Textbook Mikrobiologi4
Textbook Mikrobiologi4
PERTUMBUHAN MIKROBA
Mikroba hidup di sekitar kita dan hidup di sembarang lingkungan di bumi.
Pertumbuhan mikroba merupakan aspek penting dalam mempelajari mikrobiologi.
Karena berdasarkan kurva pertumbuhan tersebut kita dapat memanipulasi
pertumbuhan mikroba untuk kepentingan manusia. Bentuk manipulasi pertumbuhan
dapat berupa mempercepat maupun menghambat pertumbuhan.
PERTUMBUHAN
Pertumbuhan adalah bertambahnya tinggi atau berat suatu organisme.
Pertambahan tinggi maupun berat organisme merupakan bertambahnya ukuran sel
atau bertambahnya jumlah sel. Dalam dunia mikroba pertumbuhan diartikan sebagai
bertambahnya jumlah sel. Hal ini karena mikroba sebagian besar adalah organisme
bersel tunggal. Sehingga difinisi pertambahan tinggi maupun berat organisme tidak
berlaku lagi. Mikroba memperbanyak diri melalui pembelahan sel maupun reproduksi
seksual. Reproduksi seksual hanya dijumpai pada mikroba bersel banyak seperti
jamur.
Pembelahan Sel
Terdapat 2 jenis pembelahan sel yaitu pembelahan biner dan pertunasan
(budding). Pembelahan biner adalah pembelahan yang menghasilkan 2 sel sama
besar (Gambar 3.1), sedangkan pertunasan adalah pembelahan yang menghasilkan
2 sel yang tidak sama besar (sel yang besar disebut induk dan sel yang kecil disebut
anak). Pada jamur terdapat suatu deviasi dari pembelahan biner yang disebut
pembelahan filamentus. Pembelahan atau pertumbuhan filamentus adalah
pembelahan sel filamen (sel tubulus dan panjang), di mana hasil pembelahan tidak
terpisah melainkan tetap menjadi suatu bagian utuh organisme tersebut. Hal ini
masuk akal karena jamur merupakan mikroba bersel banyak. Pada bagian ini
pembelahan sel yang dipelajari adalah pembelahan biner. Hal ini karena bakteri
sebagian besar melakukan pembelahan biner dalam pertumbuhannya.
Pembelahan (Biner) Sel
Pada pembelahan (biner) sel akan memperbesar ukurannya mencapai
ukuran ideal untuk pembelahan sel. Selama proses pertambahan ukuran sel terdapat
beberapa kejadian di dalam sel termasuk replikasi kromosom dan sintesis dinding sel
untuk perpanjangan sel. Pada dasarnya pembelahan sel dimulai setelah pembelahan
kromosom. Namun pembelahan sel dapat dimulai tanpa menunggu selesainya
pembelahan kromosom. Lokasi pembelahan pada dinding sel bukan di sembarang
tempat. Hal ini ditunjukkan oleh adanya mesosom yang berindikasi pada lokasi atau
tempat pembelahan berlangsung.
Gambar 4.2 Proses pembelahan sel pada E. hirae. M, mesosom; N, nukleoid; MS,
membran sel; PD, pita dinding sel; ND, noktah dinding sel
Pengukuran Pertumbuhan
Pertumbuhan pada bakteri didefinisikan dengan pertambahan berat sel.
Karena berat sel relatif sama, maka pertumbuhan dapat didefinisikan sebagai
pertambahan jumlah sel. Terdapat berbagai metode dalam mengukur pertumbuhan
sel bakteri. Perhitungan sel bakteri terdiri atas 2 cara, yaitu perhitungan langsung
dan tidak langsung. Perhitungan langsung meliputi metode turbidimetri, total count,
dan berat kering. Perhitungan tidak langsung yaitu viable count.
Metode Turbidimetri
Secara rutin jumlah sel bakteri dapat dihitung dengan cara mengetahui
kekeruhan (turbiditas) kultur. Semakin keruh suatu kultur, semakin banyak jumlah
selnya. Prinsip dasar metode turbidimetri adalah, jika cahaya mengenai sel, maka
sebagian cahaya diserap dan sebagian cahaya diteruskan. Jumlah cahaya yang
diserap proposional (berbanding lurus) dengan jumlah sel bakteri. Atau jumlah
cahaya yang diteruskan berbanding terbalik dengan jumlah sel bakteri. Semakin
banyak jumlah sel, semakin sedikit cahaya yang diteruskan (Gambar 4.3).
Menurut Hukum Beer-Lambert bahwa fraksi cahaya yang diteruskan (I/I0)
akan menurun seiring dengan log-10 densitas sel (x) atau I/I0= 10-xl. Di mana l adalah
lebar wadah atau kuvet. Jika dikali log10, maka log I/I0 = -xl. Karena log I/I0 =
OD=absorbansi cahaya, maka diperoleh persamaan OD=A= xl.
Metode ini mempunyai kelemahan, yaitu tidak dapat membedakan antara sel
mati dan sel hidup.
Gambar 4.4 Hemasitometer yang dapat digunakan untuk perhitungan total count
Metode yang lebih memuaskan dalam mengukur jumlah sel adalah Elektronic
Total Count. Jika medan listrik mengenai sel hidup, maka timbul kejutan listrik. Akan
tetapi, jika medan listrik mengenai sel mati, maka tidak timbul kejutan listrik. Semakin
banyak kejutan listrik, semakin banyak pula jumlah sel yang hidup.
Metode Berat Kering
Cara yang paling cepat mengukur jumlah sel adalah metode berat kering.
Metode ini relatif mudah dilakukan, yaitu kultur disaring atau disentrifugasi, kemudian
bagian yang tersaring atau yang mengendap hasil sentrifugasi dikeringkan. Pada
metode ini juga tidak dapat membedakan sel yang hidup dan yang mati. Akan tetapi,
keterbatasan itu tidak menutup manfaat metode ini dalam hal mengukur efisiensi
fermentasi, karena pertumbuhan diukur dengan satuan berat, sehingga dapat
diperhitungkan dengan parameter konsumsi substrat dan produksi senyawa yang
diinginkan.
Gambar 4.5 Cara pengenceran mikroba yang hendak dihitung jumlah selnya secara
viable count
Metode Viable Count
Metode viable count sering disebut dengan metode total plate count. Kultur
diencerkan sampai batas yang diinginkan. Kultur encer ditumbuhkan kembali pada
media, sehingga diharapkan setiap sel tumbuh menjadi 1 koloni beberapa saat
berikutnya biasanya 12-4 jam (Gambar 4.5). Akan tetapi, cara ini memiliki
keterbatasan, yaitu jumlah sel terhitung biasanya lebih kecil dari sebenarnya
(kemungkinan besar 1 koloni dapat berasal dari lebih dari 2 sel) dan tidak dapat
diaplikasikan pada bakteri yang tumbuh lambat.
Pada metode ini yang perlu diperhatikan adalah jumlah sel bakteri harus
mendekati kelipatan 10 pada setiap pengencerannya. Jika tidak, maka perhitungan
dianggap gagal. Misalnya cawan yang dapat dihitung jumlah selnya adalah yang
mempunyai jumlah sel sekitar 2-4 untuk sampel pengenceran (10-x), 20-40 untuk
sampel pengenceran (10-(x+1)), dan 200-400 untuk sampel pengenceran (10-(x+2)).
Fase Pertumbuhan
Fase dalam pertumbuhan bakteri telah dikenal luas oleh ahli mikrobiologi.
Terdapat 4 fase pertumbuhan bakteri ketika ditumbuhkan pada kultur curah (batch
culture), yaitu fase adaptasi (lag phase), fase perbanyakan (exponential phase), fase
statis (stationer phase), dan fase kematian (death phase) (Gambar 4.6)
Gambar 4.6 Fase dalam pertumbuhan bakteri pada kultur curah (batch culture); 1
fase adaptasi; 2 fase perbanyakan; 3 fase statis; 4 fase kematian.
Fase Adaptasi
Ketika sel dalam fase statis dipindahkan ke media baru, sel akan melakukan
proses adaptasi. Proses adaptasi tersebut meliputi sintesis enzim baru yang sesuai
dengan medianya dan pemulihan terhadap metabolit yang bersifat toksik (misalnya
asam, alkohol, dan basa) pada waktu di media lama.
Pada fase adaptasi tidak dijumpai pertambahan jumlah sel. Akan tetapi,
terjadi pertambahan volume sel, karena pada fase statis biasanya sel melakukan
pengecilan ukuran sel. Akan tetapi, fase adaptasi dapat dihindari (langsung ke fase
perbanyakan), jika sel di media lama dalam kondisi fase perbanyakan dan dipindah
ke media baru yang sama komposisinya dengan media lama.
Fase Perbanyakan
Setelah sel memperoleh kondisi ideal dalam pertumbuhannya, sel melakukan
pembelahan. Karena pembelahan sel merupakan persamaan eksponensial, maka
fase tersebut disebut fase eksponensial. Pada fase perbanyakan jumlah sel
meningkat sampai pada batas tertentu (tidak terdapat pertambahan bersih jumlah
sel), sehingga memasuki fase statis.
Pada fase perbanyakan sel bakteri bertambah mengikuti pola atau
persamaan eksponensial, yaitu Nt=No2n. Di mana Nt adalah populasi bakteri pada
waktu ke-t; No adalah populasi awal bakteri, dan n adalah jumlah generasi.
Secara praktek kita dapat mengubah persamaan di atas dengan persamaan
logaritmik, yaitu log10Nt= log10No + log102n. Dengan demikian kita dapat menentukan
jumlah generasi (n) = 3.32[log10Nt - log10No].
Setelah menentukan jumlah generasi, maka kita dapat menentukan laju
pertumbuhan (k) = n/t = (3.32[log10Nt - log10No])/t. Waktu generasi juga dapat kita
hitung (tgen) = 1/k = t/n = t/(3.32[log10Nt - log10No]).
Pada fase perbanyakan sel melakukan konsumsi nutrien dan proses fisiologis
lainnya. Pada fase ini produk senyawa yang diinginkan oleh manusia terbentuk,
karena senyawa tersebut merupakan senyawa yang disekresi oleh sel bakteri.
Beberapa senyawa yang diinginkan pada fase perbanyakan adalah etanol, asam
laktat dan asam organik lainnya, asam amino, asam lemak, dan lainnya.
Fase Statis
Alasan bakteri tidak melakukan pembelahan sel pada fase statis bermacammacam. Beberapa alasan yang dapat dikemukaan adalah nutrien habis, akumulasi
metabolit toksik (misalnya alkohol, asam, dan basa), penurunan kadar oksigen, dan
penurunan nilai aw (ketersediaan air). Untuk kasus kedua dijumpai pada fermentasi
alkohol dan asam laktat, untuk kasus ketiga dijumpai pada bakteri aerob, dan untuk
kasus keempat dijumpai pada fungi.
Pada fase statis biasanya sel melakukan adaptasi terhadap kondisi yang
kurang menguntungkan. Adaptasi itu dapat menghasilkan senyawa yang diinginkan
manusia misalnya antibiotika dan antioksidan4).
Fase Kematian
Penyebab utama kematian adalah autolisis sel dan penurunan energi seluler.
Beberapa bakteri hanya mampu bertahan beberapa jam selama fase statis dan
akhirnya masuk ke fase kematian, sedangkan ada bakteri yang mampu bertahan
sampai harian bahkan mingguan pada fase statis dan akhirnya masuk ke fase
kematian. Beberapa bakteri bahkan mampu bertahan sampai puluhan tahun
sebelum mati dengan mengubah sel menjadi spora.
Pertumbuhan Diauxic
Pertumbuhan diauxic terjadi ketika bakteri dihadapkan pada dua sumber
karbon yang berbeda dan mampu menggunakan kedua sumber karbon tersebut.
Misalnya E. coli ditumbuhkan pada media yang mengandung glukosa dan laktosa
(Gambar 4.7). E. coli memanfaatkan glukosa, karena sel telah memiliki enzim
pendegradasi glukosa (enzim struktural). Glukosa sendiri menghambat sintesis
enzim pemecah laktosa. Ketika glukosa habis, sel masuk fase statis dan menyintesis
enzim yang mampu menghidrolisis laktosa menjadi glukosa dan galaktosa. Ketika
glukosa tersedia di media, sel memasuki fase perbanyakan kembali.
Gambar 4.7 Pertumbuhan diauxic pada E. coli ketika dihadapkan pada 2 sumber
karbon, yaitu glukosa dan laktosa.
Rhizobium juga menunjukkan pertumbuhan diauxic ketika pada media
diintroduksi 2 sumber karbon, yaitu suksinat dan glukosa. Rhizobium memanfaatkan
suksinat dulu, kemudian glukosa. Mengapa Rhizobium lebih memanfaatkan suksinat
bukan glukosa? Hal ini karena Rhizobium merupakan bakteri simbion. Secara alami
bakteri simbion biasanya memerlukan triosa atau tetrosa yang dihasilkan dari siklus
asam sitrat (Krebs) yang dihasilkan oleh inangnya daripada heksosa.
Kultur Kontinyu
Dengan mengunakan kultur curah, maka fase perbanyakan sangat terbatas
dan dengan segera beralih ke fase statis. Hal ini tidak menguntungkan bagi ahli
mikrobiologi untuk mempelajari aspek-aspek dalam fisiologi bakteri. Oleh karena itu
para ahli mikrobiologi memperkenalkan suatu metode kultivasi yang dapat
60-65C selama 10 menit atau lebih mampu memicu pembentukan spora. Faktor lain
yang mampu memicu pembentukan spora bakteri adalah perlakuan pH rendah, suhu
rendah, pemberian agen pereduksi, dana agen-agen kimia lainnya.
Material korteks dan pembungkus spora berbeda. Tahap keenam (VI) adalah
pematangan spora. Spora bakteri menyintesis asam dipokolinat dan melakukan
pengambilan kalsium. Dua komponen ini merupakan karakteristik resistensi dan
dormansi endospora. Tahap ketujuh (VII) adalah pelepasan spora. Terjadi lisis sel
induk, sehingga spora yang telah matang keluar.
Gambar 4.11 Grafik laju pertumbuhan mikroba yang mencapai maksimal pada suhu
optimal dan minimal pada suhu minimum dan maksimum.
Terminologi umum untuk kisaran suhu pertumbuhan mikroba adalah
psikrofil, mesofil, dan thermofil. Psikrofil merupakan kisaran suhu pertumbuhan
mikroba antara 020C. Mesofil merupakan kisaran suhu pertumbuhan mikroba
antara 2045C. Thermofil merupakan kisaran suhu pertumbuhan mikroba antara
4580C. Jika mikroba mampu tumbuh di atas 80C disebut thermofil ekstrim atau
hiperthermofil, sedangkan yang mampu tumbuh di bawah 0C disebut psikrofil
ekstrim atau hipopsikrofil. Lingkungan yang dapat dijumpai mikroba hiperthermofil
adalah di sumber mata air panas maupun di perut gunung berapi. Sedangkan
lingkungan yang dapat dijumpai mikroba hipopsikrofil adalah di kutub dan di periran
laut dalam. Kisaran pertumbuhan berbagai mikroba dapat dilihat pada Tabel 4.1
Tabel 4.1 Kisaran suhu pertumbuhan berbagai bakteri
Bakteri
Habitat
Minimal
Listeria monocytogenes
Vibrio marinus
Stenotrophomonas
Maksimal
Optima
l
30-37
4
4
15
35
30
41
45
maltophilia
Thiobacillus novellus
25-30
Staphylococcus aureus
10
30-37
Escherichia coli
10
37
Clostridium perfringens
15
45
Streptococcus pyogenes
20
37
Anoxybacillus
30
60
flavithermus
Thermus aquaticus
Mata air panas
40
70-72
Methanococcus
Hydrothermal vent*
60
85
jannaschii
Sulfolobus
Mata air sulfur (panas &
70
75-85
acidocaldarius
sulfur tereduksi)
Pyrobacterium brockii
Hydrothermal vent*
80
102-105
Methanopyrus kandleri
Hydrothermal vent*
85
100
* Terdapat pada laut dalam dengan gradien suhu tinggi antara 4300C.
42
45
45
55
40
72
79
90
90
115
110
Gambar 4.12 Pengaruh oksigen pada pola pertumbuhan mikroba. Media thioglikolat
agar mampu membatasi difusi oksigen hanya sampai bagian agar. Tabung #1
menunjukkan pertumbuhan mikroba aerob. Tabung #2 dan #3 menunjukkan
pertumbuhan mikroba fakultatif anaerob, dan tabung #4 menunjukkan pertumbuhan
mikroba anaerob.
Media thioglikolat agar (mengandung thioglikolat dan sistein) dapat
menunjukkan ketergantungan mikroba terhadap oksigen (Gambar 4.12). Mikorba
fakultatif anaerob tumbuh tersebar (dari atas sampai bawah), anaerob kaku hanya
tumbuh di dasar agar, dan aerob hanya tumbuh di atas saja. Aerob obligat dan
fakultatif anaerob mempunyai laju pertunmbuhan lebih tinggi daripada aerotoleran
anaerob dan anaerob obligat. Hal ini karena aerob obligat dan fakultatif anaerob
mempunyai kemampuan menghasilkan energi lebih tinggi dibandingkan aerotoleran
anaerob dan anaerob obligat ketika melakukan respirasi dan metabolisme.
Meskipun mikroba aerob memerlukan oksigen dalam pertumbuhannya, tetapi
sebagian besar enzim mengalami kerusakan jika kontak dengan oksigen. Oleh
karena itu mikroba melakukan detoksifikasi oksigen. Mekanisme detoksifikasi
oksigen dapat dilihat pada Gambar 4.13. Oksigen bereaksi menjadi 2 produk utama
dalam sel yaitu hidrogen peroksida (H2O2) dan superoksida radikal (O2-). Kedua
produk ini sangat berbahaya bagi sel karena dapat memicu karsinogenesis. Oleh
karena itu, mikroba menetralisir hidrogen peroksida dan radikal superoksida dengan
enzim katalase dan superoksida dismutase menjadi oksigen dan air.
Habitat
pH Min
pH Opt
pH Maks
Thiobacillus
thiooxidans
0.5
2.0-2.8
4.0-6.0
Sulfolobus
acidocaldarius
1.0
2.0-3.0
5.0
Bacillus
acidocaldarius
2.0
4.0
6.0
Zymomonas
lindneri
3.5
5.5-6.0
7.5
Lactobacillus
acidophilus
Hewan, tumbuhan,
materi terbusukan
4.0-4.6
5.8-6.6
6.8
Staphylococcus
aureus
Permukaan hewan,
rongga hidung, kulit
4.2
7.0-7.5
9.3
Escherichia coli
Usus hewan
4.4
6.0-7.0
9.0
Clostridium
sporogenes
5.0-5.8
6.0-7.6
8.5-9.0
Erwinia
caratovora
Patogen tanaman
5.6
7.1
9.3
Pseudomonas
aeruginosa
Ubiquitous
5.6
6.6-7.0
8.0
Streptococcus
pneumoniae
Patogen hewan
6.5
7.8
8.3
Nitrobacter spp.
Ubiquitous
6.6
7.6-8.6
10.0
Meskipun hidup di lingkungan berpH jauh dari netral, tetapi mikroba asidofil
dan alaklifil mampu menjaga nilai pH sitoplasma sekitar netral (Tabel 4.4). Mikroba
asidofil mampu hidup sampai nilai pH eksternal 1-4, tetapi nilai pH intrasel 6,5.
Dengan demikian bakteri asidofil mampu mempertahankan gradien pH lebih dari 2,5
unit. Demikian juga untuk bakteri neutrofil dan alkalifil. Bakteri neutrofil mampu
mempertahankan gradien pH sekitar 0,5-1,5 unit dan bakteri alkalifil mampu
mempertahankan gradien pH sekitar 1,5-2 unit. Stabilitas nilai pH intrasel sangat
penting, karena aktivitas metabolisme pada umumnya bekerja maksimal pada
lingkungan berpH netral. Untuk menjaga stabilitas nilai pH intrasel, sel prokariota
harus dapat menjaga gradien pH antara eksternal dan intrasel semaksimal mungkin.
Mekanisme mempertahankan kestabilan nilai pH internal terhadap perubahan nilai
pH eksternal disebut homeostasis pH.
Tabel 4.4 Nilai pH di dalam dan di luar sel pada mikroba netrofil, asidofil, dan alkalifil.
Mikroba
Nilai pH luar
Nilai pH dalam
Neutrofil
Asidofil
Alkalifil
6-8
1-4
9-12
7,5-8,0
6,5-7,0
8,4-9,0
Gradien pH
(pH)
0,51,5
>2,5
1,52,0
dinetralisir, yaitu dengan pengambilan K+ (Gambar 4.15, 2). Sebaliknya ketika nilai
pH intrasel menjadi alkali, maka sel melakukan pengambilan proton dan memompa
keluar Na+ atau K+ (Gambar 4.15, 3 dan 4). Oleh karena itu, penghambatan pompa
proton mengakibatkan nilai pH intrasel sama dengan nilai pH eksternal (pH internal =
pH eksternal).
Konsentrasi Solut (Ketersediaan Air)
Air merupakan pelarut universal yang dapat melarutkan sebagian besar
molekul untuk kehidupan. Oleh karena itu organisme mutlak memerlukan air untuk
kehidupannya. Oleh karena itu, dengan membuang aor dari makanan mampu
mengawetkan makanan dari kontaminasi mikorba, sehingga umur makanan menjadi
lama. Ketersediaan air (aktivitas air) merupakan ukuran seberapa banyak air bebas
untuk keperluan reaksi seluler. Air murni memiliki aktivitas air sebanyak 100%.
Konsentrasi air dapat diperkecil dengan mengevaporasi maupun dengan
mengikatnya dengan solut. Semakin tinggi konsentrasi solut, maka kecil aktivitas air.
Meningkatnya konsentrasi solut berpengaruh pada sel. Sel akan mengeluarkan air
untuk menetralisir lingkungan yang pekat solut, sehingga sel mengalami plasmolisis.
Sebaliknya jika konsentrasi solut rendah, maka air akan masuk ke dalam sel,
sehingga sel berpotensi pecah. Untungnya mikroba memiliki membran sel dan
dinding sel yang mampu menahan tekanan osmotik akibat proses osmosis. Semakin
pekat konsentrasi solut juga akan menyulitkan kerja enzim, karena kerja enzim
terhadao solut memerlukan sejumlah air. Akibatnya enzim tidak bekerja dengan baik.
Mikroba yang memerlukan konsentrasi garam tinggi dalam lingkungan
disebut halofil. Halofil lemah, moderat, dan ekstrim memerlukan konsentrasi garam
masing-masing sebesar 16%, 615%, dan 1530%. Mikroba halotoleran masih
dapat tumbuh sampai kadar garam 15% tetapi tumbuh baik jika tidak ada garam.
Mikroba yang mampu tumbuh pada lingkungan berkadar gula tinggi disebut osmofil.
Mikroba yang mampu tumbuh di lingkungan kering disebut xerofil.