OBJETIVOS:

Conocer diversas formas de cultivo de microorganismos

MARCO TEORICO
En biologa, y especficamente en microbiologa, un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de
microorganismos, tales como bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo
para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un mtodo fundamental para el
estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y
veterinaria.
APLICACIONES:
Medios enriquecidos: Aaden nutrientes a los cultivos donde el microorganismo exige mucho. (Ej.
sangre para que crezca Hemofilus)
Medios selectivos: Aaden compuestos al agar que permiten el crecimiento selectivo de los
microorganismos. Ej. Cristal violeta: slo crecen Gram-; Maltosa: Slo crecen los que tengan la
enzima maltasa; Penicilina: slo crecen eucariotas; etc.)
Medios diferenciales: Los microorganismos crecen de forma diferente, aadiendo al medio
sustancias especiales (sangre). Se usa tambin viraje de colores. Ej. en sangre diferenciamos los
organismos hemolticos de los que no los son; en EMB (eosina azul de metileno vemos los que
aprovechan lactosa de los que no; medio McConky (rojo neutro); en sales de pb vemos los
productores de SH2 que dan un precipitado negro de lo que no lo producen.Un ejemplo tpico es el
caldo comn, que es glucosa ms extracto de carne, y peptona , se ajusta el pH, se aade NaOH,
tamponamos, filtramos, espesamos y por ltimo esterilizamos.
SIEMBRA: TCNICAS E INSTRUMENTOS:
.- INSTRUMENTOS: Asa de siembra: picadura. Asa de vidrio. Pipeta Pasteur.
.- TCNICAS: De lquido a placa: Se puede hacer de dos formas: a) Estra en placa, Asa de
cultivo asa de vidrio. b) Extensin en placa. De lquido a tubo: Se puede hacer: a) En tubo
inclinado. Aumenta la superficie. b) En Tubo no inclinado. Por picadura. c) Semislido. Por
picadura. Tambin se puede transferir a un cultivo puro.
OBTENCIN DE CULTIVOS PUROS
1. Siembra en superficie. Extensin y estra.
2. Vertido en placa. Mezclando los microorganismos con agar fundido a 44C, y se echa luego
sobre la placa. Los microorganismos crecen en la superficie y dentro
3. Tcnicas de enriquecimiento. Aplicar el elemento adecuado (por ejemplo benzoato) al tubo de
ensayo, se aslan microorganismos que no se aslan con los mtodos anteriores y que estn en
pequeas cantidades (como pueden ser aquellos que slo usan benzoato). Se debe realizar varias
veces para asegurarnos que tenemos un cultivo puro. (Otros ejemplos: elevada temperatura para
termfilos; calentamiento a 80C para esporulados y termfilos.)

4. Dilucin seriada. Slo aslo el microorganismo ms abundante. (Lister con Streptococcus lactis
hace diluciones, cada dilucin la siembra en 20 tubos, cuando de un dilucin dlo crece el 5% la
probabilidad de que en ese tubo crezca 1 alo tipo de microorganismo es del 4.8%, as estamos
seguros de que slo existe un tipo de microorganismo).
5. Micromanipulador: aislamos una sola clula utilizando este aparato.
6. Aislamiento de microorganismos anaerobios. Micromanipulados. Obtenemos los organismos
anaerobios por una adicin de agar a 44C, mezclamos y tapamos con parafina (aceite estril).
Eliminamos el O2 con agentes reductores (tioglicolato, aadimos un colorante REDOX para ver
cuando se ha reducido), con una vela que consuma el oxgeno, usamos la jarra de anaerobios
(sistema que produce CO2 + H2 y un catalizador que consume O2). Cuanto ms sensibles son
ms precauciones tenemos que tomar. PARAFINA
CUESTIONARIO
1. Cundo realizara cultivo por diluciones?

Cuando al diluir una muestra se consigue muy pocas clulas que tras inocularse en un
medio de cultivo, generen colonias aisladas. Metodologa:
Ahora tomamos 0.1 ml de cada tubo y lo depositamos en una placa petri con medio de
cultivo. Con un asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre la placa, e incubams a 37 C
durante 24 horas.
En la primera dilucin habr un amasijo de colonias. En la siguiente habr diez veces
menos nmero de colonias, y as sucesivamente hasta conseguir colonias aisladas.
Este mtodo nos permite calcular el nmero de microorganismos viables que existen en la
muestra que estamos analizando:
N=C 1/D 1/i donde:
N es el nmero de microorganismos presentes en la muestra
C es el nmero de colonias contadas UFC (unidades formadoras de colonias)
D es la dilucin
I es el inculo
Debe haber entre 30 y 300 colonias. Si hay menos, no es significativo (puede tratarse de
una contaminacin) y, si hay ms, no estn aisladas.
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