Levadura

U.C.S.M. P.P. Ing.
Biotecnolgica
I Semestre
Prcticas de Introduccin a la Ing. Biotecnolgica
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PRACTICA N 5.
LA LEVADURA COMO ESPONJANTE DE LA MASA
PANARIA
1.
MARCO TERICO:
En contraposicin a las tortas, cuya masa se prepara sin fermentacin
microbiana y que se hornean directamente, ya desde tiempos prehistricos
se elaboraban tambin panes con masa cida.
Las masas cidas son cultivos mixtos de bacterias acidolcticas, del tipo
Lactobacillus y levaduras tolerantes al cido, que se han formado por
enriquecimiento y seleccin de la microflora que crece de manera
espontnea en los cereales y que se mantienen de proceso en proceso de
panificacin sobre masa fresca.
La mayora de levaduras presentes en la masa cida son cepas de
Saccharomyces cerevisiae, especialmente adaptadas al proceso comn con
bacterias lcticas, asimismo cepas de Candida krusei y Pichia saitoi.
Las levaduras fermentan los azcares existentes en la harina o los azcares
libres aportados como glucosa, fructosa, sacarosa y maltosa, formados por
accin de las amilasas del grano de cereal a partir del almidn de la harina.
El principal producto de la fermentacin es el dixido de carbono (CO 2),
cuyas burbujas gaseosas hinchan la masa y son responsables de la
porosidad y ligereza de la masa panaria, adems, la expansin y
estiramiento de sta se debe a las propiedades extensibles y elsticas de la
protena gluten.
Los productos colaterales de la masa fermentada como alcohol, acido
actico, acetona y diacetilo, son los que confieren el aroma y el sabor al
pan.
Al final del proceso fermentativo, la masa esponjada se calienta en el
horno, concluyendo la fermentacin y dando lugar a un producto final que
est libre de microorganismos vivos, el alcohol formado en la fermentacin
se evapora, y en la masa cocinada permanecen solo los espacios huecos en
forma de panales de las burbujas de CO2.
La Ingeniera Biotecnolgica y las tcnicas de Ingeniera gentica buscan
perfeccionar la calidad de las levaduras para incrementar su actividad y
mejorar el sabor y la textura del producto. Aplicando las tcnicas de la
ingeniera gentica se ha logrado obtener Saccharomyces cerevisiae con
propiedades fermentativas mas adecuadas.
U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

I Semestre
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2.
OBJETIVOS:
2.1. Explicar el proceso de fermentacin por Saccharomyces cerevisiae en
la obtencin de masa panaria.
2.2. Evaluar el grado de esponjamiento de la masa panaria por
Saccharomyces cerevisiae.
2.3. Identificar los factores que determinan el aumento de volumen de la
masa panaria.
2.4. Explicar la importancia de la fermentacin en los procesos
biotecnolgicos.
2.5. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de
puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.
3.
MATERIALES:
3.1. Material biolgico:
Levadura, Saccharomyces cerevisiae
3.2. Insumos:
Glucosa.
Harina de trigo.
3.3. Material de vidrio:
Baguetas.
Beakers, 400 ml.
Pipetas, 5 y 10 ml.
Probetas, 100 ml.
Matraz, 250 ml.
3.4. Aparatos y equipos:
Balanza analtica.
Estufa.
4.
PROCEDIMIENTO:
Rotular cuatro beakers del 1 al 4.
Preparar la suspensin de levadura: Suspender 10 gr. de
levadura en 120 ml. de agua potable.
Segn la Tabla N 1, preparar los siguientes sistemas:
Sistemas
Harina (gr.)
Glucosa (gr.)
Agua potable (ml.)
Levadura (ml.)
Vaso 1
25
3
22.5
7.5
Vaso 2
25
3
15
15
Vaso 3
25
3
30
Vaso 4
25
30

I Semestre
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Mezclar la masa con la bagueta.
Rotular cuatro probetas del 1 al 4.
Aadir la masa a las probetas correspondientes y colocarlas a
30C en la estufa.
Leer y anotar la altura de la masa en cada probeta (cm) al
principio y a intervalos de 15 min., durante 60 min. Este valor
constituye el grado de esponjamiento de la masa.
5. PROCEDIMIENTO DETALLADO:
Rotular 4 beaker del 1 la 4
Preparar la suspensin de levaduras
Suspender 5g de levadura en 60ml de agua potable
Preparar los siguientes sistemas
Harina (g)
Glucosa
(g)
Agua
Potable (ml)
Levadura
(ml)
S1
12.5
S2
12.5
S3
12.5
S4
12.5
1.5
1.5
1.5
11.0
7.5
3.5
7.5
15
15
Mezclar la masa con la bagueta

Colocar los beaker al 30 C a la estufa
Leer y anotar la altura de la masa al principio y en intervalos
de 15 minutos durante 60 minutos
6. RESULTADOS Y DISCUSIN:
Grado de esponjamiento de la masa panaria
S1
Tiempo
15 min
30 min
45 min
60 min
Tiempo
Altura de la masa panaria

S2
S3
S4
7mm
1cm
1.4 cm
1 cm
1.1 cm
1.5cm
2.1 cm
1.1 cm
S1
S2
S3
S4
Aroma

I Semestre
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15
30
45
60
min
min
min
min
++
+++
+++
++
+++
Sin aroma (-) suave (+) moderado (++) intenso (+++)
formacin de burbujas:
- si en S 2 y S 3 como en la ebullicin de agua
7. CONCLUSIONES:
La masa panaria no permanece constante durante su preparacin. Para
llevar a cabo la panificacin se prepara una masa con harina, agua NaCl
a la que se aaden levaduras, esto provoca la fermentacin de los
azucares formndose CO2 que hace que la masa se esponjosa.
8. SUGERENCIAS:
Mezclar bien la suspensin de la levadura procurando no dejar

grumos
Pesar todos los componentes con cuidado
Mezclar bien la masa panaria procurando no dejar grumos
Fijarse el tiempo cuando s e le pone en la estufa
9. CUESTIONARIO:
A que se refiere el Poder fermentativo de la levadura?
Qu tipo de levaduras se utilizan generalmente en panadera?
En el campo de la Ing. Biotecnolgica, En que otros propsitos se
utilizan las levaduras?
En otras partes del mundo, Qu microorganismos se utilizan en la
elaboracin de masa panaria?
RESPUESTAS:
10.
La levadura provoca la fermentacin panaria. Actua sobre la

glucosa, maltosa y sacarosa, formndose CO2 y etanol. Durante
el proceso el pH disminuye, el gluten se pone elstico y esponjoso
y formar una red tridimensional que contiene CO2. Como
productos de la fermentacin tambin se forma: etanal, acetona,
cido pirvico, hexanal, benzaldehido.
Saccharomyces cerevisiae
Para la elaboracin de cerveza, vino, hidromiel, antibitico,.etc
Bacterias de la especies Bacillus cereus, Clostridium perfringens,
Lactobacillus plantarum
BIBLIOGRAFA:

I Semestre
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RENNEBERG, R. Biotecnologa para principiantes. Editorial Revert.
Espaa. 2008.
SMITH, J. Biotecnologa. Editorial Acribia. Espaa. 2006
www.elergonomista.com
wikipedia
11. ANEXOS:
PRACTICA N 6.
EXTRACCIN DE PECTINA A PARTIR DE CSCARAS DE
CITRICOS
1.
MARCO TERICO:
Debido a la legislacin y a razones ambientales, la industria se ve cada vez
ms forzada a encontrar alternativas de uso de sus residuos materiales;
esto se da por lo general en las industrias procesadoras de alimentos.
El valor agregado que se les confiere a los residuos de materias primas,
genera utilidad o beneficio en la obtencin de ganancias en las industrias
que en cierto momento vean que el confinamiento les costaba ms y
provocaba severos problemas de contaminacin.
En las industrias procesadoras de alimentos los residuos vegetales
contienen importantes cantidades de compuestos potencialmente
interesantes. La recuperacin de ellos es ahora una elegante va para la
reutilizacin de diversos grupos de subproductos y en la ltima dcada el
inters en alternativas de uso ha aumentado drsticamente.
En la Industria citrcola se generan residuos que constituyen bsicamente
la materia prima para la obtencin de pectinas, substancias extensamente
usadas en las industrias alimenticias y farmacuticas, y que no se producen
en cantidades necesarias a partir de un desperdicio insuficientemente
industrializado: La cscara de frutas.
Qu es la pectina?
Es un heteropolisacrido altamente hidroflico. La estructura bsica la
forman molculas de cido D-galacturnico unidas por enlaces glicosdicos
1-4, que constituyen el cido poligalacturnico, que existe parcialmente
esterificado con metanol.

I Semestre
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Las pectinas son uno de los principales constituyentes de la pared celular
de los vegetales, por su habilidad de absorber grandes cantidades de agua
y su capacidad para balancear el equilibrio del agua dentro del sistema.
Aplicaciones:
En la industria alimentaria, como resultado se sus propiedades gelificantes
y espesantes, la pectina ha tomado mucha importancia como una goma
industrial, utilizndose en jaleas, mermeladas, gelatinas, conservas
vegetales y en gran variedad de productos alimenticios.
La pectina se emplea en la industria farmacutica para modificar la
viscosidad de sus productos, en la formacin de complejos que regulan la
accin de la insulina, de la epinefrina, de la estreptomicina y otros
frmacos, es eficaz en las intoxicaciones con metales pesados y venenos.
En la preparacin de medios de cultivo bacteriolgicos, se emplean varios
tipos de pectinas, como medio de identificacin de ciertos microorganismos
y como sustituyente de agar.
En la preparacin de variedad de cosmticos.
Debido a que las pectinas son compuestos utilizados en alimentos y la
industria farmacutica, es necesario utilizar en su produccin, reactivos,
disolventes y equipo que no dejen residuos txicos en el producto final.
Mtodos de extraccin:
Existen numerosos procesos patentados para obtener las pectinas, y en
cada uno de ellos se obtienen productos de diferente calidad porque sta,
as como sus posibles aplicaciones, depende mucho del mtodo de
obtencin.
Sakai en 1989 propuso un proceso biotecnolgico para obtener pectina
utilizando microorganismos del gnero Bacillus, cuya actividad permite la
liberacin y recuperacin de las pectinas, obteniendo fcilmente una
pectina de alto peso molecular con un buen rendimiento.
Graves en 1994 propuso un proceso ambientalmente amigable por
intercambio inico, que consiste en hacer reaccionar una suspensin
acuosa de una fibra comestible con una solucin de un metal alcalino trreo
y luego separa la suspensin resultante en una fraccin slida rica en
pectina y la fraccin lquida con menor contenido de sta. El material
obtenido se hace pasar por una columna de intercambio inico para
cambiar los iones H+ por los iones metlicos agregados previamente, y
proceder a recuperar la pectina.
Fishman en el 2000, obtuvo pectinas de muy buena calidad a partir de
material vegetal aplicndoles presin y con calentamiento por microondas.
Precipitacin:

I Semestre
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La precipitacin es una operacin unitaria de separacin que se produce
cuando tenemos una sustancia en disolucin que por algn factor externo,
forma el precipitado, sustancia slida que se forma en el interior de una
disolucin.
Es un mtodo sencillo y directo para purificar solutos.
Mtodos de precipitacin:
2.
Obtencin de un producto insoluble con un agente precipitante. Ej.:

Adicin de una sal de potasio o sodio a una solucin de penicilina
Precipitacin por adicin de un disolvente. Ej.: Precipitacin de
dextrano utilizando acetona o alcohol.
Variando la temperatura, generalmente disminuyndola. Ej.:
Descenso de temperatura hace que disminuya la solubilidad.
Precipitacin por cambio de pH. Ej.: La solubilidad de las protenas
es menor a pH cercanos al punto isoelctrico
OBJETIVOS:
2.1. Explicar el mtodo de extraccin de pectina a partir de cscaras de
ctricos.
2.2. Comparar y evaluar el rendimiento de pectina a partir de diferentes
tipos de materia prima.
2.3. Explicar la importancia de la obtencin de bioproductos en los
procesos biotecnolgicos
2.4. Comprender la importancia del aprovechamiento de residuos de
materias primas.
3.
MATERIALES:
3.1. Material biolgico:
Cscaras de frutas ctricas.
3.2. Reactivos:
cido actico.
cido ctrico
Etanol absoluto.
Baguetas.
Beakers de 600 y 1000 ml.
Matraces, 500 ml.
Pipetas, 10 ml.
Pipetas Pasteur.
Probetas, 100 ml.
Termmetro.

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3.4. Otros:
Agitador magntico.
Cuchillo.
Gasa.
Picetas.
Propipetas.
Tijeras.
3.5. Equipos:
Balanza analtica.
Hot plate.
Potencimetro.
Refrigeradora.
4.
PROCEDIMIENTO:
4.1 Tratamiento de la materia prima:
Seleccionar cscaras en buen estado, es decir
sin partes en descomposicin.
Separar manualmente el endocarpio y
mesocarpio.
Obtener 250 gr. de cscara.
Lavar con agua corriente para eliminar
impurezas.
Escurrir y decantar el agua de lavado.
Cortar las cscaras en pequeos trozos.
Aadir agua destilada a una temperatura de
60C, agitando constantemente por 2 min. Repetir el lavado tres
veces.
Decantar el agua de desecho.
4.2 Extraccin de la pectina y separacin del extracto:
Agregar a las cscaras, agua acidulada a un pH igual a 1.5 en
proporcin 1:3. Calentar la solucin durante 60 min. a una
temperatura de 90C.
Con ayuda de una gasa filtrar los extractos obtenidos en cada
procedimiento.
4.3 Precipitacin de las pectinas:
Al extracto filtrado agregar etanol absoluto fro.
Dejar en reposo durante 10 min. Hasta obtener un precipitado.
Decantar el etanol.

I Semestre
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Secar la muestra a temperatura ambiente y anotar su peso.
5.
PROCEDIMIENTO DETALLADO:
Seleccionar cscaras de naranja en buen estado. Registrar

el peso 50g
Cortar las cscaras aproximadamente a 1 cm2
Lavar las cscaras con agua corriente. Decantar
Lavar con agua destilada a 60 C, tres veces c/u 300 ml.
Decantar
Aadir a las cscaras agua acidulada pH 1,5 en proporcin
de 1:3 (100g en 300 ml )
Calentar a 90 C durante 20 minutos
Filtrar con ayuda de una gasa .Obtener el filtrado
Al filtrado aadir etanol absoluto (fri)
Dejar en reposo
Registrar el peso de la pectina
Comparar el porcentaje y le rendimiento
6.
RESULTADOS Y DISCUSIN:
Peso de la pectina 95,30 g
7.
CONCLUSIONES:
La obtencin de pectina a partir de la cscara de naranja es la

forma ms eficaz para las industrias que tienen por materia
prima a la naranja o a ctricos ya que es la forma mas fcil de
obtener la pectina y al parecer la mas barata ya que el proceso
para obtener la pectina es muy simple
Empleo de la pectina en alimentos.- la pectina es utilizada en la
preparacin de geles, mermeladas, jaleas, como estabilizantes,
etc.
Empleo de pectinas para fines medicinales.- la pectina puede ser
utilizada como emulgente para la preparacin de ungentos,
polvos, tabletas y otros medicamentos.
8.
SUGERENCIAS:

I Semestre
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Escoger las mejores cscaras

Pesar la cantidad requerida de cscaras
Lavar bien las cscaras para evitar las impurezas
Medir bien el agua acidulada y colocar en la correcta
proporcin
Tener cuidado en el momento de medir la temperatura
preocupara que el termmetro no este en contacto con la
base del beaker
Filtrar con cuidado
9.
CUESTIONARIO:
Qu otros residuos se utilizan para producir pectinas?

Qu otros mtodos se utilizan para precipitar la pectinas?
Qu otros residuos de materias primas pueden ser
aprovechados?
RESPUESTAS
De los restos del prensado de la produccin del zumo de la

manzana, de sidra, pern, membrillo, tuna y algunos ctricos,
como el limn, toronja y lima
Mtodos que emplean iones metlicos cobre, nquel, hierro,

el principal es el cloruro de aluminio. Tambin se puede
utilizar acetona; ciertas sales, como sulfato de aluminio e
hidrxido amnico, con lo que se forma hidrxido de
aluminio.
Residuos cermicos como materia prima alternativa para
la fabricacin de clnker de cemento Prtland
En los residuos del esprrago y el puerro slidos orgnicos
se emplea en parte como alimentacin animal, una
pequea proporcin se destina a otras aplicaciones (ej
combustible)
alimentacin animal, fertilizante, obtencin de productos
comercializadles.
En la descomposicin de residuos de vegetales para la
produccin de metano. Los residuos producidos por la
industria de conservas vegetales, por su contenido en
celulosa, pueden utilizarse como fuente de energa

I Semestre
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renovable. La fraccin celulsica de los residuos, se
transforman mediante hidrlisis en glucosa, que por
fermentacin se convierte en combustible (etanol)
10.
BIBLIOGRAFA:
GDIA, F., LPEZ, J., CASAS, C., GONZLEZ, G., LAFUENTES, F.,
MONTESINOS, J., SOL, C., VALERO, F. Ingeniera Bioqumica.
Editorial sntesis. Espaa. 1998.
DEVIA, J. Proceso para producir pectinas ctricas. Revista N 129.
Universidad Eafit. Colombia. 2003
www.tecnun.es/asignaturas/
www.ingenieroambiental.com
11.
ANEXOS:
PRACTICA N 7.
EXTRACCIN DEL CAROTENOIDE BIXINA A PARTIR DEL
ACHIOTE (Bixa orellana).
1.
MARCO TERICO:
Los materiales vegetales son recursos invaluables y tiles diariamente, los
cuales proveen un recurso interminable de materia prima a las industrias
farmacutica, cosmtica y de alimentos. Por tanto, los compuestos
naturales con propiedades funcionales o tecnolgicas, han cobrado gran
importancia en diversas aplicaciones industriales. Es por ello, que se
buscan mtodos eficientes, econmicos y favorables al ambiente para la
extraccin de estos compuestos.
Adems, se ha determinado que, en algunos casos, la extraccin puede ser
ms econmica que la sntesis qumica de los compuestos de inters, razn
por la cual, una extraccin que permita mayor productividad es
definitivamente el inters de la industria.
La produccin de colorantes naturales a partir de vegetales est
incrementndose da a da. Aunque los colorantes vegetales son muy
conocidos desde hace mucho tiempo, hoy en da estn cobrando inusitado

I Semestre
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inters. Muchos de los colorantes de alimentos se producen de manera
sinttica y hay una enorme variedad al respecto. Sin embargo, la lista de
colorantes sintticos se va acortando debido a que son vetados,
principalmente debido a razones de toxicidad, pues son sospechosos de ser
potenciales cancergenos. Por lo tanto, la industria de alimentos y
cosmticos trata de buscar fuentes ms seguras y confiables, sobre todo
respecto a su toxicidad. Es as como nuevamente se fija en los productos
que se pueden obtener en la naturaleza.
Una buena fuente es la obtencin de carotenoides los que se encuentran
presentes en muchos vegetales. El -caroteno (Figura N1) es la sustancia
representativa y hay una gran variedad de sustancias similares,
denominadas carotenoides, que se pueden obtener de diversas fuentes.
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
H3C
CH3
CH3
CH3
CH3
Figura N1: -caroteno
El -caroteno es el pigmento amarillo-naranja de la zanahoria y es un
ismero del licopeno (Figura N2) que es el pigmento rojo del tomate.
Licopeno es el carotenoide predominante en sangre y tejido prosttico.
H 3C
CH3
CH3
CH3
H 3C
CH3
CH3
CH3
H 3C
CH3
Figura N2: Licopeno

Es tambin responsable por el color rojo de los flamencos. Los flamencos,
sin licopeno en su dieta, seran blancos. El licopeno se encuentra tambin
en sanda, papaya y guayaba de color rojizo, as como la toronja pero la de
color rojo-naranja. El licopeno no se convierte en vitamina A como s lo
hace el -caroteno y, como es sabido, la vitamina A es un poderoso
antioxidante y por eso se le considera como un anticancergeno. Los
carotenoides son muy sensibles a la luz, por eso es que se deben de
proteger de la luz intensa.

I Semestre
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Otra fuente de carotenoides no especficos tal como la capsantina (Figura
N3) y la capsorubina (Figura N4), que son los pigmentos predominantes
del pimiento rojo.
H3C
CH3
CH3
CH3
CH3
OH
HO
CH3
CH3
CH3
H3C
CH3
Figura N3: Capsantina (Capsanthin)

H3C
CH3
HO
CH3
CH3
CH3
OH
H 3C
CH3
CH3
H3C
CH3
Figura N4: Capsorrubina (Capsorubin)

Otro ejemplo clsico de un carotenoide nico es la crocetina (Figura N5),
compuesto presente en el azafrn (saffron), que es el material
indispensable para la coloracin del arroz en el plato paella a la valenciana.
La bixina (Figura N6), es otro ejemplo, que es el mayor pigmento de la
bixa orellana o achiote (anatto).
CH3
CH3
COOH
HOOC
CH3
CH3
Figura N5: Crocentina (Crocentin)
CH3
CH3
HOOC
CH3
Figura N6: Bixina (Bixin)
COOCH3

I Semestre
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Extraccin SlidoLquido:
Consiste en la disolucin de un componente o grupo de componentes que
forman parte de un slido, empleando un disolvente adecuado en el que es
insoluble el resto del slido. Para llevar a cabo el proceso es necesario.
Contacto del disolvente con el slido a tratar, para disolver el
componente soluble.
Separacin de la disolucin y el resto del slido.
La disolucin separada se denomina extracto y el resto de slido se
denomina inerte.
Extraccin a reflujo:
Es un tipo de extraccin directa que utiliza todo el disolvente en una sola
operacin de extraccin.
Extraccin por Soxhlet:
Es un tipo de extraccin semicontinua, pues una de las fases, el sustrato se
agrega solo al principio, mientras que el solvente de extraccin cumple un
ciclo de extraccin y purificacin continua.
La purificacin se realiza en forma paralela por destilacin del solvente, de
manera que el sustrato siempre est en contacto con el solvente puro y
fro.
El soxhlet funciona cclicamente, para extraer las concentraciones
necesarias de algn determinado compuesto.
La extraccin con soxhlet presenta las siguientes ventajas:
La muestra est en contacto repetidas veces con porciones frescas
de disolvente.
La extraccin se realiza con el disolvente caliente, as se favorece la
solubilidad de los analitos.
No es necesaria la filtracin despus de la extraccin.
Permite la recuperacin del disolvente.
Extraccin asistida por ultrasonido (EAU):
La extraccin asistida por ultrasonido (EAU) permite extraer las sustancias
de inters utilizando sonidos de alta frecuencia, con el fin de desprender el
compuesto buscado. Las partculas slidas y lquidas vibran y se aceleran
ante la accin ultrasnica, como resultado el soluto pasa rpidamente de la
fase slida al solvente.
El proceso de extraccin es significativamente ms eficiente utilizando el
bao de ultrasonido, el cual es capaz de generar ondas ultrasnicas con la

I Semestre
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finalidad de provocar una microagitacin muy energtica y til para la
disolucin rpida de los principios activos, ya que las ondas acsticas
aumentan la interaccin del solvente con las superficies del slido por un
fenmeno mecnico denominado cavitacin.
El mecanismo de extraccin involucra dos fenmenos fsicos: difusin a
travs de la pared celular y el lavado de los contenidos celulares, una vez
que las paredes se han lisado.
El bao de ultrasonido requiere de un medio lquido y un generador de
energa, capaz de transmitir una corriente elctrica a un sistema mecnico
que la convertir en energa acstica o vibraciones de alta intensidad
generndose ondas de ultrasonido que generan millones de burbujas
microscpicas, las cuales se expanden y colapsan contra las clulas
causando la ruptura de su membrana.
Esta tcnica es la ms econmica, productiva y amigable con el medio
ambiente, que los mtodos tradicionales, adems tiene los requerimientos
instrumentales ms bajos entre las ltimas tcnicas de extraccin
desarrolladas.
2.
OBJETIVOS:
2.1. Aislar el pigmento carotenoide a partir del achiote (Bixa orellana)
2.2. Explicar los mtodos de extraccin a reflujo, por soxhlet y extraccin
asistida por ultrasonido (EAU) en la obtencin del carotenoide bixina.
2.3. Comparar y evala el rendimiento de los mtodos de extraccin.
3.
MATERIALES:
3.1. Material vegetal:
Semillas de achiote (Bixa orellana).
3.2. Reactivos:
Estandar de -Caroteno sinttico, 95%.
Etanol.
Cloroformo.
Metanol.
Cmara de separacion para Cromatografia de Capa Fina (TLC).
Capilares.
Matraces 250 mL.
Pipetas, 5 y 10 mL.

I Semestre
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Probeta, 100 mL.
3.4. Otros:
Agitador magntico.
Esptula.
Papel filtro.
Picetas.
Placas cromatogrficas de silica gel.
3.5. Equipos:
Balanza analtica.
Hotplate.
Equipo de filtracin al vaco.
Equipo de reflujo.
Equipo Soxhlet.
Bao de ultrasonido.
4.
PROCEDIMIENTO:
4.1 Extraccin por reflujo:
Reflujar 50 g de semillas de achiote (Bixa orellana) (no pulverizada)
con 100 mL de etanol por unos 30 minutos. El tiempo de reflujo se
cuenta a partir de que cae la primera gota de disolvente condensado.
Desmontar el equipo y filtrar al vaco el extracto obtenido.
4.2 Extraccin por Soxhlet (SX):
Pesar 50 g de semillas de achiote (Bixa orellana) y colocarlas en un
cartucho de papel filtro en la cmara de muestra del equipo. Colocar
en la cmara del solvente aproximadamente 100 mL de etanol.
Conectar ambas cmaras con el condensador o refrigerante,
asegurndose que circule agua. Calentar la cmara del solvente
(aprox. 70-75C), mientras los vapores ascienden por el brazo de
vapor y al condensarse en el refrigerante caen en la cmara de
muestra impregnando al slido que se encuentra en el cartucho. La
cmara de muestra se va llenando lentamente de lquido hasta que
llega al tope del brazo de retorno del solvente y descarga dentro de la
cmara del solvente, llevando consigo a la sustancia extrada.
El proceso se repite automticamente hasta que la extraccin se
completa, por aproximadamente 30 minutos.
4.3 Extraccin asistida por ultrasonido (SN):
Pesar 50 g de semillas de achiote (Bixa orellana) y colocarlas en un
matraz de 250ml, agregar 100 mL de etanol. El matraz conteniendo la
mezcla es llevado a la zona de cavitacin del bao de ultrasonido por
30 min. Finalizado el tiempo, filtrar al vaco el extracto obtenido.

I Semestre
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Destilar el disolvente en un equipo de soxhlet o en el rotavapor, hasta
obtener el extracto ms concentrado.
La bixina pura son cristales en forma de agujas, color rojo intenso, cuya
pureza puede ser evaluada usando una cromatografa en capa fina (Thin
Layer Chromatography, TLC) sobre slica gel usando cloroformo-metanol
(94:6) como solvente eluyente.
5.
I) EXTRACCIN
Reflujo
-
Material vegetal : 25g de achiote

Solvente : etanol (50ml)
Ultrasonido
-
Material vegetal : 25g de achiote

Solvente : etanol (50ml)
II) FILTRADO AL VACIO
Obtener el filtrado
Guardar en recipiente
III) IDENTIFICACION
Cromatografa en capa fina (TLC) : en una tcnica que nos

permite separar los componentes de una mezcla por su afinidad
a una fase
Procedimiento
1) Preparacin de la placa de silicagel
2) Sembrar de muestras con ayuda de capilares 2 de cada
mtodo de extraccin
3) Preparar la fase mvil 10ml
Cloroformo: metanol (94:6)
Cloroformo: 4,7
Metanol: 0,3

I Semestre
______________________________________________________________
4) Colocar la placa de silicagel en la fase mvil
5) Hace la ecuacin
Rf=
Xm cm
Xs cm
Rf = factor de referencia
Xm = distancia que recorri la muestra
Xs = distancia que recorri el solvente
6.
Masa del a muestra:
Factores de regencia de:
Bixina:
Rf=
Xm cm
Xs cm
0.9 cm
3.9 cm
0.23
Beta caroteno:
Rf =
Xm cm
Xs cm
3.7 cm = 0.94
3.9 cm
Rf =
Xm cm
Xs cm
1.8 cm
3.9 cm
Rf =
Xm cm
Xs cm
2.6 cm = 0.66
3.9 cm
Rf =
Xm cm
Xs cm
3.2 cm = 0.82
3.9 cm
Otros:
= 0.46

I Semestre
______________________________________________________________
7.
CONCLUSIONES:
8.
SUGERENCIAS:
9.
Lo obtencin de bixina a travs de las semillas de achiote por

estos procedimientos es la forma mas fcil.
La bixina es un colorante, el cual su color vara segn el tipo de
solvente y el tipo de procedimiento que se utiliza para su
extraccin. Por ejemplo la muestra fue mejor obtenida fue por el
procedimiento de reflujo que por el de ultrasonido
La bixina se utiliza en la industria alimentara como colorante
natural
En el proceso de extraccin de bixina por el reflujo, para no

desperdiciar agua un mtodo seria colocar una bomba al final
para regresar el agua pero antes pasarla por un recipiente que
tiene hielo y sal
En el proceso de extraccin por ultrasonido, poner la muestra en
la zona de cavitacion por que all se da la mayor intensidad de
ultrasonido
No introducir los dedos o cualquier parte del cuerpo en el equipo
de ultrasonido para evitar cualquier dao posible
Antes de poner la muestra en el silicagel, mover la recipiente que
contiene la muestra de achiote y procurar que el dimetro de la
muestra que se coloca con el capilar ser de mas o menos de 1 cm
No olvidar de poner el agitador para que la muestra no se pegue
al fondo del matraz
Luego de obtener la muestra ponerla en un envase y luego cubrir
el envase con un pedazo de papel aluminio, esto para evitar la
oxidacin de la muestra
CUESTIONARIO:
Cules son las partes de un equipo de Soxhlet? Esquematizar.
Enumera tres procedimientos en los cuales se utiliza el equipo de Soxhlet.
Enumera tres procedimientos en los cuales se utiliza el bao de
ultrasonido.
Dibujar la estructura qumica de la bixina.
Dibujar la estructura qumica de cinco carotenoides adicionales y
mencionar su procedencia.

I Semestre
______________________________________________________________
Haga un comentario sobre las oportunidades comerciales de la produccin
de carotenoides por biotecnologa.
RESPUESTAS:
1. agitador y calentador
2. baln
3. brazo para ascenso del vapor
4. cartucho de extraccin o cartucho Soxhlet
5. muestra (residuo)
6. entrada del sifn
7. descarga del sifn
8. adaptador
9. refrigerante (condensador)
10.entrada de agua de refrigeracin
11.salida de agua de refrigeracin
-En al extraccin de aceites esenciales de semillas.

-Extraccin de alcaloides
-Extraccin de olerorresinas como la pimienta, el jengibre, el apio,
la cebolla, etc.
-Extraccin de saponinas de las hojas de hamamelis, de resinoides,
de aloe vera, de triterpenos, de centella asitica, etc.
- Preparacin de liposomas en cosmtica

- aceleracin de reacciones qumicas, mezcla de suero y plasma,
emulsificacin.
- Degasificacin de lquidos

I Semestre
______________________________________________________________
BIXINA.
CH3
CH3
HOOC
CH3
COOCH3
ASTAXANTINA
Presente en: Salmn, gamba, langosta, plumas de flamencos y algas

I Semestre
______________________________________________________________
CANTAXANTINA
Presente en : Salmn, gamba, cantarel y otros hongos, algas y plumas de

flamencos.
RODOPIN
Presente en bacterias rojas

I Semestre
______________________________________________________________
DIATOXANTINA
Presente en corales y algas
7,8-DIDEHIDROASTAXANTINA
Presente en salmn y crustceos
FUCOXANTINA

I Semestre
______________________________________________________________
Presente en algas y plantas marinas
10.
En los ltimos aos el consumo de los carotenoides, que se encuentra en

los pigmentos de vegetales, a aumentado de una manera exponencial. Ya
que en estudios recientes se a descubierto que estos pigmentos manifiestan
propiedades antioxidantes, y as en la prevencin de numerosas
enfermedades humanas como la aterosclerocis e incluso el cncer.; adems
son provitaminas A que es necesario para la visin. Todo esto a hecho que
se aumente el inters de estos pigmentos, por eso es necesario encontrar
nuevos mtodos mas eficientes para su estacin, y all interviene la
biotecnologa
BIBLIOGRAFA:
CORDOVA, C. Contenido de -caroteno y efecto in vitro de los extractos
del fruto liofilizado de Passiflora mollisima (H.B.K) Bailey (Tumbo) en el
estrs oxidativo producido por 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH).
Universidad Catlica Santa Mara. Arequipa. 2009.
OCON, J., TOJO, G. Problemas de Ingeniera qumica Operaciones
bsicas. Tomo II. Espaa.
RENNEBERG, R. Biotecnologa para principiantes. Editorial Revert.
Espaa. 2008.
WWW.RINCONDELVAGO.COM
ES.WIKIPEDIA.ORG
WWW.INILAB.ES
WWW.ALNREVISTA.COM
11.
ANEXOS:

I Semestre
______________________________________________________________
PRACTICA N 8_
CROMATOGRAFIA DE AMINOACIDOS
1.
MARCO TEORICO:
La palabra cromatografa viene de dos vocablos: i) Croma, que significa
color, y ii) grafos, que significa dibujo. Este trmino fue introducido por
Michael Tsweet, un qumico ruso, que se puede considerar el padre de la
cromatografa. Sweet en 1911 quera separar los diferentes pigmentos
verdes presentes en extractos de hojas. Se saba que podan existir varias
formas de clorofila y su idea era separar tales pigmentos. Lo que hizo fue
rellenar una columna (similar a una bureta) y la rellen con tiza (CaCO 3).
Luego el extracto fue aplicado en la columna y la tiza selectivamente iba
reteniendo los diferentes tipos de clorofila. De esta manera se pudo aislar e
identificar los diferentes tipos de clorofila.
Este fue el punto de partida de la cromatografa y es as como con el correr
de los aos se introdujeron nuevas tcnicas y procedimientos hasta llegar
hasta lo que hoy en da se conoce como HPLC, que viene de las siglas High
Performance Liquid Chromatography, que significa Cromatografa de Alto
Rendimiento o Eficacia.
Despus del trabajo de Tsweet, se llevaron a cabo numerosas mejoras y
aplicaciones y es as como tanto a, Tiselius en Suecia, Synge y Martin en
Inglaterra se les otorga el Premio Nbel en Qumica en el ao de 1948.
La Cromatografa en capa Fina se le conoce en sus siglas en Ingles como
Thin Layer Chromatography o simplemente TLC. Se puede apreciar que es
una tcnica muy antigua pero a pesar de todo muy vigente y precursora de
numerosas tcnicas avanzadas como la electroforesis, arma clave en
Biologa Molecular.
2.
OBJETIVOS:

I Semestre
______________________________________________________________
2.1. Comprender los principios bsicos de la cromatografa como
herramienta til en la separacin de compuestos.
2.2. Explicar y distinguir los trminos adsorcin y elusin.
2.3. Separar e identificar los aminocidos presentes en una muestra.
3.
MATERIALES:
3.1. Reactivos:
Solucin de aminocidos 0.1 M.
Solucin de ninhidrina (al 2% en acetona).
Etanol.
cido actico.
Beakers, 250 ml.
Capilares.
Pipetas, 1 y 10 ml.
Placas petri.
3.3. Otros:
Placas de TLC.
Pinzas
Gotero
3.4. Equipos:
Cocinilla elctrica.
4.
PROCEDIMIENTO:
1.
Obtener una placa de TLC. Evite tocar la superficie; manipule las

placas por los bordes. Si toca la superficie, las huellas digitales se
quedarn impregnadas y podran interferir en el desarrollo de su
cromatograma. Trace una lnea ms o menos a 0.5 cm del borde
inferior. Marque o haga cruces a lo largo de esta placa pues en cada
marca se sembrar un poco de muestra.
2.
Coloque o siembre la muestra de cada aminocido en cada

marca utilizando el capilar preparado previamente. No siembre poco, no
sobre cargue la muestra, la experiencia le dir cual es la cantidad
adecuada. Esto es muy importante. Poca muestra no ser detectada y
una gran cantidad de muestra ofrecer dificultades.
3.
Deje secar la placa y aada solvente a su cmara de desarrollo.

Se puede utilizar un beaker de tamao adecuado, 100 o 250 ml.
Coloque su placa cromatogrfica, que entre en contacto con el solvente
y cubra el beaker con un poco de papel aluminio.

I Semestre
______________________________________________________________
5.
4.
Deje que el solvente de elusin viaje a travs de la placa. Cuando

el solvente est por llegar a la parte superior (que falte mas o menos
0.5 cm) saque el cromatograma.
5.
Trazar una lnea donde el solvente ha llegado y dejar que el

solvente evapore. Puede calentar de manera suave o, mejor an, utilice
un secadora.
6.
Ahora es necesario visualizar las sustancias y se hace necesario

aplicar el revelador. Aada el revelador de ninhidrina, djelo secar y
caliente en una cocina elctrica. Los aminocidos tomarn un color azul
o prpura. Marcar en el centro cada aminocido.
7.
Calcular el factor de retencin (Rf) para cada aminocido

utilizando la siguiente ecuacin:
8.
Repita el experimento para la sustancia desconocida e identifique

los aminocidos desconocidos en la muestra.
Prepara la placa de silicage:
0.5 cm
0.5 cm
Sembrar la muestra:
A = aminocido glicina
B = aminocido metionina
C = aminocido triptofano
D = solucin problema

I Semestre
______________________________________________________________
Preparar la fase mvil:

-
(90:10)
esperar que la fase mvil llegue al extremo marcado

sacar y poner en una placa pretri
esperar que la placa de silica gel, seque
Revelado:
6.
etanol : acido actico

(4.5)
(0.5)
Corrida:
-
5 ml
Agente qumico: reactivo (ninhidrina)

Agente fsico: luz UV
Aadir a la placa de silica gel; con el gotero por la parte
superior, el agente qumico (ninhidrina)
Esperar que seque
Luego llevarla a la cocina elctrica y ver los resultados
aminocido glicina
Rf
1.2 cm =
4.0 cm
0.3
Xm cm
Xs cm
2.1cm =
4.0 cm
0.52
Xm cm
Xs cm
2.3 cm =
4.0 cm
0.57
aminoacido triptofano
Rf
Xm cm
Xs cm
aminocido metionina
Rf
solucin problema
Rf =
Xm cm
Xs cm
2.2 cm =
4.0 cm
0.55

I Semestre
______________________________________________________________
7.
SUGERENCIAS:
8.
Tratar de hacer bien los capilares, para que el sembrado sea el correcto
Procurar que el sembrado tenga una radio como maximo de 1ml
En el momento de colocar la ninhidrina en la placa hacer que llegue a
toda la placa
Cuando ponemos la placa de silica gel en la cocina, debemos tener
cuidado en no hacer contacto directo, por que la placa se podra quemar
CONCLUSIONES:
Los aminocidos aparecieron como manchas prpura sobre el fondo

Esta tcnica de separacin cromatogrfica es de las ms simples,
adems de que nos permiti estudiar esta tcnica y cualitativamente
observar la reaccin producida por medio de la ninhidrina que permite
identificar aminocidos ya que la reaccin de los aminocidos; con
ninhidrina se debe a la presencia del grupo NH2 en los mismos
observndose as una coloracin morada.
El factor de retencin depende de la afinidad de los aminocidos con el
disolvente. utilizado y esto mismo depende del tipo de aminocido que
se utilice, es decir si son polares, apolares, neutros, etc.,
Es importante esta tcnica ya que de esta manera se nos facilitaran
saber las caractersticas del aminocido que se este utilizando.
CUESTIONARIO:
Cul es el rol del adsorbente en la TLC?
Qu otros adsorbentes existen? Nombrar al menos 4.
Qu papel juega el solvente en la elusin del cromatograma?
Mencionar otros solventes que se utilizan en la TLC y escribir su frmula
Cul es el propsito del revelador en la cromatografa en capa fina?
Buscar 6 reveladores adicionales e indicar cul es su uso de cada uno de
los reveladores.
Qu otros materiales o sustancias pueden ser detectados por TLC?
RESPUESTAS
Ayuda a que las sustancias que se quieren diferenciar o

estudiar sean atradas hacia parte superior poco apoco y as
evitar una posible mezcla de todos los componentes
- Celulosa
- Oxido de aluminio
- Almidn
- Tierra Silcea

I Semestre
______________________________________________________________
9.
El solvente tiene la funcin de se parar los compuestos que

estn en estudio; depender lgicamente del componente que
se va a separar y del material en que la separacin se lleva a
cabo
- Benceno
C6H6
- Piridina
C5H5N
- Eter dietlico
C4H10O
Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de
mtodos que nos permitan visualizar el(los) componente(s)
presentes
- Yodo
- Acido sulfrico
- 2,4 - dinitrofenilhidracina
- Verde de bromocresol
- Paradimetil aminobenzaldehido
- cidos carboxlicos
- Aldehdos
- Cetonas
- Aminas
- Colorantes
BIBLIOGRAFA:
www.scribd.com
http://www.science.
http://www.textoscientificos.com/
10.
ANEXOS:
PRACTICA 7
(Resultados)
Datos con respecto a la concentracin del resultado del rota vapor
a) Reflujo:
145.11g (recipiente + bixina)
143.83g (concentrado del rota vapor)
Resultado peso neto = 1.25g de achiote
b) Ultrasonido:
145.11g (recipiente + bixina)

I Semestre
______________________________________________________________
143.84g (concentrado del rota vapor)
Resultado peso neto = 1.27g de achiote

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U.C.S.M. P.P. Ing.

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Rotular 4 beaker del 1 la 4

Preparar la suspensin de levaduras

Suspender 5g de levadura en 60ml de agua potable

Preparar los siguientes sistemas

Mezclar la masa con la bagueta

Grado de esponjamiento de la masa panaria

Altura de la masa panaria

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Sin aroma (-) suave (+) moderado (++) intenso (+++)

Mezclar bien la suspensin de la levadura procurando no dejar

La levadura provoca la fermentacin panaria. Actua sobre la

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Obtencin de un producto insoluble con un agente precipitante. Ej.:

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Seleccionar cscaras de naranja en buen estado. Registrar

La obtencin de pectina a partir de la cscara de naranja es la

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Escoger las mejores cscaras

Qu otros residuos se utilizan para producir pectinas?

De los restos del prensado de la produccin del zumo de la

Mtodos que emplean iones metlicos cobre, nquel, hierro,

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Figura N2: Licopeno

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Figura N3: Capsantina (Capsanthin)

Figura N4: Capsorrubina (Capsorubin)

Figura N5: Crocentina (Crocentin)

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

U.C.S.M. P.P. Ing.Biotecnolgica

Material vegetal : 25g de achiote

Material vegetal : 25g de achiote

II) FILTRADO AL VACIO

Cromatografa en capa fina (TLC) : en una tcnica que nos

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Factores de regencia de:

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Lo obtencin de bixina a travs de las semillas de achiote por

En el proceso de extraccin de bixina por el reflujo, para no

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-En al extraccin de aceites esenciales de semillas.

- Preparacin de liposomas en cosmtica

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Presente en: Salmn, gamba, langosta, plumas de flamencos y algas

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Presente en : Salmn, gamba, cantarel y otros hongos, algas y plumas de

Presente en bacterias rojas

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Presente en corales y algas

Presente en salmn y crustceos

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Presente en algas y plantas marinas

En los ltimos aos el consumo de los carotenoides, que se encuentra en

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