LAPORAN PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI DASAR

ACARA II
ISOLASI BAKTERI

KELOMPOK 3
Penanggung jawab:
Erni Astutiningsih

(A1M013038)

KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAAN NASIONAL

UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN
FAKULTAS PERTANIAN
PURWOKERTO
2014

I.

PENDAHULUAN
A. Latar Belakang

Mikroba yang hidup di alam terdapat dalam bentuk populasi campuran.

Jarang sekali kita temukan mikroba di alam yang hidup hanya satu spesies atau
spesies tunggal. Agar mikroba dapat diidentifikasi maka langkah yang pertama
harus dilakukan adalah memisahkan spesies tersebut dari organisme lain yang ada
dihabitatnya, selanjutnya dikembangkan menjadi biakan murni yaitu suatu biakan
yang terdiri dari sel-sel dari satu jenis mikroba. Maka dari itu harus dilakukan
isolasi maupun permurnian agar didapatkan bakteri dalam keadaan murni. Isolasi
adalah cara yang dilakukan untuk memisahkan mikroba tertentu dari
lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni. Kultur murni ialah kultur yang
sel-sel mikrobianya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Maka dari itu
pada praktikum ini kita akan mengetahui dan mempraktekan teknik isolasi
mikroba sehingga kita dapat membiakkan dan menumbuhkan bakteri yang murni.
Cara isolasi mikroba yang dilakukan pada praktikum kali ini adalah metode
tuang (pour plate), metode goresan (streak plate), agar miring (slant culture), dan
agar tegak (stab culture) (Thalib, 2004)

B. Tujuan
Mempelajari dan mempraktekan beberapa tahapan dalam isolasi mikroba.

II.

TINJAUAN PUSTAKA

Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan

menumbuhkannya pada medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah
memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari
campuran berbagai macam mikroba. Isolasi bakteri atau biakan yang terdiri dari
satu jenis mikroorganisme (bakteri) dikenal sebagai biakan murni atau biakan
aksenik. Biakan yang berisi lebih dari satu macam mikroorganisme (bakteri)
dikenal sebagai biakan campuran, jika hanya terdiri dari dua jenis
mikroorganisme, yang dengan sengaja dipelihara dikenal sebagai biakan duajenis.
Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan
mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini
dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel mikroba
akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya (Indriyani, 2007).
Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara
lain digunakan dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri
kultural morfologi, fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari
satu spesies (Suriawiria, 2005).
Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari
suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah
metode cawan gores dan metode cawan tuang, yang didasarkan pada prinsip
pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies individu. Dengan
anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang dapat
diamati (Afrianto, 2004).
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrien)
yang berguna untuk membiakkan mikroba. Agar mikroba dapat tumbuh baik
dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat, antara
lain: harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba,
harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan dan pH yang sesuai

dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh, tidak mengandung zat-zat yang
dapat menghambat pertumbuhan mikroba, harus berada dalam keadaan steril
sebelum digunakan, agar mikroba yang ditumbuhkan dapat tumbuh dengan baik
(Plezar, 2006).
Ada empat metode mengisolasi bakteri yaitu :
a. Pour plate atau metode tuang
Beberapa ml bakteri dicampur dengan medium yang masih cair. Setelah
inkubasi pada suhu dan waktu tertentu, koloni akan tumbuh pada permukaan dan
bagian bawah agar.
b. Streak plate atau metode gores
Kawat ose mengandung bakteri digoreskan permukaan agar-agar dalam cawan
petri sebanyak tiga baris.metode ini membutuhkan keterampilan karena jika salah
menggoreskan jarum ose akan mengakibatkan medium agar tergores.

c. Slant culture atau agar miring

Kawat ose yang mengandung bakteri digoreskan pada permukaan agar miring
dalam tabung reaksi. Penggoresan dilakukan dengan cara menggoreskan secara
zig-zag pada permukaan agar miring.
d. Stab culture atau agar tegak
Kawat ose yang mengandung bakteri ditusukkan pada media kira-kira
bagian agar dalam tabung reaksi. Cara ini digunakan untuk menguji bakteri yang
bersifat anerob atau tidak memerlukan oksigen. (Afriyanto, 2004)

III.

METODE PRAKTIKUM
A. Alat dan Bahan

Alat :
1. Cawan petri steril
2. Tabung reaksi
3. Jarum ose
4. Lampu spiritus
Bahan :
1.

Sampel bakteri dari air sungai pada medium NA

2.

Medium NA

B. Prosedur Kerja

1.

Metode tuang (pour plate)

Disiapkan medium NA steril suhu sekitar 450-500C.

Disiapkan cawan petri steril, diteteskan 1 ml akuades steril.

Diambil 1 ose bakteri dari medium NA dimasukan dalam cawan petri steril
dan dicampur dengan akuades.

Dituang medium NA ke dalam cawan, diratakan.

Diinkubasi cawan petri selama 2 hari dalam posisi terbalik.

2. Metode goresan (streak plate)

Disiapkan medium NA steril suhu sekitar 450-500C

Dituangkan medium ke dalam cawan petri steril, diratakan dan dibiarkan

memadat.

Diambil 1 ose bakteri, digoreskan pada permukaan agar dalam cawan petri.

Dibagi cawan petri menjadi 4 kuadran. digoreskan 3 baris pada kuadran

pertama, kemudian pada kuadran kedua sebanyak 3 baris menyambung
goresan pertama dan seterusnya.

Diinkubasi cawan petri selama 2 hari.

3.

Agar miring (slant culture)

Disiapkan medium agar miring steril dalam tabung reaksi.

Diambil 1 ose bakteri murni, digoreskan zig-zag pada permukaan agar.

Ditutup tabung reaksi dan diinkubasi selama 2 hari.

4.

Agar tegak (stab culture)

Disiapkan medium agar tegak steril dalam tabung reaksi.

Diambil 1 ose bakteri murni, dan ditusukan kedalam agar sepanjang 3/4
bagian.

Ditutup tabung reaksi dan diinkubasi selama 2 hari.

IV.

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

Pour Plate

Udara

Air Sumur

Air Sungai

Tanah

Makanan

Streak Plate

Udara

Air Sumur

Air Sungai

Tanah

Makanan

Slant Culture

Udara

Air Sungai

Makanan

Air Sumur

Tanah

Stab Culture

Udara

Air Sungai

Makanan

Air Sumur

Tanah

B. Pembahasan

Dalam praktikum isolasi bakteri, diperlukan medium yang berisi zat hara
untuk metabolisme sel, sintesis sel dan pertumbuhan sel. Yang digunakan dalam
praktikum adalah medium padat yaitu agar. Media yang digunakan dalam
praktikum adalah NA karena yang akan di biakan adalah bakteri. Metode yang
dilakukan antara lain :
1. Metode tuang (pour plate)
Metode tuang terdiri dari penginokulasian biakan murni dalam hal ini
digunakan bakteri dari udara, air sumur, air sungai tanah dan makanan yang sudah
dibuat dalam acara 1 dengan medium NA dalam cawan petri. Akuades dituang
ditengah cawan, lalu diambil 1 ose bakteri dan dicampurkan dengan akuades
yang ada ditengah cawan. Selanjutnya dituangkan media ke dalam cawan petri,
media yang digunakan yaitu NA pada suhu 45 oC 50 0C. Cawan ini kemudian
diputar untuk mencampur isinya dan dibiarkan memadat. Setelah memadat,
diinkubasi selama 2 hari dan terlihatlah koloni yang ada pada media tersebut.
Tujannya adalah memisahkan sel-sel bakteri satu sama lain sehingga terbentuk
menjadi koloni-koloni yang terpisah dalam medium yang padat. Pada percobaan
isolasi bakteri dengan menggunakan teknik pour plate bentuk koloni bakteri
menyebar tidak teratur. Bakteri yang ada pada medium bentuknya tidak beraturan,
ukurannya titik dan ada beberapa yang berukuran kecil. Kenampakan bentuknya
datar atau flat, dan bagian tepi koloni seperti terdapat filamen.

2. Metode goresan (streak plate)

Metode goresan terdiri dari penginokulasian biakan murni dalam hal ini
digunakan bakteri dari udara, air sumur, air sungai tanah dan makanan yang sudah
dibuat dalam acara 1 dengan medium NA dalam cawan petri. Medium NA dengan
suhu 45 0C 50 0C dituangkan kedalam cawan petri steril dan diratakan
selanjutnya dibiarkan dingin dan memadat. Setelah medium NA padat, ambil 1
ose bakteri pada acara 1 kemudian goreskan pada permukaan agar. Cara

menggoreskannya yaitu cawan dibagi menjadi 4 bagian kemudian goreskan

bakteri pada permukaan agar tiga baris yang menyambung dari cawan kuadran ke1 sampai ke cawan kuadran ke-4. Setelah diinkubasi selama 2 hari akan terlihat
koloni bakteri berkumpul pada goresan-goresan tersebut. Seharusnya pada
kuadran ke-1 terdapat mikroba dalam jumlah yang penuh kemudian semakin
berkurang pada setiap kuadrannya, dan seharusnya pada kuadran ke-4 mampu
diamati koloni mikrobanya. Dikarenakan pada saat penggoresan yang kurang
baik, atau terjadinya kontaminasi sehingga bakteri menyebar ke semua bagian
cawan. Bakteri yang dihasilkan ada bermacam-macam ukuran ada yang besar dan
kecil, bentuk koloni bakteri tidak beraturan, kenampakan bentuk koloni datar dan
bagian tepi koloni tidak rata dan cenderung bergelombang.

3. Agar miring (slant culture)

Metode ini mirip dengan metode streak plate, hanya saja metode slant
culture ini (agar miring) media NA disiapkan dalam tabung reaksi dengan posisi
miring. Satu ose bakteri diambil dari acara I dan digoreskan dengan arah zig-zag
dimulai dari bawah tabung. Setelah itu diinkubasi selama 2 X 24 jam untuk
melihat pertumbuhan bakteri. Dalam percobaan yang dilakukan ada pertumbuhan
bakteri yang terlihat di permukaan agar. Bakteri yang tumbuh disekitar goresan
berukuran titik dan kecil. Bakteri yang tumbuh bersifat aerob.

4. Agar tegak (stab culture)

Medium NA disiapkan dalam tabung reaksi, kemudian 1 ose koloni
bakteri diambil dari acara I dan ditusukkan dengan menggunakan jarum ose yang
ujungnya runcing. Setelah itu tabung ditutup menggunakan kapas dan plastik dan
diinkubasi selama 2 hari. Setelah 2 hari inkubasi terdapat pertumbuhan mikroba
pada agar ditusukkan sebelumnya. Bakteri yang tumbuh memiliki bentuk seperti
gelembung dan bakteri yang tumbuh bersifat anaerob. Pada metode stab culture
ini teerjadi kontaminasi dengan mikro organisme lain yang menyebabkan
permukaan agar tegak menjadi berwarna hijau kebiru-biruan.

V.

PENUTUP

A. Kesimpulan

Kesimpulan yang didapat setelah melakukan praktikum isolasi mikroba

antara lain :
1. Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan
menumbuhkannya dalam medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah
memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari
campuran bermacam-macam mikroba.
2. Isolasi bakteri yang dilakukan pada praktikum ini dengan cara metode tuang
(pour plate), metode goresan (streak plate), agar miring (slant culture), dan agar
tegak (stab culture) yang semuanya menggunakan sample dari medium NA
dari acara 1.
3. Medium yang digunakan medium NA karena medium ini cocok untuk
menumbuhkan bakteri.

B. Saran

Dalam pelaksanaan praktikum, sebaiknya lebih teliti lagi dalam setiap

metode yang dilakukan, supaya hasilnya bisa sesuai dengan yang diharapkan.
Keadaan lab, alat- alat yang digunakan dan praktikan juga harus diperhatikan,
untuk mengurangi adanya kontaminasi dari luar (udara).

DAFTAR PUSTAKA

Afrianto, L., 2004, Menghitung Mikroba Pada Bahan Makanan, Cakrawala

(Suplemen pikiran rakyat untuk iptek), Farmasi FMIPA ITB : Bandung.
Buckle. 2007. Mikrobiologi Terapan. Universitas Gajah Mada: Yogyakarta
Indriyani, Nur dan Asnani, 2007, Penuntun Praktikum Mikrobiologi Akuatik,
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Unhalu : Kendari.
Plezar.2006. Dasar-Dasar-Mikrobiologi. Jakarta : UI Press
Suriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Papas Sinar Sinanti, Jakarta
Amilius Thalib, Widiawati Y., dan Hamid H., 2004, Uji Efektif Isolasi
Bakteri Hasil Isolasi Mikroba Rumen dengan Media Asetogen sebagai
Inhibutor Metanogenesis, JLTV, Vol. 9 (4).