1. Mengapa dalam teknik isolasi goresan kuadran, cawan petri harus dibagi menjadi beberapa kuadran ? Jelaskan. Metode penggoresan kuadran maupun cawan tuang merupakan metode untuk memisahkan koloni mikroorganisme menjadi satu spesiae atu sebagai biakan murni , dimana prinsip metode ini mengencerkan media sedemikian rupa dan di goreskan pada media bertujuan untuk memisahkan koloni organism dimana koloni yang terpisah dianggap sebagai organisme yang murni atau yang sudah terpisah dengan organisme lainnya bertujuan untuk mengisolasi mikroorganisme dari campurannya atau meremajakan kultur ke dalam medium baru (Effendi, 2009) . 2. Apa tujuan dari teknik isolasi dalam dunia mikrobiologi ? Teknik isolasi mikroba adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. Mikroorganisme dapat diperoleh dari lingkungan air, tanah, udara, substrat yang berupa bahan pangan, tanaman dan hewan. Jenis mikroorganismenya dapat berupa bakteri, khamir, jamur, kapang dll (Postlethwait 2006) . 3. Apa tujuan transfer kultur pada agar miring ? Jelaskan Tujuan dari transfer kultur pada agar miring ntuk membiakkan bakteri pada medium tegak dan miring dalam tabung reaksi (Effendi 2009). 4
.Bagaimana cara transfer kultur dari medium cair ke agar tegak ? Jelaskan. Media yang telah dimasukkan dalam tabung reaksi dan disterilisasi, diletakkan dalam posisi tegak (pada rak tabung reaksi) hingga benar-benar memadat (Dwyana, 2011) .
5. Jelaskan prinsip hitungan dari metode cawan!
Prinsip dari metode hitungan cawan ini adalah jika sel mikroba yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel mikroba akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung dengan menggunakan mata telanjang tanpa harus dengan menggunakan mikroskop (Betsy, 2005).
6. Apa yang dimaksud dengan metode pour plate dan spread plate pada hitungan cawan? Jelaskan!
Metode pour plate (lempeng tuang) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara mencampurkan media agar yang masih cair dengan stok kultur bakteri (agar) sehingga sel-sel tersebut tersebar merata dan diam baik di permukaan agar atau di dalam agar. Dalam metode ini memerlukan perlakuan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium agar di dalam cawan petri, sehingga setelah inkubasi akan terbentuk koloni pada cawan tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung. Pengenceran biasanya dilakukan secara desimal yaitu 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000, dan seterusnya, atau 1 : 100, 1 : 10000, 1 : 1000000 dan seterusnya (Dwyana,2011). a. b. Metode spread plate dilakukan dengan menyemprotkan suspensi ke atas medium agar kemudian menyebarkannya secara merata dengan trigalski. Dengan ini diharapkan bakteri terpisah secara individual, kemudian dapat tumbuh menjadi koloni tunggal. Metode pemaparan pada udara terbuka adalah metode untuk mengisolasi bakteri udara. Metode ini sangat simpel, yaitu dengan memaparkan medium pada udara terbuka, dengan harapan ada bakteri yang menempel dan kemudian akan tumbuh menjadi koloni (Dwyana, 2011). c. .
PERTANYAAN
1. Teknik Isolasi Metode Goresan Kuadran (Streak Plate)
Prinsip metode ini, yaitu mendapatkan koloni yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain, sehingga mempermudah proses isolasi.Cara ini dilakukan dengan membagi cawan petri menjadi 3-4 bagian. Ose steril yang telah disiapkan dilekatkan pada sumber isolat, kemudian menggoreskan ose tersebut pada cawan berisi media steril. Goresan dapat dilakukan 3-4 kali membentuk garis horisontal di satu sisi cawan. Ose disterilkan lagi dengan api bunsen, setelah kering ose tersebut digunakAn untuk menggores goresan sebelumnya pada sisi cawan kedua. Langkah ini dilanjutkan hingga keempat sisi cawan tergores. 2. Teknik Isolasi Metode Sebar (Spread Plate) Teknik spread plate (lempeng sebar) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri atau mengapuskannya di atas media agar yang telah memadat. Bedanya dengan pour plate adalah, pencampuran stok kultur bakteri dilakukan setelah media agar memadat sedangkan pour plate kultur dicampurkan ketika media masih cair (belum memadat). Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada bagian permukaan media agar. 3. Teknik Isolasi Agar Miring ke Agar Miring
4. Teknik Isolasi Agar Miring ke Agar Tegak
Dilakukan dengan cara menggoreskan secara zig-zag pada permukaan agar miring menggunakan jarum ose yang bagian atasnya dilengkungkan. Selain itu dapat dilakukan dengan cara menusukkan loop pada bagian tengah tabung. Cara ini juga dilakukan pada agar tegak untuk meminimalisir pertumbuhan mikroba dalm keadaan kekurangan oksigen,
5. Teknik Isolasi Agar Miring ke Broth
Daftar Pustaka Effendi Irzal. 2009. Pegantar Akuakultur :Penebar Swadaya . Bogor . Jawabarat Dwyana Z,. Nurhaedar. 2011. Mikroobiologi Dasar. Universitas Hasanuddin. Makassar Betsy dan Keogh. 2005. Microbiology Demystifed. McGraw-Hill Publisher. USA. Postlethwait dan Hopson. 2006. Modern Biology. Holt, Rinehart and Winston. Texas.
Pelczar Michael J. Jr. dan Chan E.C.S. 2008. Dasar Dasar Mikrobiologi. Jakarta. UI Press. Dwyana Z,. Nurhaedar. 2011. Mikroobiologi Dasar. Universitas Hasanuddin. Makassar Dwyana Z,. Abdullah. 2012. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Universitas Hasanuddin. Makassar
arrity MG, Bell JA, dan Lilburn TG. 2004. Taxonomic Outline of The Prokaryotes: Bergeys Manual of Systematic Bacteriology Second Edition. New York: Springer.
Adams, M.R. 2000. Food Microbiology. University of Surrey. Guildford. New
YorkSuriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Papas Sinar Sinanti, Jakarta Zubaidah, Elok. 2006. mikrobiologi umum. Universitas Brawijaya. Malang
Betsy dan Keogh. 2005. Microbiology Demystifed. McGraw-Hill Publisher. USA.
Harley dan Presscot. 2002. Laboratory Exercise in Microbiology. McGraw-Hill Publisher. USA. Postlethwait dan Hopson. 2006. Modern Biology. Holt, Rinehart and Winston. Texas. Purves dan Sadava. 2003. Life The Science of Biology 7th Edition. Sinauer Associates Inc. New York. Singleton dan Sainsbury. 2006. Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd Edition. John Wiley and Sons. Sussex, England.
