Manual de Coleta e Envio de Amostras PDF

LABORATRIO CENTRAL DO ESTADO DO PARAN
MANUAL DE COLETA E ENVIO DE AMOSTRAS BIOLGICAS AO LACEN/PR

MANUAL 1.30.001
REVISO 01
LACEN
Mais de um sculo de histria....
CURITIBA
2012
Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR
GOVERNO DO ESTADO DO PARAN

Carlos Alberto Richa
SECRETARIA DE ESTADO DA SADE SESA

Michele Caputo Neto
DIREO GERAL DA SESA

Ren Jos Moreira dos Santos
SUPERINTENDNCIA DE VIGILNCIA EM SADE

Sezifredo Paulo Alves Paz
DIREO DO LABORATRIO CENTRAL DO ESTADO

Clia Fagundes da Cruz
LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA DO PARAN

UNIDADE GUATUP
Rua Sebastiana Santana Fraga, 1001 - CEP 83060-500
So Jos dos Pinhais - Paran
Fone (41) 3299-3200 - Fax (41) 3299-3204
www.saude.pr.gov.br/lacen
DIREO DO LABORATRIO CENTRAL DO ESTADO

CHEFIA DA DIVISO DE GESTO DE QUALIDADE E BIOSSEGURANA

Rosiane Nickel
CHEFIA DA DIVISO DE SUPORTE OPERACIONAL

Sonia Maria Dotto Ampessan
CHEFIA DA DIVISO DOS LABORATRIOS DE EPIDEMIOLOGIA E CONTROLE DE DOENAS

Elizabeth El Hajjar Droppa
CHEFIA DA DIVISO DE LABORATRIOS DE VIGILNCIA SANITRIA E AMBIENTAL

Daniel Altino de Jesus
CHEFIA DA DIVISO DO SISTEMA ESTADUAL DE LABORATRIOS DE SADE PBLICA
Suely Harumi Ioshii
ELABORADO/REVISADO POR:
Tcnicos responsveis pelos diagnsticos/exames
EQUIPE DE APOIO:
Marisa Aparecida Mathias
Ricardo dos Santos Bergamo
REVISO FINAL
Rosiane Nickel
SUMRIO
PARTE I APRESENTAO ........................................................................... 1

1
OBJETIVO ................................................................................................... 2
CAMPO DE APLICAO ............................................................................ 2
DEFINIES/SIGLAS ................................................................................. 2
1. PARTE I APRESENTAO
O Laboratrio Central do Estado do Paran Lacen/PR o Laboratrio de
Referncia Estadual para o diagnstico de doenas infecciosas, com prioridade para
as doenas de notificao compulsria e de interesse epidemiolgico, sanitrio ou
ambiental. Nos casos de exames no realizados no Lacen/PR, as amostras so
redirecionadas para Laboratrios ou Centros de Referncia Regionais ou Nacionais.
Este manual um informativo da rea de Laboratrios de Epidemiologia e
Controle de Doenas. Foi elaborado pelos tcnicos do Lacen/PR, com o objetivo de
informar quais exames so realizados e orientar os procedimentos de coleta,
armazenamento e envio de materiais. Este manual se constitui em uma ferramenta
de uso contnuo, garantindo resultados confiveis e melhores servios. Deve servir
de instrumento de consulta e facilitar a atuao dos tcnicos nos servios de coleta e
envio de amostras para o Lacen/PR.
Este manual foi dividido em partes para facilitar sua leitura e aplicao. A
Parte II traz orientaes gerais sobre as atividades realizadas dentro do laboratrio
com enfoque em procedimentos de Biossegurana. Na Parte III constam as
informaes sobre os exames, organizadas primeiramente pelo tipo de material a ser
coletado e orientaes gerais sobre o acondicionamento e transporte, incluindo a
relao dos documentos necessrios para acompanhar as amostras biolgicas
encaminhadas para exame. Na Parte IV, as orientaes so especficas e esto
organizadas por seo e servio onde o exame realizado, com detalhes sobre a
quantidade e tipo de material, bem como a forma de armazenamento e condies de
transporte exigidas para os ensaios.
1 OBJETIVO
Este Manual tem por objetivo fixar condies, padronizar, definir e estabelecer
regras e recomendaes para coleta e envio de amostras biolgicas ao Laboratrio
Central do Estado do Paran Lacen/PR.
2 CAMPO DE APLICAO
Este documento aplica-se coleta, preparo e transporte de amostras biolgicas,
para todos os servios que solicitam exames ao Lacen/PR.
3 DEFINIES/SIGLAS
Para efeito deste documento, so adotadas as seguintes definies e siglas:
a) ANF Aspirado de Nasofaringe.

b) BPA-I Boletim de Produo Ambulatorial Individualizado.
c) CA Certificado de Aprovao. um documento emitido pelo Ministrio do
Trabalho e Emprego, que certifica que o EPI satisfaz os requisitos mnimos de
qualidade estabelecidos em Norma Tcnica. A certificao feita mediante
relatrio de ensaios emitido por um laboratrio credenciado pelo Ministrio do
Trabalho e Emprego.
d) CSB Cabine de Segurana Biolgica
e) EPC Equipamento de Proteo Coletiva.
f) EPI Equipamento de Proteo Individual.
g) EPR Equipamento de Proteo Respiratria.
h) HBV Vrus da Hepatite B
i) HCV Vrus da Hepatite C
j) LACEN/PR Laboratrio Central do Estado do Paran.
k) MTE Ministrio de Trabalho e Emprego.
l) MTV Meio de Transporte Viral.
m) NR Norma Regulamentadora do MTE.
PARTE II CONDIES GERAIS
SUMRIO
CUIDADOS PRELIMINARES ...................................................................... 4
PROCEDIMENTOS DE BIOSSEGURANA ............................................... 4

2.1
Equipamentos de Proteo Individual EPI ..................................................4
2.2
Equipamentos de Proteo Coletiva EPC...................................................7
2.3
Lavagem das Mos ........................................................................................8
2.4
Limpeza e Desinfeco da Bancada de Trabalho ..........................................8
2.5
Descarte de Materiais Contaminados e Perfurocortantes ............................10
2.6
Precaues Especiais ..................................................................................11
2.7
Boas prticas em relao no uso de centrfuga ...........................................11
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1 CUIDADOS PRELIMINARES
Para que se possa realizar uma anlise, e liberar um resultado confivel,
necessrio que os procedimentos pr-analticos, ou seja, coleta, conservao e
transporte dos materiais biolgicos, sejam realizados de acordo com as normas que
visam garantir a qualidade das amostras. Portanto, as instrues contidas neste
Manual devem ser rigorosamente observadas.
2 PROCEDIMENTOS DE BIOSSEGURANA
A Biossegurana constitui parte integrante e importante do sistema e das polticas
para determinar a qualidade da empresa.
A educao e a preveno so bases para qualquer programa de segurana
biolgica. O variado elenco de riscos biolgicos inerentes prtica laboratorial
demanda uma abordagem ampla, persistente e associada a aspectos de motivao
e bem estar no ambiente laboratorial.
Durante todo o processo, desde a coleta do material biolgico at a anlise
laboratorial, imprescindvel a adoo de medidas de Biossegurana, de forma a
diminuir os riscos envolvidos.
2.1
Equipamentos de Proteo Individual EPI
todo dispositivo de uso individual, de fabricao nacional ou estrangeira, destinado

a proteger a sade e a integridade fsica do trabalhador. Como diz a prpria
definio, EPI um equipamento de uso individual, no sendo adequado o uso
coletivo, por questes de segurana e higiene. Na Figura 1, constam alguns
exemplos de EPI.
Figura 1 - Exemplos de Equipamentos de Proteo Individual.
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Todo EPI seja ele nacional ou importado, s pode ser comercializado ou utilizado
quando possuir o Certificado de Aprovao (CA), expedido pelo Ministrio do
Trabalho e Emprego (MTE) devendo apresentar, em caracteres indelveis e bem
visveis, o nome comercial da empresa fabricante ou importadora e o nmero de CA,
conforme estabelecido na Norma Regulamentadora NR-6 da Portaria 3214 de 1978,
do Ministrio do Trabalho e Emprego. Portanto, ao adquirir qualquer tipo de EPI
(luvas, respiradores, culos de proteo, etc.) observar se o mesmo possui o
nmero de CA.
A seguir, esto descritos alguns tipos de EPI, que podem ser utilizados durante a
coleta de amostras de material biolgico.
2.1.1
Jaleco (Guarda-p):
Deve ser utilizado em todos os tipos de procedimentos, sempre fechado, no sentido

de prevenir a contaminao da pele e da indumentria do tcnico.
O jaleco para coleta de material biolgico deve ter as seguintes caractersticas:
manga longa, com elstico no punho, comprimento mnimo na altura dos joelhos,
abertura frontal, preferencialmente de tecido de algodo ou no inflamvel.
proibido o uso do jaleco em locais pblicos, tais como: refeitrio, administrao,
biblioteca, ou seja, deve ser utilizado somente durante o a coleta e manuseio do
material biolgico.
2.1.2
Luvas
So utilizadas como barreira de proteo, prevenindo a contaminao das mos ao

manipular material contaminado. Desta forma, obrigatria a utilizao de luvas em
todos os procedimentos com risco de exposio o material infectante, a fim de
reduzir a incidncia de contaminao das mos: em coleta, manuseio e
acondicionamento de materiais biolgicos.
As luvas tambm reduzem a possibilidade dos micro-organismos presentes nas
mos do trabalhador sejam transmitidos aos pacientes durante procedimentos
invasivos ou quando pele no intacta, tecidos e mucosas possam ser tocadas.
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As luvas de proteo para a coleta de amostras biolgicas podem ser de

procedimento ou cirrgica, em ltex ou de vinil. Devem ser fabricadas de acordo com
as diretrizes do Instituto Nacional de Metrologia INMETRO.
proibido abrir portas, atender telefone, ou tocar objetos de uso comum por outras
pessoas usando luvas.
Salienta-se que a utilizao de luvas no exclui o ato da lavagem das mos.
2.1.3
Mscaras e equipamentos de proteo respiratria
Nas situaes com risco de formao de aerossis e gotculas de material

potencialmente contaminado devem ser utilizados mscaras ou Equipamentos de
proteo Respiratria (EPR).
Existem doenas de transmisso respiratria por gotculas e outras de transmisso
respiratria por aerossis, as quais requerem modos de proteo diferentes. Vrios
modelos de mscaras e equipamentos de proteo respiratria encontram-se
disponveis no mercado, os quais devem ser selecionadas de acordo com o risco
envolvido.
Doenas transmitidas por gotculas

Para as doenas transmitidas por gotculas (como por exemplo, caxumba,
coqueluche, rubola, meningite, difteria farngea), orienta-se que seja utilizada
mscara cirrgica sempre que entrar em contato com o paciente.
A mscara cirrgica uma barreira de uso individual que cobre o nariz e a boca,
indicada para proteger o Trabalhador de Sade de infeces por inalao de
gotculas transmitidas curta distncia e pela projeo de sangue ou outros fluidos
corpreos que possam atingir suas vias respiratrias.
importante destacar que a mscara cirrgica no protege adequadamente o
usurio de patologias transmitidas por aerossis, pois, independentemente de sua
capacidade de filtrao, a vedao no rosto precria neste tipo de mscara. A
mscara cirrgica no um EPI e, portanto, no possui Certificado de Aprovao.
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Doenas transmitidas por aerossis

A proteo respiratria para as doenas de transmisso area por aerossol (como
por exemplo, tuberculose pulmonar, sarampo, varicela, gripe viria), recomenda-se o
uso e seleo de EPR durante todo o perodo em que o Trabalhador de Sade
estiver em contato com o paciente ou sempre que entrar em um ambiente
contaminado pelo agente biolgico transmitido via aerossol.
Deve ser utilizado EPR contendo elementos filtrantes do tipo semifacial filtrante.
Recomenda-se a leitura da Cartilha de Proteo Respiratria contra Agentes
Biolgicos para Trabalhadores da Sade, que se encontra disponvel na pgina do
Lacen/PR (http://www.saude.pr.gov.br/lacen/).
A pea semifacial filtrante (PFF) um EPI que cobre a boca e o nariz,
proporcionando uma vedao adequada sobre a face do usurio. Possui filtro
eficiente para reteno dos contaminantes atmosfricos presentes no ambiente de
trabalho na forma de aerossis. A mscara conhecida como N95 refere-se a uma
classificao de filtro para aerossis adotada nos EUA e equivale, no Brasil, PFF2
ou ao EPR do tipo pea semifacial com filtro P2, pois ambos apresentam o mesmo
nvel de proteo.
2.1.4
culos de Proteo
Devem ser utilizados em situaes de risco de formao de aerossis, salpicos de

material contaminado ou quebras de vidraria.
Os culos de proteo devem ser de boa qualidade e oferecer total segurana ao
Trabalhador da Sade. Suas lentes devem ser transparentes, preferencialmente
anti-riscos e antiembaante.
2.2
Equipamentos de Proteo Coletiva EPC
So equipamentos que possibilitam a proteo do trabalhador, do meio ambiente e

do produto ou pesquisa desenvolvida.
2.2.1
Dispositivos de Pipetagem
So dispositivos que evitam o risco de acidentes, visto que a ao de pipetar com a
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boca um risco a integridade fsica e a sade do trabalhador.

Nunca usar a boca para pipetar, porque alm do risco de aspirao, torna mais fcil
a inalao de aerossis. Deve ser utilizado um dos vrios modelos disponveis
(figura 2), podendo ser de borracha (pra de borracha), pipetadores automticos,
eltricos, etc.
Figura 2 - Modelos de Dispositivos de Pipetagem.
2.2.2
Cabines de Segurana Biolgica CSB
So usadas como barreira primria para evitar propagao de aerossis, dando

proteo ao manipulador, ao meio ambiente e amostra ou procedimento, de
acordo com a classe e tipo da CSB.
2.3
Lavagem das Mos
Os locais de coleta devem possuir uma pia exclusiva para lavagem das mos.
a) lavar as mos sempre antes e aps o uso de luvas;
b) lavar as mos sempre ao trmino das atividades.
2.4
Limpeza e Desinfeco da Bancada de Trabalho
2.4.1
Material para Limpeza
Balde
Desinfetantes: lcool 70% (77 GL), Hipoclorito de Sdio a 2%
Escova
Etiquetas
Protetores de sapatos (para casos de derramamentos e quebras de materiais
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contaminados)
-
Saco para autoclave
2.4.2
Procedimento
Realizar a limpeza das bancadas com lcool a 70% no incio e no trmino das
atividades ou sempre que houver necessidade.
NOTAS:
-
Se no houver lcool 70% pronto, realizar o preparo a partir do lcool 96GL

(lcool comercial), na proporo de 73 mL do lcool para 27 mL de gua;
No uso de gua sanitria a 2%, observar sempre o prazo de validade e no

manter a embalagem aberta ou com furo na tampa, porque o cloro evapora e, em
diluio menor, perde sua funo desinfetante.
No caso de haver derramamento de material biolgico, efetuar a limpeza segundo o

procedimento descrito abaixo, utilizando os EPIs necessrios:
Usar luvas resistentes, avental e proteo facial e respirador devido ao

cloro;
Proteger os calados com material impermevel descartvel.
- Identificar o local imediatamente com um alerta de RISCO e isolar;

- Cobrir completamente a rea de derramamento com material absorvente e aplicar
soluo concentrada de Hipoclorito de Sdio a 2%;
- Usar material absorvente descartvel (toalhas de papel, compressas de gaze)
para absorver o derramamento. Se o volume derramado for grande, pode ser
usado absorvente granulado para absorver o lquido;
- Absorver a maior parte do lquido antes da limpeza;
- Aps 30 minutos, iniciar o procedimento de limpeza:
Enxaguar o local do derramamento com gua, a fim de remover

produtos qumicos nocivos ou odores;
Secar o local para prevenir escorreges.
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- Importante:
Se houver vidros quebrados ou outros fragmentos rgidos, recolher os

mesmos utilizando pinas ou ps de lixo plsticas, que devem ser
descartadas juntamente com os fragmentos recolhidos para um recipiente
apropriado (caixa de descarte de perfurocortantes), prova de
perfuraes;
Se houver risco de formao de aerossis, ex: quebra de tubo em

centrfuga, o equipamento dever ficar fechado durante pelo menos meia
hora, a fim de permitir a deposio das gotculas formadas antes de iniciar
a descontaminao;
Todo o material descartvel utilizado neste procedimento deve ser

encaminhado para a descontaminao antes do descarte.
2.5
Descarte de Materiais Contaminados e Perfurocortantes
a) Agulhas, seringas, tubos quebrados, tubos contendo material biolgico devem

ser desprezados em recipientes de paredes rgidas com tampa (latas de leite em
p ou similares podem ser utilizadas) e sinalizadas como INFECTANTE ou em
caixas coletoras prprias para material infectante, conforme Figura 3, atendendo
as determinaes da NR 32.
Figura 3 Modelos de caixas coletoras de material perfurocortante.
b) Papis contaminados, luvas, gaze, algodo e outros, devem ser recolhidos em

lixeiras com tampa, de preferncia com pedal, contendo saco para lixo especfico
para material infectante (cor branca leitosa).
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2.6
Precaues Especiais
- A coleta deve ser realizada de acordo com os procedimentos corretos e deve ser
designada a funcionrios competentes e treinados;
- Os tubos contendo as amostras e os formulrios de requisio de exame levaro
um rtulo assinalando risco de infeco ou outro alerta semelhante;
- Trabalhar com ateno para evitar acidentes: com agulhas, escalpes ou qualquer
outro instrumento perfurocortante; ao manusear ou limpar instrumentos usados;
ao descartar agulhas usadas;
- No recapear agulhas usadas; no remover agulhas usadas de seringas
descartveis; no entortar, quebrar ou realizar manipulao com agulhas usadas.
- Para o descarte, colocar seringas, agulhas, lminas ou qualquer outro instrumento
cortante em recipiente resistente perfurao. Colocar o recipiente o mais
prximo possvel da rea de trabalho.
- Ter precaues especiais no manejo do resduo hospitalar proveniente de
laboratrios de microbiologia e no manejo de espcimes contendo sangue ou
hemoderivados. O resduo infectante deve ser autoclavado para descarte.
2.7
Boas prticas em relao no uso de centrfuga
Quando se usa uma centrfuga, partculas infecciosas podem ser projetadas.

Empregando-se a tcnica correta de centrifugao, utilizando porta-tubo e tubos de
ensaio fechados, h proteo contra aerossis infecciosos e contra disperso de
partculas infecciosas.
Se possvel, utilizar centrfugas com tampa anti-aerossol.
- Para se ter segurana no uso de centrfuga necessrio o seu perfeito
desempenho mecnico;
- Operar a centrfuga de acordo com as instrues do fabricante;
- Coloc-la em tal nvel, que tanto os funcionrios de baixa ou de alta estatura
possam visualizar o seu interior;
- Os portas-tubo devem ter pesos correspondentes e devem ser equilibrados
corretamente; os tubos no balanceados quebram e lanam estilhaos, aerossis
e gotculas de amostra;
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- Equilibrar o peso dos tubos, utilizando com tubo com gua, se necessrio;
- Ligar o equipamento somente quando a tampa estiver devidamente travada;
- Para desacelerar, usar apenas o controle de freio da centrfuga, nunca a mo.
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13
PARTE III AMOSTRAS
SUMRIO
DOCUMENTOS.......................................................................................... 14
1.1
Fichas de Notificao ...................................................................................14
1.2
Boletim de Produo Ambulatorial Individualizado BPA-I ............................14
1.3
Cadastro no Sistema Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL ...........14
COLETA..................................................................................................... 15
2.1
Sangue.........................................................................................................15
2.2
Secrees ....................................................................................................16
2.3
Outros Materiais ...........................................................................................21
2.4
Fezes ...........................................................................................................33
ACONDICIONAMENTO E CONSERVAO DAS AMOSTRAS .............. 35
TRANSPORTE........................................................................................... 37
CRITRIOS PARA REJEIO DAS AMOSTRAS.................................... 40
1 DOCUMENTOS
Os documentos necessrios para cada exame esto relacionados na Parte IV junto
s informaes especficas para cada exame.
1.1
Fichas de Notificao
As Fichas de Notificao, sempre que necessrias, devero ser encaminhadas com

todos os campos devidamente preenchidos.
1.2
Boletim de Produo Ambulatorial Individualizado BPA-I
Os
Boletins de Produo Ambulatorial Individualizado BPA-I devero ser
encaminhados com todos os campos devidamente preenchidos, sem rasuras, e

acompanhar os seguintes exames:
-
Contagem de Linfcitos CD4/CD8;
Quantificao de Carga Viral de HIV;
Teste Quantitativo do Vrus da Hepatite C HCV;
Teste de Genotipagem da Hepatite C HCV;
1.3
Cadastro no Sistema Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL

-
Cadastrar no Sistema GAL todos os exames, antes de enviar ao Lacen/PR,

conforme orientaes do Manual do Usurio do GAL;
Preencher os dados do Sinan;
Preencher todos os campos da requisio, mesmo que no sejam

obrigatrios;
Fornecer os dados clnicos do paciente, substituindo assim o envio de

requisies e outros documentos;
Imprimir o relatrio dos exames a serem encaminhados e enviar com as

requisies e amostras.
Importante: Somente as amostras para Contagem de Linfcitos
CD4/CD8 e para Quantificao de Carga Viral de HIV no devero ser
cadastradas no GAL.
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2 COLETA
2.1
Sangue
a) Realizar os seguintes procedimentos antes de iniciar a coleta: lavar as mos,

colocar luvas, identificar os tubos, encaixar a agulha na seringa com o auxlio de
uma pina, inspecionar a ponta da agulha (no deve estar rombuda ou torta) e
mover o mbolo da seringa. Para coleta a vcuo, rosquear a agulha no suporte
com o auxlio de uma pina;
b) Colocar o torniquete (garrote) para que as veias fiquem mais salientes;
c) Inspecionar as veias cuidadosamente e verificar a mais adequada para a
puno;
d) Fazer a assepsia do local com algodo embebido em lcool 70%; em seguida,
puncionar a veia e coletar o sangue;
Para coleta a vcuo, cuidar para no retirar o tubo enquanto houver

vcuo, para que a quantidade de sangue produza a quantidade de
soro ou plasma necessrio;
A presso do torniquete no deve ser mantida mais que 60

segundos, porque produz aumentos na concentrao de clulas
sanguneas;
e) Colocar o sangue, contido na seringa, cuidadosamente nos tubos prprios,

deixando escorrer suavemente pela parede interna do tubo;
Para coleta vcuo, o sangue dever ser mantido nos tubos

prprios para os exames.
Obteno de soro e/ou plasma

a) colocar luvas;
b) abrir a centrfuga e colocar os tubos com o sangue nas caapas, tomando o
cuidado de equilibr-los;
c) fechar a tampa da centrfuga, marcar 3000 a 4000 RPM e ligar por 5 minutos;
Para os exames de biologia molecular observar o tempo e a

rotao da centrfuga conforme descrito em cada exame.
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d) No abrir a tampa da centrfuga antes de parar totalmente de rodar e nem tentar

parar com a mo ou instrumentos. Recomenda-se no abrir a centrfuga
imediatamente aps parar, devido formao de aerossis que podem ser
infectantes, por isto, deve-se esperar alguns minutos para que as partculas
sedimentem;
e) Retirar os tubos das caapas com auxlio de uma pina e colocar em estante
prpria;
f) Verificar o aspecto da amostra. O soro ou plasma deve estar livre de resduos de
hemcias. Se o soro estiver fortemente hemolisado ou lipmico, nova coleta deve
ser providenciada;
g) Transferir o soro ou plasma obtido para o tubo correspondente, previamente
identificado, com auxlio de pipeta plstica tipo Pasteur descartvel ou pipeta;
2.2
2.2.1
Secrees
Pesquisa de Streptococcus pyogenes (Estreptococos do grupo A):
a) Orofaringe:
- Em local bem iluminado, pedir para o paciente engolir a saliva.
- Coletar o exsudato tonsilofaringeano com auxlio de um abaixador de lngua e um
swab estril. Friccionar firmemente o swab contra a parede posterior da faringe do
paciente e em seguida, friccionar a tonsila direita e esquerda, especialmente sobre
reas com pus.
- Retirar o swab evitando tocar na vula, lngua ou lbios para evitar contaminao
da amostra com micro-organismos da microbiota oral normal.
b) Feridas secas:
- Lavar bem a ferida com soluo fisiolgica, remover a crosta com bisturi e proceder
coleta com swab estril, friccionando firmemente o centro da leso.
c) Feridas midas/Abscessos:
- Lavar bem a ferida com soluo fisiolgica, remover a crosta com bisturi e proceder
coleta do exsudato com auxlio de seringa e agulha estril.
d) Secreo de material cirrgico:
- A coleta deve ser realizada pelo mdico, durante o procedimento de debridamento
cirrgico (utilizar a secreo entre as fscias musculares).
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2.2.2
Pesquisa de Corynebacterium diphtheriae (Difteria):
a) Orofaringe:
- Introduzir o swab estril sobre as superfcies das tonsilas, vula e regies
adjacentes. Tomar o cuidado de no desprender a pseudomembrana quando
presente.
b) Nasofaringe:
- Introduzir o swab nas fossas nasais anteriores, fazendo com que o algodo entre
em contato com a superfcie da mucosa nasal. Girar continuamente o swab durante
a coleta.
c) Leses cutneas:
- Lavar previamente a ferida ou lcera com soro fisiolgico. Umedecer o swab em
soro fisiolgico estril e pressionar o mesmo contra a base das leses.
2.2.3
Pesquisa de Bordetella pertussis (Coqueluche):
a) Nasofaringe:
- Observar as bordas do orifcio nasal quanto presena de fissuras ou crostas.
- Coletar o material introduzindo um swab de algodo, alginatado estril de haste
flexvel, na cavidade nasal o mais profundamente possvel, e produzir movimentos
giratrios suaves, retornar o swab e friccionar sobre as leses do nariz, se
existentes.
2.2.4
Pesquisa de vrus respiratrios
a) Aspirado de nasofaringe (ANF)

A coleta de ANF um processo indolor podendo apenas provocar lacrimejamento
reflexo. O coletor de muco (plstico) descartvel recomendado para obteno do
espcime. A aspirao pode ser realizada com bomba aspiradora porttil.
Este material coletado somente pelas Unidades Sentinelas do Ministrio da Sade.
Material necessrio:
- Bomba de aspirao porttil;
- Coletor plstico descartvel de secrees (Fornecido pelo Lacen/PR);
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- Meio de transporte viral MTV (Fornecido pelo Lacen/PR);

- EPIs: avental, gorro, culos, luvas e mscara tipo respirador para partculas N95
ou PFF2.
Procedimento de coleta, conforme figura 4:
a) Inserir a sonda atravs da narina at atingir a regio da nasofaringe quando
ento o vcuo aplicado aspirando a secreo para o interior do coletor.
O vcuo deve ser colocado aps a sonda localizar-se na
nasofaringe, uma vez que, se no momento da introduo da sonda

houver vcuo, poder ocorrer leso da mucosa.
b) Realizar o procedimento em ambas as narinas, mantendo movimentao da
sonda para evitar que haja presso diretamente sobre a mucosa provocando
sangramento.
c) Alternar a coleta nas duas fossas nasais at obter um volume suficiente,
aproximadamente 1 mL de ANF.
d) Aps a coleta, aspirar o MTV (previamente descongelado e em temperatura
ambiente) para dentro do coletor plstico de secrees, descartvel;
a) Fechar o frasco e identific-lo com etiqueta em letra de forma ou etiqueta do GAL
com cdigo de barras.
Figura 4 Esquema para coleta de material de ANF
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b) Swabs combinados (nasal/orofaringe)

Material necessrio para a coleta swabs combinados (nasal/orofaringe)
-
3 swabs de Rayon (Fornecidas pelo Lacen/PR)
Meio de transporte viral MTV (Fornecido pelo Lacen/PR)
EPIs: avental, gorro, culos, luvas e mscara tipo respirador para partculas
N95 ou PFF2.
Importante:
A tcnica de coleta de amostras por meio de swab combinado de nasofaringe

e orofaringe deve ser realizada exclusivamente com swab de rayon.
Os swabs de rayon devem ser estreis e com alas de plsticos, no devendo

ser usados swabs com hastes de madeira e alginato de clcio.
No dever ser utilizado swab de algodo, pois o mesmo interfere nas

metodologias moleculares utilizadas.
Procedimento de coleta, conforme figura 5:

Para o procedimento de coleta deve-se examinar a fossa nasal do paciente com o
intuito de verificar a presena de secrees e a posio do corneto inferior e mdio.
A inspeo feita deslocando-se a ponta do nariz para cima com o dedo polegar e
inclinando-se a cabea do paciente para trs. Pedir para o paciente assuar (limpar) o
nariz caso haja secrees.
- O objetivo do swab colher um esfregao de clulas e no secrees nasais.
a) Introduzir o swab na cavidade nasal do paciente (cerca de 5 cm), direcionando-o
para cima (direo dos olhos), com uma angulao de 30 a 45 em relao ao lbio
superior.
-
Certificar-se que o estilete ultrapassou o corneto inferior, atingindo o meato
mdio. Aps a introduo, esfregar o swab com movimentos circulares delicados,

pressionando-o contra a parede lateral do nariz (em direo orelha do paciente).
b) Coletar amostras de ambas as narinas e da orofaringe utilizando um swab para
cada sitio, ou seja, coletar trs amostras por paciente com trs swabs diferentes.
c) Aps a coleta, acondicionar os trs swabs no mesmo frasco contendo o MTV
previamente descongelado e que deve estar em temperatura ambiente.
d) Cortar o excesso das hastes dos swabs.
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e) Tampar o frasco contendo os swabs e identificar com uma etiqueta em letra de

forma ou etiqueta do GAL com cdigo de barras.
f) Descartar corretamente como resduos do GRUPO A1;
Importante:
Os tubos ou os bronquinhos contendo as amostras devem ser protegidos de

vazamentos: acondicionar em recipientes plsticos com tampa de rosca.
Colocar na posio vertical em recipientes que garantam esta posio at a
chegada ao Lacen/PR.
O material gentico viral extremamente lbil e, portanto, facilmente

degradado
pelo
manuseio
inapropriado
ou
pela
demora
em
seu
processamento.
Figura 5 Esquema para coleta de material de Swabs combinados
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2.3
Outros Materiais
2.3.1
Pesquisa de micoses superficiais, cutneas e profundas
a) Raspado de Pele
- Raspar vrias escamas de pele das bordas da leso utilizando lminas de bisturi,
coletar em placa de Petri estreis ou entre duas lminas de vidro estreis (figura 6).
Figura 6 - Coleta de amostra para exame micolgico.
b) Couro cabeludo e pelos

- Coletar amostras de regies afetadas como reas depiladas, ou em cabelos
partidos e sem brilho; ou ainda locais com descamao com auxlio de lminas de
bisturi, cureta ou pina e colocar em placas de Petri estreis ou entre duas lminas
de vidro.
c) Unha:
- Desinfetar o local de coleta com lcool a 70%, raspar a regio entre a poro
doente e a poro sadia de uma unha com uma lmina ou bisturi e desprezar as
primeiras escamas, recolhendo o restante para uma placa de Petri estril ou entre
duas lminas de vidro estreis.
d) Leses cutneas ulceradas:
- Fazer bipsia, sempre que possvel o bordo da leso e sob condies asspticas
retirar o fragmento e coloc-lo em frasco contendo soluo salina ou gua destilada
estril.
e) Leses cutneas no ulceradas:
- Desinfetar o local com lcool 70% embebido em gaze. Secar espontaneamente.
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- Raspar os bordos da leso com lmina de bisturi para uma placa de Petri estril ou
entre duas lminas de vidro estreis.
f) Medula ssea:
- Colher assepticamente em ambiente hospitalar, aspirando 0,5 ml em seringa
heparinizada estril. Girar bem a seringa para misturar bem o material com o
anticoagulante.
g) Sangue:
Coletar em frasco aerbio de hemocultura automatizado, observando o volume
indicado nas orientaes de hemocultura
h) Urina:
Lavar rigorosamente os genitais externos com gua e sabo. Enxaguar bem, colher,
desprezando o 1 jato e em seguida, coletar o jato intermedirio em frasco estril,
desprezando o ltimo jato.
i) Abscessos e fstulas:
Material proveniente de secreo:
Aspirar com uso de agulha e seringa descartveis; caso o material seja muito
viscoso ou granuloso, injetar previamente no local pequena quantidade de
soluo salina estril;
Material proveniente de leses fistuladas:
Aspirar com seringa sem agulha, ou com swab de algodo, que dever ser
acondicionado em tubo estril em volume suficiente para recobrir a ponta do
swab, evitando-se dissecao (em salina estril).
2.3.2
Pesquisa de Mycobacterium leprae (Hansenase)
Linfa
Locais de coleta:
a)
Preconizado: lbulos de orelha direita e esquerda, cotovelos direito e esquerdo;
b)
A critrio mdico: joelhos direito e esquerdo, borda e centro das leses.
Volume: Boa quantidade (equivalente a 1 gota)

Nmero de Amostras: 04 para cada paciente ou a critrio mdico
Preparo do paciente: Explicar o procedimento de coleta a ser realizado.
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Tcnica de coleta:
-
Orientar o paciente sobre o procedimento de coleta;
Fazer assepsia do local a ser coletado com lcool a 70%;
Com auxilio de uma pina de Kelli curva, fazer uma boa isquemia para impedir o
fluxo de sangue;
-
Com auxlio de um bisturi n 15, realizar um corte de aproximadamente 5 mm de
comprimento por 3 mm de profundidade (figura 7);

-
Com o lado no cortante da lmina, raspar o bordo interno do corte obtendo boa
quantidade de material (1 gota);
Figura 7 Coleta de Linfa para pesquisa de Hansenase
Transferir o raspado para lmina de vidro bem limpa e nova, previamente
identificada com lpis ponta de vdea ou com ponta de diamante;

-
Espalhar o material com a parte plana do bisturi em movimentos circulares a fim
de obter um esfregao uniforme abrangendo uma rea de 5 a 7 mm de dimetro;

-
Os 4 esfregaos sero colocados um ao lado do outro com a distncia de 1 cm
na seqncia da coleta do material. Cada lmina dever ter, no mximo, 4

esfregaos, sendo 1 de cada local de coleta do paciente, devidamente identificados
(figura 8);
Figura 8 - Distribuio padro dos esfregaos na lmina
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Os esfregaos no devem conter sangue, para no ocorrer interferncia no
exame microscpico;
-
Para o mesmo paciente, usa-se a mesma lmina e bisturi aps limp-la com
lcool e pass-la em chama;

-
Deixar os esfregaos secarem temperatura ambiente. Em seguida, passar a
lmina na chama, por trs vezes rapidamente, observando para que a face em que
se encontram os esfregaos fique para cima (fixao);
-
Usar sempre lmina e bisturi novos a cada paciente;
A inciso feita no paciente deve ser coberta com um curativo estril (bege).
2.3.3
Pesquisa de Mycobacterium tuberculosis (Tuberculose)
Escarro
Orientaes para coleta de escarro 1 e 2 Amostras, conforme figuras 09 e 10.
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Figura 9 - Orientaes para coleta de escarro 1 Amostra
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Figura 10 - Orientaes para coleta de escarro 2 Amostra
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2.3.4
Pesquisa de Malria e Doena de Chagas

Tcnica de confeco da Gota Espessa para pesquisa de Malria e Doena
de Chagas, conforme figura 11.
Figura 11 Tcnica de confeco de gota espessa
Procedimentos:
-
Trabalhar sobre superfcie plana horizontal.
Preencher os dados do paciente estabelecidos no formulrio.
Usar duas lminas (ver modelos na figura 12), colocar uma lmina sobre uma
superfcie plana, sendo o manuseio pelas extremidades sem tocar as superfcies. De
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preferncia, a lmina deve estar com etiqueta auto-adesiva para o registro da

identificao ou usar lmina com extremidade esmerilhada (fosca).
Pode ser feito em qualquer dos dedos da mo, lbulo da orelha ou

em lactentes o dedo grande do p ou o calcanhar. com gaze ou
algodo embebido de lcool e enxugar com gaze ou algodo.
Limpar vigorosamente a pele do local de puno (parte lateral);
Retirar o estilete do envoltrio estril, segurando-o com a mo esquerda (ou a de

melhor posio para quem for executar a puno), puncionar o local de maneira
firme e leve.
Remover a primeira gota de sangue com gaze ou algodo seco;
Comprimir o dedo suavemente para obter outra gota de sangue esfrica sobre a
pele seca;
Segurando a lmina firmemente pelas bordas numa das extremidades contra o

indicador (que est comprimindo o dedo do paciente) baixa-se lentamente a lmina
at tocar o alto da gota de sangue (sem entrar em contato com a pele do paciente).
Se a quantidade de sangue for insuficiente, pode-se colocar outra

gota ao lado;
Colocar a lmina com a face para cima na superfcie de trabalho. Com o canto e os
primeiros 5mm da borda longa da segunda lmina, espalhar o sangue formando um
retngulo de tamanho e espessura adequados;
Tomar outra amostra, colocar ao lado da primeira e espalhar da mesma maneira;
As gotas espessas devem ser localizadas na parte central da

lmina.
Limpar o local puncionado com gaze ou algodo secos, se necessrio pressionar.
Secar com fluxo de ar com ventilador ou com um pedao de carto, ar morno, caixa
com lmpada, estufa, ou sob o prprio quebra-luz com suporte para secagem de
lminas recm-colhidas ou coradas.
Em lugar da segunda gota espessa pode-se colocar uma gota de sangue e fazer um
esfregao sanguneo (extenso).
Obs.: No registrar o nmero da lmina na prpria amostra de sangue.
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Figura 12 Modelos de lminas usadas na microscopia da malria
2.3.5
Pesquisa de meningites e meningococcemias
Lquor
A coleta realizada pelo mdico;
Utilizar os kits, para meningite e meningococcemia, fornecidos pelo Lacen/PR;
Importante: No romper os lacres dos frascos que sero enviados ao
Lacen/PR para evitar contaminao das amostras, seja durante a
coleta, transporte ou processamento da amostra de LCR.
Kit para Meningite Bacteriana
Este kit composto de:
01 Frasco de gar Chocolate;
02 Frascos vazios estreis;
02 Lminas em portas-lmina.
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Envelope - Frente
Envelope - Verso
Composio do Kit
Figura 13 - Kit para Meningite Bacteriana
Importante: A data de validade est no rtulo de cada frasco.

No usar aps o vencimento.
Frasco de gar Chocolate

- Armazenar os meios de cultura gar Chocolate, antes de serem utilizados, em
geladeira (2 a 8 C);
- Manter sempre um kit temperatura ambiente, de fcil acesso, para poder usar
imediatamente, quando necessrio;
- Levantar o lacre central do frasco e fazer assepsia da tampa de borracha
friccionando com algodo umedecido em lcool a 70 %, por um minuto;
-
Injetar 2 a 3 gotas de lquor no frasco de gar Chocolate, com seringa, aps a

assepsia da tampa de borracha;
Colocar no fundo da lata de alumnio ou em jarra para CO2, o frasco de gar

Chocolate semeado, tantos quantos couberem no fundo;
Para obter atmosfera de CO2 poder utilizar lata de alumnio ou

jarra para CO2. Colocar um pequeno chumao de algodo
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umedecido com gua e uma pequena vela no fundo da lata ou

jarra;
Atear fogo na vela e fechar imediatamente a lata de alumnio ou

a jarra para CO2, com a vela ainda acesa;
Incubar a jarra fechada em estufa a 35/36 C, por 24/48 horas;
Enviar o frasco de gar Chocolate ao Lacen/PR, unidade Guatup, em caixa de

isopor temperatura ambiente.
Frascos Vazios Estreis

Frasco 1 - Para laboratrio local
-
Fazer assepsia da tampa de borracha;
Com auxilio de seringa, injetar 1 a 2 ml de lquor no frasco vazio estril;
Enviar imediatamente ao laboratrio local para execuo das Anlises

Bacteriolgica e Citoqumica (contagem de clulas com diferencial de leuccitos,
dosagem de glicose, protena e cloretos);
Frasco 2 - Para envio ao Lacen/PR
Fazer assepsia da tampa de borracha (SEM ROMPER O LACRE);
Com auxilio de seringa, injetar 1 a 2ml de lquor no frasco vazio estril;
Enviar ao Lacen/PR, unidade Guatup, em caixa de isopor com gelo reciclvel

para Anlise Bacteriolgica e Ltex.
Lminas para colorao de Gram - 02 Lminas em portas-lmina
-
Fazer esfregao de lquor nas 02 lminas;
Identificar;
Lmina 1 - esfregao seco, sem corar;
Lmina 2 - esfregao corado pelo Gram (esta deve ser a mesma lmina lida no
Laboratrio Local);
Colocar as 02 lminas em Porta-lmina;
Usar 01 porta-lmina por paciente;
Enviar ao Lacen/PR, unidade Guatup, na caixa de isopor junto com o gar

Chocolate, em temperatura ambiente.
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Kit para Meningococcemia
Este kit composto de:
01 Frasco vazio estril para soro Ltex;
01 Frasco para Hemocultura Automatizado, Peditrico (tampa amarela) ou

Adulto (tampa azul ou verde).
Utilizar para pacientes com quadro hemorrgico (petquias, sufuses,

equimoses e leses)
Assegurar todos os itens do kit de meningite bacteriana e acrescentar os itens do
kit de meningococcemia (antes da antibioticoterapia).
Envelope Frente
Envelope Verso
Composio do Kit
Figura 14 - Kit para Meningococcemia
Importante: A data de validade est no rtulo de cada frasco.

No usar aps o vencimento.
Coleta de Sangue para Hemocultura Automatizada

-
Remover a parte central do lacre do frasco de hemocultura e fazer assepsia da

tampa de borracha friccionando com algodo umedecido em lcool a 70%, por um
minuto;
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Coletar o sangue com seringa e agulha estreis, sem anticoagulante;
Independente de o paciente ser adulto ou criana, seguir a

orientao abaixo:
PESO (Kg)
VOLUME DE SANGUE (mL)
< 4,0
1,0
4,0 a 13,0
3,0
13,0 a 25,0
5,0
Acima de 25,0
10,0
Para at 5,0 mL de sangue usar o frasco de Hemocultura

Automatizada Peditrico (tampa amarela);
Acima de 5,0mL de sangue usar o frasco de Hemocultura

Automatizada Adulto (tampa azul ou verde).
Aps a coleta manter o frasco em Temperatura Ambiente. NO INCUBAR;
Enviar ao Lacen/PR, o mais breve possvel, no mximo em 48 horas, em caixa de

isopor temperatura ambiente, dentro da embalagem individual (saco plstico) do
Kit para Meningococcemia.
Coleta de Sangue para Obteno do Soro para Ltex
Coletar aproximadamente 5mL de sangue em tubo sem anticoagulante;
Deixar retrair o cogulo e centrifugar;
Fazer assepsia na tampa de borracha do frasco vazio estril com lcool a 70% (SEM
ROMPER O LACRE);
Retirar, com seringa, 1 a 2 mL de soro do tubo centrifugado e injetar no frasco vazio

estril;
Enviar ao Lacen/PR em caixa de isopor com gelo reciclvel.
2.4
2.4.1
Fezes
Para pesquisa de Enterobactrias Patognicas
A amostra deve ser coletada de preferncia no incio do quadro diarrico e antes da

antibioticoterapia.
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a) Fezes in natura para cultura: coletar de 1 a 2 gramas de fezes (equivalente a 1

colher de sobremesa) em frasco limpo, seco, de boca larga e com tampa de
rosca; enviar ao Lacen/PR at 1 hora aps a coleta temperatura ambiente;
b) Swab fecal em Cary-Blair: coletar de 1 a 2g de fezes em frasco limpo e seco.
Mergulhar o swab no frasco contendo as fezes, dando preferncia s partes
mucopurulentas e com sangue e a seguir introduzir no meio de Cary-Blair, de
modo a no deixar sobras de material na superfcie do meio. Manter em
temperatura ambiente em at 24h aps esse prazo refrigerar entre 2 a 8C pelo
prazo mximo de 48 horas.
c) Swab retal em Cary-Blair; introduzir o swab no reto, fazendo movimentos
rotatrios suaves por alguns segundos e introduzir no meio de Cary-Blair. Fechar
firmemente o frasco. Manter em temperatura ambiente em at 24h aps esse
prazo refrigerar entre 2 a 8C pelo prazo mximo de 48 horas.
2.4.2
Para pesquisa de vrus
a) Fezes (in natura) - sem meio de transporte.

- Fraldas:
-
Fezes slidas: coletar com esptula e colocar no frasco coletor.
Fezes lquidas: utilizar compressa cirrgica entre a criana e a fralda. Com esse
procedimento as fezes ficam armazenadas na compressa, aps acondicion-la no

frasco.
b) Swab retal em casos de bito
Acondicionar em frasco de tampa de rosca. Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72
horas. Aps este prazo, congelar a -20 C
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3 ACONDICIONAMENTO E CONSERVAO DAS AMOSTRAS

-
O armazenamento das amostras deve observar o tempo especificado em condies

que garantam estabilidade das propriedades e repetio do exame;
Evitar congelamentos e descongelamentos consecutivos;
A qualidade do espcime clnico de suma importncia para o sucesso da anlise.

O material gentico viral extremamente lbil e, portanto, facilmente degradado pelo
manuseio inapropriado ou pela demora em seu processamento.
As amostras devero ser identificadas individualmente com o nome completo do

paciente e o local de procedncia, o exame a ser realizado e a data da coleta;
Importante: As etiquetas devem ser colocadas de forma a no ocultar
o nvel do volume da amostra contida e no cobrir o cdigo de barras
da etiqueta;
Enviar uma amostra para cada exame a ser realizado, com volume adequado, de
forma a evitar manuseio da amostra dentro do Lacen/PR;
Somente sero aceitas amostras agrupadas, conforme planilhas a seguir:
AGRUPAMENTO - BIOLOGIA MOLECULAR/PCR

1 microtubo 1,5 mL de plasma.
Hepatite C - Quantitativa
Hepatite C - Genotipagem
Hepatite B - Quantitativa
2 microtubos 1,5 mL de plasma em cada

microtubo.
Carga Viral de HIV

Herpes simplex vrus tipo 1 (HSV-1)
Varicela zoster (VZV)
Epstein Barr virus (EBV)

Citomegalovirus (CMV)
Herpes Vrus Humano tipo 6 (HHV-6)
Outros materiais clnicos (exceto sangue).
Mycobacterium tuberculosis
1 tubo coleta vcuo sangue total Mycobacterium avium

colhido EDTA
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AGRUPAMENTO SOROLOGIA
Tubo nico
Febre Amarela
Tubo nico
Raiva Soro-neutralizao
Tubo nico
Dengue Sorologia
Tubo nico
Tubo nico
Tubo nico
Isolamento Viral, NS1 enviar tubo nico e na mesma requisio

incluir o pedido para Isolamento Viral e NS1.
Febre Maculosa 1 amostra incio dos sintomas
Febre Maculosa 2 amostra aps 14 dias do incio dos
sintomas
Sarampo
Tubo nico
Exantemticas Rubola
Parvovrus B19
Tubo nico
Citomegalovrus
Tubo nico
Herpes
Tubo nico
Caxumba
Tubo nico
Varicela
Tubo nico
Mononucleose/Epstein Barr
Tubo nico
Leptospirose
Hantavrus
Tubo nico
Chagas
Tubo nico
Leishmaniose
Tubo nico
Toxoplasmose
Tubo nico
Cisticercose
Tubo nico
Sfilis
Tubo nico
HIV
Tubo nico
Hepatites (A.,B e C)
Tubo nico
HTLV
Tubo nico
Doena de Lyme
Tubo nico
Esquistossomose
Tubo nico
Toxocarase
Tubo nico
Brucelose
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4 TRANSPORTE
Antes de acondicionar os materiais para o transporte ao Lacen/PR, conferir se as

amostras e as requisies do GAL esto de acordo com o protocolo estabelecido
por este manual para cada exame;
Certifique-se de que os recipientes esto bem fechados e que no h vazamento

de contedo;
Colocar os tubos ou frascos, contendo o material biolgico, dentro de saco ou

pote plstico, na posio vertical, antes de colocar na caixa de isopor (figura 15);
Colocar amostras de fezes em sacos plsticos individuais;
Colocar amostras de secrees respiratrias em caixa de isopor separadas das

demais amostras;
Colocar gelo reciclvel em quantidade que envolva completamente a embalagem

que contenha as amostras;
Importante: A caixa de isopor dever conter quantidade de gelo seco
ou reciclvel compatvel com a quantidade de material que estiver
sendo enviado.
Completar com papel amassado ou flocos de isopor os espaos vazios, a fim de

evitar a quebra da embalagem que contm as amostras;
Acondicionar as requisies e outros documentos em saco plstico separado.

No enrolar ao redor dos tubos.
Fechar o saco plstico contendo as requisies e fix-lo na parte interna da

tampa da caixa de isopor;
Fechar e vedar bem a caixa;
Identificar com destinatrio, com o endereo abaixo:

Laboratrio Central do Estado do Paran (LACEN/PR)
Rua: Sebastiana Santana Fraga, 1001
CEP:83060-500
Guatup - So Jos dos Pinhais Paran
Telefone (41) 3299 3200
FAX: (41) 3299 3204
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Figura 15 Acondicionamento das amostras para o transporte
Colocar em dois lados opostos da caixa externa as seguintes informaes:
ESTE LADO PARA CIMA

CUIDADO FRGIL
Amostras para pesquisa de Brucelose devero ser enviadas para o seguinte

endereo:
Lacen Fronteira
Rua Santos Dumont, 460
Centro Foz do Iguau Paran
CEP: 85.851-040
Telefones: (45) 3545-7147 / 7148 / 7149 / 7150
Fax: (45) 3545-7138
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Importante:
a) Enviar materiais de rotina at, no mximo, quinta-feira;
b) O horrio de atendimento da Seo de Gerenciamento de Amostras da
Diviso dos Laboratrios de Epidemiologia e Controle de Doenas ser das
8:00 horas s 15:00 horas, de segunda sexta-feira;
c) Enviar na sexta-feira somente casos de emergncia como, por exemplo,
pesquisa de meningites. Nestes casos comunicar o laboratrio sobre o envio;
d) No enviar material atravs de transportadoras. Nos finais de semana o
Lacen/PR no mantm servio de planto de motorista;
e) Aos sbados, domingos e feriados haver expediente para atender os
exames de urgncia, com nfase no diagnstico de meningites;
f) Sempre que houver eventos considerados de emergncia em sade pblica,
o Lacen/PR manter atendimento para receber amostras e realizar os exames
em esquema de plantes;
g) Os materiais para Carga Viral para HIV e Contagem de CD4/CD8 devero
obedecer s datas j estabelecidas para cada local.
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5 CRITRIOS PARA REJEIO DAS AMOSTRAS
Amostras no cadastradas no GAL;
Amostras no identificadas;
Amostras com identificao inadequada:

Amostra identificada somente com as iniciais;
Amostra identificada com nmeros;
Amostra com identificao diferente da requisio;
Outras que no identifiquem completamente;
Exceo: Quando a amostra primria (lquido cefalorraquidiano, bipsia,
etc.) for insubstituvel ou crtica, o Lacen poder realizar o exame, no
entanto, no ir liberar o resultado at que o mdico requisitante ou
pessoa responsvel pela coleta da amostra primria assuma a
responsabilidade pela identificao e recebimento da amostra, ou pelo
fornecimento de informaes ou por tudo isto. Esta responsabilizao
dever ser por escrito com assinatura.
Amostras com armazenamento inadequado quanto temperatura:

Hemocultura em temperatura imprpria;
Amostras com gelo em quantidade insuficiente.
Amostra enviada em meio de transporte imprprio para o material enviado;
Amostra de soro com hemlise;
Amostra de soro turva caracterizando lipemia;
Amostra de soro turva caracterizando contaminao bacteriana ou fngica;
Amostra com volume insuficiente para os exames solicitados;
Amostra de Lquor com hemlise decorrente de acidente de puno;
Amostra de secreo respiratria na mesma caixa das demais amostras;
Amostras vazadas;
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PARTE IV DOENAS PESQUISADAS

Para solicitao no GAL consultar as orientaes especficas para cada doena
pesquisada neste manual, dentro de: Laboratrio / Seo / Servio onde os
exames so realizados.
Doena / Agente pesquisado / Exame
Laboratrio / Seo / Servio
cido Delta Amino Levunlico Dosagem
Laboratrio de Apoio
Bactrias Identificao
Bacteriologia
Botulismo
Referncia Nacional
Brucelose
Lacen Fronteira
Caxumba (Parotidite Infecciosa)
Virologia
Chumbo Pesquisa
Laboratrio de Apoio
Cisticercose
Referncia Nacional
Citomegalovrus Pesquisa do Vrus
Biologia Molecular
Citomegalovrus Sorologia
Virologia
Clera
Bacteriologia
Colinesterase Dosagem
Laboratrio de Apoio
Contagem de CD4 / CD8/CD3/CD45 (Contagem de linfcitos T)
Imunologia
Coqueluche
Bacteriologia
Criptococose
Micologia
Dengue Sorologia NS1 Isolamento Viral
Virologia
Difteria
Bacteriologia
Doena de Chagas Sorologia
Imunologia
Doena de Chagas Aguda Parasitoscpico
Parasitologia
Doena de Lyme
Centro Colaborador
Doena Prinica: enfoque na Doena de Creutzfeldt Jakob (DCJ)
Centro Colaborador
Doenas Diarricas Agudas DDA Bacterianas
Bacteriologia
Doenas Diarricas Agudas - Virais
Virologia
Enterovrus
Referncia Nacional
Eritema Infeccioso (Parvovrus B19) Sorologia
Virologia
Esquistossomose Sorologia
Referncia Nacional
Febre Amarela Isolamento Viral
Virologia
Febre Amarela Sorologia
Referncia Nacional
Febre Maculosa Sorologia
Virologia
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Febre Tifide
Bacteriologia
Filariose
Parasitologia
Hansenase Controle de Qualidade Baciloscpica
CQ Hansenase
Hantavrus Sorologia
Virologia
Hemocultura
Bacteriologia
Hepatite B - Pesquisa Quantitativa do DNA do HBV
Biologia Molecular
Hepatite C - Genotipagem do HCV
Biologia Molecular
Hepatite C - Pesquisa Quantitativa do RNA do HCV
Biologia Molecular
Hepatites Virais A, B, C Sorologia
Imunologia
Hepatites Virais D, E Sorologia
Referncia Nacional
Herpes Simples vrus tipo 1 e/ou tipo 2 Pesquisa dos vrus
Biologia Molecular
Herpes Simples vrus tipo 1 e/ou tipo 2 Sorologia
Virologia
Herpes vrus Humano tipo 6 (HHV-6) Pesquisa do vrus
Biologia Molecular
Hidatidose
Referncia Nacional
Histoplasmose e Aspergilose
Referncia Nacional
HIV - I/II Sorologia
Imunologia
HIV-1 Carga Viral
Biologia Molecular
HTLV I/II
Imunologia
Infeces Estreptoccicas.
Bacteriologia
Influenza
Biologia Molecular
Leishmaniose Tegumentar Americana LTA
Parasitologia
Leishmaniose Visceral Humana LVH
Referncia Nacional
Leptospirose Humana
Virologia
Malria Reviso e Controle de Qualidade
CQ Malria
Meningite Bacteriana / Meningococcemia
Bacteriologia
Meningite Viral (Echovrus e Coxsackievrus)
Biologia Molecular
Mercrio Pesquisa
Laboratrio de Apoio
Micoses Superficiais e Cutneas
Micologia
Mononucleose Pesquisa de Epstein-Barr vrus
Biologia Molecular
Mononucleose sorologia
Virologia
Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium
Biologia Molecular
Paracoccidioicomicose
Micologia
Poliomielite
Referncia Nacional
Raiva - Titulao de anticorpos antirrbicos
Referncia Nacional
Raiva Animal
Virologia
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Raiva Humana
Virologia
Resistncia Bacteriana
Bacteriologia
Rubola
Virologia
Sarampo
Virologia
Sfilis
Imunologia
Toxocarase
Centro Colaborador
Toxoplasmose
Imunologia
Tuberculose
Bacteriologia
Tuberculose Controle de Qualidade Baciloscpica
CQ Tuberculose
Varicela zoster vrus Pesquisa do vrus
Biologia Molecular
Varicela zoster vrus Sorologia
Virologia
Vrus Respiratrios Para Monitoramento
Biologia Molecular
Vrus Respiratrios Para Unidades Sentinela/MS
Virologia
Elaborado e revisado por:

Carla Simone Felippe
Flavia Kasumi Shibata
Nelson Fernando Qualio Marques
Rebeca Priscila Milano Hella
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BACTERIOLOGIA
SUMRIO
1
Clera......................................................................................................... 45
Coqueluche ................................................................................................ 47
Difteria ........................................................................................................ 50
Doenas Diarreicas Agudas DDA Bacterianas..................................... 52
Febre Tifide .............................................................................................. 54
Hemocultura ............................................................................................... 57
Identificao de Bactrias ......................................................................... 60
Infeces Estreptoccicas.......................................................................... 62
Meningite Bacteriana / Meningoccemia...................................................... 66
10 Resistncia Bacteriana............................................................................... 69
11 Tuberculose................................................................................................ 71
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1 CLERA
Solicitao no GAL: Clera
Etiologia:
Vibrio cholerae O1, biotipo clssico ou El Tor (sorotipos Inaba, Ogawa ou Hikogima)
toxignico e, tambm, o O139.
Documentos requeridos:
Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do paciente e de
dados clnico/laboratoriais;
Critrios para realizao do exame:
Casos de diarria com manifestaes clnicas e epidemiolgicas.
Material: Fezes
Volume: 2 a 3 mL de fezes ou 2 g
Nmero de amostras: 2 amostras em swabs retais ou fecais
Perodo da coleta:
Fase aguda da doena (at o 2 dia aps o incio dos sintomas) e antes da
administrao de antibiticos.
Convalescentes: coletar um volume maior de fezes (5 a 10 g) em trs etapas com
intervalos de 48 horas.
Preparo do paciente: No Aplicvel
Coleta da amostra:
a) Swab fecal: coletar as fezes em recipiente limpo; imergir os dois swab
bacteriolgicos nas fezes (dando preferncia aos elementos de aparncia
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patolgica como muco, sangue, pus, membrana, etc.) introduzir os swabs em

meio de transporte e conservao (Cary-Blair).
b) Swab retal: umedecer previamente o swab na ampola retal (2 cm alm do
esfncter anal), comprimindo-o em movimentos rotatrios suaves, por toda a
extenso parietal.
Acondicionamento e conservao da amostra:

O material coletado deve permanecer totalmente imerso no meio Cary-Blair
temperatura ambiente, em frasco vedado e protegido da luz.
Manter em at 24 horas, em temperatura ambiente. Aps essa prazo refrigerar entre
2 e 8 C pelo prazo mximo de 48 horas.
O tempo entre coleta e processamento no deve ultrapassar 72 horas.
Transporte: Em caixa de isopor com gelo reciclvel.
Metodologia: Bacterioscopia, cultura e teste de sensibilidade a antimicrobianos.
Prazo para resultado: 7 dias

Sonia Maria de Souza Santos Farah
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2 COQUELUCHE
Solicitao no GAL: Coqueluche
Etiologia: Bordetella pertussis
a) Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do paciente e
de dados clnico/laboratoriais.
b) Sinan Ficha de Investigao do Agravo, com todos os campos preenchidos.

a) Caso suspeito: Todo indivduo independente da idade e estado vacinal, que
apresente tosse seca h 14 dias ou mais, associada a: tosse sbita incontrolvel,
guincho inspiratrio, vmito ps-tosse, ou com histria de contato com caso
confirmado como coqueluche.
b) Comunicantes: Pessoas expostas a um caso de coqueluche confirmado, entre o
incio do perodo catarral at 3 semanas aps o incio do perodo paroxstico da
doena (perodo de transmissibilidade).
Comunicantes adultos e idosos que residam com menores de 1 ano de idade e
indivduos imunodeprimidos devem ser considerados.
Material:
Secreo nasofarngea (per nasal profunda), at a parte posterior da nasofaringe
(epitlio respiratrio ciliado)
Volume: No se aplica
Nmero de Amostras: 1 amostra nasofarngea profunda.
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Coleta da amostra:
a) Retirar um tubo de transporte Reagan Lowe R.L. com antibitico da geladeira
30 minutos antes da coleta (deve estar temperatura ambiente);
b) Introduzir o swab em uma das narinas, at encontrar resistncia na parede
posterior da nasofaringe;
c) Manter o swab em contato com a nasofaringe por 10 segundos realizando
movimentos rotatrios lentos, 5 para um lado e 5 para o outro lado;
d) Retirar o swab do orifcio nasal, introduzir no tubo R.L. e semear a superfcie
inclinada do meio fazendo movimentos de ziguezague, no sentido de baixo para
cima.
e) Aps a semeadura, introduzir o swab no meio R.L. at a metade e manter dentro
do tubo para o envio;
f) Identificar o tubo com nome, data e indicar se o paciente um caso suspeito ou
comunicante.
Perodo de coleta:
a) Caso suspeito: Coletar o material durante a fase aguda da doena (fase
catarral), 1 a 4 semanas aps o incio dos sintomas.
b) Comunicantes: Coletar o material do comunicante com tosse.
Importante: A coleta deve ser realizada antes do incio da
antibioticoterapia ou, no mximo, aps 3 dias de sua instituio.
Preparo do paciente: No se aplica

As amostras clnicas, acondicionadas no meio R.L. devem ser encaminhadas ao
Lacen/PR, imediatamente aps a coleta. Na impossibilidade do envio imediato,
pr-incubar os tubos em estufa bacteriolgica 35/37C por no mximo 48 horas, e
logo aps enviar as amostras ao Lacen/PR.
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Transporte:
Em caixa de isopor temperatura ambiente. Se a temperatura local for superior a 35
C recomenda-se enviar em caixa de isopor, com gelo reciclvel. Usar essa opo
apenas para amostras pr-incubadas.
Metodologia: Cultura seletiva para Bordetella pertussis.

Rosngela Stadnick Lauth de Almeida Torres
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3 DIFTERIA
Solicitao no GAL: Difteria
Etiologia: Corynebacterium diphtheriae.
a) Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do paciente e de
dados clnico/laboratoriais.

Caso suspeito de difteria: paciente com ou sem febre, presena de placas
acinzentadas sobre as tonsilas (pseudomembrana) e que apresente estado geral
caracterstico para toxicidade.
Material: Exsudato de orofaringe, nasofaringe e leso cutnea
Importante: Amostras de exsudato de nasofaringe e leses devem ser
coletadas principalmente de pacientes convalescentes e contatos
discriminar se o material de doente, controle de convalescente ou
comunicante.
Nmero de amostras:
1 swab para orofaringe
1 swab para nasofaringe
1 swab para leses
Perodo de coleta: Antes da antibioticoterapia

Meio de transporte Stuart. Fixar os tubos na parede interna da caixa de isopor, para
mant-los na posio vertical. Manter temperatura ambiente.
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Transporte:
Encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, em caixa de isopor temperatura
ambiente, em no mximo 24 horas aps a coleta.
Metodologia:
a) Bacterioscopia
b) Cultura
c) Pesquisa de exotoxina por Imunodifuso Radial (IDR)

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4 DOENAS DIARREICAS AGUDAS DDA BACTERIANAS

Solicitao no GAL: Coprocultura
Etiologia
Os mais freqentes:
a)
Salmonella spp.
b)
Shigella spp.
c)
Aeromonas spp.
d)
Escherichia coli enteropatognica (EPEC), enteroinvasora (EIEC)
e)
Campylobacter jejuni
Importante na vigncia de surtos para orientar as medidas de controle. Solicitar
orientaes da equipe de vigilncia epidemiolgica do municpio.
Material: Fezes
Volume:
a) Pastosas ou slidas: aproximadamente 2 g
b) Lquidas: 2 a 3 mL
Nmero de Amostras: 1
Perodo de coleta:
O mais precoce possvel, na fase aguda, e antes do tratamento com antibiticos.
Preparo do paciente: No aplicvel
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-
O material coletado deve ser recolhido com swab e imerso em meio de transporte
Cary-Blair, de modo a no deixar sobras de material na superfcie do meio.
Manter temperatura ambiente em at 24 horas. Aps esse prazo refrigerar entre 2

a 8 C em no mximo 48 horas.
Metodologia: Bacterioscopia, cultura e teste de sensibilidade a antimicrobianos.

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5 FEBRE TIFIDE
Solicitao no GAL: Febre Tifide
Etiologia: Salmonella Typhi.

Febre alta, cefalia, mal-estar, anorexia, bradicardia relativa (dissociao pulsotemperatura, conhecida como sinal de Faget) esplenomegalia, manchas rosadas no
tronco (rosola tfica), obstipao intestinal ou diarria e tosse seca
Material:
Fases clnicas:
a) 1 fase: sangue
b) 2 fase: fezes
Podem ser tambm utilizado, alternativamente, cogulos de sangue, contedo
duodenal, urina e petquias.
Volume:
a) Sangue:
-
Adultos: 20 mL - dividir em duas alquotas para inoculao em 2 frascos

(adulto) de meio de cultura.
Crianas: coletar de acordo com o peso, conforme a tabela a seguir:
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Peso
Volume Semeadura
(kg)
(ml)
Aerbio
<4
01*
4-13
03*
13-25
10
> 25
20
Anaerbio
* O volume de sangue coletado deve ser inoculado em um frasco de meio de

cultura peditrico.
Importante: A relao sangue/meio de cultura deve ser de 10 %.
b) Fezes:
-
Pastosas ou slidas: aproximadamente 2 g
Lquidas: 2 a 3 mL
Nmero de Amostras:
a) Sangue: 2 amostras na fase aguda da doena com coleta simultnea nos dois
braos.
b) Fezes: 1 amostra
Perodo de coleta:
a) 1 fase: sangue - 1 semana da doena
b) 2 fase: fezes - 2 5 semana da doena
-
Na urina, a positividade usualmente obtida aps a 3 semana;
Hemocultura: apresenta maior possibilidade de isolamento nas 2 semanas

iniciais da doena;
Coprocultura: apresenta maior possibilidade de isolamento a partir da 2 at a 5

semana da doena;
Em caso de isolamento de bactria patognica, repetir a coleta aps 5 dias do

trmino da antibioticoterapia.
Portadores e manipuladores de alimentos: coletar 3 amostras de fezes com

intervalo de 48 horas;
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a) Sangue:
-
Em frasco contendo meio para hemocultura automatizado adulto/peditrico

(fornecido pelo Lacen/PR). Manter temperatura ambiente e encaminhar o mais
rpido possvel ao Lacen/PR, de preferncia no prazo mximo de 24 horas aps a
coleta. Nunca refrigerar os frascos.
b) Fezes:
Imerso em meio de transporte Cary Blair. Manter temperatura ambiente em at 24

horas; aps esse prazo refrigerar entre 2 a 8 C pelo prazo mximo de 48 horas.
Transporte:
a) Sangue: Em caixa de isopor temperatura ambiente.
b) Fezes: Em caixa de isopor com gelo reciclvel.
Metodologia: Hemocultura, coprocultura e teste de sensibilidade a antimicrobianos.
Prazo para resultado:

a)
Hemocultura 10 dias
b)
Coprocultura 7 dias
Observao:
A Reao de Widal, recomendada para a segunda fase da doena, no realizada
no Lacen/PR.

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6 HEMOCULTURA
Solicitao no GAL: Hemocultura 1 amostra ou 2 amostra
Etiologia:
Principais agentes:
a) Bactrias Gram positivas: Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase
negativa, Enterococcus spp, Streptococcus spp;
b) Bactrias Gram negativas: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella
spp, Enterobacter spp, Pseudomonas aeruginosa, Neisseria meningitidis.

Quadro clnico compatvel com sepsis; febre de origem desconhecida; diagnostico
diferencial de sndromes febris.
Material: Sangue
Cuidados na coleta:
a) Fazer assepsia da tampa do frasco de hemocultura friccionando o algodo
embebido em lcool 70% por 1 minuto;
b) Coletar o sangue e inocular no frasco de hemocultura correspondente;
c) Agitar delicadamente o frasco;
d) No recomendada a tcnica de coleta atravs de cateteres ou cnulas
quando for possvel utilizar punes venosas;
e) Identificar os frascos com o nome do paciente, data e hora da coleta e via de
coleta (cateter ou sangue perifrico)
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Volume:
Adultos: 20 mL - dividir em duas alquotas para inoculao em 2 frascos de meio de
cultura: aerbio e anaerbio.
-
Crianas: coletar de acordo com o peso, conforme a tabela abaixo:
Peso
Volume Semeadura
(kg)
(ml)
Aerbio
<4
01*
4-13
03*
13-25
10
> 25
20
Anaerbio
* O volume de sangue coletado deve ser inoculado em um frasco de meio de cultura

peditrico.
Nmero de Amostras:
No mnimo, duas amostras e em braos diferentes e sem intervalo de tempo. O
intervalo entre as amostras seguintes varia de acordo com a suspeita clnica,
gravidade e necessidade de antibioticoterapia imediata, podendo variar de 15
minutos entre cada amostra, at horas ou dias.
Uma s puno pode oferecer uma menor chance de isolamento do agente e
dificulta a interpretao de eventual contaminante.
Perodo de coleta:
Antes da administrao de medicamentos e de preferncia, momentos antes do pico
febril.
Preparo do paciente: No aplicvel.

(fornecido pelo Lacen/PR). Manter temperatura ambiente e encaminhar o mais
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rpido possvel ao Lacen/PR, de preferncia no prazo mximo de 24 horas aps a

coleta. Nunca refrigerar os frascos.
Transporte: Em caixa de isopor temperatura ambiente.
Metodologia:
Cultura para Aerbios e Anaerbios
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos
Prazo de entrega: 10 dias

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7 IDENTIFICAO DE BACTRIAS ATPICAS

Solicitao no GAL: Identificao Bacteriana - Confirmao
Etiologia: Bactrias de difcil identificao
de dados clnico/laboratoriais.
b) Laudo do laboratrio de origem ou descrio dos dados do isolado no campo
observao do GAL.
Isolado de materiais de stios originalmente estreis (Ex.: hemocultura com duas ou
mais amostras positivas; lquor; lquido pleural; lquido pericrdico, etc.) ou por
critrio clnico com evidncia clara de infeco.
Material:
Isolados bacterianos clinicamente significativos, puros, em meio slido ou em meio
de conservao (ex.: TSA, BHI com sangue, Skim-Milk), hemocultura positiva que
no apresentam crescimento nos meios comuns (enviar o frasco).
Volume: No se aplica
Perodo de Coleta: No se aplica
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Placas de cultura vedadas ou tubos com tampa de rosca. Manter em at 24 horas,

temperatura ambiente. Aps este prazo refrigerar entre 2 a 8 C.
Metodologia:
Provas bioqumicas Automao ou Sequenciamento gentico do rDNA.

Lavnia Nery Villa Stangler Arend
Marcelo Pilonetto
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8 INFECES ESTREPTOCCICAS
- Faringite, Febre Reumtica, Escarlatina e outras doenas estreptoccicas.
Solicitao no GAL: Cultura para identificao de Estreptococos Beta
Hemolticos
Etiologia: Streptococcus pyogenes (Estreptococos Beta Hemoltico do grupo A)
dados clnico/laboratoriais - definir se doente ou contactante. Se for contactante,
informar se o contato foi familiar, escolar ou hospitalar.

Pacientes que apresentar clnica de: faringite, escarlatina, febre reumtica,
piodermite, pstulas de varicela infectada,
glomerulonefrite aguda, pneumonia,
meningite, otite, bacteriemia, fascite necrosante, choque txico estreptoccico.

O exame ser realizado para elucidao diagnstica e caracterizao de surtos.
Amostras clnicas devem ser coletadas do doente e de indivduos assintomticos
(contatos) familiares/escolares de pacientes com Febre reumtica e contatos
familiares/escolares/hospitalares de pacientes com doena invasiva estreptoccica.
Material:
a) Exsudato tonsilofaringeano e secreo nasal (Faringite, Febre Reumtica,
Glomrulo nefrite aguda e Escarlatina e contatos de pacientes com doenas
invasivas).
b) Outras Secrees: Feridas, abscessos, pstula infectada, biopsias, material
cirrgico (Piodermite, pstula de varicela infectada e Fascite necrosante)
c) Sangue, Lquido cefalorraquidiano (lquor) e lavado bronco alveolar (Pneumonia,
Meningite,
Fascite
necrosante,
Bacteriemia,
Sepsis
Choque
Txico
Estreptoccico).
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Volume:
a) Exsudato tonsilofaringeano e secrees em geral e bipsias material coletado
no swab.
b) Sangue:
-
Adultos: 20 mL - dividir em duas alquotas para inoculao em 2 frascos de

meio de cultura: aerbio e anaerbio
Peso
Volume
Semeadura
(kg)
(ml)
Aerbio
<4
01*
4-13
03*
13-25
10
> 25
20
Anaerbio

cultura peditrico.
c) Lquor: 1 a 2 mL
Nmero de Amostras:
a) Exsudato tonsilofaringeano e secreo nasal: 1 swab coletado da orofaringe e 1
swab coletado da nasofaringe
b) Para os outros materiais 1 amostra de cada tipo
Perodo de coleta:
a) Na fase aguda da doena, antes da introduo da antibioticoterapia.
b) Surto/Epidemia: coletar amostras de orofaringe e de feridas de pacientes
sintomticos e assintomticos (contatos familiares/escolares/hospitalares);
c) Controle de tratamento: coletar 10 dias aps a primeira dose de antibitico.
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a) Exsudato tonsilofaringeano e secrees em geral:
-
O swab contendo o material biolgico deve ser introduzido em meio de transporte

Stuart e enviado para o Lacen/PR no perodo de at 24 horas temperatura
ambiente.
Secrees coletadas com seringa e agulha devem ser depositadas em frasco

estril e enviadas ao Lacen/PR no prazo de 2 horas.
Para conservar a amostra por perodos mais prolongados, o material deve ser
mantido sob refrigerao entre 2 a 8 C.
Enviar ao Lacen/PR o mais breve possvel. Acondicionar os tubos com meio de

Stuart/frascos estreis contendo a amostra biolgica, na posio vertical em caixa
de isopor.
b) Lquor:
-
Colocar 1 a 2 mL de lquor no frasco estril que acompanha o kit. Meningite.

Refrigerar entre 2 a 8 C por at 24 horas.
Semear lquor em gar chocolate, fazendo assepsia da tampa friccionando

algodo embebido em lcool 70% por um minuto e inocular 2 a 3 gotas de lquor.
Incubar por at 24 a 48 horas a 36 C. Enviar ao Lacen/PR.
c) Sangue:
-

(fornecido pelo Lacen/PR). Manter temperatura ambiente e encaminhar o
mais rpido possvel ao Lacen/PR, de preferncia no prazo mximo de 24 horas
aps a coleta. Nunca refrigerar os frascos.
Importante: Cada envio de material dever ser acompanhado da
ficha de cadastro do GAL. Se os materiais de um mesmo paciente
forem encaminhados em dias diferentes (como por ex. lquor para
ltex em uma remessa e cultura em outra), dever ser acompanhado
de uma cpia da ficha a fim de agrupar todos os materiais num
mesmo cadastro. Nunca enviar material sem ficha.
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Transporte:
a) Exsudato tonsilofaringeano, secrees em geral e sangue: em caixa de isopor
temperatura ambiente;
b) Lquor: em caixa de isopor com gelo reciclvel;
c) Materiais que foram refrigerados devero ser enviados em caixa de isopor com
gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Bacterioscopia
b) Cultura para identificao de Estreptococos Beta Hemolticos
c) Antibiograma
d) Tipagem Molecular
-
Sequenciamento do gene emm (M- tipos)
PFGE (eletroforese em campo Pulsado)

a) Bacterioscopia, Cultura e Antibiograma: 7 dias;
b) Tipagem Molecular: 30 dias

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9 MENINGITE BACTERIANA / MENINGOCCEMIA

Solicitao no GAL: Meningite Bacteriana
*Na suspeita de Meningococcemia acrescentar Hemocultura
*Para pesquisa de meningites virais, solicitar a pesquisa, por PCR, do agente da
suspeita clnica.
Etiologia:
-
Neisseria meningitidis do grupo A, B/E. coli, C, Y/W135
Haemophilus influenzae b
Streptococcus pneumoniae
Bactrias Gram negativas
Bactrias Gram positivas
B.A.A. R e fungos.
Documentos requeridos
de dados clnicos/laboratoriais;
b) Ficha epidemiolgica devidamente preenchida com os dados citoqumicos e
bacteriolgicos da anlise do lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor).
Quadro clnico grave, caracterizado por febre, cefalia intensa, nusea, vmito,
rigidez de nuca, prostrao e confuso mental, sinais de irritao menngea,
podendo ser observadas petquias.
A presena de alguns sinais clnicos pode sugerir a suspeita etiolgica. o caso da
N. meningitidis que, em alguns casos, responsvel pelos quadros de
meningococcemia com ou sem meningite, caracterizada por um exantema (rash)
principalmente nas extremidades do corpo.
As meningites tuberculosa e fngica podem apresentar uma evoluo mais lenta, de
semanas ou meses.
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Material:
a) Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor)
b) Soro: nos casos de suspeita de meningococcemia
c) Sangue: em caso de suspeita de Meningococcemia, coletar para hemocultura e
para obteno de soro.
Volume:
a) Lquor: 1 a 2 mL
b) Soro: 2 mL
c) Sangue:
-
Adultos: 10 mL - inoculao em 1 frasco de meio de hemocultura

automatizada adulto (tampa azul ou verde).
Peso (Kg)
Volume de Sangue (mL)
<4,0
*1,0
4,0 a 13,0
*3,0
13,0 a 25,0
*5,0
Acima de 25,0
10,0
* O volume de sangue coletado deve ser inoculado em um frasco de hemocultura

automatizada peditrico (tampa amarela).
Nmero de amostras: 1
Perodo de coleta: Antes da antibioticoterapia.

Importante: - Utilizar os kits, para meningite e meningococcemia,
fornecidos pelo Lacen/PR, seguir as orientaes contidas na Parte III
deste manual, as quais tambm constam na embalagem do kit.
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Aps a coleta os materiais devero ser conservados da seguinte forma:

a) Lquor no frasco estril: Refrigerar entre 2 a 8 C por at 24 horas.
b) Lquor semeado em gar chocolate: Incubar por 24 a 48 horas a 36 C. Enviar ao
Lacen/PR em at 24 horas;
c) Lmina: esfregao corado pelo mtodo de Gram.
d) Sangue inoculado em frasco de hemocultura automatizada: Manter temperatura
ambiente e encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, de preferncia no
prazo mximo de 24 horas aps a coleta. Nunca refrigerar os frascos.
e) Soro: em tubo de poliestireno com tampa de cor amarela (fornecido pelo
Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72 horas. Aps este prazo, congelar
a 20 C.
Transporte:
a) Lquor: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
b) gar chocolate com lquor j incubado: em caixa de isopor em temperatura
ambiente;
c) Lminas: dentro do porta-lminas ou embrulhado com papel alumnio em caixa
de isopor temperatura ambiente.
Metodologia:
a) Bacterioscopia, Cultura e Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos
b) Ltex (pesquisa de antgenos solveis).

Christian de Alencar Siebra
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10 RESISTNCIA BACTERIANA
Solicitao no GAL: Resistncia Bacteriana
Etiologia: Bactrias multirresistentes
b) Laudo do laboratrio de origem ou descrio dos dados do isolado no campo
observao do GAL.
a) Isolamento de bactria com perfil de resistncia no usual ou de interesse
epidemiolgico.
Material:
Isolados bacterianos clinicamente relevantes ou de interesse epidemiolgico, puros,
em meio slido ou meio lquido.
Volume: No Aplicvel
Perodo de coleta: No Aplicvel
Preparo do paciente: No Aplicvel

a) Meio slido: placa de cultura vedada.
b) Meio lquido: tubo com tampa de rosca bem vedada.
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Manter em at 24 horas, temperatura ambiente. Aps este prazo refrigerar entre 2

a 8 C.
Transporte:
Em caixa de isopor temperatura ambiente. Se refrigerado, enviar em caixa de
isopor com gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Cultura e Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos
b) Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) in house
c) Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real

Lavnia Nery Villa Stangler Arend
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11 TUBERCULOSE
Solicitao no Gal: Tuberculose Baciloscopia, Tuberculose Cultura,
Tuberculose Teste de Sensibilidade
Etiologia: Mycobacterium tuberculosis e outras micobactrias.

a) Baciloscopia indicada para todos os sintomticos respiratrios (indivduo com
tosse e expectorao por 3 semanas e mais). Tambm utilizada para
acompanhar a evoluo bacteriolgica do paciente pulmonar, inicialmente
positivo, durante o tratamento. O controle bacteriolgico deve ser de preferncia
mensal e, obrigatoriamente, ao trmino do segundo, quarto e sexto ms de
tratamento.
b) Cultura de escarro ou outras secrees indicada para suspeitos de tuberculose
pulmonar negativos ao exame direto do escarro, e para diagnstico de formas
extrapulmonares com meninge, renal, pleural, ssea e ganglionar, e tambm para
diagnstico de tuberculose em pacientes HIV positivos.
Importante: Nos casos de suspeita de infeco por micobactrias notuberculosas, notadamente nos doentes HIV positivos ou com Aids,
alm da cultura, dever ser realizada a tipificao do bacilo.
c) Teste de Sensibilidade TSA: indicada nos casos de suspeita de resistncia
bacteriana drogas, ou ao final do segundo ms de tratamento quando a
baciloscopia se mantm positiva, retratamento aps falncia ao esquema
bsico ou reincio aps abandono.
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Material:
a) Lavado
gstrico,
lavado
brnquico,
sangue,
urina,
escarro,
lquido
cefalorraquidiano LCR (Lquor), lquidos (pleural, sinovial, peritoneal) bipsia e

secrees em geral.
b) Culturas para identificao e TSA:
-
Identificao: Para micobactrias no causadoras de tuberculose so

necessrias duas ou mais amostras com cultura positiva proveniente de stio
no estril. Cada cultura deve conter mais de 10 (dez) colnias. A presena
de uma ou duas colnias na cultura no permite o diagnstico, porque pode
significar apenas uma contaminao ambiental e no uma infeco real,
conforme Nota Tcnica 2/2009-MS/FIOCRUZ/Centro de Referncia Professor
Helio Fraga.
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos TSA: Ser realizado quando houver

um crescimento acima de 10 (dez) colnias, conforme Manual Nacional de
Vigilncia Laboratorial da Tuberculose e outras Micobactrias (2010).
Volume:
a) Lavado gstrico, lavado brnquico, secrees em geral e lquidos (peritoneal,
pleural, sinovial): mnimo de 2 mL;
b) Bipsias: a critrio mdico;
c) Sangue: 5mL a 10mL;
d) Escarro: 2 a 3 mL;
e) Lquor: 2 mL;
f) Urina: 20 a 30 mL da primeira mico da manh (incluindo o primeiro jato);
Nmero de Amostras:
a) Lavado gstrico, brnquico, bipsias, lquidos (peritoneal, pleural, sinovial) e
lquor: a critrio mdico;
b) Sangue e secrees: 2 a 3 amostras;
c) Escarro: 2 amostras em dias consecutivos;
d) Urina: 3 a 6 amostras em dias consecutivos.
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Perodo de coleta: A critrio mdico
Preparo do paciente:
a) Lavado gstrico, lavado brnquico, lquidos (peritoneal, pleural, sinovial), lquor,
secrees em geral: procedimento realizado em paciente hospitalizado;
b) Bipsia: procedimento realizado pelo profissional mdico.
c) Urina: lavar rigorosamente os genitais externos com gua e sabo neutro.
Enxaguar bem e enxugar com pano limpo.
d) Escarro: a boca do paciente dever estar limpa (bochecho com gua) e sem
resduos de alimentos.
a) Lavado gstrico, lavado brnquico, lquidos (peritoneal, pleural, sinovial), urina e
secrees em geral em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento
do envio. Enviar ao Lacen/PR em at 24 horas. No coletar em dias que no seja
possvel obedecer este prazo.
Importante: Lavado gstrico: deve ser processado at 4 horas aps a
coleta. Se no for possvel, juntar carbonato de sdio a 10 % (partes
iguais) para neutralizar a ao do suco gstrico sobre o bacilo.
b) Bipsia: Em frasco estril contendo salina estril. Refrigerar entre 2 a 8 C.
Enviar ao Lacen/PR em at 24 horas. No coletar em dias que no seja possvel
obedecer este prazo.
c) Escarro: Em frasco plstico descartvel com tampa de rosca e boca larga.
Refrigerar entre 2 a 8 C por at 7 dias. Proteger da luz.
Importante: Colocar identificao no corpo do frasco;
d) Sangue: Em frasco contendo meio para hemocultura MB (Mood Bottle)
acrescido de lquido de enriquecimento (sistema automatizado). Manter
temperatura ambiente e encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, de
preferncia no prazo mximo de at 24 horas aps a coleta. Nunca refrigerar os
frascos. No coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo.
e) Lquor: Em frasco estril, temperatura ambiente e encaminhar o mais rpido
possvel ao Lacen/PR, de preferncia no prazo mximo de 24 horas aps a
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coleta. Nunca refrigerar os frascos. No coletar em dias que no seja possvel

obedecer este prazo.
f) Culturas para identificao e TSA acondicionar os tubos, na posio vertical em
recipientes plsticos com tampa de rosca. Manter a temperatura ambiente. Enviar
o mais breve possvel.
Transporte:
a) Lavado brnquico e gstrico, lquidos (peritoneal, pleural, sinovial), urina,
secrees em geral, bipsia, escarro: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
b) Sangue, lquor, culturas para identificao e TSA: em caixa de isopor
temperatura ambiente.
Metodologia:
a) Baciloscopia
b) Cultura
c) Identificao da micobactria e
d) Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos TSA

a) Baciloscopia: 24 horas
b) Cultura: 45 dias
c) Teste de Sensibilidade: 45 dias a partir da cultura positiva

Andressa Sprada da Silva
Sonia Regina Brockelt
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MICOLOGIA
SUMRIO
Micoses Sistmicas.................................................................................. 76
1.1
Histoplasmose e Aspergilose .......................................................................77
1.2
Paracoccidioicomicose.................................................................................79
1.2.1 Pesquisa no soro ......................................................................................79

1.2.2 Pesquisa em outros materiais...................................................................80
1.3
2
Criptococose ................................................................................................83
Micoses superficiais e cutneas............................................................. 86
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1 MICOSES SISTMICAS
Etiologia:
Paracoccidioides brasiliensis
Histoplasma capsulatum
Blastomyces dermatitides
Cryptococcus neoformans
Coccidioides immitis
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1.1
Histoplasmose e Aspergilose
Solicitao no GAL: Histoplasmose e Aspergilose
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional Fundao Oswaldo Cruz

(FIOCRUZ)/Instituto de Pesquisa Clnica Evandro Chagas.
Etiologia: Histoplasma capsulatum, Aspergillus sp
-

Ficha do Laboratrio de Referncia Nacional em Micoses Sistmicas (Enviar

preenchida juntamente com a amostra)
Critrios para realizao de exame: Suspeita clnica
Material: Soro
Volume: 2 mL
Nmero de Amostras: A critrio mdico
Perodo de coleta: No aplicvel
Preparo do paciente: Jejum no obrigatrio

Em tubo de poliestireno com tampa de cor amarela (fornecido pelo Lacen/PR).
Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72 horas. Aps este prazo, congelar a 20 C.
Importante: no usar amostras inativadas pelo calor.
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Metodologia: Imunodifuso radial dupla (IRD)

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1.2
Paracoccidioicomicose
Etiologia: Paracoccidioides brasiliensis
Critrios para realizao do exame: Suspeita clnica.
-
Forma aguda/subaguda (tipo juvenil) responsvel por 3 a 5 % da doena.

Como principais caractersticas desta forma de micose, em ordem de freqncia,
destacam-se:
presena
de
linfadenomegalia,
manifestaes
digestivas,
hepatoesplenomegalia, envolvimento osteo-articular e leses cutneas.

-
Forma crnica (tipo adulto) responsvel por 90 % da doena. As manifestaes

pulmonares esto presentes em 90 % dos casos e, em cerca de 25 % deles o
pulmo pode ser o nico rgo afetado.
Forma sequelar: Por ser uma doena sistmica cuja resposta consiste em
processo inflamatrio granulomatoso, que resulta em fibrose. Pode ocorrer
alteraes anatmicas e funcionais dos rgos acometidos durante a doena,
particularmente os pulmes, adrenais e sistema nervoso central. Alm dessas
seqelas, o processo de fibrose decorrente do envolvimento de mucosas e pele
pode causar alteraes crnicas da voz.
Diagnstico diferencial da tuberculose, histoplasmose, e coccidioicomicose.
1.2.1
Pesquisa no soro
Solicitao no GAL: Paracoccidioicomicose
Material: Soro
Volume: 2 mL
Nmero de amostras: A critrio mdico
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Perodo de coleta: Aps a suspeita do caso

Transporte: Em caixa de isopor com gelo reciclvel
Metodologia: Imunodifuso radial dupla (IRD)
1.2.2
Pesquisa em outros materiais
Solicitao
no
GAL:
Fungos
(especificar
que
suspeita
de
Paracoccidioidomicose).
Material:
Escarro, lavado broncoalveolar, lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor), lquido
pleural, secrees e bipsia.
Volume:
a) Escarro: 2 a 5 mL
b) Lquor: 2 a 3 mL
c) Lavado brnquico, lquido pleural: 2 a 3 mL
d) Secrees em geral: 2 a 3 mL
e) Bipsia: Fragmento de tecido em salina estril 0,85 %.
Nmero de Amostras:
a) Escarro: 3
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b) Demais materiais: 1
Perodo de coleta:
a) Escarro: dias consecutivos
b) Demais materiais: a critrio mdico
Suspender a medicao antifngica tpica ou sistmica, se possvel, por sete dias
antes da coleta.
a) Escarro: em frasco estril, descartvel de boca larga e com tampa de rosca.
Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio.
b) Lquor, lavado broncoalveolar, lquido pleural e secrees em geral: em frasco
estril. Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio.
c) Bipsia: em frasco estril com soluo salina. Refrigerar entre 2 a 8 C at o
momento do envio.
Importante:
Fechar devidamente os frascos
a fim de evitar
vazamentos.
Transporte: Em caixa de isopor, com gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Direto a fresco
b) Cultura

a) Exame micolgico direto e colorao: 3 dias
b) Cultura: 30 dias
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1.3
Criptococose
Solicitao no GAL: Fungos
Etiologia: Cryptococcus spp
Material:
Lquido
cefalorraquidiano
LCR
(lquor),
sangue
(hemocultura),
lavado
broncoalveolar, lquido pleural, secrees.

Critrios para realizao de exame: Suspeita clnica.
Volume:
a) Lquor: 2 a 3 mL
b) Lavado broncoalveolar, lquido pleural: 2 a 3 mL
c) Secrees em geral: 2 a 3 mL
d) Sangue:
-
Adultos: 20mL (dividir em duas alquotas para inoculao em 02 frascos de

meio de cultura).

Peso (Kg)
Volume de Sangue (mL)
<4,0
1,0*
4,0 a 13,0
3,0*
13,0 a 25,0
5,0
Acima de 25,0
10,0

cultura peditrico.
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Nmero de Amostras:
a) Lquor: 1
b) Lavado broncoalveolar, lquido pleural: 1
c) Secrees em geral: 1
d) Sangue: A critrio mdico
Perodo de coleta: 7 dias aps o trmino da medicao
Jejum no obrigatrio; Suspender a medicao antifngica tpica ou sistmica, se
possvel, por sete dias antes da coleta.
c) Lquor: Em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C.
d) Sangue: Em frasco contendo meio
para
hemocultura automatizado
adulto/peditrico (fornecido pelo Lacen/PR). Manter a temperatura ambiente e

encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, de preferncia no prazo
mximo de 24 horas aps a coleta. Nunca refrigerar os frascos.
e) Lavado broncoalveolar, lquido pleural: em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C
f) Secrees em geral: em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C.
Metodologia:
a) Micolgico direto (Tinta da China)
b) Cultura
b) Cultura: 30 dias
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2 MICOSES SUPERFICIAIS E CUTNEAS

Solicitao no GAL: Fungos
Etiologia:
a) Superficiais: Microsporum sp, Trichoplyton sp, Piedraia sp, Malassezia furfur,
Epidermophyton flocosum e outros
b) Cutneas: Microsporum sp, Trichophyton sp, Candida albicans, Cndida sp e
outros
c) Subcutneas: Lobomicose, rinosporidiose, esporotricose, cromoblastomicose,
feohifomicose, etc
Critrios para realizao do exame: Suspeita clnica
Material:
Pele, couro cabeludo, plos, unha, leso cutnea ulcerada e no ulcerada,
abscessos e fstulas.
Volume: A critrio mdico
Nmero de amostras: A critrio mdico.
Perodo de coleta: Sete dias aps o trmino da medicao
Suspender a medicao antifngica tpica ou sistmica, se possvel, por sete dias
antes da coleta.
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a) Pele, couro cabeludo, plos, unha, leses cutneas no ulceradas: em placa de
Petri e/ou lminas lacradas com fita adesiva. Manter temperatura ambiente.
b) Leses cutneas ulceradas, lquidos corporais: em frasco estril lacrado com fita
adesiva. Manter temperatura ambiente.
c) Abscessos e fstulas: em seringas de tubos estreis lacradas com tampa de
borracha. Refrigerar entre 2 a 8 C.
Transporte:
a) Pele, couro cabeludo, plos, unhas, leses cutneas e no ulceradas: em caixa
de isopor temperatura ambiente;
b) Abscessos e fstulas: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Micolgico direto: a fresco ou tinta da China;
b) Exames corados: Gram, Ziehl;
c) Cultura e identificao de fungos.
b) Cultura: 30 dias

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BIOLOGIA MOLECULAR
SUMRIO
Citomegalovrus.......................................................................................... 89
Epstein-Barr vrus (EBV) ............................................................................ 91
Hepatite B - Pesquisa Quantitativa do DNA do Vrus do HBV.................... 93
Hepatite C - Genotipagem do Vrus da Hepatite C..................................... 95
Hepatite C - Pesquisa Quantitativa do RNA do HCV.................................. 97
Herpes simplex vrus tipo 1 (HSV-1) e/ou tipo 2 (HSV-2)........................... 99
Herpes vrus Humano tipo 6 (HHV-6)....................................................... 101
HIV-1 Carga Viral .................................................................................. 103
Influenza .................................................................................................. 105
10 Meningite Viral (Echovrus e Coxsackievrus) .......................................... 108

11 Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium .............................. 110
12 Varicela zoster vrus (VZV)....................................................................... 112
13 Vrus Respiratrios ................................................................................... 114
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1 CITOMEGALOVRUS
Solicitao no GAL: Pesquisa Qualitativa e/ou Quantitativa do DNA do
Citomegalovrus
Etiologia: Citomegalovrus (CMV)
Material:
a) Plasma: Coletar 4 mL de sangue total com EDTA. Separar o plasma em at 2
horas aps a coleta por centrifugao a 3500 RPM durante 15 minutos;
b) Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor);
c) Outros: Para pesquisa desse agente em materiais como lquidos de derrames,
lavado brnquico, produtos de bipsia, medula ssea, esfregaos de orofaringe e
leses, entrar em contato com a Seo de Biologia Molecular atravs do telefone
(41) 3299-3272.
Volume:
a) Plasma: Mnimo1,5 mL
b) Lquor : 1 mL
Perodo de coleta: No se aplica
Preparo do paciente: Jejum de 4 horas.
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a) Plasma: Colocar o plasma obtido em microtubo com tampa de rosca (fornecido
pelo Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio. Enviar ao
Lacen/PR em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No
coletar em dias em que no seja possvel obedecer este prazo.
b) Lquor: Em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C. Enviar ao Lacen/PR em at
24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No coletar em dias em
que no seja possvel obedecer este prazo.
Metodologia:
a) Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real Curva padronizada
pelo painel Internacional da Optiquant (Acrometrix CA, USA), derivado de
amostra do padro da OMS.
Sensibilidade: 10-500.000 copias/mL

Luciana Cristina Fagundes Gequelin
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2 EPSTEIN-BARR VRUS (EBV)

Solicitao no GAL: Pesquisa Qualitativa e/ou Quantitativa do DNA do EpsteinBarr vrus (EBV)
Etiologia: Epstein-Barr vrus (EBV) ou Human herpesvirus tipo 4
Material:
a) Plasma. Coletar 4 mL de sangue total com EDTA. Separar o plasma em at 2
horas aps a coleta por centrifugao a 3500 rpm durante 15 minutos
b) Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor)
(41) 3299-3272.
Volume:
a) Plasma: Mnimo de 1,5 mL
b) Lquor : 1 mL
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coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo.
24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No coletar em dias que
no seja possvel obedecer este prazo.
Transporte: Caixa de isopor com gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real
b) Curva padronizada pelo painel Internacional da Optiquant (Acrometrix CA, USA),
derivado de amostra do padro da OMS.
Sensibilidade: 88 - 446.000 cpias/mL

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3 HEPATITE B - PESQUISA QUANTITATIVA DO DNA DO VRUS DO HBV

Solicitao no GAL: Hepatite B Quantitativo Biologia Molecular
Etiologia: Vrus da Hepatite B (HBV)
Cdigo do exame: 02130102 0-8
b) Uma via de Laudo Mdico para Emisso de BPA-I devidamente preenchida com
carimbo e assinatura do mdico requisitante.
O Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para Tratamento da Hepatite Viral
Crnica B e Coinfeces (publicado em 2009) indica o mtodo HBV-DNA
quantitativo:
a) Para pacientes em que o HbeAg no diferencia aqueles com ou sem replicao
significativa, sendo necessrio o teste de carga viral;
b) No monitoramento clnico, para avaliar a resposta teraputica;
c) Para avaliar o risco de desenvolvimento de dano heptico, o qual est
relacionado com os nveis da carga viral.
Material:
Plasma: Coletar 4 mL de sangue total com EDTA. Separar o plasma em at 2 horas
aps a coleta por centrifugao a 3500 rpm durante 15 minutos.
Volume: Mnimo de 1,5 mL de plasma.
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Perodo de Coleta: A critrio mdico
Critrios para a realizao do teste:

O teste ser realizado somente dos pacientes com o marcador sorolgico positivo
para HbsAg e nos seguintes casos: pacientes que iro para tratamento, controle de
tratamento e transplante heptico.
Preparo do paciente: Jejum de 4 horas

Colocar o plasma obtido em microtubo com tampa de rosca (fornecido pelo
Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio. Enviar ao Lacen/PR
em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No coletar em dias
em que no seja possvel obedecer este prazo.
Transporte: Em caixa de isopor, com bastante gelo reciclvel.
Metodologia: Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real.

Erico Luis Costa Ludtk
Irina Nastassja Riediger
Sueli Massumi Nakatani
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4 HEPATITE C - GENOTIPAGEM DO VRUS DA HEPATITE C

Solicitao no GAL: Hepatite C Genotipagem Biologia Molecular
Etiologia: Vrus da Hepatite C (VHC)
Cdigo do exame: 020203021-0
a) A genotipagem complementa a avaliao clnico-laboratorial na definio da
estratgia de tratamento da hepatite crnica.
b) O Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para Hepatite C e Coinfeces
(publicado em 18/07/2011) recomenda a realizao do teste de genotipagem na
ocasio da confirmao do diagnstico.
Material:
Perodo de Coleta: No aplicvel
Preparo do paciente: Jejum 4 horas
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em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No coletar em dias em
que no seja possvel obedecer este prazo.
Transporte: Em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Hibridizao reversa
b) Reao da Transcriptase Reversa (RT) seguida da Reao em Cadeia da
Polimerase (PCR) em Tempo Real regio NS5B

Claudia Helena Zen
Deborah Munhoz Buba
Ednia Oliveira Cavalcanti
Helena Leiko Misugi
Sueli Massumi Nakatani
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5 HEPATITE C - PESQUISA QUANTITATIVA DO RNA DO HCV

Solicitao no GAL: Hepatite C Quantitativo Biologia Molecular
Etiologia: Vrus da Hepatite C (VHC)
Cdigo do exame: 020203108-0
O Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para Hepatite C e Coinfeces
(publicado em 18/07/2011) recomenda o mtodo quantitativo para diagnstico e
monitoramento. Este teste indicado:
a) Para confirmar diagnstico de Hepatite C aps duas sorologias positivas;
b) Para caracterizar transmisso vertical;
c) Em acidentes com materiais biolgicos, para definir a transmisso;
d) No monitoramento clnico, para avaliar a resposta virolgica.
Material:
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Perodo de Coleta:
Antes de iniciar o tratamento com Peg-interferon e aps a 12 semana de
tratamento.
Preparo do paciente: Jejum 4 horas

em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No coletar em dias
em que no seja possvel obedecer este prazo.
Transporte: Caixa de isopor com bastante gelo reciclvel.
Metodologia:
Reao da Transcriptase Reversa (RT) seguida da Reao em Cadeia da
Polimerase (PCR) em Tempo Real.

Claudia Helena Zen
Deborah Munhoz Buba
Helena Leiko Misugi.
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6 HERPES SIMPLEX VRUS TIPO 1 (HSV-1) E/OU TIPO 2 (HSV-2)

Solicitao no GAL: Herpes vrus Biologia Molecular
Etiologia: Herpes simplex vrus tipo 1 e 2 (HSV-1, HSV-2)
Material:
horas aps a coleta por centrifugao a 3500 rpm durante 15 minutos;
(41) 3299-3272.
Volume:
b) Lquor : 1 mL
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Transporte: Caixa de isopor com gelo reciclvel
Metodologia:
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real
Sensibilidade: 125 Eq/mL.

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7 HERPES VRUS HUMANO TIPO 6 (HHV-6)

Solicitao no GAL: Herpes vrus, tipo 6 Biologia Molecular
Etiologia: Herpes vrus Humano tipo 6 (HHV-6)
Material:
(41) 3299-3272.
Volume:
b) Lquor : 1 mL
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Transporte: Caixa de isopor com gelo reciclvel.
Metodologia:
Sensibilidade: 125 gEq/mL.

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8 HIV-1 CARGA VIRAL
Etiologia:
Vrus HIV-1 causa principal da Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (AIDS).
Uma via de Laudo Mdico para Emisso de BPA-I devidamente preenchida com
carimbo e assinatura do mdico requisitante. Dever ser informado, alm dos dados
pessoais, o uso de medicao, o estado de sade, o horrio da coleta e o nome da
instituio responsvel pela amostra.
a) Para avaliao de indicao de tratamento e monitoramento de pacientes em
Tratamento Anti-Retroviral TARV.
b) O Ministrio da Sade recomenda a realizao de 3 a 4 dosagens de carga viral
por pessoa /ano.
Material:
Plasma: Coletar dois tubos com 4 mL de sangue total com EDTA. Separar o plasma
em at 2 horas aps a coleta por centrifugao a 3500 rpm durante 15 minutos.
Volume: Mnimo de 1,5 mL de plasma em cada tubo.
Nmero de Amostras: 1 (dividida em 02 tubos contendo 1,5 mL em cada tubo).
Perodo de coleta: A critrio mdico.
Preparo do paciente: Jejum de 4 horas
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Lacen/PR).
Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio. Enviar ao Lacen/PR em at 24
horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta. No coletar em dias em que no
seja possvel obedecer este prazo.
Transporte: Caixa de isopor com bastante gelo reciclvel.
Metodologia:
b-DNA (quantificao direta do vrus atravs da amplificao do sinal emitido pelo
cido nuclico)

Claudia Helena Zen
Deborah Munhoz Buba
Helena Leiko Misugi
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9 INFLUENZA
Solicitao no GAL: Pesquisa de Influenza Biologia Molecular
Etiologia: Vrus da Influenza
dados clnicos/laboratoriais;
Critrio para realizao do exame:

Caso suspeito de doena respiratria aguda grave (apresentando ou no fator de
risco para complicaes)
Material:
a) Swabs combinados nasal/orofaringe:
Coletar amostras da narina direita, narina esquerda e orofaringe utilizando um Swab
de Rayon para cada stio.
Importante: No utilizar swab de algodo, pois interfere nas
metodologias moleculares utilizadas.
Volume: No aplicvel
Perodo de coleta: Fase aguda da doena, at 5 dias do incio dos sintomas.

a) Swab combinado nasal/orofaringe:
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Aps a coleta, inserir os 3 swab coletados (narina direita, narina esquerda e

orofaringe) no tubo contendo meio de transporte viral previamente descongelado.
Cortar o excesso da haste dos swab, tampar o frasco, lacrar.
Aps a coleta, acondicionar no tubo contendo meio de transporte viral previamente
descongelado, lacrar.
Refrigerar as amostras entre a 2 a 8 C, por no mximo 24 horas. Aps este prazo,
congelar a 20C.
Importante:
Os tubos contendo as amostras devem ser protegidos de vazamentos:

acondicionar em recipientes plsticos com tampa de rosca. Colocar na
posio vertical em recipientes que garantam esta posio at a
chegada ao Lacen/PR.
O material gentico viral extremamente lbil e, portanto, facilmente

degradado pelo manuseio inapropriado ou pela demora em seu
processamento.
Transporte:
a) As amostras no congeladas (sob refrigerao de 2 a 8 C) devero ser enviadas
ao Lacen/PR, em caixa de isopor com gelo reciclvel, no mesmo dia, ou seja, em
um perodo no superior a 24 horas aps a coleta.
b)
c) As amostras congeladas (a 20C) devero ser enviadas ao Lacen/PR, em caixa
de isopor com gelo seco. Na impossibilidade de obter gelo seco, a amostra
poder ser transportada em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel, de
modo a evitar o descongelamento durante o transporte.
Metodologia:
a) Reao da Transcriptase Reversa (RT) seguida da Reao em Cadeia da
Polimerase (PCR) em Tempo Real;
b) Isolamento viral.
Prazo para entrega:
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a) RT-PCR em tempo real: 15 dias;

b) Isolamento em cultura celular: 60 dias.
Maria do Carmo Debur Rossa
Mayra Marinho Presibella
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10 MENINGITE VIRAL (ECHOVRUS E COXSACKIEVRUS)

Solicitao no GAL: Pesquisa de Enterovrus Biologia Molecular
Etiologia:
Os Echovrus e os Coxsakievrus, causadores de meningite assptica, so
transmitidos por via fecal-oral e de incidncia mundial.
b) Enviar resultados de citoqumica, quando disponveis.
Critrios para realizao do exame: Suspeita clnica de meningite viral.
Material: Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor).
Volume: 2 mL
Preparo do paciente: A critrio mdico

Em frasco estril e lacrado. Refrigerar entre 2 a 8 C por at 24 horas. Aps esse
prazo, congelar a 20C por at 48 horas.
Transporte:
Em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel para evitar o descongelamento.
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Metodologia: Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real .

Ednia Oliveira Cavalcanti
Irina Nastassja Riediger
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11 MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS E MYCOBACTERIUM AVIUM

Solicitao no GAL: Mycobacterium tuberculosis e/ou Mycobacterium avium
- Biologia Molecular
Etiologia: Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium
Material:
a) Sangue total com EDTA somente p/ Mycobacterium avium;
(41) 3299-3272.
Volume:
a) Sangue total com EDTA: 4 mL
b) Lquor: 1 mL
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a) Sangue total: No prprio tubo da coleta. Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento
do envio. Enviar ao Lacen/PR em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia
da coleta. No coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo.
b) Lquor: Em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio.
Enviar ao Lacen/PR em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta.
Transporte: Caixa de isopor com gelo reciclvel
Metodologia: Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real.

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12 VARICELA ZOSTER VRUS (VZV)

Solicitao no GAL: Varicela zoster Biologia Molecular
Etiologia: Varicella-zoster, da famlia Herpetoviridae.
Material:
(41) 3299-3272.
Volume:
b) Lquor : 1 mL
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b) Lquor: Em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio.
Enviar ao Lacen/PR em at 24 horas, preferencialmente no mesmo dia da coleta.
Metodologia:
Sensibilidade: 125 gEq/mL.

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13 VRUS RESPIRATRIOS
Solicitao no GAL: Pesquisa de vrus respiratrios Biologia Molecular
Etiologia:
Adenovrus,
Influenza
Parainfluenza 3,
Metapneumovrus
A,
Influenza
B,
Parainfluenza
1,
Parainfluenza
2,
Vrus Sincicial Respiratrio A, Vrus Sincicial Respiratrio B,

Humano,
Rinovrus
Humano
A/B,
Coronavrus
Humano
229E/NL63 e Coronavrus Humano OC43/HKU1
b) Ficha de Sndrome Respiratria Aguda Grave, em duas vias, com todos os
campos preenchidos.
Suspeita de Sndrome Respiratria Aguda Grave (SRAG)
Material:
a) Swabs combinados nasal/orofaringe: Coletar amostras da narina direita, narina
esquerda e orofaringe utilizando um swab de rayon para cada stio.
Importante: No dever ser utilizado swab de algodo, pois o mesmo
interfere nas metodologias moleculares utilizadas.
Volume: No aplicvel
Perodo de coleta:
Coletar na fase aguda da doena, at 05 dias do incio dos sintomas.
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a) Swab combinado: Aps a coleta, inserir os 3 swab coletados (narina direita,
narina esquerda e orofaringe) no tubo contendo meio de transporte viral
previamente descongelado. Cortar o excesso da haste dos swab, tampar o
frasco, lacrar.
Importante: Os tubos contendo as amostras devem ser protegidos de
vazamentos: colocar em recipientes plsticos com tampa de rosca.
Colocar na posio vertical em recipientes que garantam esta posio
at a chegada ao Lacen/PR.
Transporte:
a) As amostras no congeladas (sob refrigerao de 2 a 8 C) devero ser enviadas
ao Lacen/PR, em caixa de isopor com gelo reciclvel, no mesmo dia, ou seja, em
um perodo no superior a 24 horas aps a coleta.
b) As amostras congeladas (a 20 C) devero ser enviadas ao Lacen/PR, em caixa
de isopor com gelo seco. Na impossibilidade de obter gelo seco, a amostra
poder ser transportada em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel, de
modo a evitar o descongelamento durante o transporte.
Metodologia:
a) Reao da Transcriptase Reversa (RT) seguida da Reao em Cadeia da
Polimerase (PCR) Multiplex
b) Sequenciamento gentico

a) Reao da Transcriptase Reversa (RT) seguida da Reao em Cadeia de
Polimerase (PCR) Multiplex: 20 dias
b) Sequenciamento gentico: 60 dias
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Maria do Carmo Debur Rossa
Mayra Marinho Presibella
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IMUNOLOGIA
SUMRIO
1
Contagem de CD4/CD8/CD3/CD45 (Determinao de linfcitos T)............. 118
Doena de Chagas................................................................................... 120
Hepatites Virais A, B, C ............................................................................ 122
Hepatites Virais D, E ................................................................................ 124
HIV - I/II .................................................................................................... 126
HTLV I/II ................................................................................................... 128
Sfilis......................................................................................................... 128
Toxoplasmose .......................................................................................... 131
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1 CONTAGEM DE CD4/CD8/CD3/CD45 (DETERMINAO DE LINFCITOS T)
Etiologia: No aplicvel
Uma via de Laudo Mdico para Emisso de BPA-I devidamente preenchida com
carimbo e assinatura do mdico requisitante. Dever ser informado, alm dos dados
pessoais, o uso de medicao, o estado de sade, o horrio da coleta, e o nome da
instituio responsvel pela amostra.

A contagem de linfcitos T CD4+ estabelece o risco de progresso para a Aids e
morte; portanto, o indicador laboratorial mais importante em pacientes
assintomticos, para definir o momento de iniciar o tratamento.
O Ministrio da Sade recomenda que cada paciente realize 3 exames de CD4/CD8
por ano.
Material: Sangue total com EDTA.
Volume: 4 mL
Perodo de Coleta: A critrio mdico

No prprio tubo da coleta. Manter temperatura ambiente (20 a 26 C) e
encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, em at 24 horas aps a coleta,
com a chegada preferencialmente pela manh.
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Importante:
Nos locais em que a temperatura ambiente ultrapassar 26 C, colocar uma
barra de gelo reciclvel de forma que no encoste no tubo com sangue.
No coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo. Nunca
refrigerar os frascos.
Metodologia: Citometria de fluxo

Juliana Neves Bachim
Slvia Morsoletto Tozetto
Soraia Reda Gilber
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2 DOENA DE CHAGAS (DETECO DE ANTICORPOS ANTI TRYPANOSOMA CRUZI)

Solicitao no GAL: Chagas
Etiologia: Trypanosoma cruzi

Em casos suspeitos ou confirmados de Doena de Chagas Aguda o exame
sorolgico tem utilidade complementar aos exames parasitolgicos. O diagnstico na
fase crnica essencialmente sorolgico.
Material: Soro
Volume: 2 mL

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Metodologia:
a) Enzimaimunoensaio (EIE) IgG
b) Imunofluorescncia Indireta (IFI)
c) Imunoensaio Quimioluminescente por Micropartculas (CMIA)

Patrcia Cristina Pereira Cardoso Zampieri
Soraia Reda Gilber
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3 HEPATITES VIRAIS A, B, C
Solicitao no GAL: Hepatites A, B ou C
Etiologia:
-
Vrus da Hepatite A
Vrus da Hepatite B
Vrus da Hepatite C
a) Para casos agudos:
Alm do cadastro no GAL, acrescentar o formulrio Sndrome Febril ctero
Hemorrgico
Aguda
SFIHA
(ver
em anexos) com os
resultados
de
aminotransferases (AST, ALT).

b) Para casos no agudos:
Alm do cadastro no GAL, acrescentar o formulrio Marcadores de Hepatite (ver em
anexos).
Anamnese detalhada do paciente fundamental para estabelecer as hipteses
diagnstica e direcionar a pesquisa laboratorial na suspeita de hepatites virais. Deve
ser realizada avaliando a faixa etria, a histria patolgica pregressa e a presena
de fatores de risco, como o uso de drogas injetveis, inaladas ou pipadas, prtica
sexual no segura, contato com pacientes portadores de hepatite, condies
sanitrias, ambientais e de higiene, entre outros.
Material: Soro
Volume: 2 mL
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Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72 horas. Aps este prazo, congelar a 20C.
Metodologia: Imunoensaio Quimioluminescente por Micropartculas CMIA

Florise Weniger Spelling
Yatiyo Matsui Moriya
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4 HEPATITES VIRAIS D, E
Solicitao no GAL: Hepatites D e/ou E
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional:

a) Hepatite D Instituto Evandro Chagas/PA
b) Hepatite E Fundao Instituto Osvaldo Cruz (FIOCRUZ/RJ)
b) Sinan: Ficha de Investigao do Agravo, com todos os campos preenchidos.
Antes do envio da amostra consultar o Lacen/PR para uma prvia avaliao.
Material: Soro
Volume: 2 mL

Refrigerar entre 2 a 8 C
at o momento do envio. O envio deve ocorrer
obrigatoriamente no mesmo dia da coleta.

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Metodologia: Ensaioimunoenzimtico

Florise Weniger Spelling
Yatiyo Matsui Moriya
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5 HIV - I/II
Solicitao no GAL: HIV 1 ou 2 amostra
Etiologia: HIV-1 e HIV-2

A doena pode ou no ter expresso clnica logo aps a infeco. Desta forma,
importante que o profissional saiba conduzir a investigao laboratorial aps a
suspeita de risco de infeco pelo HIV.
Material: Soro
Volume: 2 mL
Nmero de Amostras:
a) Para triagem sorolgica: 1
b) Para confirmatrios: 2 (coletar cada amostra com intervalo mnimo de 1
semana).
-
Quando necessrio, ser solicitada segunda amostra, conforme fluxograma

recomendado pela Portaria 151/2009-MS/SVS (pela Coordenao Nacional DST
AIDS do Ministrio da Sade);
Para as unidades descentralizadas que realizam testes de triagem para HIV: nos
casos de amostras com resultados reagentes ou indeterminados, deve ser
realizada a segunda coleta e ambas as amostras devem ser encaminhadas ao
Lacen/PR para testes confirmatrios;
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Preparo do paciente: Jejum no obrigatrio.
Acondicionamento conservao da amostra:

Metodologia:
a) Imunoensaio Quimioluminescente por Micropartculas CMIA;
b) Enzimaimunoensaio (EIE)
c) Ensaio Imunoenzimtico por Fluorescncia (ELFA);
d) Imunoblot Rpido (IBR)
e) Western Blot
f) Eletroquimioluminescncia

Suely Maria Arana Kamei
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6 HTLV I/II
Solicitao no GAL: HTLV I/II
Etiologia: HTLV I/II (Vrus linfotrpico da clula humana)
Material: Soro
Volume: 2 mL

Metodologia: Imunoensaio Quimioluminescente por Micropartculas CMIA

Suely Maria Arana Kamei
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7 SFILIS
Solicitao no GAL: Sfilis
Etiologia: Treponema pallidum.

Para confirmao de sorologia reagente ou duvidosa.
Material: Soro ou Lquor
Volume: 2 mL

Metodologia:
a) Floculao
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b) Imunofluorescncia Indireta (IFI)

c) Imunoensaio Quimioluminescente por Micropartculas (CMIA)

Ana Maria Brezolin Bortolotto
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8 TOXOPLASMOSE
Solicitao no GAL: Toxoplasmose
Etiologia: Toxoplasma gondii

a) Apenas amostras reconhecidamente IgM positivo ou com sintomatologia de
doena aguda devero ser encaminhadas ao Lacen/PR
b) IgG e IgM reagentes: o LACEN/PR automaticamente realiza o teste de avidez de
anticorpos IgG. Este exame de carter confirmatrio.
Material: Soro
Volume: 2 mL

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Metodologia:
a) Ensaio Imunoenzimtico por Fluorescncia (ELFA): IgM, IgG e Avidez
b) Imunoensaio Quimioluminescente por Micropartculas (CMIA)

Soraia Reda Gilber
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PARASITOLOGIA
SUMRIO
Doena de Chagas Aguda ....................................................................... 134
Filariose.................................................................................................... 136
Leishmaniose Tegumentar Americana LTA .......................................... 138
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1 DOENA DE CHAGAS AGUDA

Solicitao no GAL: Chagas Agudo
Etiologia: Trypanosoma cruzi

O exame sorolgico tem utilidade complementar aos exames parasitolgicos e
devem sempre ser colhidos em casos suspeitos ou confirmados de Doena de
Chagas Aguda. O diagnstico na fase crnica essencialmente sorolgico.
Verificar se a suspeita clnica est associada residncia, procedncia ou ao
deslocamento em rea com confirmao de transmisso.
Material:
g) Gota espessa corada (Giemsa)
h) Esfregao
Volume: 10 a 20 L de sangue
Nmero de Amostras: 2 lminas
Perodo de coleta: Fase aguda
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a) Gota espessa: As lminas secas, devidamente identificadas, devero ser
colocadas em porta-lminas, mantidas temperatura ambiente. Enviar ao
Lacen/PR o mais rpido possvel.
b) Esfregao: As lminas secas, fixadas em lcool metlico, devidamente
identificadas, devero ser colocadas em porta-lminas, mantidas temperatura
ambiente. Enviar ao Lacen/PR.
Transporte:
As lminas devem ser acondicionadas em caixa de papelo para envio, protegendo
os frascos e/ou caixas de lminas, de forma a evitar que se quebrem.
Metodologia:
a)
Gota espessa: Walker ou Giemsa
b)
Esfregao: Giemsa

Roderlei de Arajo
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2 FILARIOSE
Solicitao no GAL: Filariose
Etiologia: Wuchereria bancrofti

Para confirmar o diagnstico clnico-epidemiolgico, quando h manifestaes
sugestivas e o indivduo oriundo de rea endmica.
Verificar se a suspeita clnica est associada residncia, procedncia ou ao
deslocamento em rea com confirmao de transmisso.
Material:
a) Gota espessa corada (Giemsa)
b) Esfregao
Coletar entre 23h00 e 01h00 da manh (periodicidade noturna da microfilria)
Volume: 10 a 20 L de sangue.
Nmero de Amostras: 2 lminas.

a) Gota espessa: As lminas secas, devidamente identificadas, devero ser
colocadas em porta-lminas, mantidas em temperatura ambiente. Enviar ao
Lacen/PR o mais rpido possvel.
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b) Esfregao: As lminas secas, fixadas em lcool metlico, devidamente

identificadas, devero ser colocadas em porta-lminas, mantidas em temperatura
ambiente. Enviar ao Lacen/PR.
Transporte:
As lminas devem ser acondicionadas em caixa de papelo para envio, protegendo
os frascos e/ou caixas de lminas, de forma a evitar que se quebrem.
Metodologia:
a) Gota espessa: Walker ou Giemsa
b) Esfregao: Giemsa

Roderlei de Arajo
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3 LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA LTA

Solicitao no GAL: Leishmaniose Tegumentar Americana Pesquisa direta
Agente etiolgico: Leishmania braziliensis.
importante informar ao laboratrio no caso de aparecimento de ferida que no
cicatriza, ou se o paciente j est em tratamento.
Na ocorrncia de leses tpicas de leishmaniose, especialmente se o paciente
procede de reas endmicas ou esteve presente em lugares onde h casos de
leishmaniose.
A confirmao desse diagnstico por mtodos parasitolgicos
fundamental tendo em vista o nmero de doenas que fazem diagnsticos

diferenciais com a LTA.
Material: Esfregao da leso.
Volume: No aplicvel
Tcnicas de coleta:
Realizar escarificaes em diferentes locais da borda da leso, coletando no mnimo
duas lminas por leso. Evitar extravasamento de sangue, pois prejudica o
diagnstico.
Importante: lceras recentes so mais ricas em parasitos.
Nmero de amostras: 2 lminas por leso
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As lminas no coradas devem ser previamente fixadas com cerca de 3 mL de
metanol durante trs minutos. Aps secas as lminas devero ser colocadas em
frascos ou caixas prprias para transporte de lminas devidamente identificadas.
Manter a temperatura ambiente.
Transporte:
Em caixas de papelo para envio (se possvel, a padronizada pelos Correios),
protegendo os frascos ou caixas de lmina.
Metodologia:
Pesquisa do parasita a partir de esfregaos corados da leso (tcnica de GIEMSA).
Prazo para resultado: 10 dias.

Roderlei de Arajo
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VIROLOGIA
SUMRIO
Caxumba (Parotidite Infecciosa)............................................................... 141
Citomegalovrus........................................................................................ 143
Dengue..................................................................................................... 145
Doenas Diarreicas Agudas - Virais ......................................................... 148
Doena Prinica: com enfoque na Doena de Creutzfeldt Jakob (DCJ) .. 150
Enterovrus ............................................................................................... 153
Eritema Infeccioso (Parvovrus B19) ........................................................ 155
Febre Amarela.......................................................................................... 157
Hantavrus ................................................................................................ 160
10 Herpes Simples ........................................................................................ 162

11 Mononucleose .......................................................................................... 164
12 Poliomielite ............................................................................................... 166
13 Raiva Animal ............................................................................................ 168
14 Raiva Humana.......................................................................................... 170
15 Raiva - Titulao de anticorpos antirrbicos............................................. 172
16 Rubola .................................................................................................... 174
17 Sarampo ................................................................................................... 177
18 Varicela .................................................................................................... 180
19 Vrus Respiratrios Para Unidades Sentinela/MS ................................. 182
20 Outros Exames Realizados na Seo de Virologia .................................. 184
20.1 Febre Maculosa..........................................................................................185
20.2 Leptospirose Humana ................................................................................187
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1 CAXUMBA (PAROTIDITE INFECCIOSA)

Solicitao no GAL: Caxumba
Etiologia: Vrus da Caxumba gnero Rubulovrus, famlia Paramyxoviridae

O diagnstico da doena eminentemente clnico-epidemiolgico.
Exame realizado somente como auxlio no esclarecimento de casos graves e sem
etiologia definida, no fazendo parte da rotina do Lacen/PR. Para casos de rotina
prevalece o diagnstico clnico.
Material: Soro
Volume: 2 mL
Perodo de Coleta: A critrio mdico.

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Metodologia: Enzimaimunoensaio (EIE) IgM e IgG

Etienne Wessler Coan
Marcia Prussak
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2 CITOMEGALOVRUS
Solicitao no GAL: Citomegalovrus
Etiologia: Citomegalovrus (CMV) pertence a famlia Herpesviridae.

etiologia definida, no fazendo parte da rotina do Lacen/PR.
Material: Soro
Volume: 2 mL
Perodo de coleta : A critrio mdico

Metodologia:
a) Ensaio Imunoenzimtico por Fluorescncia ELFA: IgM, IgG e Avidez
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b) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM e IgG

Marcia Prussak
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3 DENGUE
Solicitao no GAL: Dengue
Etiologia
Arbovrus do gnero Flavivirus. So conhecidos 4 sorotipos: D1, D2, D3 e D4.
Vetor: mosquito do gnero Aedes, sendo o Aedes aegypti o mais importante na
transmisso da doena.
O cadastro das amostras para isolamento viral no GAL deve ser feito sempre
acompanhado do cadastro do NS1, e vice-versa.
O diagnstico laboratorial especfico dos pacientes com suspeita de dengue
indicado de acordo com a situao epidemiolgica de cada rea.
a) Sorologia o mtodo de escolha para a confirmao laboratorial na rotina.
b) Isolamento Viral o mtodo mais especfico (padro ouro) para o isolamento e
a identificao do sorotipo do Vrus Dengue responsvel.
c) Deteco de antgenos NS1 o mtodo bastante sensvel e especfico e deve
ser utilizado em pesquisas e nos casos graves. O Ministrio da Sade
disponibiliza este teste para triagem das amostras para isolamento viral em
Unidades Sentinela.
Material: Soro.
Volume:
a) 1 mL - Diagnstico virolgico
b) 1 mL - Diagnstico sorolgico
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Perodo de coleta:
-
1 amostra: do 1 ao 5 dia da doena, para deteco do antgeno NS1 e

isolamento viral
2 amostra: aps o 5 dia do incio dos sintomas para sorologia (IgM)

Importante: As amostras para isolamento viral e NS1 devem ser
acondicionadas e enviadas separadas das amostras para
sorologia.
Transporte:
a) Sorologia Em caixa de isopor, com gelo reciclvel.
b) Isolamento Viral e NS1 De preferncia em caixa de isopor com gelo seco. Se
no for possvel, transportar em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel no
mesmo dia da coleta.
Metodologia:
a) Sorologia: Enzimaimunoensaio (EIE) IgM deteco de anticorpos IgM
especficos para os 4 sorotipos do vrus do dengue;
b) Deteco do Antgeno NS1: Enzimaimunoensaio (EIE) deteco de antgenos
virais especficos de dengue. Utilizado para deteco precoce da infeco pelo
vrus da dengue e como triagem para o isolamento viral;
c) Isolamento Viral: culturas em clulas C6/36. o mtodo mais especfico para o
isolamento e a identificao do sorotipo do vrus da dengue.
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a) Sorologia e NS1: 5 dias
b) Isolamento Viral: 40 dias
Importante: Aps a determinao do sorotipo circulante em situaes
de epidemias ou surtos, no necessrio realizar a sorologia em todos
os casos.

Anaclete Fellini
Carla Gomes da Silva Bortoleto
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4 DOENAS DIARREICAS AGUDAS - VIRAIS

Solicitao no GAL: Adenovrus, Norovrus ou Rotavrus
Etiologia:
Os principais agentes so: Rotavrus A, Norovrus, Adenovrus Entricos e
Astrovrus.
de dados clnico/laboratoriais;
b) Para rotavrus, alm do GAL, Sinan Ficha de Investigao do Agravo, com
todos os campos preenchidos.
Importante na vigncia de surtos para orientar as medidas de controle. Solicitar
orientaes da equipe de vigilncia epidemiolgica do municpio.
Material:
a) Fezes (in natura) - sem meio de transporte.
Fraldas:
Fezes slidas: coletar com esptula e colocar no frasco coletor.
Fezes lquidas: utilizar compressa cirrgica entre a criana e a fralda. Com

esse procedimento as fezes ficam armazenadas na compressa, aps
acondicion-la no frasco.
b) Swab retal em casos de bito

Volume: De 3 a 5 mL ou 5 g ou 1 colher de ch.
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Perodo de coleta:
Preferencialmente de 3 a 5 dias aps o aparecimento dos sintomas.

Em frasco de tampa de rosca. Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72 horas. Aps este
prazo, congelar a 20C.
Metodologia: Enzimaimunoensaio - EIE

Irene Skraba
Rafaela Pintan Inamassu
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5 DOENA PRINICA: COM ENFOQUE NA DOENA DE CREUTZFELDT

JAKOB (DCJ)
Solicitao no GAL: Doena Prinica
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional:

a) Lquido cefalorraquiano LCR (Lquor) Laboratrio de Investigaes em
Neurologia USP/SP.
b) Sangue com EDTA Centro Internacional de Pesquisa e Ensino CIPE do
Hospital A.C. Camargo - SP.
Etiologia:
As doenas causadas por prons so decorrentes do acmulo e/ou metabolismo
anormais de protenas denominadas prons (PrP) capazes de determinar as
Encefalopatias Espongiforme Transmissveis (EET).
No exame do lquido cefalorraquiano podemos encontrar a protena 14-3-3 LIM 15.
b) Para o lquor e fragmentos - Sinan Ficha de Investigao do Agravo, com todos
os campos preenchidos.
c) Para o sangue com EDTA - Termo de Consentimento Esclarecido (TCE) e Sinan
Ficha de Investigao do Agravo, com todos os campos preenchidos.
Os exames laboratoriais so teis para excluir outras causas de demncia
rapidamente progressivas.
Material:
a) Sangue com anticoagulante EDTA
b) Lquor
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c) Fragmentos/blocos de tecido cerebral
Volume:
a) Sangue: 2 mL
b) Lquor: 1 a 2 mL
c) Fragmentos de tecido cerebral.
Perodo de coleta: No aplicvel.

-
Sangue: manter no tubo de coleta com EDTA e sob refrigerao entre 2 e 8 C por
at 24 horas.
Lquor: em tubo/frasco estril; manter sob refrigerao entre 2 a 8 C por at 24

horas.
Fragmentos/blocos de tecidos cerebrais: colocar em frascos com formol e/ou fazer

blocos com parafina. Manter temperatura ambiente.
Importante:
Todos os materiais devero ser colocados em frascos lacrados e rotulados
adequadamente com a incluso dos dizeres: Risco Biolgico.
O acondicionamento deve ser em embalagem especfica e prpria para o
transporte de amostras infecciosas, conforme disposto na legislao
pertinente.
Transporte:
Em embalagem tripla, de acordo com a legislao ONU/IATA para transporte de
substncias perigosas.
Metodologias:
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a) Lquor: Immunobloting pesquisa da protena 14.3.3 LIM 15. Realizado no

Laboratrio de Investigaes em Neurologia USP/SP.
b) Sangue com EDTA: Pesquisa de polimorfismos e/ou mutaes do gene de pron
celular PRNP. Realizado no Centro Internacional de Pesquisa e Ensino (CIPE) do
Hospital A.C. Camargo/SP.
c) Fragmentos e blocos de tecido cerebral: Imunohistoqumica.
Importante: Obrigatrio a adoo de medidas de precaues para o
manuseio de pacientes, tratamentos de artigos e superfcies,
manipulao e descarte de materiais de amostras e tecidos.

Irene Skraba
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6 ENTEROVRUS
Solicitao no GAL: Enterovrus Isolamento Viral
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional Fundao Instituto Osvaldo

Cruz (FIOCRUZ/RJ).
Etiologia:
Os Echovrus e os Coxsakievrus, causadores de meningite assptica e outras
doenas, so transmitidos por via fecal-oral e de incidncia mundial.
dados clnico/laboratoriais. Em caso de suspeita de Coxsackie colocar na
observao.
b) Ficha epidemiolgica devidamente preenchida com os dados citoqumicos e
bacteriolgicos quando o material for lquor.
Material:
a) Lquor
b) Fezes - coletar em coletor universal
Importante: Em caso de suspeita de Coxsackievrus (doena do p,
mo e boca) o material a ser coletado fezes.
Pode-se enviar soro, porm somente ser processado no caso de
ocorrer isolamento do vrus nas fezes.
Volume:
a) Lquor: 2 mL
b) Fezes: 4 a 8 g
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Preparo do paciente: A critrio mdico

a) Lquor: em frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C por at 24 horas. Aps esse
prazo, congelar a 70 C. Caso no tenha essa possibilidade, congelar a 20 C
por at 48 horas.
b) Fezes: em frasco limpo e seco (coletor universal), vedar bem. Refrigerar entre
2 a 8 C por no mximo 2 dias, ou congelar a 20 C No utilizar congelador de
geladeira.
Transporte:
Em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel para evitar o descongelamento.
Metodologia:
a) Cultivo Celular (1 etapa) Inoculao do espcime clnico (amostra) a ser
analisado em culturas celulares.
b) Reao em Cadeia de Polimerase PCR (2 etapa) Sequenciamento gentico
para identificao do vrus.

Irene Skraba
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7 ERITEMA INFECCIOSO (PARVOVRUS B19)

Solicitao no GAL: mediante incluso pelo Lacen/PR.
Etiologia: Parvovrus B19 gnero Eritrovrus, famlia Parvoviridae.

Exame realizado somente como diagnstico diferencial para casos de doenas
exantemticas (Rubola e Sarampo).
Material: Soro
Volume: 2 mL
Nmero de amostras: 1 ou 2
A solicitao de segunda amostra, quando necessria, ser feita pelo Lacen/PR ou
pelo Servio de Epidemiologia.
Perodo de coleta: Coleta Oportuna: do 1 ao 28 dia aps o incio do exantema.
Acondicionamento da amostra:
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Marcia Prussak
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8 FEBRE AMARELA
Solicitao no GAL: Febre Amarela
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional - Instituto Adolfo Lutz/SP.
Etiologia: Arbovrus do gnero Flavivrus.
Confirmao diagnstica em indivduos com quadro febril agudo (at 7 dias), de
incio sbito, acompanhado de ictercia e/ou manifestaes hemorrgicas, residente
ou procedente de rea de risco para febre amarela ou de locais com ocorrncia de
epizootias em primatas
no humanos ou isolamento de vrus em vetores, nos
ltimos quinze dias, no vacinado contra febre amarela ou com estado vacinal
ignorado.
Material:
a)
Sangue
b)
Vsceras e rgos (post mortem): humanos e no-humanos

-
Tecidos: fgado, rins, corao, bao, linfonodos e crebro.
Volume:
a) Soro: 2 mL
b) Tecidos: ver em perodo de coleta.
Nmero de Amostras: Conforme o perodo de coleta.
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Perodo de coleta:
a) Sorologia e Isolamento
-
1. Amostra: No incio dos sintomas (isolamento)
2. Amostra: A partir do 5 dia do incio dos sintomas (sorologia)

Importante: Nos casos de bito o sangue dever ser puncionado
diretamente do corao.
b) Vsceras e rgos (post mortem) - humanos e no-humanos

-
Tecidos: fgado, rins, corao, bao, linfonodos e crebro: coletar dentro

das primeiras 8 horas aps o bito.
Coletar duas amostras de tecidos de pelo menos 1cm3, uma para isolamento viral, e
outra, fixada em formalina, para estudos histopatolgicos.

a) Soro para sorologia (Elisa): Acondicionar em tubo de poliestireno com tampa
de cor amarela (fornecido pelo Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C por at
72 horas. Aps este prazo, congelar a 20 C.
b) Soro para isolamento viral: Acondicionar em tubo de poliestireno com tampa
de cor amarela (fornecido pelo Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C por at
72 horas.
Aps este prazo, congelar a 70 C. Caso no tenha essa possibilidade,
congelar a 20 C por at 48 horas.
c) Para os testes histopatolgicos: Os fragmentos devem conter um volume de
formalina 10 X maior que o volume dos fragmentos. Esses devem ser
acondicionados em frascos de plstico devidamente lacrados. Conservar
com formalina temperatura ambiente.
Soluo de formalina
Formol concentrado ........................10mL
Soluo salina...................................90mL
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Transporte:
a)
Material para sorologia: em caixa de isopor com gelo reciclvel;
b)
Material para Isolamento Viral: em caixa de isopor com gelo seco ou em

nitrognio lquido. Caso no tenha essa possibilidade, enviar em caixa
isopor com bastante gelo reciclvel.
c)
Material para Imunohistoqumica: em caixa de isopor temperatura

ambiente.
Metodologia:
a)
Isolamento viral;
b)
Enzimaimunoensaio (ELISA);
c)
Histopatolgico (post mortem);

d)
Sorologia: 30 dias;
e)
Isolamento e Histopatologia: 30 dias.

Anaclete Fellini
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9 HANTAVRUS
Solicitao no GAL: Hantavrus
Lacen/PR envia amostras para diagnstico molecular ao Laboratrio de Referncia

Nacional - Instituto Adolfo Lutz/SP.
Etiologia: Vrus do gnero Hantavrus.
a) Cadastro no GAL com todos os dados do paciente e informaes clnicas
devidamente preenchidas.
Material:
a) Soro
b) Cogulo de sangue a temperatura de 70 C para PCR
Volume:
a) Soro: 2 mL
b) Cogulo: No aplicvel
Perodo de coleta:
a) Fase aguda
b) Fase convalescente
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a) Soro: Em tubo de poliestireno com tampa de cor amarela (fornecido pelo
Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C por at 24 horas. Aps este prazo,
congelar a 20 C.
b) Cogulo: Em criotubo congelar a 70 C.
Transporte:
a) Soro: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
b) Cogulo: em caixa de isopor com gelo seco.
Metodologia:
a) Enzimaimunoensaio (EIE) de captura para IgM para pesquisa de infeco
aguda.
b) Enzimaimunoensaio (EIE) de captura para IgG para estudos de prevalncia.
c)
Reao em Cadeia de Polimerase (PCR) para definio do Gentipo Viral

a) Sorologia: 10 dias
b) PCR: 20 dias.

Irene Skraba
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10 HERPES SIMPLES
Solicitao no GAL: Herpes simples tipo 1 e 2
Etiologia:
Herpes Simples causado pelo Herpesvrus hominis tipo 1 e 2 da famlia
Herpesviridae.
Material: Soro
Volume: 2 mL

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Metodologia: Enzimaimunoensaio (EIE) IgM e IgG.

Marcia Prussak
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11 MONONUCLEOSE
Solicitao no GAL: Mononucleose
Etiologia: Vrus Epstein Barr pertence famlia Herpesviridae.

etiologia definida, no fazendo parte da rotina do Lacen/PR
Material: Soro
Volume: 2 mL

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Metodologia:
a) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM e IgG
b) Ensaio Imunoenzimtico por Fluorescncia (ELFA) IgM e IgG
Prazo para resultado: 30 dias.

Marcia Prussak.
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12 POLIOMIELITE
Solicitao no GAL: Paralisia Flcida Aguda
O Lacen/PR encaminha ao Laboratrio de Referncia Nacional Fundao Instituto

Osvaldo Cruz (FIOCRUZ/RJ).
Etiologia: Poliovrus gnero Enterovrus composto de trs sorotipos 1,2 e 3.
a) Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do paciente e, de
Exame encaminhado ao Laboratrio de Referncia Nacional, em cumprimento ao
Programa de Erradicao da Poliomielite nas Amricas.
Material: Fezes
Volume: 8 g ou 2/3 da capacidade de um coletor universal.
Perodo de coleta:
Na fase aguda da doena, at o 14 dia do incio da deficincia motora.

Em frasco limpo e seco (coletor universal), vedar bem. Refrigerar entre 2 a 8 C por
no mximo 2 dias, ou congelar a 20 C. No utilizar congelador de geladeira.
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Metodologia:
Isolamento em cultura celular
Reao em Cadeia de Polimerase PCR

Irene Skraba
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13 RAIVA ANIMAL
Solicitao no GAL: Raiva Animal
Etiologia: Rabdovrus do gnero Lyssavirus.
a) Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do animal, nome
do proprietrio, endereo, e dados clnicos;

a) Para definir a conduta em relao ao paciente (pessoa agredida).
b) Para se conhecer o risco de transmisso da doena na rea de procedncia do
animal.
Material:
a) Fragmentos do Sistema Nervoso Central (SNC) ou cabea.
b) Morcegos: devem ser enviados inteiros.
Volume: No aplicvel
Perodo de coleta: Post mortem imediato.

a) Fragmentos de crebro: colocar em frasco limpo e seco com tampa de rosca.
b) Cabeas de animais/morcegos: devero ser embalados em saco plstico,
devidamente fechado e identificado.
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Metodologia:
a) Imunofluorescncia Direta - IFD
b) Prova Biolgica
c) Imunofluorescncia Direta - IFD: 24 horas
a) Prova biolgica: 30 dias

Anaclete Fellini
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14 RAIVA HUMANA
Solicitao no GAL: Raiva Soroneutralizao
Etiologia:
Rabdovrus do gnero Lyssavirus, pertencente famlia Rhabdoviridae
Material:
Fragmentos do Sistema Nervoso Central (SNC), corno de Ammon, crtex e
cerebelo.
Volume: No aplicvel
Perodo de coleta: Post mortem imediato

Colocar os fragmentos de crebro em frasco limpo e seco com tampa de rosca.
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Metodologia:
a) Imunofluorescncia direta IFD
b) Prova Biolgica
a) Imunofluorescncia Direta IFD: 24 horas
b) Prova biolgica: 30 dias
Em caso de resultado positivo, a comunicao ser imediata por telefone e a
liberao preliminar no GAL.

Anaclete Fellini
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15 RAIVA - TITULAO DE ANTICORPOS ANTIRRBICOS

Solicitao no GAL: Raiva
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional Instituto Pasteur/SP.

Controle sorolgico anual dos profissionais que se expem permanentemente ao
risco de infeco ao vrus da Raiva, administrando-se uma dose de reforo sempre
que os ttulos forem inferiores a 0,5 UI/mL.
Material: Soro.
Volume: 2 mL
Perodo de coleta:
1 a 3 semanas aps a ltima dose do esquema de vacinao ou aps a
administrao de dose de reforo anual.

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Metodologia: Microtcnica de soroneutralizao em cultivo celular

Anaclete Fellini
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16 RUBOLA
Solicitao no GAL: Rubola
Isolamento Viral e Biologia Molecular: O Lacen/PR encaminha ao Laboratrio de

Referncia Nacional Fundao Instituto Osvaldo Cruz (FIOCRUZ/RJ).
Etiologia: Vrus da Rubola gnero Rubivrus, famlia Togaviridae.
dados clnico/laboratoriais, incluindo data de incio do exantema.
-
Suspeita da doena (febre e exantema);
- Para recm-nato com m formao congnita e/ou suspeita de Sndrome da

Rubola Congnita.
Material:
a) Soro
b) Urina: quando for indicado isolamento viral.
c) Swab combinado de nasofaringe quando for indicado isolamento viral. Coletar
amostras da narina direita, narina esquerda e orofaringe utilizando um swab de
rayon para cada stio.
Importante: No dever ser utilizado swab de algodo, porque
Volume:
a) Soro: 2 mL
b) Urina: 20 a 50 mL
c) Swab combinado de nasofaringe: no aplicvel
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Nmero de Amostras:
1 ou 2
A solicitao de segunda amostra, quando necessrio, ser feita pelo Lacen/PR ou
pelo Servio de Epidemiologia.
Perodo de coleta:
a) Soro: Coleta Oportuna: do 1 ao 28 dia aps o exantema;
b) Urina e Swab combinado de nasofaringe: At o 5 dia a partir do aparecimento do
exantema.

a 20 C.
b) Swab combinado de nasofaringe: Aps a coleta, inserir os 3 swab coletados
(narina direita, narina esquerda e orofaringe) no tubo contendo meio de
transporte viral previamente descongelado. Cortar o excesso da haste dos swab,
tampar o frasco, lacrar. Refrigerar as amostras entre 2 a 8 C. Encaminhar o mais
rpido possvel ao Lacen/PR, no prazo mximo de 24 horas aps a coleta. No
coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo. Nunca congelar os
frascos.
c) Urina: in natura Em frasco estril. Refrigerar as amostras entre 2 a 8 C.
Encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, no prazo mximo de 24 horas
aps a coleta. No coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo.
Nunca congelar os frascos.
Transporte:
Soro: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
Amostras para isolamento: em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel, no
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Metodologia:
a) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM, IgG e Avidez
b) Ensaio Imunoenzimtico por Fluorescncia (ELFA) IgM, IgG
c) Reao em Cadeia de Polimerase - PCR
d) Isolamento Viral

a) Sorologia:
IgM: 4 dias
IgG: 15 dias.
b) Reao em Cadeia de Polimerase - PCR: 60 dias

c) Isolamento Viral: 60 dias
Importante: Os casos IgM Reagente ou Inconclusivos so repassados

imediatamente
para
Diviso
de
Vigilncia
de
Doenas
Transmissveis DVVTR.

Marcia Prussak
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17 SARAMPO
Solicitao no GAL: Sarampo
Isolamento Viral e Biologia Molecular: O Lacen/PR encaminha ao Laboratrio de

Etiologia: Vrus do Sarampo, gnero Morbillivrus, famlia Paramyxoviridae.
dados clnico/laboratoriais, incluindo a data de incio do exantema.
a) Suspeita da doena (febre e exantema);
b) Suspeita de Panencefalite Esclerosante Subaguda (PEESA).
Material:
a) Soro
b) Urina: quando for indicado isolamento viral.
c) Swab combinado de nasofaringe quando for indicado isolamento viral. Coletar
amostras da narina direita, narina esquerda e orofaringe utilizando um swab de
rayon para cada stio.
Importante: No dever ser utilizado swab de algodo, porque
d) Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor) e soro indicado na suspeita de
PEESA.
Volume:
a) Soro: 2 mL
b) Urina: 20 a 50 mL
c) Lquor : 2 mL.
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Nmero de Amostras:
1 ou 2 A solicitao de segunda amostra, quando necessria, ser feita pelo
Lacen/PR ou pelo Servio de Epidemiologia.
Perodo de coleta:
a) Soro: coleta oportuna do 1 ao 28 dia aps o exantema;
b) Urina e Swab combinado: at o 5 dia a partir do aparecimento do exantema;
c) Lquor e soro (PEESA): a critrio mdico.

a 20 C.
b) Swab combinado de nasofaringe: Aps a coleta, inserir os 3 swab coletados
(narina direita, narina esquerda e orofaringe) no tubo contendo meio de
transporte viral previamente descongelado. Cortar o excesso da haste dos swab,
tampar o frasco, lacrar. Refrigerar as amostras entre 2 a 8 C. Encaminhar o mais
rpido possvel ao Lacen/PR, no prazo mximo de 24 horas aps a coleta. No
coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo. Nunca congelar os
frascos.
c) Urina: in natura: Em frasco estril. Refrigerar as amostras entre 2 a 8 C.
Encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, no prazo mximo de 24 horas
aps a coleta. No coletar em dias que no seja possvel obedecer este prazo.
Nunca congelar os frascos.
d) Lquor: Em frasco estril, refrigerar entre 2 a 8 C. Encaminhar o mais rpido
possvel ao Lacen/PR.
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Transporte:
a) Lquor e Soro: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
b) Amostras para isolamento: em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel, no
Metodologia:
a) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM e IgG
b) Reao em Cadeia de Polimerase - PCR
c) Isolamento Viral
a) Sorologia
-
IgM: 4 dias
IgG: 15 dias
b) Reao em Cadeia de Polimerase PCR: 60 dias

c) Isolamento Viral: 60 dias
Importante: Os casos IgM Reagente ou Inconclusivos so repassados
imediatamente
para
Diviso
de
Vigilncia
de
Doenas
Transmissveis DVVTR.

Marcia Prussak
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18 VARICELA
Solicitao no GAL: Varicela
Etiologia: Vrus Varicellazoster, famlia Herptoviridae.

Material: Soro
Volume: 2 mL

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Marcia Prussak
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19 VRUS RESPIRATRIOS PARA UNIDADES SENTINELA/MS

Solicitao no GAL: Pesquisa de Vrus Respiratrios IFI
Amostras para Isolamento em Cultura Celular.o Lacen/PR envia ao Laboratrio de

Etiologia:
Influenza A e B, Parainfluenza 1, 2 e 3, Vrus Sincicial Respiratrio (RSV) e
Adenovrus.
b) Para a SMS/Curitiba: Encaminhar ficha de informao clnica e laboratorial
preenchida.
Caso suspeito de doena respiratria aguda grave (apresentando ou no fator de
risco para complicaes).
Esta pesquisa realizada apenas para as Unidades Sentinela definidas pelo
Ministrio da Sade.
Material:
Aspirado de nasofaringe (ANF): Coletar com bomba a vcuo acoplada ao coletor
plstico de secrees (bronquinho) e sonda uretral n 6.
Volume: No se aplica.
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Perodo de coleta:
At o 5 dia aps o incio dos sintomas, preferencialmente nos trs primeiros dias.

Aps a coleta do ANF, aspirar os 3 mL de meio de transporte viral (fornecido pelo
Lacen/PR) para dentro do bronquinho. Enrolar a sonda no coletor guardando-o na
prpria embalagem.
Refrigerar as amostras entre a 2 a 8 C, por no mximo 48 horas. Nunca congelar.
Importante:
As
clulas
epiteliais
infectadas
com
vrus
so
extremamente lbeis e, portanto facilmente danificveis pelo manuseio

inapropriado ou pela demora em seu processamento.
Metodologia:
a) Imunofluorescncia Indireta (IFI) Painel de Anticorpos Monoclonais.
b) Isolamento em cultura celular
c) Reao em Cadeia de Polimerase - PCR
a) IFI: 7 dias
b) Isolamento em cultura celular: 30 dias.
c) PCR: 20 dias.

Irene Skraba
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20 OUTROS EXAMES REALIZADOS NA SEO DE VIROLOGIA
Sumrio
20.1 Febre Maculosa..........................................................................................185

20.2 Leptospirose Humana ................................................................................187
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20.1
Febre Maculosa
Solicitao no GAL: Febre Maculosa 1, 2 ou amostra nica
Etiologia: Rickettsia rickettsii.
Para confirmar caso suspeito em indivduo que apresente: febre de moderada a
alta, cefalia, mialgia, histria de picada de carrapatos e/ou contato com animais
domsticos e/ou silvestres e/ou tenha freqentada rea sabidamente de
transmisso de Febre Maculosa, nos ltimos quinze dias; ou, ainda, indivduo que
apresente febre de incio sbito, mialgia, cefalia, seguida por aparecimento de
exantema maculopapular, entre dois a cinco dias dos sintomas e/ou manifestaes
hemorrgicas.
Material: Soro
Volume: 2 mL
Perodo de coleta:
A 1 amostra deve ser coletada no incio dos sintomas, e a 2 coletar aps
intervalo de 14 dias. Enviar as duas amostras juntas ao Lacen/PR.
Importante: Enviar amostra nica somente em caso de bito.
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Refrigerar entre 2 a 8C por at 72 horas. Aps esse prazo, congelar a 20 C.
Metodologia: Imunofluorescncia Indireta (IFI)

Anaclete Fellini
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20.2
Leptospirose Humana
Solicitao no GAL: Leptospirose Humana
Etiologia: Gnero Leptospira
b) Sinan Ficha de Investigao do Agravo, com todos os campos preenchidos
a) Para confirmao de diagnstico em indivduos que apresentem: febre, cefalia,
mialgia e ainda:
b) Presena de antecedentes epidemiolgicos sugestivos nos trinta dias anteriores
data do incio dos sintomas: aps exposio a enchentes, alagamentos, lama
ou colees hdricas; exposio a fossas, esgoto, lixo e entulho; atividades que
envolvam risco ocupacional; vnculo epidemiolgico com um caso confirmado por
critrio
laboratorial;
residir
ou
trabalhar
em
rea
de
risco
para
Leptospirose.Apresente pelo menos um dos seguintes sinais ou sintomas:

c) Sufuso conjuntival; sinais de insuficincia renal aguda; ictercia e/ou aumento de
bilirrubinas; fenmeno hemorrgico.
Material:
a) Soro: para EIE IgM e MAT
b) Sangue total coletado com heparina: para isolamento
Volume: 2 mL
Nmero de Amostras:
d) Soro: 1 para EIE IgM e 2 para MAT
e) Sangue total: 1
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Perodo de coleta:
Fase aguda:
a) Para Enzimaimunoensaio (EIE) IgM: coletar 1 amostra a partir do 5 dia aps
o incio dos sintomas.
b) Para o Teste de Aglutinao Microscpica (MAT): recomenda-se a coleta de
amostras pareadas - a primeira na fase aguda e a segunda aps 10 dias a partir
da data de coleta da primeira.
c)
Para o isolamento bacteriano: coletar at o 5 dia do incio dos sintomas.

a 20 C.
b) Sangue total com heparina: No prprio tubo da coleta (com heparina). Manter a
temperatura ambiente e encaminhar o mais rpido possvel ao Lacen/PR, de
preferncia no prazo mximo de 24 horas aps a coleta.
Importante: No coletar em dias que no seja possvel obedecer este
prazo.Nunca refrigerar os frascos.
Transporte:
a) Soro: em caixa de isopor com gelo reciclvel.
b) Sangue total com heparina: em caixa de isopor temperatura ambiente
Metodologia:
a) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM
b) Teste de Aglutinao Microscpica (MAT): identificao dos sorovares.
c) Isolamento da bactria.
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Prazo para resultados:

a) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM: 7 dias
b) Teste de Aglutinao Microscpica (MAT): 15 dias
c) Isolamento: 30 dias

Irene Skraba
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CONTROLE DE QUALIDADE
SUMRIO
Hansenase Controle de Qualidade Baciloscpica................................ 191
Malria Reviso e Controle de Qualidade Parasitoscpico................... 193
Tuberculose Controle de Qualidade Baciloscpica ............................... 196
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1 HANSENASE CONTROLE DE QUALIDADE BACILOSCPICA
Etiologia: Mycobacterium leprae (Bacilo de Hansen)
Controle de Qualidade das Baciloscopias de Hansenase: Preencher todos os
campos de identificao.
Critrios para realizao do exame: Controle de Qualidade
Material:
Lminas coradas.
Aps ter sido realizada a coleta para baciloscopia, as lminas fixadas, coradas e
examinadas devem ser guardadas em geladeira at o envio para o Lacen/PR para o
controle de qualidade.
Nmero de amostras: Todas as lminas examinadas no ms, no laboratrio local.
Perodo de envio: At o dia 10 do ms subseqente.

As lminas coradas devem ser acondicionadas em caixas de transporte prprias,
evitando poeiras, umidade, calor intenso, luz solar e insetos.
Refrigerar entre 2 a 8 C.
Transporte: Em porta-lminas identificados (C.Q.B.H.)
Metodologia:
Baciloscopia direta pela colorao de Ziehl Gabbet para avaliar presena ou
ausncia do Bacilo de Hansen (M. leprae).
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Interpretao:
-
fornecido pelo ndice baciloscpico (IB) de cada esfregao. A mdia aritmtica

dos IB dos diversos locais de coleta fornecer o ndice do paciente (IP).
-
IP = carga bacilar
Tambm realizado o ndice morfolgico (IM), para avaliao da morfologia

bacilar.
O resultado fornecido em % de bacilos ntegros e % de bacilos fragmentados:

-
IM = ......... % de bacilos ntegros
IM = ......... % de bacilos fragmentados.

Marlia Schinetski Nascimento
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2 MALRIA REVISO E CONTROLE DE QUALIDADE DO DIAGNSTICO

PARASITOSCPICO
Enviar duas vias do Resumo Semanal do Laboratrio ao laboratrio de reviso de
sua referncia, devidamente preenchido.
Critrios para realizao do exame: Controle de Qualidade
Material:
a) Lminas com gota espessa (preferencialmente);
b) Esfregao distendido de sangue;
c)
Gota espessa + esfregao distendido de sangue para pesquisa de Plasmodium.
Nmero de Amostras:
A totalidade das amostras de sangue positivas e negativas examinadas durante a
semana.
Perodo de envio: Sempre na semana subseqente anlise das amostras.
Importante: No caso de lminas examinadas e/ou revisadas nos
laboratrios de referncia para reviso de diagnstico de Malria,
recomenda-se o envio mensal de 50 % dessas lminas para o Controle
de Qualidade do diagnstico no Lacen/PR.
Aps a anlise, remover o leo de imerso das lminas utilizando papel absorvente
macio, com maior cuidado quando tratar-se da gota espessa por no ser fixada a
amostra e ento colocada em caixas porta lminas.
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Transporte:
As lminas devero ser colocadas em frascos ou caixas prprios para transporte de
lminas e estas identificadas com:
-
Nome do Laboratrio que est enviando;
Municpio;
Regional de Sade;
Nmero total de lminas positivas;
Nmero total de lminas negativas;
Semana Epidemiolgica;
Identificao do examinador.
Importante: As lminas devem ser acondicionadas em caixa de
papelo para envio, protegendo os frascos e/ou caixas de lminas, de
forma a evitar que se quebrem durante o transporte.
Metodologia:
Positivo Preencher diariamente o Resumo Semanal do laboratrio, colocando nas
colunas correspondentes os resultados encontrados nas amostras de sangue
examinadas. A espcie e a densidade parasitria devem ser registradas em cruzes
(+++), por exemplo: ++V; 2 Fg; +++V 3Fg; +++F+V; ++M. Nos resultados menores
que meia cruz (<+/2), registrar o nmero de parasitos visualizados, por exemplo: 20
V, 15 F. No caso de resultados obtidos a partir de esfregao, registrar ento somente
gnero e espcie, por exemplo: P. vivax; P. falciparum.
Importante: Registrar em primeiro lugar a inicial da espcie dominante,
exemplo: +++F + V; ++V 5 Fg.
Negativo O examinador anotar, ao final do dia, no Resumo Semanal, o nmero
de amostras de sangue negativas examinadas.
Terminada a semana sero confrontados o nmero de lminas examinadas que
aparecerem no Resumo Semanal do Microscopista (Quadro 1), com o nmero de
lminas que enviar ao laboratrio de reviso e controle de qualidade (Quadro 2).
O restante das lminas negativas e positivas no enviadas sero empacotadas e
rotuladas, indicando o total de lminas, a semana epidemiolgica correspondente e
a identificao pessoal do examinador. Estas lminas s podero ser descartadas
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ou recuperadas (reutilizadas), quando o laboratrio receber os resultados do

controle de qualidade, ou sero examinadas no local quando pela superviso do
Laboratrio Central.
Resultados:
Os resultados das lminas enviadas para Reviso e/ou Controle de Qualidade, sero
acrescentados ao RESUMO SEMANAL, que acompanham as amostras enviadas
ao laboratrio de referncia.
30 dias a contar do recebimento das amostras, salvo caso especial em que for
solicitada confirmao urgente para prosseguimento ou alterao da conduta
teraputica.

Roderlei de Arajo
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3 TUBERCULOSE CONTROLE DE QUALIDADE BACILOSCPICA
As lminas devem vir acompanhadas do Xerox da folha do livro de registro com o
nome do laboratrio e do tcnico responsvel pelas baciloscopias.
Material: Lminas de escarro coradas pela tcnica Ziehl-Neelsen.
Nmero de Amostras:
Todas as lminas examinadas no perodo de trs meses, devidamente identificadas
pelo nmero de ordem do livro de registro de Baciloscopia e de Cultura para
Diagnstico e Controle da Tuberculose (livro branco).
Perodo de envio: Preferencialmente at o dia 10 do ms subsequente.
Aps a leitura, devem retirar levemente o excesso do leo de imerso com papel
absorvente sem prejudicar o esfregao. Colocar o mais breve possvel ao abrigo da
luz e dos insetos em caixa porta lminas.
Transporte:
Em caixas porta lminas devidamente identificadas com nome do laboratrio,
municpio e Regional de Sade.
Metodologia:
a) O tamanho da amostra foi desenhado para uma sensibilidade de 80% e uma
especificidade de 100%, em um nvel de confiana de 95 %, e adequado ao
ndice de positividade da baciloscopia dos laboratrios analisados, para obter-se
uma amostragem de lminas positivas e negativas.
b) Foi determinada uma amostra de 80 lminas, por laboratrio a ser avaliado em
funo do nmero mdio de exames realizados pelos laboratrios locais e a
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capacidade do laboratrio avaliador de fazer a releitura. Se no perodo avaliado o

laboratrio no atingir o tamanho da amostra (80 lminas) dever ser realizada a
releitura de todas as lminas.
c) O tcnico avaliador no dever conhecer os resultados das lminas recebidas
antes de realizar as releituras.
-
A releitura das lminas dever ser realizada utilizando os critrios de leitura

para diagnstico, de acordo com o Manual Nacional de Vigilncia Laboratorial
da Tuberculose e outras Micobactrias (2008).
O Ministrio da Sade disponibiliza a nova edio do Manual da Tuberculose

no site:
http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/manual_laboratorio_tb.pdf
Resultados:
Avaliao das caractersticas macroscpicas e microscpicas das lminas,
concordncias/discordncias dos resultados, concluso e sugestes de aes
corretivas.
Avaliao das caractersticas tcnicas das lminas:
- Avaliao Macroscpica do esfregao
O tcnico avaliador analisar o esfregao de cada uma das lminas, classificando-os

como:
a) Satisfatrio: Homogneo
b) No satisfatrio: No homogneo
Espesso
Delgado
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- Avaliao Microscpica
O tcnico avaliador analisar a colorao de cada uma das lminas, classificando-as

como:
a) Satisfatrio
b) No satisfatrio:
Descolorao inadequada
Presena de cristais de fucsina
Excesso de aquecimento
Nota: O critrio para qualificar as caractersticas tcnicas relacionadas acima ser
baseado na avaliao das deficincias que eventualmente ocorram, podendo induzir
a erros de interpretao e, portanto, a resultados falso-positivos ou falso-negativos.
De acordo com a avaliao das caractersticas tcnicas, as lminas do laboratrio

so caracterizadas como:
a) Adequada: Porcentagem de esfregao adequado + porcentagem de colorao
adequada / 2 > 80.
b) Inadequada: Porcentagem de esfregao adequado + porcentagem de colorao
adequada / 2 < 80.
Avaliao das concordncias/discordncias nos resultados
As diferenas dos resultados no nmero de cruzes em lminas positivas, no so
consideradas discordncias significativas para o diagnstico do paciente.
So classificadas como discordantes:
a) Falso Negativa (FN): lminas com resultado negativo no laboratrio local e
positivo na releitura.
b) Falso Positiva (FP): lminas com resultado positivo no laboratrio local e
negativo na releitura.
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O clculo da concordncia feito de acordo com a tabela a seguir:
Anlise de Concordncia
Laboratrio Avaliador
(LACEN)
Positivo Negativo
Total
Positivo
Laboratrio
Local
Negativo
Total
N0 Lminas FN
% Relativo de FN _________
N0 Lminas FP
% Relativo de FP _________
_________
_________
Laboratrio Avaliador (LACEN)

Positivo Negativo
Total
(a)
(b)
(a+b)
Negativo
(c)
(d)
(c+d)
Total
(a+c)
(b+d)
(a+b+c+d)
Laboratrio Positivo
Local
% concordncia: (a+d) / (a+b+c+d)
Resultados FN: ( c )
Resultados FP: ( b )
% relativo de resultados FN: [c/ (c+d)] x 100 (No FN/ Total resultados
negativos do Laboratrio Local x 100)
% relativo de resultados FP: [b/ (a+b)] x 100 (No. FP/ Total resultados
positivos do Laboratrio Local x 100)
Toda vez que uma releitura caracteriza uma discordncia dever ser realizada uma
segunda releitura confirmatria, por outro tcnico.
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As lminas com discordncias confirmadas devero ser revistas junto com o tcnico
do laboratrio local, para verificao da discordncia, na visita tcnica.
Diferenas de resultados em lminas com 1 a 9 BAAR em 100 campos observados,

no so classificadas como discordncias importantes. Nestes casos, porm, a
diferena anotada no informe correspondente, no campo de Observaes no
relatrio.
O ndice de concordncia (C) esperada de 100% e expresso de acordo com a

seguinte frmula:
C% = N lminas concordantes / total de lminas relidas x 100

Cleia Tedeschi Costa Gomes
Rosa Ramos Lopes
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LABORATRIO DE APOIO
TOXICOLOGIA HUMANA
SUMRIO
1. Dosagem de cido Delta Aminolevulnico (ALA-U) ............................. 202

2. Dosagem de Colinesterase (Diagnstico de Intoxicao por Organofosforados
e Carbamatos)..................................................................................... 204
3. Pesquisa de Chumbo .......................................................................... 206
4. Pesquisa de Mercrio .......................................................................... 209
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1 DOSAGEM DE CIDO DELTA AMINOLEVULNICO (ALA-U)

Solicitao no GAL: cido Delta Aminolevulnico (ALA-U)
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Apoio.
Etiologia: Exposio ao Chumbo.
o indicador de efeito mais utilizado nas exposies ao chumbo.
Material:
Urina recente (incio ou final jornada de trabalho).
Acidificar a urina com cido Actico 8 M (conservante), a fim de atingir um pH entre
4 e 4,5. Adicionar 1 gota de cido Actico 8 M para cada 5 mL de urina.
Volume: 20 a 50 mL
O trabalhador dever estar em trabalho contnuo sem afastamento maior que
quatro dias. Horrio de coleta no crtico.
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Em frasco de polietileno branco ou opaco para proteger da luz. A amostra vivel
at cinco dias com conservante e refrigerao entre 2 C a 8 C. No congelar a
amostra. Enviar ao Lacen/PR em no mximo dois dias aps a coleta.
Importante: Observar o prazo para coleta e envio para que o
recebimento no Lacen/PR ocorra at a 5 feira pela manh a fim de
possibilitar o envio ao laboratrio de apoio.
Metodologia: Espectrofotometria UV/Visvel

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2 DOSAGEM DE COLINESTERASE (DIAGNSTICO DE INTOXICAO POR

ORGANOFOSFORADOS E CARBAMATOS)
Solicitao no GAL: Colinesterase Plasmtica ou Colinesterase Eritrocitria
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Apoio
Etiologia: Organofosforados e Carbamatos
As dosagens das colinesterases so os parmetros para controle biolgico da
exposio aos organofosforados e carbamatos, as quais se encontram diminudas.
H dois tipos de colinesterase no sangue:
a) Colinesterase verdadeira (acetilcolinesterase ou colinesterase eritrocitria)
mais usada para avaliar exposio crnica aos organofosforados;
b) Pseudocolinesterase (benzoilcolinesterase ou colinesterase 2, ou, colinesterase
plasmtica).
Material:
a) Soro: Colinesterase Plasmtica
b) Sangue total com EDTA: Colinesterase Eritrocitria
Volume:
a) Soro 2 mL
b) Sangue total 4 mL
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a) Soro Em tubo de poliestireno com tampa de cor amarela (fornecido pelo
Lacen/PR). Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72 horas.
b) Sangue total No prprio tubo da coleta. Manter temperatura ambiente e
encaminhar ao Lacen/PR, no mesmo dia da coleta. Nunca refrigerar os frascos.
Transporte:
a) Soro Em caixa de isopor, com gelo reciclvel.
b) Sangue total Em caixa de isopor temperatura ambiente.
Metodologia:
a) Colinesterase Plasmtica: Ensaio Colorimtrico
b) Colinesterase Eritrocitria: Cintico

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1 PESQUISA DE CHUMBO
Solicitao no GAL: Chumbo
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Apoio.
Etiologia:
Chumbo Contaminante ambiental em conseqncia de seu largo emprego
industrial. Apresenta efeito acumulativo no organismo e deposita-se nos ossos com
uma meia-vida de cerca de vinte anos.

Pacientes expostos ao risco profissional e clnica compatvel. Pesquisa de chumbo
no sangue: um indicador biolgico de exposio e serve para avaliar a dose
interna de chumbo no sangue. Pesquisa de chumbo na urina: um indicador
biolgico de exposio menos exato que o chumbo no sangue em funo das
flutuaes de sua excreo. A portaria NR-7 considera o chumbo urinrio como
indicador biolgico para as exposies ao chumbo tetraetila (chumbo orgnico). A
via renal representa o mecanismo mais importante de excreo do chumbo, tambm
til aps a administrao de agentes quelantes.
Material:
a) Sangue total: coletar 5 mL de sangue em tubo com heparina.
b) Urina recente.
Volume:
a) Sangue total: 5 mL
b) Urina: 5 mL
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- Questionar se o paciente est em uso de agentes quelantes.
a) Sangue: O horrio de coleta no crtico desde que o trabalhador esteja em
trabalho contnuo nas ltimas 4 semanas, sem afastamento maior que 4 dias.
b) Urina: Coletar o jato mdio da urina com reteno de 4 horas entre as mices.
Recomenda-se coletar a amostra de final de jornada de trabalho. Coletar da
seguinte forma:
- Lavar as mos e a genitlia antes da coleta com gua e sabo, secar, desprezar o
1 jato de urina, coletar o jato do meio, e desprezar o 3 jato. Entregar a urina no
laboratrio em at 2 horas aps a coleta.
Importante: Para evitar contaminao da amostra, recomenda-se que
a coleta do material no seja feita no ambiente de trabalho e o paciente
no deve estar usando as roupas e/ou uniforme usados no trabalho.
a) Sangue: Em tubo prprio fornecido pelo Lacen/PR (tampa azul). Refrigerar entre
2 a 8C, em at 48 horas.
b) Urina: Em frasco de polietileno branco ou opaco para proteger da luz. Refrigerar
entre 2C a 8C, em at 48 horas. No congelar as amostras.
Enviar as amostras ao Lacen/PR em no mximo 48 horas aps a coleta.
Metodologia: Espectrofotometria de absoro atmica
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2 PESQUISA DE MERCRIO
Solicitao no GAL: Mercrio
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Apoio
Etiologia: Mercrio (metal pesado)
Exposio ao mercrio (vapores, solues, contaminao alimentar, etc.)
Material:
a) Urina: Acidificar a urina com cido ntrico 6 N utilizando 1 mL de cido para
10 mL de urina observando um pH entre 4 e 4,5.
b) Sangue total coletado com heparina.
Volume:
a) Urina: 50 mL
b) Sangue total: 10 mL
a) Sangue: jejum no obrigatrio.
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b) Urina: No coletar no local de trabalho. Coletar o jato mdio da urina com

reteno de 4 horas entre as mices. Recomenda-se a 1 urina da manh.
Coletar da seguinte forma:
Lavar as mos e a genitlia antes da coleta com gua e sabo, secar, desprezar o
1 jato de urina, coletar o jato do meio, e desprezar o 3 jato. Entregar a urina no
laboratrio em at 2 horas aps a coleta.
Importante: Para evitar contaminao da amostra, recomenda-se que
a coleta do material no seja feita no ambiente de trabalho e o paciente
no deve estar usando as roupas e/ou uniforme usados no trabalho.
c) Sangue: No prprio tubo da coleta. Refrigerar entre 2 a 8 C, em at 48 horas.
d) Urina: Em frasco de polietileno branco ou opaco para proteger da luz. Refrigerar
entre 2 a 8 C, em at 48 horas.
No congelar as amostras.
Enviar as amostras ao Lacen/PR em no mximo 48 horas aps a coleta.
Metodologia: Espectrofotometria de absoro atmica

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LABORATRIOS DE REFERNCIA E COLABORADORES
SUMRIO
1
Botulismo.................................................................................................. 212
Brucelose ................................................................................................. 215
Cisticercose.............................................................................................. 217
Doena de Lyme ...................................................................................... 219
Esquistossomose ..................................................................................... 221
Hidatidose ................................................................................................ 223
Leishmaniose Visceral Humana LVH .................................................... 225
Toxocarase.............................................................................................. 227
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1 BOTULISMO
Solicitao no GAL: Botulismo
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional Instituto Adolfo

Lutz/Seo de Microbiologia de Alimentos.
Etiologia:
Clostridum botulinun toxina
So trs os tipos de transmisso:
a) Botulismo alimentar os alimentos mais comumente envolvidos so: conservas
vegetais, principalmente as artesanais; produtos crneos cozidos, curados e
defumados de forma artesanal; pescados defumados, salgados e fermentados;
queijos e pastas de queijos e, raramente alimentos enlatados industrializados.
b) Botulismo por ferimentos ocasionado pela contaminao de ferimentos com o
C. botulinun que em condies de anaerobiose, assume a forma vegetativa e
produz toxina in vivo.
c) Botulismo intestinal resulta da ingesto de esporos presentes no alimento,
seguida da fixao e multiplicao do agente no ambiente, onde ocorre a produo
e absoro de toxina.
Importante: Antes de encaminhar o material para o Lacen/PR notificar
nos nmeros de telefones abaixo:
CIEVS (41) 3330-4416, 3330-4492 e 3330-4493
Diviso de Vigilncia Sanitria de Alimentos (41) 3330-4472.
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Suspeita clnica a anamnese e o exame fsico e neurolgico do paciente so
imprescindveis para o diagnstico do botulismo.
Material:
a) Amostras biolgicas: soro, fezes e lavado gstrico. Encaminhar ao Lacen/PR Unidade Guatup.
b) Amostra
alimentar:
alimentos
potencialmente
sujeitos
contaminao:
Encaminhar ao Lacen/PR - Unidade Alto da XV, de acordo com as orientaes

do Manual de Coleta e Envio de Amostras de Vigilncia Sanitria e Ambiental ao
Lacen/PR.
Volume:
Amostras
Perodo mximo coleta
Volume
Soro
8 dias
11mL
Fezes
3 dias
15g
3 dias
15g
Lavado
gstrico/vmito
Importante: Sempre que possvel, coletar as amostras em quantidades

superiores s indicadas para o diagnstico especfico.
Nmero de Amostras: 01 ou a critrio mdico e/ou epidemiolgico.
Perodo de coleta:
Amostras clnicas devem ser coletadas o mais precocemente possvel, conforme
tabela acima, e anteceder administrao de soro antibotulnico (SAB), para evitar
que a toxina ativada seja neutralizada antes da coleta.
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a 20C.
b) Fezes/lavado gstrico e vmito: frasco plstico descartvel com tampa de rosca e
boca larga. Refrigerar entre 2 a 8 C at o momento do envio, em no mximo 12
horas.
Metodologia:
a) Bioensaio em camundongos inoculao intraperitonial;
b) Deteco de Toxina Botulnica.

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2 BRUCELOSE
Solicitao no GAL: Brucelose
Enviar amostra ao Lacen/PR - Unidade de Fronteira.

Rua Santos Dumont, 460 - Centro
85851-040 - Foz do Iguau - Paran.
Etiologia:
O gnero Brucella. A forma mais grave da doena em humanos atribuda
Brucella mellitensis.
Suspeita clnica aliada histria epidemiolgica de ingesto de produtos animais
contaminados mal cozidos, no pasteurizados ou esterilizados.
Material: Soro
Volume: 2 mL
Perodo de coleta: Incio da doena.
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Refrigerar entre 2 a 8C por at 72 horas. Aps este prazo, congelar a 20C.
Metodologia:
a) Soroaglutinao IgG
b) Enzimaimunoensaio (EIE) IgM

Marcia Prussak
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3 CISTICERCOSE
Solicitao no GAL: Cisticercose
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Instituto Adolfo Lutz/SP.
Etiologia: Cysticercus cellulosae (larva da Taenia solium)
Para confirmao do diagnstico de neurocisticercose, cuja suspeita decorre de
exames de imagem: raios-x (identifica apenas cisticercos calcificados), tomografia
computadorizada e ressonncia nuclear magntica.
Material: Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor)
Volume: 2 mL

Colocar 1 a 2 mL no frasco estril. Refrigerar entre 2 a 8 C por at 72 horas. Aps
esse prazo, congelar a 70 C. Caso no tenha essa possibilidade, congelar a 20
C por at 48 horas.
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Transporte: Em caixa de isopor com bastante gelo reciclvel.
Metodologia:
a) Imunofluorescncia Indireta (IFI) - In House
b) Hemaglutinao Indireta In House

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4 DOENA DE LYME
Solicitao no GAL: Lyme
Lacen/PR envia ao Laboratrio Colaborador - Laboratrio de Reumatologia da

Universidade de So Paulo (USP).
Etiologia: Borrelia burgdorferi
a) Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do paciente e, de
b) Protocolo Borreliose Humana Brasileira ou Sndrome de Baggio-Yoshinari.
O diagnstico da Doena de Lyme baseia-se na identificao dos aspectos clnicos
da doena em paciente com relato de exposio (epidemiolgico) ao microorganismo causal, associadas com testes laboratoriais.
Material: Soro e/ou Lquido cefalorraquidiano LCR (Lquor)
Importante: Quando o material for lquor, h necessidade de enviar o
resultado da dosagem de protenas totais junto com o pedido do
exame.
Volume:
a) Soro: 2 mL
b) Lquor: 3 mL
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Lacen/PR).
b) Lquor: em tubo/frasco estril.
Metodologias:
a) Enzimaimunoensaio (EIE)
b) WESTERN BLOT

Marcia Prussak
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5 ESQUISTOSSOMOSE
Solicitao no GAL: Esquistossomose
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional FIOCRUZ Centro de

Pesquisas Ren Rachou.
Etiologia: Shistossoma mansoni
Cadastro no GAL: Preencher todos os campos de identificao do paciente e, de
O teste sorolgico tem utilidade em reas de baixa prevalncia da doena, ou em
pacientes com baixa parasitemia e imunodeprimidos.
Material: Soro
Volume: 2 mL

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Metodologia: Enzimaimunoensaio (EIE)

Marcia Prussak
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6 HIDATIDOSE
Solicitao no GAL: Hidatidose
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Referncia Nacional FIOCRUZ - RJ
Etiologia: Helmintos da classe Eucestoda, do gnero Echinococcus
a) Requisio da instituio solicitante;
b) Pedido mdico;
c) Ficha de Diagnstico de Hidatidose
Material:
a)
Soro
b)
Lquido hidtico
c)
Lquido pulmonar
d)
Cisto hidtico
e)
Bipsia tecidual
Volume:
a)
Soro 2 mL
b)
Lquido hidtico em formol 5 mL
c)
Lquido pulmonar/Cisto hidtico/Bipsia tecidual no se aplica
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a) Soro: Jejum no obrigatrio
b) Outros: coletar durante procedimento cirrgico.
a 20C.
b) Lquido hidtico/lquido pulmonar: Em frasco limpo, na proporo de uma parte
do lquido para duas partes de formol. Manter a temperatura ambiente.
c) Cisto hidtico e bipsia tecidual: Em frasco limpo. Cobrir com formol e lacrar.
Manter a temperatura ambiente.
Transporte:
a) Soro: Em caixa de isopor com gelo reciclvel.
b) Outros: Em caixa de isopor temperatura ambiente.
Metodologia:
Sorolgico - Immunoblot para deteco de anticorpos IgG;
Parasitolgico: exame direto e histopatolgico (cisto hidtico/bipsia tecidual)

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7 LEISHMANIOSE VISCERAL HUMANA LVH

Solicitao no GAL: Leishmaniose Visceral Humana LVH
Lacen/PR envia Fundao Ezequiel Dias/FUNED.
Etiologia: Leishmania chagasi
b) Requisio do mdico com todos os campos preenchidos;
Material: Soro
Volume: 2 mL

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Metodologias:
a)
Imunofluorescncia Indireta (IFI)
b)
Imunocromatografia

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8 TOXOCARASE
Solicitao no GAL: Toxocarase
Lacen/PR envia ao Laboratrio de Zoonoses e Doenas Transmitidas por Vetores da

Prefeitura do Municpio de So Paulo/Secretaria Municipal de Sade
Etiologia: Toxocara canis
c)

d) Ficha Epidemiolgica, com todos os campos preenchidos;

Material: Soro
Volume: 2 mL

Refrigerar entre 2 a 8C por at 72 horas. Aps este prazo, congelar a -20 C.
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Metodologias:
a) Enzimaimunoensaio (EIE)
b) Imunocromatografia

Marcia Prussak
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PARTE IV BIBLIOGRAFIAS CONSULTADAS

BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Cartilha de Proteo Respiratria
contra Agentes Biolgicos para Trabalhadores de Sade. Braslia, 2009. 95 p.
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Vigilncia em Sade. Departamento de

Vigilncia Epidemiolgica. Guia de Vigilncia Epidemiolgica. 7. ed. Braslia, 2009.
816 p. (Srie A. Normas e Manuais Tcnicos).

Vigilncia
Epidemiolgica.
Manual
Nacional
de
Vigilncia
Laboratorial
da
Tuberculose e outras Micobactrias / Ministrio da Sade, 2008. 436p.

DST, Aids e Hepatites Virais. Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para
Tratamento da Hepatite Viral C e Coinfeces. Braslia, 2011.
DST, Aids e Hepatites Virais. Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para
Tratamento da Hepatite Viral Crnica B e Coinfeces. Braslia, 2010.

Vigilncia Epidemiolgica. Guia de Vigilncia Epidemiolgica e Eliminao da
Filariose Linftica. Braslia, 2009. 80 p. (Srie A. Normas e Manuais Tcnicos)
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Vigilncia em Sade. Manual de

Vigilncia da Leishmaniose Tegumentar Americana. 2. ed.. Braslia, 2007.180 p.
(Srie A. Normas e Manuais Tcnicos).
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Vigilncia em Sade. Guia de Vigilncia

Epidemiolgica. 6. ed.. Braslia, 2005. 816 p. (Srie A. Normas e Manuais
Tcnicos)
Pgina 229 de 236
FONTES, G., ROCHA, E. M .M., BRITO, A.C., ANTUNES, C.M.F. Lymphatic

Filariasis in Brazilian Urban Area (Macei, Alagoas). Memrias do Instituto Oswaldo
Cruz, v.93, n.6, p.705-710, 1998.
PARAN. Secretaria de Estado da Sade. Laboratrio Central de Sade Pblica.

Curitiba. Manual de Exames, 2002.
PARAN. Secretaria de Estado da Sade. Departamento de Vigilncia e Controle

em Agravos Estratgicos. Plano de Enfrentamento a Influenza Pandmico (H1N1)
2009 - Segunda Onda.
SANTA CATARINA. Secretaria de Estado da Sade. Laboratrio Central de Sade

Pblica. Manual de Orientaes para Coleta, Preparo e Transporte de Material
Biolgico. Florianpolis, 2006
SO PAULO (estado). Secretaria de Estado da Sade. Instituto Adolfo Lutz. Seo
de Bacteriologia. Setor de Bactrias Piognicas. So Paulo, 2010.
SILVA, E. C. B. F.; SILVA, M. A. L.; OLIVEIRA, P. A. S.. Filariose Linftica: Avanos

e Perspectivas do Diagnstico Laboratorial. Revista Brasileira de Anlises
Clnicas, Rio de Janeiro, v. 40, n.3, p. 177-181, 2008. Reviso.
Pgina 230 de 236
PARTE V DOCUMENTOS REQUERIDOS
Os documentos, abaixo relacionados, encontram-se disponveis no endereo

www.lacen.saude.pr.gov.br em Manuais.
1. FICHA DE CONTROLE DE QUALIDADE DE MALRIA
2. FICHA DE DIAGNSTICO DE HIDATIDOSE
3. FICHA DE DIAGNSTICO DE MICOSES SISTMICAS
4. FICHA DE NOTIFICAO DOENAS PRINICAS
5. FICHA DE MARCADORES DE HEPATITE
6. FICHA DE SNDROME FEBRIL CTERO HEMORRGICO AGUDA - SFIHA
7. PROTOCOLO PARA DOENA DE LYME BORRELIOSE HUMANA
BRASILEIRA OU SNDROME DE BAGGIO-YOSHINARI
8. TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO PARA PESQUISA
DE DOENAS PRINICAS
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ANEXO X HISTRICO DAS MUDANAS
N
Item
Todo Manual
Sntese da mudana
Foi alterado em todos os itens desde o ttulo, que ficou mais amplo, at a estruturao, distribuio e
descrio dos procedimentos. Sendo assim, h a necessidade da leitura integral do documento.
Pgina 232 de 236

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LABORATRIO CENTRAL DO ESTADO DO PARAN

MANUAL DE COLETA E ENVIO DE AMOSTRAS BIOLGICAS AO LACEN/PR

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

GOVERNO DO ESTADO DO PARAN

SECRETARIA DE ESTADO DA SADE SESA

DIREO GERAL DA SESA

SUPERINTENDNCIA DE VIGILNCIA EM SADE

DIREO DO LABORATRIO CENTRAL DO ESTADO

LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA DO PARAN

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

DIREO DO LABORATRIO CENTRAL DO ESTADO

CHEFIA DA DIVISO DE GESTO DE QUALIDADE E BIOSSEGURANA

CHEFIA DA DIVISO DE SUPORTE OPERACIONAL

CHEFIA DA DIVISO DOS LABORATRIOS DE EPIDEMIOLOGIA E CONTROLE DE DOENAS

CHEFIA DA DIVISO DE LABORATRIOS DE VIGILNCIA SANITRIA E AMBIENTAL

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

PARTE I APRESENTAO ........................................................................... 1

CAMPO DE APLICAO ............................................................................ 2

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

a) ANF Aspirado de Nasofaringe.

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

PARTE II CONDIES GERAIS

CUIDADOS PRELIMINARES ...................................................................... 4

PROCEDIMENTOS DE BIOSSEGURANA ............................................... 4

Equipamentos de Proteo Individual EPI ..................................................4

Equipamentos de Proteo Coletiva EPC...................................................7

Lavagem das Mos ........................................................................................8

Limpeza e Desinfeco da Bancada de Trabalho ..........................................8

Descarte de Materiais Contaminados e Perfurocortantes ............................10

Precaues Especiais ..................................................................................11

Boas prticas em relao no uso de centrfuga ...........................................11

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

Equipamentos de Proteo Individual EPI

todo dispositivo de uso individual, de fabricao nacional ou estrangeira, destinado

Figura 1 - Exemplos de Equipamentos de Proteo Individual.

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

Deve ser utilizado em todos os tipos de procedimentos, sempre fechado, no sentido

So utilizadas como barreira de proteo, prevenindo a contaminao das mos ao

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

As luvas de proteo para a coleta de amostras biolgicas podem ser de

Mscaras e equipamentos de proteo respiratria

Nas situaes com risco de formao de aerossis e gotculas de material

Doenas transmitidas por gotculas

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

Doenas transmitidas por aerossis

Devem ser utilizados em situaes de risco de formao de aerossis, salpicos de

Equipamentos de Proteo Coletiva EPC

So equipamentos que possibilitam a proteo do trabalhador, do meio ambiente e

So dispositivos que evitam o risco de acidentes, visto que a ao de pipetar com a

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

boca um risco a integridade fsica e a sade do trabalhador.

Figura 2 - Modelos de Dispositivos de Pipetagem.

Cabines de Segurana Biolgica CSB

So usadas como barreira primria para evitar propagao de aerossis, dando

Lavagem das Mos

Limpeza e Desinfeco da Bancada de Trabalho

Material para Limpeza

Desinfetantes: lcool 70% (77 GL), Hipoclorito de Sdio a 2%

Protetores de sapatos (para casos de derramamentos e quebras de materiais

Manual de Coleta e Envio de Amostras Biolgicas ao Lacen/PR

Saco para autoclave

Se no houver lcool 70% pronto, realizar o preparo a partir do lcool 96GL