Quantification of water-soluble vitamins in milk-based infant formulae using

biosensor-based assays
Vitamin merupakan senyawa organik yang dibutuhkan dalam jumlah
sedikit namun penting bagi tubuh. Vitamin dibutuhkan untuk pertumbuhan dan
menjaga daya tahan tubuh. Selain itu, vitamin memiliki peran penting untuk
menjaga otot nadi sepanjang lapisan saluran pencernaan dan menjaga kesehatan
sistem saraf, kulit, rambut, mata, mulut, dan hati. Vitamin fortifikasi merupakan
salah satu bahan utama dalam pengolahan susu formula dan suplemen. Vitamin
larut air (WSVs) ini relatif stabil dan dapat hilang kandungannya selama
pengolahan dan penyimpanan. Penetuan kadar vitamin dalam produk nutrisi
diperlukan untuk memenuhi standar yang ditetapkan pemerintah yaitu menjaga
kualitas produk dan kadar nutrisi yang terdapat dalam produk.
Penentuan kadar vitamin dapat dilakukan dengan metode tradisional, yaitu
metode MBA (Microbiological Assay) yang didasarkan pada respon pertumbuhan
berbagai vitamin tergantung lactobacilli. Selain metode MBA ini, metode lain
yang digunakan ialah HPLC, namum hasilnya sering tidak sensitif. Sebagai
bagian dari proteomik fungsional, Biomolecular Interaction Analysis (BIA)
bertujuan untuk mengukur pola interaksi dalam sebuah jaringan proteinnya secara
rinci. BIA terdiri berbagai metode berbasis pada fisika, biokimia dan biologi.
Teknik BIA berdasarkan pada SPR yang dievaluasi untuk analisis B2, B12, biotin,
asam folat dan asam pantotenat dalam susu formula telah diaplikasikan.
Metodelogi yang digunakan pada pengujian WSVs ialah Biosensor SPR dengan
instrumen Biacore Qflex kit yang didasarkan pada analisis kualitatif dan
kuantitatif yang hasilnya berupa kurva. Biacore Qflex kit yang disertakan dengan
chip sensor amobil dengan vitamin atau turunan dari vitamin A diketahui,
kelebihannya mendeteksi molekul dengan jumlah berat molekul tinggi seperti
protein, vitamin tertentu yang mengikat atau antibodi (VBP atau A) ditambahkan
ke sampel. Tingkat respon berbanding lurus dengan waktu kontak antara sampel
dan permukaan, yaitu volume injeksi. Semakin tinggi konsentrasi vitamin dalam
sampel, semakin tinggi tingkat hambatan dan menurunkan respon terdeteksi pada
chip biosensor. Tanggapan dari konsentrasi standar yang dikenal trations
digunakan untuk menghasilkan kurva kalibrasi dan tidak dikenal sampel
ditentukan dengan mengacu pada kurva standar.
Dalam analisis vitamin proses ekstraksi adalah sangat penting. Asam
pantotenat ada dalam makanan dalam bentuk bebas. Untuk asam B2 dan
pantotenat, buffer ekstraksi adalah buffer sitrat fosfat dengan pH 7.0. Hal ini
sesuai dengan penelitian lain yang menunjukkan bahwa pelarut ekstraksi yang
baik adalah air atau larutan berair yang mengandung sejumlah kecil asam.
Vitamin B12 mungkin ada dalam bentuk yang berbeda dalam makanan seperti
cyanocobalamin yang paling stabil dan bentuk normal yang digunakan untuk
fortifikasi makanan. Endogen vitamin B12 dalam susu terkait dengan glikoprotein
haptocorrin R-pengikat. Prosedur ekstraksi dioptimalkan untuk membebaskan
protein terikat cobalamin dan mengkonversi multiforms endogen untuk membuat
cyanocobalamin stabil. Jika bentuk lain dari vitamin B12 yang hadir, sianida
dalam ekstraksi penyangga akan mengubah mereka ke cyanocobalamin. Seluruh
ekstraksi sampel susu formula dan analisis dilakukan di bawah kondisi tingkat
rendah lampu pijar kuning. Ekstrak dari masing-masing vitamin seperti vitamin

B2, vitamin B12, asam folat, biotin, asam pantotenat diatur pHnya 6.0-8.0 dengan
natrium hidroksida encer PH ekstrak itu disesuaikan dengan 6.0-8.0 .
Penelitian ini dirancang untuk mengevaluasi optik biosensor berbasis
immunoassay untuk kuantifikasi vitamin yang larut dalam air (B2, B12, asam
folat, biotin, dan asam pantotenat) dalam produk susu formula. Metode analisis
vitamin ini adalah menggunakan HPLC dengan kondisi pengukuran laju aliran
dari lima vitamin 40, 20, 40, 40 dan 25 lL / menit untuk vitamin B2, B12, folat
asam, biotin dan asam pantotenat. Waktu kontak 30-480 s. Volume injeksi berkisar
dari 22 L - 177 L dan analisis waktu per sampel adalah sekitar 2-10 menit.
Akurasi dievaluasi dengan menggunakan adisi standar untuk menghilangkan efek
matriks, dimana dari 10 sampel susu formula bayi, 5 diantaranya ditambahkan
standar vitamin B2 dan 5 sampel lagi ditambahkan standar asam pantotenat.
Sedangkan sampel SRM 1846 dibubuhi biotin, asam folat dan vitamin B12.
Analisis Pengulangan dilakukan dengan menganalisis satu sampel beberapa kali.
Kriteria penerimaan ditentukan sebagai nilai HORRATr . Nilai HORRATr
diterima adalah 0.3-1.3 untuk presisi laboratorium tunggal. Presisi menengah
metode ditentukan dengan menganalisis sampel yang sama pada tiga hari yang
berbeda.
Hasil
penelitian pemulihan didapatkan rata-rata untuk vitamin B2, B12, asam folat,
biotin dan asam pantotenat adalah 103.6%, 98.6%, 101.5%, 100.1% dan 99.5%.
Kisaran pemulihan rata-rata adalah 94.7-109.1% dengan RSD mulai dari 1.78% 10.00%. Berdasarkan nilai RSD dan % pemulihan, hasil analisis optik berbasis
biosensor dapat diterima pada semua sampel yang diuji. Pengulangan optik
berbasis biosensor immunoassay dianalisis dengan mengukur sampel formula bayi
yang dianalisis 13 kali. Hasilnya didapatkan nilai RSD adalah 1.73%, 1.76%,
1.15%, 2.13% dan 1.94%, untuk B2, B12, asam folat, biotin dan asam pantotenat.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa teknologi berbasis biosensor optik sangat
handal berkaitan dengan pengulangan. Nilai HORRATr untuk analisis vitamin
dalam penelitian ini berkisar 0.10-0.22 dan jauh di bawah 0.3 yang menunjukkan
presisi dapat diterima untuk analisis vitamin. Uji Ketepatan dilakukan dengan
menganalisis lima vitamin dalam tiga sampel susu formula pada 3 hari yang
berbeda. Nilai RSD untuk setiap vitamin dalam tiga sampel yang berbeda
menunjukan presisi antara metode yang baik. Nilai HORRATr untuk vitamin B2,
asam folat, biotin dan asam pantotenat berada dalam rentang yang dapat diterima
dari 0.3-1.3 dan untuk vitamin B12 adalah di bawah batas bawah dari rentang
yang dapat diterima yang mungkin karena standar deviasi yang lebih rendah.
Hasil ini menunjukkan presisi yang memuaskan dari metode di tingkat analit ini.
Penelitian ini dibandingkan dengan hasil yang diperoleh dengan menggunakan
metode mikrobiologi untuk studi sertifikasi antar laboratorium untuk semua
vitamin. Menghasilkan konsentrasi vitamin dalam SRM 1846 mirip dengan nilai
acuan yang ditetapkan.
Setelah evaluasi biosensor optik
untuk analisis vitamin, 10 sampel komersial yang berbeda di analisis dan
menghasilkan nilai sampel jauh lebih besar dibandingkan dengan yang dilaporkan
label nutrisi. Umumnya vitamin yg di tambahkan sengaja berlebih dari kebutuhan
bayi dan meminimalisir penyusutan selama proses. Bentuk bawaan WSVs juga
kan terdeteksi selama analisis dan memberikan hasil saat diukur melebihi label
nutrisi. Efek matriks tidak diketahui namun kemungkinan terbentuk rasemik atau
vitamers alam lainya yang dapat mempengaruhi hasil dan mungkin menjadi alasan

untuk menambahkannya secara berlebih. Biotin merupakan vitamin yang paling

stabil diantara vitamin lain yang larut dalam air. Sedangkan untuk asam folat di
ekstraksi dengan larutan antioksidan sangat encer. Ditambahkan antioksidan
seperti vitamin C dan mercaptoetanol yang akan mencegah bentuk endogen asam
folat teroksidasi. Dalam penelitian tidak ditambahkan pada larutan buffer
ekstraksi karena dalam semua susu formula yang diperkaya sudah ditambahkan.
Analisis Teknologi interaksi biomolekular menghemat waktu dan tenaga kerja.
Keuntungan dari tekhnik instrumental ialah hasil yang diperoleh lebih terpercaya
dan akurat tanpa menggunakan enzim atau pelabelan radioisotop. Skema
persiapan sederhana dan panduan software mudah digunakan dari proses injeksi
sampel untuk analisis data dan pelaporan. Biasanya waktu yang dibutuhkan dari
preparasi sampel sampai hasil yang diperoleh kurang dari 12 jam.
Penelitian ini menunjukkan kesesuaian teknik optik
berbasis biosensor untuk pemantauan rutin vitamin suplemen susu formula.
Spiking, pemulihan, presisi menengah, pengulangan analisis dan SRM 1846
analisis menunjukkan metode ini dapat diandalkan dan akurat. Konsentrasi WSV
terdeteksi dalam sampel susu formula secara signifikan di atas batas deteksi
instrumen, yang memungkinkan analisis kuantitatif analit. Kemudahan
penggunaan dan analisis data otomatis datang bersama-sama dengan selektivitas,
presisi dan pengulangan untuk membuat teknik ini alternatif praktis untuk teknik
mapan. Teknik BIA bekerja dengan selektifitas yang tinggi dan sensitivitas.
Prosedur persiapan sampel sederhana, injeksi dan teknik analisis sepenuhnya
otomatis yang akan mengatasi prosedur memakan waktu dan mengurangi risiko
kesalahan eksperimental. Teknik berperan ini menyediakan metode yang sangat
akurat untuk analisis cepat dan tepat WSVs. Perkembangan baru seperti mengikat
protein dengan spesifisitas yang lebih besar dan perangkat multichannel yang
lebih kecil akan membantu untuk lebih diterima sebagai alat analisis yang kuat.