Enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) atau dalam bahasa indonesianya disebut sebagai
uji penentuan kadar imunosorben taut-enzim,merupakan teknik pengujian serologi yang
didasarkan pada prinsip interaksiantara antibodi dan antigen. Pada awalnya, teknik ELISA hanya digunakan dalam bidang imunologi untuk mendeteksi keberadaan antigen maupun antibodi dalamsuatu sampel seperti dalam pendeteksian antibodi IgM, IgG, & IgA pada saat terjadi infeksi (pada tubuh manusia khususnya). Namun seiring dengan perkembangan ilmu pengetahuan, teknik ELISA juga diaplikasikan dalam bentuk lain termasuk menganalisis kadar hormon yang terdapat dalam suatu organisme.Secara singkat dapat dikatakan bahwa teknologi ELISA yang digunakanuntuk asai hormon dalam cairan tubuh adalah system competitive enzymeimmunoassay yang analog dengan teknik RIA. Antigen yang berlabel dan antigenyang tidak berlabel saling bersaing untuk berikatan dengan tapak pengikatanantibodi yang terdapat dalam jumlah terbatas. Saturasi antibodi terjadi secara simultan bila semua reaktan diinkubasikan bersama sama. Contoh reaksi sepertii ni adalah ELISA untuk mengukur progesteron, estradiol, dan kortisol. Pengukuran hormon kortisol dalam saliva menggunakan teknik ELISA dapat mengetahui tingkat stres yang di alami oleh organisme (Haussmann et al., 2007). Pemeriksaan ELISA dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi dalam tubuh manusia maupun hewan. Terdapat berbagai teknik dalam pemeriksaan ELISA.Tes ini dapat dilakukan dengan kit yang sudah jadi atau dapat juga dilakukan dengan menggunakan antigen yang diracik sendiri (Setiawan, 2007). ELISA tradisional secara khusus memiliki reporter dan substrat yang menghasilkan beberapa bentuk perubahan warna yang dapat diamati untuk mengetahui kehadiran antigen atau analyte. Bentuk teknik ELISA terbaru seperti teknik flurogenic,electro chemiluminescent , dan real-time PCR dibuat untuk mengetahui sinyal kuantitatif. Metode ini dapat memberikan berbagai keuntungan diantaranya sensitifitas yang tinggi dan bersifat multiplexing (Leng et al , 2008). ELISA juga dapat dipakai untuk pengujian semua antigen, hapten atau antibody. Paling banyak dipakai di laboratorium klinis, misalnya uji immunoglobulin G dan E, hormone seperti insulin, esterogen dan gonadotrofin. Adapun prinsip dari ELISA / Enzim-linked Immunosorbent Assay adalah menggabungkan spesifisitas antibodi dengan sensitivitas pengujian enzim yang sederhana, dengan menggunakan antibodi atau antigen. Dengan mengukur konsentrasi antigen atau antibodi terlarut.
Antibody yaitu Antibodi disekresi oleh Sel Plasma (Sel B), Biasanya digunakan monoklonal Antibody karena lebih spesifik untuk epitop tertentu daripada policlonal antibodi. Dapat dibeli terpisah atau dalam paket ELISA Kit, biasanya diproduksi dengan cara induksi respon imun humoral pada hewan coba ( rat, mouse) dengan cara injeksi Antigen berulang, dilakukan ekstraksi sel dan purifikasi Ab. Dapat juga diekstraksi dari manusia yang telah diimunisasi dengan Ag tertentu.
Terdapat 2 Teknik Metode ELISA
Teknik Kualitatif adalah Berdasarkan bahwa tiap antibodi berikatan pada antigen yang spesifik. Teknik kuantitatif berdasarkan jumlah ikatan antigen-antibodi yang ditentukan dengan nilai absorbansi. Teknik ini menggabungkan spesifitas antibody dengan kepekaan uji enzymatis dengan spektrofotometer biasa atau antigen dilekatkan pada enzyme yang mudah ditera.
JENIS ELISA DIRECT ELISA Metode langsung pelabelan terhadap antibodi target itu sendiri. Microwell plates dicoated dengan target antigen dan ikatan dari antibodi diukur dengan colorimetric, chemiluminescent, atau fluorescent end-point. INDIRECT ELISA Metode dua langkah : antibodi sekunder berlabel untuk deteksi. Kemudian antibodi primer diinkubasi dengan antigen. Dan inkubasi kedua dengan antibodi sekunder berlabel yang dapat mengenali antibodi primer. Antibodi yang digunakan : Monoklonal antibodi yang spesifik pada satu site di permukaan partikel molekul tertentu dan Poliklonal antibodi yang kurang spesifik (harus mempunyai afinitas yang tinggi terhadap antigen) SANDWICH ELISA Sandwich ELISA mengukur jumlah antigen antara dua lapisan antibodi. Antigen yang akan diukur harus berisi setidaknya dua antigenic sites dan mampu mengikat antibodi (protein atau polisakarida misal deteksi species pada daging).
Biasanya digunakan untuk antigen dengan konsentrasi rendah. Capture antibody dimurnikan dan terikat dengan permukaan plate well. Antigen ditambahkan kemudian membentuk komplek antibodi. Produk yang tidak terikat akan tercuci saat washing. Antibodi berlabel yang kedua mengikat antigen dan antibodi. Uji ini mengukur jumlah antibodi kedua berlabel yang terikat matriks (antigen), melalui penggunaan substrat kolorimetri. COMPETITIVE ELISA ELISA ini mempunyai hubungan terbalik antara sinyal yang diperoleh dan konsentrasi analit dalam sampel, karena persaingan antara analit bebas dan konjugat ligan-enzim untuk antibodi yang dicoating. MULTIPLEX ELISA Dengan mengembangkan target antigen dengan coating atau capture antibodi atau antibodi array lebih dari satu dalam satu hole mikroplate. Sampel berupa plasma, cell lysate, atau tissue extract, dengan metode direct, indirect, sandwich atau competitive, labeling atau non-labeling, tergantung dari teknologi antibody array.
DAFTAR PUSTAKA Haussmann, M. F., C. M. Vleck, and E. S. Farrar. 2007. A laboratory exercise toillustrate increased salivary cortisol in response to three stressful conditionsusing competitive ELISA. Adv. Physiol. Educ. 31: 110115. Leng, S. J. McElhaney, J. Walston, D. Xie, N. Fedarko, G. Kuchel. 2008. "Elisa and Multiplex Technologies for Cytokine Measurement in Inflammation and Aging Research". J Gerontol a Biol Sci Med Sci 63 (8):879884.PMC 2562869.PMID 18772478. Lequin, RM .2005. "Enzyme Immunoassay (EIA)/Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)" Clinical Chemistry 51 (12): 24152418. Setiawan, I Made. 2007. Pemeriksaan Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)untuk diagnosis Leptospirosis. EBERS PAPYRUS
