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Determinacin de glucosa en sangre

PRACTICA DE LABORATORIO N 6
DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE

I.

INTRODUCCION

La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene


fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el hgado, el
cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre
(glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hgado sea
adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el pncreas.
La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al combinarlo
con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la sangre se eleva, lo que se
consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina
producida por el pncreas (islotes pancreticos). Esta hormona hace que la glucosa de la
sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucgeno, aminocidos, y cidos
grasos. Cuando la glucosa en sangre est muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se
secreta otra hormona llamada glucagn que hace lo contrario y mantiene los niveles de
glucosa en sangre.
Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situacin se
mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos rganos. Esta es la razn
principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades
y alteraciones que tambin la provocan.
El tejido ms sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy
bajas o muy altas aparecen sntomas de confusin mental e inconsciencia.
El mantenimiento de la glucemia, o concentracin plasmtica de glucosa, en los organismos
superiores es fundamental para el funcionamiento de todos los rganos, al ser la glucosa un
metabolito energtico principal.
La coordinacin de los procesos metablicos implicados en este cometido se lleva a cabo por
la relacin insulina/glucagn. La ingestin de glucosa o sustancias que la produzcan (almidn,
fructosa, galactosa, protenas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un
aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la puesta en marcha del mecanismo
regulador: aumento de la utilizacin de glucosa (porgluclisis, entre otras), aceleracin de la
glucogenognesis y disminucin de la glucogenlisis; todo ello ocurre principalmente
mediante la secrecin de insulina, una hormona pancretica de tipo polipeptdico. En el caso
de que la produccin de insulina est disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las
clulas, lo cual ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); as ocurre en
las personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1".
El diagnstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en antecedentes,
sntomas clnicos y comprobacin de una hiperglucemia significativa. Las determinaciones de
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glucemia basal permiten el diagnstico de la diabetes, pero constituyen valores puntuales y


aislados en el tiempo que no reflejan los niveles medios de glucemia ni la duracin de la
misma. Por lo tanto, es necesario disponer de pruebas que indiquen el grado del control
metablico de la enfermedad a corto y medio plazo. Estas pruebas estn basadas en el
fenmeno de unin de la glucosa a diversas protenas. Esta glucosilacin tiene lugar por una
reaccin no enzimtica y afecta tanto a protenas de vida media corta (albmina,
hemoglobina, etc.) como de vida media larga (colgeno, mielina, etc.). La intensidad de la
glucosilacin depende de varios factores, siendo los ms importantes los niveles medios de
glucemia, la duracin de la hiperglucemia, la vida media de las protenas y la concentracin de
stas. Como consecuencia, la medida de la glucosilacin proteica constituye un buen
marcador bioqumico del grado de compensacin del enfermo diabtico.
En esta prctica se utilizara el mtodo de la glucosa oxidasa y peroxidasa (GOD--POD) para
medir los niveles de glucosa sangunea de ratas diabticas y controles.
En el mtodo GOD--POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la D--
glucosa a acido D--gluconico con formacin de perxido de hidrogeno. Este es utilizado por la
peroxidasa para oxidar a la 4-- aminofenazona y al fenol, dando lugar a una quinonaimina
coloreada.
La intensidad de color ser proporcional a la concentracin de glucosa presente inicialmente.
El esquema de la reaccin es el siguiente:

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II.

OBJETIVO

III.

La presente experiencia prctica tiene como finalidad determinar los niveles de


glucosa en sangre mediante el mtodo enzimtico Trinder, considerando como
valores de referencia: de 0.70 a 1.10 g/L en suero o plasma y de 0.060 a 1.00 g/L en
sangre total.

MATERIALES

1. Material Biolgico: Suero o plasma sanguneo.


2. Material y Equipo de laboratorio
Gradilla y tubos de ensayo de 13x100 mm
Bao Mara a 37 C
Pipetas de 0.1 , 2 y 5 mL
Espectrofotmetro o fotocolormetro.
3. Reactivos y soluciones:
Reactivo de trabajo: Solucin de glucosa y peroxidasa (GOD/POD), Reactivo de
fenol
y
Reactivo
4Amino
Fenazona
(4AF).

IV.
PROCEDIMIENTO
A. Obtencin de la Muestra: Se extraen de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del
codo con jeringa de 5mL y aguja hipodrmica N 21 y se reciben un tubo de 13x 100 mm.
Se deja en reposo por 10 minutos para coagulacin de la sangre. Luego se centrifuga a 2

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500- 3000 rpm durante 10 minutos y se separa el suero con una pipeta descartable de
plstico.

Si la muestra a utilizar fuese plasma, la muestra de sangre se coloca en un frasco pequeo


conteniendo 1 mg de oxalato de potasio como anticoagulante, se mezcla agitando, se deja en
reposo durante 5 minutos y luego se centrifuga como en el caso anterior.
B. SISTEMA DE INCUBACION
Componentes (mL) y
proceso
Standard
Muestra(suero o
plasma)
Reactivo de trabajo
Incubar a 37 C / 10
minutos

B
------------

TUBOS
St
0.05
------

P
------0.05

4.0

4.0

4.0

Luego leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm)
llevando el equipo a cero con el blanco.

V.

RESULTADOS Y DISCUSION
Los resultados de expresan en trminos de gramos de glucosa por litro de sangre (g/L) o en
miligramos por decilitro de sangre (mg/dL).
Glucosa = Factor x Lectura
problema
Datos:
Muestra del sujeto: 0.31 (A)
Patrn: 100 mg/dL
Clculos:
100 mg/dL / 0.36 Abs =
277.77(mg/dL) / Abs x 0.31 Abs =
86.11 mg/ dL

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VI.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Como sabemos los niveles normales de glucosa en la sangre son de 80 120 Mg/dL,
observamos en el sujeto nivel algo elevado, pero esto se puede deber a que el
paciente, est ingiriendo medicamentos, los mismos que le producen una
alteracin en los niveles de glucosa.
La tcnica utilizada en la determinacin de glucosa fue muy buena pero hubo error
al tomar la cantidad de reactivo por lo que se observ un color que no era tan rosa
plido, as que hay que mejorar la tcnica de pipeteo ya que al parecer es muy
importante para poder obtener una buena fiabilidad en el resultados.
Tener cuidado al momento de pipetear la sangre y colocarla completamente en el
tubo ya que esta tiende a quedarse pegada en las paredes de las puntas.

VII.

CUESTIONARIO

1.- A que se denomina estndar?


Aquel compuesto que queremos evaluar en el que su concentracin es conocida, llamada
tambin patrn primario que, por su especial estabilidad, se emplea para valorar la
concentracin de otras soluciones.
Un estndar simple, se obtiene por disolucin de un nico elemento o sustancia en un
disolvente en el cual es soluble y con el que no reacciona.

2.- Cul es la diferencia entre suero y plasma?


Suero y plasma son partes importantes de la sangre. La sangre se compone de plasma,
suero, glbulos blancos (clulas que combaten los cuerpos extraos) y glbulos rojos
(clulas que transportan oxgeno). La principal diferencia entre suero y plasma se encuentra
en sus factores de coagulacin.
Una sustancia llamada fibringeno es esencial en la coagulacin de la sangre. El plasma
sanguneo contiene este fibringeno. Bsicamente, cuando se separan el suero y plasma de
la sangre, el plasma an conserva el fibringeno que ayuda a la coagulacin, mientras que el
suero es la parte de la sangre que queda despus de quitar este fibringeno.
El suero es principalmente agua que se disuelve con protenas, hormonas, minerales y
dixido de carbono. Fuente importante de electrolitos.

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El plasma es un lquido amarillo y claro que es parte de la sangre. Se encuentran en las linfas
o en fluidos intramusculares, es la parte de la sangre que contiene fibrina y otros factores de
coagulacin, hace el 55% del volumen total de sangre. Su principal componente es el agua.

3.- Por qu la muestra debe provenir de pacientes en ayunas?


Se solicita venir en ayuno (no haber ingerido ningn tipo de alimento) en las ltimas 8 a 12
horas. No se debe exceder de tales para horas para una correcta interpretacin de os
resultados de Laboratorio de Glucemia Basal, es decir la cantidad de glucosa que puede
determinarse en la sangre por la maana, despus del descanso nocturno.

4.- A qu niveles de glucosa sangunea se sospecha de estado patolgico en el


metabolismo de carbohidratos?
Estado patolgico hace referencia a la enfermedad. Y una de esas patologas es la diabetes,
los valores normales estn entre 65-70 a 110 mg/dl, cuando se superan dichos valores se
empieza con problemas de diabetes.

VIII.

BIBLIOGRAFIA

Keilin, D. Hartree, E.F., Biochem. J. 42, 250 (1948).


Passey, R.B., Gillum, R.L., Fuller, J.B., Urry, F.M., Giles, M.L., Evaluation and
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Trinder, P. Ann. Clin. Biochem. 6: 24 (1969).
White F. La Importancia del Consenso en la Prevencin y el Control de la Diabetes
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