Anda di halaman 1dari 2

RESUME BIOTEKNOLOGI

Nama : Sunani
No.Reg : 3425110161
DNA SEQUENCING

Bioteknologi : Cabang ilmu Biologi yang mempelajari tentang pemanfaatan makhluk


hidup (meliputi bakteri, fungi) serta virus maupun produk dari makhluk hidup
(meliputi enzim, alkohol) dalam proses produksi untuk menghasilkan barang dan
jasa untuk kepentingan manusia.

cDNA

DNA yang disintesis dari template mRNA dalam sebuah reaksi yang dikatalis oleh
enzim reverse transcriptase.
digunakan untuk kloning gen eukariot dalam prokariot. Jika seorang ilmuan ingin
mengekspresikan protein tertentu dalam sel yang secara normalnya tidak
mengekspresikan protein tersebut (contohnya ekspresi heterolog), mereka akan
mentranfer cDNA yang mengkode protein tersebut ke dalam sel donor (sel
penerima).
cDNA juga diproduksi oleh kelompok retrovirus (seperti HIV-1, HIV-2, Simian
Immunodeficiency Virus, dan lain sebagainya) yang terintegrasi dengan inangnya
untuk membuat sebuah provirus (calon virus).
keperluan ekpresi gen eukariot dilakukan dalam sel prokariot. Metode yang sangat
sederhara untuk melakukan hal ini adalah menambahkan DNA eukariot ke dalam
sel donor prokariot, yang kemudian akan mentraskripkan DNA menjadi mRNA dan
kemudian mentranslasikan protein. Sayangnya, DNA protein memiliki intron, dan
juga sel prokariot tidak memiliki kemampuan untuk melakukan splicing, sehingga
untuk melakukan hal ini splicing harus dilakukan sebelum DNA eukariot tersebut
dimasukan ke dalam sel prokariot. DNA yang telah dibuat merupakan komplemen
dari RNA yang juga disebut complementary DNA (cDNA). Untuk mengekspresikan
protein dari cDNA tersebut, maka diperlukan sequence pengatur ekspresi seperti
Promotor.
Sintesis
cDNA harus di sintesis dari mRNA (setelah splicing atau mRNA tanpa Intron)
menggunakan enzyme reverse transcriptase. Enzim ini bekerja pada untai tunggal
mRNA, menghasilkan DNA komplemen berdasarkan urutan pasang basa RNA (A,
U, G dan C) menjadi DNA komplemen (T, A, C dan G berturut-turut).
1


1.
2.
3.
4.

5.

Untuk mendapatkan cDNA dari sel eukariot yang intronnya telah dihilangkan
(spliced) sebagai berikut:
Sel eukariot mentranskripkan DNA (dari gen) menjadi RNA (pre-mRNA)
Sel yang sama kemudian melakukan proses splicing pada untai pre-mRNA,
dan menambahkan ujung poly-A tail dan 5 Methyl-Guanine cap.
Campuran untai mRNA diekstrak dari sel
Sebuah primer oligonukleotida poly-T berhibridisasi dengan poly-A tail dari
templet mRNA, atau primer hexamer acak dapat ditambahkan yang mana
mengandung 6 basa yang paling mungkin ada dalam untai DNA dan dapat
berhibridisasi di mana saja dalam RNA (dipelukan reverse transcriptase)
Penambahan Reverse transcriptase, dan juga deoxynucleoside
triphosphates (A, T, G, C).

Enzim reverse transcriptase akan mengecek mRNA dan mensinstesi sebuah DNA
yang merupakan pasangan dari mRNA tersebut. Untaian inilah yang disebut cDNA.

DNA LIBRARY

collection of DNA fragments that have been cloned into vectors so that researchers
can identify and isolate the DNA fragments that interest them for further study.
There are basically two kinds of libraries: genomic DNA and cDNA libraries.
Genomic DNA libraries contain large fragments of DNA in either bacteriophages or
bacterial or P1-derived artificial chromosomes (BACs and. PACs). cDNA libraries
are made with cloned, reverse-transcribed mRNA, and therefore lack DNA
sequences corresponding to genomic regions that are not expressed, such as
introns and 5 and 3 noncoding regions. cDNA libraries generally contain much
smaller fragments than genomic DNA libraries, and are usually cloned into plasmid
vectors.
koleksi fragmen DNA yang telah dikloning ke dalam vektor sehingga peneliti
dapat mengidentifikasi dan mengisolasi fragmen DNA yang menarik perhatian
mereka untuk studi lebih lanjut.
Pada dasarnya ada dua jenis perpustakaan: DNA genomik dan cDNA
perpustakaan. Perpustakaan DNA genomik mengandung fragmen besar DNA
baik bakteriofag atau kromosom buatan bakteri atau P1-diturunkan (BAC dan.
PAC). cDNA perpustakaan dibuat dengan kloning, reverse-ditranskripsi mRNA,
dan karena itu tidak memiliki urutan DNA yang sesuai dengan daerah genom
yang tidak diungkapkan, seperti intron dan 5 'dan 3' noncoding daerah. cDNA
perpustakaan umumnya mengandung fragmen jauh lebih kecil daripada
perpustakaan DNA genomik, dan biasanya diklon ke vektor plasmid.
2

Anda mungkin juga menyukai