LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

AKADEMI ANALIS KESEHATAN

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURABAYA
2004
v Hari/Tgl. Praktikum : Senin, 31 Mei 2004
v Judul praktikum

: Pembuatan BAP, MSA, Nutrien agar

v Tujuan praktikum

: Untuk mengetahui cara pembuatan BAP, MSA, Nutrien Agar

v Alat dan bahan

Alat:
-

Timbangan

Api spritus

Tabung reaksi

Gelas kimia

Erlemeyer

Batang pengaduk

Gelas ukur

Bahan:
-

BAP

MSA

Nutrien agar

Darah

Aquades

Prosedur kerja

1. Membuat 5 petridisk
- . BAP = 40

X 60 = 2,4gr

1000
-

Menimbang BAP 2,4gr lalu dilarutkan dalam 60ml aquades

Dipanaskan hingga larut sempurna

Di pH 7,3

Ditutup dengan kapas steril dan dibungkus dengan almunium foil dan diikat dengan
benang
-

Disteril dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit

Ditambah dengan darah golongan O sebanyak 3 cc

Dituang dipetridisk dengan disterilkan

2. Membuat 2 petridisk
- MSA = 111 X 35 = 3,8gr
1000
-

Menimbang MSA 3,8gr lalu dilarutkan dalam 35 ml aquades

Dilarutkan hingga rata lalu dipanaskan hingga larut sempurna

Di pH 7,5

Ditutup dengan kapas steril dan dibungkus dengan almunium foil dan diikat dengan
benang
-

Disteril dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit

Dituang dipetridisk

3. NAS(Nutrien Agar Slank)

-

Membuat 5 tabung

Nutrien Agar = 20
1000

X 30 = 0,6gr

- Bacto agat = 5 X 30 = 0,15 gr

1000
-

Menimbang nutrien agar 0,6gr + bacto agar 0,15gr dilarutkan dalam 30ml aquades

Dipanaskan hingga larut sempurna

Dituang dalam tabung reaksi kecil ditutup dengan kapas steril

Disteril dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit

v Hasil pengamatan:
-

Warna BAP kuning menjadi merah

Warna MSA merah

Warna NAS

v No./ Hari/ Tgl. Praktikum : 3/Senin/17 Mei 2004

v Judul praktikum

: Pembuatan Air Peptone, gula-gula dan Semi Solid

v Tujuan praktikum

: Mengetahui pembuatan Air Peptone, gula-gula

Dan Semi Solid.

v Alat dan bahan

Alat :
-

Erlenmeyer

Tabung reaksi

Rak tabung

Timbangan

Kertas pH

Aotoclave

Bahan :
-

Glukosa

Laktosa

Maltosa

Sukrosa

Manosa

Air Peptone

Semi Solid

v Prosedure Kerja :

1.

Air Peptone membuat 150 ml :

Tujuan: Untuk mengetahui apakah organisme menghasilkan indol dan triptofon

a.Peptone = 10 gr

150 = 1,5 gr
1000

b. NaCl

= 5gr

X 150

= 0,75 gr

1000
c. Aquades 1000 ml

150 ml

d.
Cara : 1,5 gram peptone + 0,75 gr NaCl dilarutkan dengan aquades
hingga larut lalu di pH=7,4

2.

150 ml dipanaskan

Gula-gula :

Tujuan : Untuk menentukan kemampuan organisme melakukan fermentasi karbohidrat

tertentu yang tergabung dalam medium dasar dan membentuk asam dan gas

a. Air peptone 100 ml

25 ml

b. Gula = 1

X 25 = 0,25 gr
100

c. BTB 0,4 %

X 25 = 0,25 ml

100
d. cara :
Larutkan gula (glukosa,sukrosa,laktosa,maltosa, manosa ) dengan air peptone @25ml
Dipanaskan sampai larut hampir mendidih, tambahkan BTB 0,4 % sebanyak 0,25 ml
sampai pH 7,6.
Glukosa : masukkan ke tabung kecil berisi tabung Durham @ 4-5 ml dan ditutup dengan
kapas warna merah dan disteril dalam aotoclave pada suhu 1210 C selama 15 menit.
Sukrosa : masukkan dalam tabung kecil dan tutup dengan kapas warna biru disteril dalam
aotoclave 121o C selama 15 menit.
Laktosa : masukkan dalam tabung kecil dan tutup dengan kapas warna kuning dan disteril
dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit.
Maltosa : masukkan dalam tabung kecil dan tutup dengan kapas warna hijau dan disteril
dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit.
Manosa : masukkan dalam tabung kecil dan tutup dengan kapas warna putih dan disteril
dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit
3.

Semi solid :

Prinsip: Menentukan apakah suatu organisme (kuman bergerek atau tidak)

a.

Pepton = 5

X 30 = 0,15 gr
1000

NaCl = 5

X 30 = 0,15 gr

1000
c.

Bacto agar = 3,4

1000

X 30 =0,102 gr

d.
o

Aquades 1000 ml

30 ml

Cara kerja:

0,15 gr pepton + 0,15 gr NaCl + 0,102 gr Bacto agar, lalu dilarutkan dalam 30 ml
aquades.
-

Panaskan hingga larut sempurna lalu di pH 7,6.

Tuang dalam tabung reaksi kecil, lalu disterilan dalam aotoclave 1210 C selama 15 menit.

Dinginkan dengan tegak lurus

Hari / Tgl. Praktikum : Senin, 26 April 2004

v
Citrate

Judul praktikum

: Membuat media KIA (Kilglers Iron Agar) dan Simonns

v
Citrate

Tujuan praktikum

: Untuk mengetahui cara pembuatan media KIA dan Simons

v Alat dan bahan

Alat : - Gelas kimia

-

Timbangan

Gelas ukur

Batang pengaduk

Tabung reaksi kecil

Kertas pH

Api spritus
Bahan : -KIA

Simons Citrte

Aquades

v Prosedur kerja
1.

Kilglers Iron Indol (KIA)

Prinsip : Menentukan kemampuan organisme untuk menyerang suatu karbohidrat yang

tergabung dalam pembenihan basal, dengan tanpa pembentukan gas disertai penentuan
kemungkinan terbentuknya H2S.
-

Membuat 5 tabung @ 5 ml x 5 = 25

Komposisi : glukosa dan laktosa dengan perbandingan 1: 10

KIA = 55

X 25 = 1,375gr

1000
-

Menimbang KIA 1,375gr dilarutkan dalam 25 ml aquades hingga larut

Panaskan hingga larut sempurna, lalu di pH 7,4

Masukkan dalam tabung reaksi kecil dan tutup dengan kapas steril

Disteril dalam aotoclave 1210C selama 15 menit

Dinginkan dengan posisi miring atau berlereng dan berdasar

Simons Citrate Agar

Prinsip : Menentukan apakah suatu organisme dapat menggunakan citrat sebagai satu-satunya
sumber karbon untuk metabolisme dengan menghasilkan suasana basa
-

Membuat 5 tabung @ 5 ml x 5 = 25

Simons Citrate Agar = 23

X 25 = 0,575gr
1000

Menimbang SCA 0,575 gr dilrutkan dalam 25 ml aquades

Panaskan hingga larut sempurna, lalu di pH 6,8-7,0

Dimasukkan dalam tabung reaksi kecil dan ditutup kapas steril

Disteril dalam aotoclave 1210C selama 15 menit

Dinginkan dengan posisi miring atau slant

Hari/ Tgl. Praktikum:

Senin, 12 Maret 2004

v Materi Praktikum:
- Pembuatan media Mac Conkey dan EMB (Eosin Metilyene Blue )
v Tujuan Praktikum:
Untuk mengetahui cara pembuatan media Mac Conkey dan media EMB (Eosin Metilyene Blue)
v Alat dan Bahan:
-

Alat:

1.

Erlenmeyer

2.

Petridisk

3.

Tabung reaksi

4.

Batang pengaduk

5.

Lampu spirtus

6.

Gelas ukur

7.

Timbangan

8.

Lidi panjang 20 cm

9.

Autoclave

10. Kertas PH
-

Bahan:

1.

Mac Conkey

2.

EMB (Eosin Metilyene Blue)

3.

Aquades

4.

Hcl

5.

NaOH

v Prosedur Kerja:
1.Mc Conkey

Fungsi: Untuk membedakan kuman-kuman yang meragi laktosa dengan kuman kuman tidak
meragi lactose serta mengisolasi gram (-) karena menghambat pertumbuhan kuman gram (+).
-

Membuat 5 plate

@ 17x5= 85

Perhitungan : 50

x 100 = 5 gram

100 cc

1000
rata

Timbang Mc Conkey 5 gram dilarutkan dengan aquades 100 ml kemudian diaduk sampai

Dipanaskan sampai larut dan mendidih

Diukur dengan PH pada PH 7,2. Jika PH kelebihan Maka ditambah dengan HCl dan
jika kekurangan PH maka ditambah dengan NaOH
-

Sterilkan dalam autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit

Dituangkan dalam petridisk

2.EMB (Eosin Metilyene Blue)

Fungsi: Untuk membedakan golongan enterobacteriace serta mengisolasi kumangram (-)
karena menghambat kuman gram (+).
-

Membuat 5 plate @ 17 x 5 = 85

Perhitungan : 36

100 cc

x 100 =3,6

1000
rata

Timbang 3,6 gram EMB larutkan dalam aquades 100 ml. Kemudian dilarutkan sampai

Panaskan hingga larut sempurna dan sampai mendidih

Dukur dengan PH 7,2.Jika kelebihan maka ditambah dengan HCl dan bila kekurangan
maka ditambah dengan NaOH
-

Sterilkan dalam autoclave 121oC selama 15 menit

Kemudian tuang dalam petridisk