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Biotecnologa

Trabajo Prctico N 4

JUAN, Branco

COLUMNA DE WINOGRADSKY
MUESTRA DA

OBSERVACIONES MACROSCPICAS
SEDIMENTO
Marrn oscuro
apelmazado con trozos
blancos apenas visibles

LQUIDO
Marrn muy turbio

Granulado y poroso,
irregular de marrn
ms claro.
Desprendimiento de
burbujas desde el
interior

Lmpido color beige

2
PORTAOBJETOS
4/06/12

Nivel igual

3
PORTAOBJETOS
11/06/12

Igual, con aparicin de


burbujas

Igual nivel, ligeramente


turbia, con pequeas
burbujas superficiales y
una pelcula orgnica
delgada de grasa y
aceite. Olor
nauseabundo y
penetrante
Menor nivel, presencia
de una aureola inferior
borrosa

4
PORTAOBJETOS
18/06/12

Capa marrn ms
oscura pero con
aumento en la altura

Momento de
confeccin de la
columna
23/05/12
1
PORTAOBJETOS
28/05/12

Ms opaca que no
permite ver el interior,
en la superficie hay
formacin de una

OBSERVACIONES
MICROSCPICAS

Mucha poblacin de levaduras


mviles. Presencia de
organismos complejos ms
grandes con extremidades
vellosas. Aparicin espordica de
microorganismos de forma
alargada sin tabique, algunos
lisos y otros con una traza
longitudinal central.
Crecimiento reciente de mohos
alargados con una pequea
cabeza. Posible presencia de
conidios diminutos en primeros
estados.
Mucha interferencia por barros

En seco, presencia de levaduras


ms grandes brillantes y slidas,
otras pequeas con mucho
movimiento y flagelos largos y
cortos. Alargados con traza
longitudinal ms oscuros, largos
y rugosos. Junto a los anteriores
se nota una invasin de
protozoos de forma de casco con
muchos filos, de mucho
movimiento erizando su cuerpo.
En hmedo, se nota mayor
invasin de los protozoos, con
presencia de otro tipo grueso
con movimiento hacia delante
por estrangulacin del cuerpo y
filos delanteros. Levaduras con
flagelos largos y cortos y restos
moribundos despedazados.
En seco, formacin de posibles
conidiforos de Fusarium pero
sin la presencia de conidios
pluricelulares. Se observan

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Trabajo Prctico N 4
pelcula grasosa de color
gris verdoso y
consistencia gelatinosa.
Sin desprendimiento de
olor

JUAN, Branco
tambin colonias de formacin
de larvas de protozoos
seguramente.
En hmedo, sembrado con ansa,
se observa la presencia de
protozoos ovalados con patitas y
mucho desplazamiento.

No se utilizaron tcnicas de fijacin diferentes ni coloracin en ninguna experiencia.


Dibujos:
Momento de
confeccin de
la columna
23/05/12

1
PORTAOBJETOS
28/05/12

2
PORTAOBJETOS
4/06/12

3
PORTAOBJETOS
11/06/12

4
PORTAOBJETOS
18/06/12

Respuestas a la Gua
1) Qu tipos de bacterias se encuentran asociadas con las zonas de color prpura y verde de la
columna de Winogradsky? En qu zona de la columna esperara encontrar un anaerobio
estricto?

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Podra aparecer una capa de color rosado o violeta en el fondo formada por bacterias prpuras
del azufre como las del gnero Amoebobacter o incluso Clostridium debido a la celulosa
incorporada. Ambos gneros son anaerobios estrictos, por lo que crecen en el sedimento una
vez que se haya acabado todo el oxgeno, liberan cidos, alcoholes y H2S al medio, que son
utilizados por otros microorganismos.
Aparecen bandas de color negro por bacterias como Gallionella, de color verde por los
Clostridium por encima, y rojo-prpura por los Chromatium. Todas ellas obtienen energa a
partir de la luz.
2) Describir una sucesin microbiana en la columna de Winogradsky
Se promueve el crecimiento de microorganismos debido al contenido celulsico y en forma
diferenciada por la disminucin del oxgeno disuelto en funcin de la profundidad. En el fondo,
el gnero Clostridium degrada la celulosa y produce etanol, cido actico, etc. Los reductores de
sulfatos (Desulfovibrio, Desulfotomaculum o Desulfomonas) aparecen arriba produciendo
sulfuros de metales pesados oscuros. Las fotosintticas rojas y verde del azufre (Chromatium,
Thiocapsa o Thiospirillum) consumen los sulfuros inmediatamente. En la parte superior, de
mayor cantidad de oxgeno y menor cantidad de sulfuros se encuentran cianobacterias y
microalgas. En casos de mucha produccin de sulfuros, pueden aparecer en la superficie
bacterias incoloras como Beggiatoa o Thiothrix que desprenden una capa superficial de azufre
elemental.
3) Qu gradientes se forman en la columna de Winogradsky? Qu elementos se utilizan en el
laboratorio para garantizar la formacin de los mismos?
En la columna de Winogradsky se establece un gradiente vertical entre los microorganismos y los
nitrientes. Este gradiente consiste en una capa de fango con cascara de huevo pulverizada, la cual
aporta sales minerales necesarias; tiras de papel que contienen celulosa; un alimento rico en nutrientes
como la yema de huevo y agua. De esta manera la poblacin microbiana se reparte en diferentes zonas:
- Los productos de fermentacin (Clostridium) y los sulfuros (Desulfovibrio) migran hacia arriba
desde la zona inferior reductora favoreciendo en la zona superior la formacin de
quimiolittrofos (Beggiatoa y Thiothrix). En este gradiente de SH2 como fuente de electrones los
fotoauttrofos (Chlorobium, verde y Chromatium, roja) se desarrollan como color verde oliva y
prpura.
- Por encima crecen bacterias purpuras no del azufre (Rhodospirillum) que utilizan materia
orgnica como dador de electrones en zona anaerbica.
- En la zona ms alta se pueden ver diatomeas y cianobacterias.
La temperatura y la presin controlan la cantidad de oxigeno disponible por los microorganismos.
Una concentracin elevada de nutrientes contaminantes hacen crecer microorganismos que pueden
consumir el organismo y causar la muerte de peces y una degradacin importante en la calidad del agua
conocido como Eutrofizacin.
El segundo gas ms importante es el CO2 que sirve como fuente de C para organismos auttrofos, cuyo
equilibrio con el bicarbonato y el carbonato controlan el pH del agua mantenindolo en un pH cercano a
8.

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JUAN, Branco

4) Indique la funcin que cumplen cada uno de los elementos agregados en la columna
Funcin de los elementos agregados en la columna:
Papel de diario: proveen celulosa, incrementando la velocidad de crecimiento de
microorganismos; disminuyen el oxigeno en el sedimento y en la columna de agua y permite
que la parte superior permanezca aireada.
Cscara de huevo pulverizada: aporta sales minerales como sulfato sdico y carbonato sdico.
Nylon plstico: se coloca para evitar la evaporacin del agua.
5) Ubique en relacin al gradiente de sulfuro de hidrgeno a los siguientes microorganismos: bacterias
reductoras de sulfato, bacterias verdes del azufre, bacterias prpuras del azufre, cianobacterias,
diatomeas.
Algas
Diatomeas
Cianobacterias
Sulfo-oxidadores aerobios
Beggiatoa
Thiobacillus y Thiotrix
Bacterias purpura no del azufre
Rhodospinilium Rhodopseudomonas
Bacterias purpuras del azufre: Chromatium
Bacterias verdes del azufre: Chlorobium
Sulfato-reductores: Desulfovibrio
Fermentadores de celulosa: Clostridium
6) A partir de libros de texto, citas bibliogrficas o bsquedas a travs de internet, recabar ms
informacin sobre el metabolismo y los requerimientos de oxgeno de los organismos que pueden estar
presentes en la columna. Utilizando la informacin,
Ubicacin de los microorganismos en relacin con el gradiente de SH2

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JUAN, Branco

7) Los siguientes 4 tipos metablicos se encuentran presentes en la columna de Winogradsky:


fotoauttrofos, fotohetertrofos, quimiolitoauttrofos y quimioorganohetertrofos. Mencione un
ejemplo de cada uno de estos microorganismos que pueda ser encontrado en una columna de
Winogradsky tpica. En base a los ejemplos por usted seleccionados seale:
a) Qu microorganismos participan en el ciclo del azufre y qu transformaciones realizan de
ese compuesto.
b) Ubique espacialmente c/u de los microorganismos seleccionados en funcin del gradiente
de O2.
Microorganismos:
Fotoauttrofos: Cyanobacteria
Fotohetertrofos: hongos, bacterias
Quimiolitoauttrofos: Bacterias: nitrificantes, oxidantes del azufre, oxidantes del hierro,
oxidantes del hidrogeno.
Quimioorganohetertrofos: Hongos como el Saccharomyces cerevisiae, algas y protozoos.

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JUAN, Branco

a) Ciclo del azufre:

b) Microorganismos en funcin del gradiente de oxigeno:


Algas
Diatomeas
Cianobacterias
Sulfo-oxidadores aerobios
Beggiatoa
Thiobacillus y Thiotrix
Bacterias purpura no del azufre
Rhodospinilium Rhodopseudomonas
Bacterias purpuras del azufre: Chromatium
Bacterias verdes del azufre: Chlorobium
Sulfato-reductores: Desulfovibrio
Fermentadores de celulosa: Clostridium

Conclusiones:
Nuestra columna preparada no tuvo definidamente las zonas tericas ni los crecimientos
previstos de tanta variedad de microorganismos debido a la poca permanencia en el
proceso, apenas lleg al mes de incubacin siendo que se prevn al menos tres meses para
ello.
Un gran problema definitivo a la hora del desarrollo posterior de hongos diversos o bacterias
especficas, fue la aparicin infectiva de protozoos que comieron la mayor parte de los
dems microorganismos.
Igualmente nos sirvi esta experiencia para comprender el desarrollo de diversos
microorganismos segn las condiciones nutritivas del medio