Cloning Vectors
Powerpoint Templates
Page 1
Page 4
Tahapan
Page 5
VEKTOR KLONING
Bagian DNA dimana
fragmen DNA asing
dapat disisipkan
Digunakan untuk
menggandakan molekul
DNA
KARAKTERISTIK VEKTOR
1. Memiliki origin of replication sehingga DNA dapat digandakan
dalam sel inang
Powerpoint Templates
Page 7
VEKTOR KLONING
A. Vektor Bakteri
1.
Plasmid
2.
Bakteriofag
3.
Kosmid
B. Vektor Organisme lain
1.
Yeast Artificial Chromosomes (YACs)
2.
Bacterial Artificial Chromosomes (BACs)
3.
Plant Cloning Vectors
4.
Mammalian Cell Vectors
Powerpoint Templates
Page 8
VEKTOR KLONING-PLASMID
Bagian Ekstrakromosom DNA : tidak terlalu dibutuhkan bakteri
Memiliki beberapa fungsi : resisten antibiotik, menghasilkan pigmen,
degradasi komponen dan fiksasi dinitrogen
Dapat disisipi DNA sampai 10 kb
Memiliki high copy number atau low copy number
Contoh: pBR322 : plasmid pertama, memiliki ciri:
1. molekul kecil dan mudah diisolasi
2. Dapat disisipi DNA 5 -10 kb
3. Memiliki beberapa unique restriction sites
4. Memiliki gen yang mengkode resisten ampicillin (ampr) dan tetracycline (tetr)
Powerpoint Templates
Page 9
Powerpoint Templates
Page 10
PLASMID
Powerpoint Templates
Page 13
Powerpoint Templates
Page 14
VEKTOR KLONING-BACTERIOPHAGE
Menginfeksi bakteri, DNA direkayasa dalam vektor kloning
Membunuh bakteri melalui 2 jalur:
1. Litik
penting karena DNA phage rekombinan dapat dimasukkan
kedalam bakteri. Bakteri mati, membentuk area jernih
plaques berarti DNA rekombinan dapat di isolasi
2. Lisogenik :
Genom phage diintegrasikan kedalam DNA bakteri, bereplikasi
sama dengan genom sel bakteri
BACTERIOPHAGE
Struktur: head, tail, tail fibres
Dapat disisipi DNA sepanjang >20 kb
Replacement VectorsVektor phage
yang memiliki segmen DNA non
esensial dapat dihilangkan untuk
digantikan DNA asing.
BACTERIOPHAGE LAMBDA
Phage lambda E. coli sebagai
inang.
Lambda viral genome: DNA
48,5 kb linier dengan 12 basa
ssDNA "sticky end" pada kedua
ujung; ujung tsb komplemen
sekuennya dan dapat dihibridkan
satu sama lain (cos site: cohesive
ends).
Infection: lambda tail fibres
masuk ke reseptor permukaan sel,
ekor berkontraksi, DNA
dimasukkan.
DNA sirkuler pada cos site, dan
mulai siklus hidupnya pada inang
E. coli.
VEKTOR KLONING-COSMID
Plasmid kecil yang mengandung satu atau dua lamda cos
site (cohesive termini) dari phage DNA, plasmid origin
of replication, dan gen untuk resisten antibiotik
Di bungkus dalam protein secara in vitro, tetapi plasmid
bereplikasi seperti plasmid bukan DNA phage setelah
berada dalam bakteri
Dapat membawa segmen DNA sebesar 35 45 kb.
Powerpoint Templates
Page 24
VEKTOR KLONING-PACs
Powerpoint Templates
Page 26
VEKTOR KLONING-TANAMAN
Digunakan untuk tujuan : resistensi penyakit, hama dan
herbisida; meningkatkan kualitas tanaman dan hasil;
meningkatkan kualitas nutrisi; dan meningkatkan masa
simpan pangan.
Contoh vektor tanaman tobacco mosaic virus dan Ti
plasmid dari bakteri tanah Agrobacterium tumefaciens.
tobacco mosaic virus
VEKTOR KLONING-TANAMAN
Agrobacterium tumefaciens menyebabkan
penyakit empedu mahkota (pembentukan tumor)
pada tanaman, disebabkan oleh T-DNA (DNA
transfer), terletak di Ti plasmid, dan berisi delapan
gen yang diintegrasikan ke dalam genom tanaman
Ti plasmid kekurangan gen penyebab tumor, tetapi
memiliki gen yang diperlukan untuk
mengintegrasikan DNA bunga ke dalam genom
tanaman.
Plasmid disisipkan kedalam embryo tanaman
melalui perendaman benih dengan rekombinan
bakteri A. tumefaciens , atau dengan memasukkan
plasmid Ti ke dalam sel, yang akan menumbuhkan
tanaman
Page 28
Adenovirus
Page 32