2

Biologia da Propagao Clonal

No processo evolutivo das tcnicas de propagao de plantas, o

desenvolvimento da cincia, aliado ao processo produtivo, mostrou-se sempre
necessrio para alcanar os objetivos almejados na multiplicao e preservao de
material gentico selecionado. O conhecimento de algumas reas da propagao de
plantas considerado imprescindvel ao bom desempenho no processo de
multiplicao destas. Hartmann et al. (2002), por exemplo, citam a arte da
propagao, a cincia da propagao e o conhecimento das plantas.

A arte da propagao: o sucesso da propagao de plantas requer domnio

da tcnica para manipulao adequada do seu crescimento. Caractersticas
como habilidade, prtica, dedicao e experincia pessoal na conduo do
processo de propagao das plantas so indispensveis. A existncia de
informaes cientficas de determinadas tcnicas e uma ampla aplicao das
mesmas, para as mais variadas espcies e usos, facilitam a adoo de uma
em detrimento da outra de forma mais racional e vivel na propagao
daquela planta.
A cincia da propagao: a propagao de plantas requer perspiccia e
conhecimento quanto a morfognese, desenvolvimento e crescimento, bem
como, conhecimento bsico de fsica, qumica, nutrio e aspectos de
ecologia do ambiente de propagao. Estes conhecimentos podem ser
obtidos empiricamente durante o processo de propagao das plantas e
incrementados pelo conhecimento adquirido no ensino formal de qumica,
fsica, botnica, gentica e fisiologia de plantas, assim como das informaes
cientficas advindas dos avanos obtidos na pesquisa cientfica.

12
O conhecimento das plantas: no processo evolutivo das tcnicas de
propagao, as vrias tcnicas foram avaliadas, aperfeioadas e, ou,
ajustadas s diferentes exigncias fisiolgicas e ambientais de cada espcie,
em funo dos objetivos desejados, das experincias adquiridas, avanos
tecnolgicos e da estrutura disponvel. Assim, o sucesso da propagao est
no conhecimento das plantas e das tcnicas adequadas a ela em uma dada
condio e necessidade.
As trs reas de conhecimento da propagao de plantas mencionadas so
complementares e necessrias, em que a teoria compartilhada com a prtica, aliada
ao conhecimento da planta que est sendo multiplicada permitem alcanar os
objetivos com maior eficincia e qualidade.
A maioria das espcies lenhosas normalmente de natureza heterozigtica,
imposta pela alogamia quase que obrigatria no processo de reproduo das
plantas e, na maioria das espcies, a forma principal e natural de propagao por
via seminal. Diante disso, a alternativa utilizada no setor florestal para a obteno de
materiais superiores, visando atingir determinados propsitos, foi a utilizao da
propagao vegetativa no processo de produo de mudas clonais.
As expresses propagao vegetativa, propagao assexuada e
propagao clonal de plantas tm sido utilizadas rotineiramente para designar a
multiplicao e produo de novas plantas usando propgulos vegetativos de uma
planta ou clone especfico. No entanto, em algumas situaes, determinada
expresso pode ser preferida em funo dos objetivos que esta busca enfocar;
assim, a expresso propagao assexuada tem sido utilizada, principalmente,
quando pretende-se referenciar o modo de reproduo de uma planta; a expresso
propagao vegetativa tem sido utilizada mais para referenciar a forma de
propagao de uma planta em um processo de produo de mudas; e quando se
tratar de produo de mudas de um determinado clone, a expresso propagao
clonal tem sido empregada. Logicamente que estas expresses tm sido utilizadas
de forma indiscriminada, e que em muitas das situaes elas so formas alternativas
de expressar a forma de propagao de uma determinada planta. Outras
expresses como propagao agmica e propagao somtica tambm so
encontradas na literatura para referenciar este tipo de propagao de plantas. No
entanto, de forma geral, a expresso propagao vegetativa tem sido aquela com
maior difuso nas diversas reas que atuam com a propagao de plantas.

13

Princpios Biolgicos da Propagao de Plantas

Na propagao vegetativa, a mitose o processo responsvel pelo controle,
desenvolvimento e crescimento das plantas, na qual mantida a identidade gentica
da planta matriz. Dessa forma, um propgulo constitui-se de parte de uma
determinada planta usada para produzir uma ou mais novas plantas. Entre os vrios
tipos de propgulos incluem-se as sementes (propagao sexuada), estacas,
estruturas florais, segmentos vegetativos e vrios tipos de estruturas especializadas
como gemas, calos, bulbos, estoles. O uso de um propgulo em detrimento de
outro est em funo dos objetivos desejados, da espcie, disponibilidade de
material vegetativo e estrutura de propagao disponvel.
A cincia da propagao vegetativa de plantas baseia-se em alguns dos
princpios bsicos da biologia. Em um processo de organognese in vitro, por
exemplo, segundo Peres (2002), vrias so as etapas envolvidas na regenerao de
uma planta (Figura 1).

Propgulo

Planta

Aquisio de
competncia

Desdiferenciao

Regenerao

Diferenciao

Induo

Determinao

Figura 1 - Etapas envolvidas na regenerao de uma planta em um processo de propagao

por organognese in vitro. Adaptado de Peres (2002).

Organognese significa o processo de neoformao de partes areas,

razes ou de outros tipos de explantes, na condio in vitro ou in vivo; contrastando
com a embriognese na qual se forma uma estrutura semelhante ao embrio, com
eixo polar (radcula - parte area) completo. A condio in vitro indica, literalmente,
no vidro, termo aplicado para designar crescimento de clulas, tecidos ou rgos
vegetais em meio de cultura, sob condies asspticas.
Desdiferenciao

constitui-se

no

processo

pelo

qual

uma

clula

diferenciada perde suas caractersticas especficas, reassumindo atividades

meristemticas, ou seja, processo de alcanar um estado meristemtico no
diferenciado em clulas previamente diferenciadas.

14
O termo competncia usado para descrever o potencial de uma
determinada clula ou tecido em se desenvolver em uma forma particular, como por
exemplo, a competncia para iniciar enraizamento adventcio, um embrio ou uma
flor. O desenvolvimento da competncia por um tecido requer certa quantidade de
tempo e, ou exposio a um sinal endgeno ou exgeno.
A induo indica o que causa a iniciao ou desenvolvimento de uma
estrutura ou processo.

O termo determinao, refere-se ao grau de

comprometimento que um grupo de clulas tem perante a um direcionamento

naquele momento. A diferenciao significa as mudanas fisiolgicas, morfolgicas
e anatmicas que ocorrem em uma clula, tecido, rgo ou planta, durante o
desenvolvimento do estado meristemtico ou juvenil para o adulto.
Todo o processo de regenerao de uma planta pela propagao vegetativa
somente possvel dada a totipotencialidade das clulas vegetais em manifestar,
em momentos diferentes e sob estmulos apropriados, a potencialidade em iniciar
um novo indivduo multicelular. Em vista da totipotncia que toda clula viva
possui, esta tem potencial para reproduzir um organismo inteiro, desde que possua
informao gentica para tal expresso gnica. O termo expresso gnica referese aos padres de desenvolvimento e crescimento das plantas, decorrente da
informao gentica contida no genoma daquela planta, associada s condies
ambientais. Dessa forma, as variaes fenotpicas observadas em plantas so
manifestaes resultantes das informaes genticas para formao de suas
estruturas, padres de crescimento e funes, exercendo controle primrio no
processo de propagao.
Embora a organognese seja um processo considerado emprico, segundo
Peres (2002), o desenvolvimento de um protocolo facilitado se forem seguidos
alguns princpios e conhecimentos fisiolgicos. De acordo com este autor,
normalmente o sucesso da propagao por organognese in vitro dependente
principalmente da etapa de aquisio de competncia, pois quando um explante
falha em desenvolver organognese in vitro, essa se d normalmente na etapa de
aquisio de competncia. Contudo, pouco se conhece, at o momento, sobre os
mecanismos envolvidos neste processo.
De acordo com o exposto, o conhecimento dos princpios bsicos da biologia
ajuda a compreender melhor a propagao de uma planta, facilitando a sua
multiplicao clonal, assim como acompanhar a histria do desenvolvimento do

15
organismo durante o seu ciclo vital, ou seja, a ontogenia da planta.

Ao Hormonal nas Plantas

Hormnios vegetais so um grupo de substncias orgnicas de ocorrncia
natural que, em pequenas concentraes, influenciam os processos fisiolgicos de
crescimento, diferenciao e desenvolvimento (DAVIES, 1995). So substncias
conhecidas h muito tempo, entretanto, sua ao nas plantas foi melhor entendida
nos ltimos anos.
Dentre os hormnios de plantas mais conhecidos e de interesse na
propagao de plantas destacam-se as auxinas, giberelinas, citocininas, etileno e
cido abscsico. Em certas condies, essas substncias possuem efeito quando
aplicadas nas plantas exogenamente, sendo denominadas de reguladores de
crescimento vegetal e, ou fitorreguladores.

Auxinas: So compostos com atividade biolgica similar aquela do cido indol-3actico (AIA), incluindo a capacidade de promover o alongamento de coleptilos de
segmentos de caules, diviso celular em culturas de calos em presena de
citocininas, formao de razes adventcias em folhas ou caules destacados e outros
fenmenos do desenvolvimento relacionados com a ao do AIA (TAIZ & ZEIGER,
2004).
Segundo

Vlio

(1985),

as

auxinas

so

sintetizadas

nas

plantas,

principalmente, em regies de crescimento ativo, como o meristema apical, gemas

axilares e folhas jovens, sendo translocadas para diferentes rgos, segundo o
mecanismo de transporte polar e baspeto. O AIA a principal auxina nos vegetais
superiores (TAIZ & ZEIGER, 2004) e, segundo os mesmos autores, embora quase
todos os tecidos vegetais sejam capazes de produzir baixos nveis de AIA, os
meristemas apicais, as folhas jovens, os frutos e as sementes em desenvolvimento
so os principais locais de sntese deste hormnio.
A aplicao da auxina em rgos isolados promove aumento da resposta,
paralelamente ao aumento da concentrao at certo nvel, aps o qual ocorre um
efeito inibitrio. Entretanto, a resposta da planta auxina endgena ou exgena,

16
varia tanto com a natureza do tecido, quanto com a concentrao da substncia
presente.
As principais aplicaes das auxinas na propagao de plantas so a
induo de razes adventcias em estacas e o controle da morfognese na
micropropagao. Segundo Taiz & Zeiger (2004), as auxinas tambm promovem o
crescimento de caules e coleptilos, inibem o crescimento de razes, regulam a
dominncia apical, retardam o incio da absciso foliar e regulam o desenvolvimento
das gemas florais e frutos.
Fisiologistas tm buscado definir o modo de ao qumica das auxinas nas
plantas. Acredita-se que a promoo de crescimento pelas auxinas ocorre por meio
de dois mecanismos: a) pela promoo de transporte de ons de H+ pelas paredes
celulares, aumentando sua extenso; e b) pela induo da transcrio de RNAm
especfico necessrio para promover o crescimento. Em morfognese, a aplicao
de auxina parece capaz de apagar programas de diferenciao celular, revertendo
clulas em estado de diferenciao e reabilitando a diviso celular.
Dentro do grupo das auxinas, Taiz & Zeiger (2004) salientam que o AIA
ocorre em todos os vegetais, mas outros compostos relacionados apresentam
atividade auxnica; mostarda e milho contm cido indol-3-butrico (AIB). Alm do
AIA, vrias outras substncias com funes regulatrias de crescimento semelhante
e com aplicao na propagao das plantas so produzidas sinteticamente: cido
indol-3-butrico (AIB), cido naftalenoactico (ANA), o 2,4-diclorofenoxiactico (2,4D), entre outros.

Citocininas: Constituem um grupo de hormnios de grande importncia no

crescimento das plantas, visto os efeitos na diviso celular e diferenciao de
gemas. Os meristemas dos pices radiculares so as regies da planta de maior
sntese de citocininas livres, as quais parecem se mover pelo xilema at a parte
area, juntamente com a gua e os sais minerais absorvidos pelas razes (TAIZ &
ZEIGER, 2004).
O equilbrio entre a auxina e citocinina uma das relaes primrias na
propagao de plantas, em que uma alta relao auxina/citocinina favorece o
enraizamento; uma baixa relao favorece a formao de brotaes e; um alto nvel
de ambas favorece o desenvolvimento de calo. Vale salientar, tambm, que a
interao entre citocinina, cido abcsico e giberelinas controla a dormncia de

17
sementes.
Alm dos efeitos na diviso celular, as citocininas tambm so importantes
na morfognese in vitro pela induo do caule, no crescimento de caules e razes,
na expanso foliar, no movimento dos nutrientes, no retardamento da senescncia
foliar, entre outros (DAVIES, 1995; TAIZ & ZEIGER, 2004).
As citocininas de maior interesse na propagao de plantas e de ocorrncia
natural so a Zeatina (ZEA) e a Isopenteniladenina (2iP). Quanto s citocininas
produzidas sinteticamente, alm das citadas anteriormente, existem a 6benzilaminopurina (BAP), Cinetina (KIN) e o Thidiazuron (TDZ).

Giberelinas, cido Abscsico e Etileno: As giberelinas ocorrem em altas

concentraes nas sementes imaturas e nos frutos em desenvolvimento e possuem
importante funo na germinao e no controle da dormncia. Ocorrem tambm em
altas concentraes em pices caulinares, sendo transportadas no interior da planta
pelo xilema e floema (DAVIES, 1995). Entre as funes nas plantas esto aquelas
relacionadas com a promoo do alongamento de brotaes por meio da diviso
celular e alongamento, alm da regulao da transio da fase juvenil para a adulta
em muitas plantas lenhosas. Mais de 125 formas de giberelinas foram encontradas
nas plantas, embora somente algumas se apresentam fisiologicamente ativas e, em
particular GA1 e GA4, so responsveis pelos efeitos nas plantas, sendo as demais
precursores ou metablitos (TAIZ & ZEIGER, 2004). O cido giberlico (GA 3 ) uma
das mais importantes como produto comercial.
O cido abscsico enquadra-se na classe de inibidores de crescimento e
considerado importante em muitas atividades das plantas. Na propagao de
plantas, este inibidor est envolvido na germinao e dormncia, bem como, na
embriognese e produo das sementes (HARTMANN et al., 2002).
O etileno um regulador de crescimento gasoso com estrutura qumica
muito simples e que, segundo Hartmann et al. (2002), pode ter efeitos profundos no
crescimento das plantas, incluindo a epinastia quando em altas concentraes,
senescncia e absciso de folhas e frutos, promoo do florescimento, estimulao
das gemas laterais e estimulao da produo do ltex. Na propagao, o etileno
pode induzir enraizamento adventcio, estimular a germinao em algumas
sementes e superar dormncia.
Na Tabela 1 apresentado um resumo das principais classes de

18
reguladores de crescimento e os respectivos componentes mais aplicados na
propagao das plantas. Salienta-se que as concentraes de uso e formas de
preparo variam muito em funo da tcnica de propagao adotada, do tipo de
material e da espcie utilizada.
Tabela 1 - Classes de reguladores de crescimento e respectivos componentes mais
aplicados na propagao das plantas.
Classes de
Reguladores

Abreviatura

Massa Molar
(g mol-1)

Nome Qumico

AUXINAS

AIA
AIB
ANA
2,4-D

175,2
203,2
186,2
221,0

cido indol-3-actico
cido indol-3-butrico
cido naftalenoactico
cido 2,4-diclorofenoxiactico

CITOCININAS

Zea
2iP
BAP
TDZ
KIN

219,2
203,2
225,3
220,2
215,2

N -(4-hidroxi-3-metilbut-2 enil) aminopurina (zeatina)

Isopenteniladenina
6-benzilaminopurina
Thidiazuron
6-furfuriloamino-purina

GIBERELINAS

GA 3

346,4

cido giberlico

INIBIDORES

ABA

264,3

cido abscsico

Outros hormnios: alm das substncias citadas, outros compostos qumicos

naturais ocorrem em plantas e so considerados como hormnios. Incluem-se nesta
classe as poliaminas, os brassinoesterides, os jasmonatos, os salicilatos, alguns
complexos oligossacardeos e inositol trifosfato.

Juvenilidade e Maturao em Plantas Lenhosas

As plantas apresentam ao longo de sua vida consecutivos perodos de
crescimento vegetativo (formao de caule, folhas e razes) e de desenvolvimento
reprodutivo (formao de flores, frutos e sementes), determinados por padres
sazonais baseados em mudanas climticas (temperatura, luz e/ou precipitao) e
pela resposta s mudanas durante o ciclo de vida.
Ciclos de vida superiores a dois anos caracterizam as plantas perenes, as
quais

apresentam

repetidos

ciclos

vegetativo-reprodutivos,

anualmente,

bianualmente ou em perodos mais longos. Em geral, arbustos tm maior perodo de

19
juvenilidade em relao s rvores e, embora a fase madura ocorra em plantas
herbceas anuais e perenes, esta geralmente menor quanto durao e, as
mudanas nas caractersticas morfo-fisiolgicas associadas s trocas de fase, so
menos distintas do que em outras plantas (HACKETT, 1987). As mudanas
ocorridas durante estes ciclos apresentam grande importncia no processo de
propagao de plantas, em que pode-se caracterizar as seguintes fases (Figura 2):

Fase juvenil: caracterizada pela predominncia de caractersticas juvenis;

correspondente ao estdio inicial de crescimento vegetativo das plantas aps
a germinao e, em algumas plantas, pela incapacidade dos meristemas
apicais em induzir florescimento, mesmo que condies favorveis para tal
existam.
Fase de transio juvenil/adulta: caracteriza-se pela transio entre a fase
vegetativa e reprodutiva, ou seja, pela passagem da planta da fase juvenil
para uma condio madura.
Fase adulta: corresponde quela fase com predominncia de caractersticas
maduras em relao s juvenis. caracterizada, principalmente, pela fase
reprodutiva das plantas, ou seja, pela fase em que ocorre o florescimento e
frutificao da planta.

Semente

Senescncia

Fase juvenil

Fase de transio

Fase adulta

Figura 2 Fases do ciclo de vida das plantas perenes.

O ciclo de vida de muitas espcies refere-se s fases juvenil e adulta, nas

quais as caractersticas morfolgicas e fisiolgicas so diferentes. Aps a
germinao da semente, a planta inicia uma fase de crescimento vegetativo muito
vigoroso, durante a qual a florao no pode ser induzida, mesmo que as condies

20
externas sejam favorveis (SALISBURY & ROSS, 1978). Assim, a fase juvenil de
algumas plantas caracterizada pelo no florescimento, grande vigor e presena de
espinhos; a fase adulta pelo florescimento e frutificao, reduzido vigor e ausncia
de espinhos (HARTMANN et al., 2002).
Quanto regulao da troca de fase, evidncias predominantes sugerem
que a planta necessita ter um determinado tamanho antes de entrar na fase adulta
(HACKETT, 1987). Alm disso, segundo Hackett & Murray (1993), as mudanas
ocorridas em funo da troca de fase com o desenvolvimento da planta variam de
espcie para espcie, sendo que as maiores alteraes ocorrem no perodo
precedente maturao, resultando em formas transicionais. Segundo estes
autores, as caractersticas relacionadas maturao so estveis, porm reversveis
para determinadas caractersticas, variando em decorrncia do tempo de
desenvolvimento. Para Greenwood (1992), a maturao uma determinao celular
regulada por fatores intrnsecos e extrnsecos das clulas do meristema apical.
A maturao freqentemente confundida com a idade cronolgica, embora
a maturao seja reversvel sob certas condies e a idade provavelmente no. De
forma geral, com o avano da idade, a planta ou rgo tende senescncia e morte,
enquanto o meristema apical adulto de plantas pode ter sua juvenilidade restaurada,
ou seja, rejuvenescida (HUANG et al., 1990). Segundo Hackett & Murray (1993),

as caractersticas de maturao se arquivam em funo da sua relativa

estabilidade e so transmitidas por meio das divises celulares de uma
gerao somtica para a prxima.
Com base na conceituao de maturao apresentada por Fortanier &
Jonkers (1976), pode-se descrever trs tipos de idade em uma planta:
Idade cronolgica: refere-se ao tempo decorrido desde a germinao da
semente at a data de observao da planta, ou seja, a idade registrada do
tempo de vida de uma planta ou propgulo.
Idade ontogentica: refere-se a passagem da planta por sucessivas fases de
desenvolvimento, as quais incluem a embriognese, germinao, crescimento
vegetativo e reprodutivo. Corresponde a maturao da planta, passando pela
fase juvenil, de transio juvenil-adulta e adulta.
Idade fisiolgica: corresponde ao aspecto de vigor fisiolgico da planta,
como sanidade e status nutricional e hdrico. Refere-se aos aspectos
negativos da idade, tais como a perda de vigor, aumento da susceptibilidade
s condies adversas ou a deteriorao em geral.

21

De modo geral, em algumas espcies florestais, h um gradiente de

juvenilidade ontogentica em direo base da rvore, sendo este varivel entre
espcies (HACKETT, 1987), o que promove um aumento da maturao em funo
da maior proximidade com o meristema apical (GREENWOOD & HUTCHISON,
1993). A maior juvenilidade da regio basal das plantas se deve ao fato de que os
meristemas mais prximos da base foram formados em uma fase com maior grau de
juvenilidade, dada a proximidade com a fase de germinao, do que os das regies
terminais que possuem maior grau de maturao (Figura 3).

Figura 3 Gradiente de juvenilidade em plantas

lenhosas. (A): regio com maior grau de
juvenilidade ontogentica. (B): regio com maior
grau de maturidade ontogentica.

O conhecimento do gradiente de juvenilidade em plantas lenhosas de

grande importncia em um processo de propagao clonal, uma vez que a origem
dos propgulos vegetativos utilizados possui efeito marcante na produo de mudas
e no comportamento da futura planta. Os propgulos vegetativos de diferentes
posies da planta retm os nveis especficos de juvenilidade (ou maturidade)
quando so retirados da planta e propagados vegetativamente. Como resultado, a
morfologia e a fisiologia das plantas resultantes dos propgulos oriundos das
diferentes partes da planta matriz podem apresentar diferenas significativas dentro
das trs categorias de fase juvenil, juvenil/adulta e adulta.
O conhecimento da espcie, a definio dos objetivos a serem alcanados
com determinada tcnica de propagao vegetativa, a escolha e o uso correto dos
propgulos

vegetativos

de

extrema

importncia.

Quando

desejado

um

comportamento mais juvenil da planta a ser propagada, deve-se utilizar propgulos

oriundos das partes mais juvenis (fase juvenil) da planta matriz. Por outro lado,

22
quando se deseja uma planta com comportamento maduro, tal como a manifestao
do florescimento precoce e porte reduzido, deve-se preferir propgulos oriundos das
partes mais adultas (fase adulta) da planta matriz.
Na propagao vegetativa das plantas, os conceitos apresentados
anteriormente so de grande importncia em funo dos diferentes tipos de
propagao de plantas e dos objetivos almejados. A compreenso do ciclo de vida
das plantas facilita o entendimento da biologia da propagao e serve como suporte
nas atividades de multiplicao clonal em espcies florestais. O entendimento da
troca da fase juvenil para a adulta permite conduzir com maior sucesso o processo
de clonagem de rvores selecionadas, resultando em maior eficincia da etapa de
seleo, melhoramento e clonagem e, conseqentemente, em uma silvicultura clonal
intensiva mais eficiente.

Efeitos da Maturao
Na propagao clonal em espcies florestais, as principais conseqncias
da mudana da fase juvenil para a adulta de uma planta, esto relacionadas aos
efeitos no crescimento, efeito topfise e ciclfise, mudanas nas caractersticas
foliares e caulinares, capacidade de enraizamento, competncia reprodutiva,
alteraes bioqumicas e expresso gnica.
A mudana de fase em espcies florestais um fenmeno bem mais
complexo, onde esto envolvidos um nmero bem maior de alteraes do que as
aqui apresentadas, as quais, na sua maioria, ainda no so bem conhecidas e
entendidas.

Hbito e Vigor de Crescimento das Plantas

Entre os principais efeitos da maturao relacionados ao crescimento de
espcies florestais esto aqueles relacionados com o hbito de crescimento e os
efeitos no crescimento em altura e dimetro das plantas.
O crescimento das brotaes das plantas pode variar em funo da
maturidade dos propgulos que as originaram. Segundo Greenwood & Hutchison
(1993), na propagao vegetativa pela enxertia ou estaquia, por exemplo, as plantas

23
originadas de propgulos juvenis possuem maior tendncia em apresentar hbito de
crescimento ortotrpico do que aquelas plantas originadas de propgulos mais
maduros. Dependendo da espcie, pode-se observar plantas com ntido hbito de
crescimento plagiotrpico quando esta origina-se de propgulo vegetativo maduro
na propagao clonal. O crescimento plagiotrpico refere-se situao em que
algumas plantas propagadas vegetativamente assumem um crescimento desviado
da posio vertical (ortotropia) e continuam seu crescimento de forma similar a uma
ramificao lateral (crescimento plagiotrpico).
Segundo dados experimentais de Greenwood & Hutchison (1993) e Parker
et al. (1998), rvores originadas por enxertia ou enraizamento de estacas de
propgulos juvenis de Tsugar canadensis e Pinus taeda tendem a exibir maior
nmero de brotaes por unidade de rea, bem como maior tendncia ao
crescimento ortotrpico, em comparao com aquelas de propgulos maduros.
Em Araucaria angustifolia e Coffea arabica, mudas produzidas por
enraizamento de estacas coletadas de brotaes laterais continuam tendo
crescimento plagiotrpico, enquanto estacas coletadas de brotaes da parte apical
se desenvolvem normalmente (HARTMANN et al., 2002), sendo a mesma resposta
encontrada em Platanus occidentalis (LAND et al., 1995).
Para espcies do gnero Eucalyptus, no foram encontrados estudos
referentes aos efeitos de gradientes de maturidade dos propgulos utilizados na
propagao. Porm, em nveis de viveiro e campo, podem-se observar plantas com
caractersticas que lembram o crescimento plagiotrpico (Figura 4).

Figura 4 Hbito de crescimento em mudas. (A): Eucalyptus sp.; (B): Grevillea robusta.
Crescimento ortotrpico esquerda e plagiotrpico direita, respectivamente.

Na literatura tm sido amplamente abordados os conceitos de topsise e

ciclfise, embora estes ainda no sejam bem compreendidos. Em espcies
florestais, estes efeitos possuem especial importncia, visto as dificuldades

24
encontradas na propagao vegetativa em vrias situaes na produo de mudas.
Para o presente caso, topfise refere-se ao efeito na propagao clonal resultante
da diferena de estgio de desenvolvimento potencial fisiolgico do meristema
apical,

quando

comparado

com

outras

reas

meristemticas

da

planta,

independentemente do processo de maturao do meristema apical (DODD &

POWER, 1988). Em outras palavras, o fenmeno de topfise pode ser entendido
como um efeito da origem do propgulo vegetativo que se manifesta nos processos
assexuados de reproduo, atravs da menor ou maior performance na propagao
vegetativa. A ciclfise refere-se ao efeito na propagao clonal decorrente do
processo de maturao do meristema apical. o estdio em que se encontram as
regies meristemticas da planta no momento da seleo do propgulo vegetativo
(DODD & POWER, 1988). Pode-se dizer que o efeito topfise relaciona-se com a
idade fisiolgica e o efeito ciclfise relaciona-se com a idade ontogentica.
Os termos topsise e ciclfise podem se confundir quando analisados
quanto morfologia dos propgulos vegetativos envolvidos no processo de
propagao clonal. Nesse processo, a minimizao destes efeitos est na utilizao
de propgulos vegetativos fisiologicamente mais novos e em idade ontogentica
mais juvenil quanto possvel. Excees so apresentadas em algumas conferas
florestais, como a Araucaria angustiflia, na qual pode ser observado que os
propgulos vegetativos provenientes das brotaes apicais (ortotrpicas) originam
plantas com crescimento tipicamente na vertical, enquanto que propgulos
provenientes das brotaes laterais (plagiotrpicas) resultam em plantas com
crescimento na horizontal, independentemente da idade dos propgulos vegetativos.

Crescimento em Altura e Dimetro das Plantas

Informaes cientficas contemplando a influncia do grau de maturao do
propgulo vegetativo no crescimento em altura e dimetro das plantas propagadas
vegetativamente, so pouco conhecidas e compreendidas. No entanto, segundo
Greenwood & Hutchison (1993), a capacidade de crescimento em altura e dimetro
de uma planta pode ser afetada pelo uso de propgulos vegetativos provenientes de
rvores de diferentes idades. Segundo estes autores, pesquisas demonstram a
reduo na capacidade de crescimento em altura e dimetro, com o envelhecimento
ontogentico, na propagao clonal por enxertia e/ou por estaquia a partir de

25
propgulos com diferentes idades. Salientam, ainda, que isto pode ser decorrente do
decrscimo da capacidade de enraizamento com o aumento da maturao, onde
menores crescimentos em altura e dimetro podem ser funo de um menor vigor do
sistema radicial em propgulos mais maduros utilizados em um processo de
propagao clonal. Propgulos vegetativos mais juvenis no somente produzem
maior crescimento do caule, mas tambm sustentam maior produo de folhas e
biomassa (GREENWOOD, 1992).
O estdio juvenil possibilita o maior crescimento vegetativo da planta e a
produo de grande rea foliar, como tambm a produo de fotoassimilados a
serem, posteriormente, utilizados no desenvolvimento dos frutos e do sistema
radicular, facilitando a absoro de gua e ons do solo (BOLIANI, 1986).
Alguns autores tm sustentado que o reduzido crescimento em dimetro e
altura em rvores mais velhas devido ao aumento da complexidade e tamanho da
rvore, isto , idade e no maturao (HACKETT, 1987; ZIMMERMANN et al.,
1985, citados por GREENWOOD & HUTCHISON, 1993).

Mas, de acordo com

estes, o fato de enxertos de mesmo tamanho inicial, de rvores com diferentes

idades, apresentarem taxas de crescimento diferenciadas indica que o decrscimo
do potencial de crescimento tambm relacionado s caractersticas de maturao.
A mesma concluso pode ser extrada de pesquisa realizada por Parker et al.
(1998), que, avaliando mudas originrias de enxertia em plantas de Pinus elliottii,
aps seis anos no campo, observaram crescimentos em altura e dimetro
significativamente superiores em mudas resultantes de enxertos com idade de 6 a 9
anos (juvenis), em comparao com aquelas de enxertos com idades acima de 40
anos. Enfim, as informaes cientficas indicam que menor vigor pode ser
decorrente do envelhecimento, maturao ou ambos.

Anatomia Foliar e Caulinar

Durante o desenvolvimento ontogentico, a planta apresenta uma srie de
alteraes morfolgicas e fisiolgicas relacionadas com partes foliares e caulinares,
tais como mudanas de forma (Figura 4), dimenso, pigmentao (clorofila e
antocianina), atividade fotossinttica, entre outras. Segundo vrios autores
(BOLIANI, 1986; HACKETT, 1987; FOUDA, 1996; HARTMANN et al., 2002), estas
mudanas decorrem da troca da fase juvenil para a adulta, afetando sensivelmente a

26
propagao vegetativa das plantas. Em Eucalyptus, por exemplo, na fase juvenil as
folhas so largas, extensas e sem pecolo, enquanto na fase adulta so alongadas e
apresentam um pecolo distinto (Figura 5A e 5C). Diferenas similares podem ser
observadas para algumas espcies do gnero Pinus (Figura 5B).

B
C

Figura 5 - Diferenas morfolgicas entre brotos na fase juvenil e adulta de algumas plantas
lenhosas. (A): Eucalyptus benthamii, (B): Pinus canariensis; (C): Eucalyptus globulus.
Brotos adultos esquerda e juvenis direita, respectivamente.

Em algumas situaes tem sido relatada a maior resistncia foliar a doenas

com o envelhecimento ontogentico e, segundo Greenwood & Hutchison (1993),
especula-se que seja devido a maior resistncia a penetrao do fungo. Segundo
FOUDA (1996), folhas de ramos juvenis apresentam forma mais cnica, a epiderme
recoberta por uma fina camada de cutcula com alta densidade estomatal, mesfilo
espesso com ductos de resina menores e em menor concentrao do que em folhas
adultas; ramos juvenis apresentam crtex, floema, zona cambial, medula e raios do
xilema e floema mais espessos do que adultos.
Em Tectona grandis, o nmero de elementos de vaso, comprimento e
largura dos elementos de vaso e de fibra foram menores em estacas caulinares
oriundas de plantas juvenis, com dois meses de idade (HUSEN & PAL, 2006). Estes
valores cresceram com o aumento da idade da planta matriz, sendo maiores
naquelas de 30 anos. Segundo os autores, as referidas caractersticas anatmicas
podem ser usadas como marcadores confiveis do grau de maturao na espcie
estudada e, talvez, para outras espcies.

Capacidade de Enraizamento Adventcio

Uma das mais consistentes expresses da maturao em plantas lenhosas

27
refere-se ao potencial de regenerao, em que a reduo da capacidade do
enraizamento de propgulos vegetativos, com o envelhecimento ontogentico, tem
sido considerado como um dos principais efeitos na propagao clonal.
Vrios estudos indicam que o potencial de enraizamento de propgulos
vegetativos, obtidos em diferentes alturas da planta matriz, varia com o gradiente de
maturao. Assim, propgulos coletados do pice e dos ramos laterais das plantas
geralmente apresentam menor potencial de enraizamento do que aqueles coletados
das regies mais prximas base da rvore, embora ocorram grandes variaes em
termos de espcies.
Para a maioria das espcies lenhosas, estacas de mudas juvenis,
provenientes de sementes, enrazam facilmente, enquanto outras provenientes de
plantas mais velhas o fazem com maiores dificuldades, ou definitivamente no
enrazam. Vale salientar que a juvenilidade muitas vezes se perde antes mesmo da
planta alcanar a maturao reprodutiva.
Estudos em plantas de Tsugar heterophylla tm indicado que o potencial de
enraizamento de propgulos coletados de diferentes alturas da rvore matriz trazem
evidncias da existncia de um gradiente de maturao, com o grau de maturao
aumentando medida que se aproxima do pice da planta (GREENWOOD &
HUTCHISON, 1993).
O gradiente de maturao e seus efeitos no enraizamento podem variar
entre as diferentes espcies. Para Eucalyptus grandis, por exemplo, trabalhos tm
evidenciado que estacas cotiledonares tm alto potencial de enraizamento,
enquanto estacas coletadas acima do 150 n apresentam baixo enraizamento ou
no enrazam (HACKETT, 1987). Para Eucalyptus viminalis e Eucalyptus pauciflora,
Hackett (1987), relata que o alto potencial de enraizamento perdido
completamente aps o 4o n. Em Eucalyptus camaldulensis, esse mesmo autor
relata enraizamento de 40-50% em estacas do 100o n e em Eucalyptus deglupta,
100% de enraizamento em estacas coletadas acima do 100o n.
H vrias dcadas tem sido estudado o efeito da idade sobre o
enraizamento de estacas de Hevea brasiliensis (seringueira). Gregory (1951) cita
que alm da diminuio dos ndices de enraizamento com o aumento da idade da
planta fornecedora de propgulos, o tempo de enraizamento tambm bastante
influenciado. Segundo este autor, nesta poca dados experimentais com matrizes de
Hevea brasiliensis indicaram que estacas obtidas com plantas de 1 ms de idade

28
apresentaram 95% de enraizamento aos 28 dias, sendo observado a reduo
gradual do percentual de enraizamento e aumento do tempo de resposta ao
enraizamento a medida que as estacas foram obtidas de matrizes mais velhas.
Estas resultaram em apenas 7,5% de enraizamento aos 65 dias em plantas com 13
meses de idade e nenhuma resposta a partir de 24 meses de idade nas condies
experimentais adotadas. Tambm, Stahel (1947) cita que a propagao de Hevea
brasiliensis por estacas bem sucedida somente quando estacas so coletadas de
plantas muito novas ou de partes basais do caule de plantas mais velhas.
Para Ilex paraguariensis (erva-mate), Sand (1989) obteve enraizamento de
91,7% e 39,4% em estacas caulinares e foliares, respectivamente, provenientes de
plantas matrizes de um ano de idade, enquanto que apenas 6,8% e 2,6% para
aquelas oriundas de plantas de 60 anos. Estes resultados indicam que o fator
juvenilidade se perde aps trs anos de idade, sem, no entanto, terem ainda
alcanada a maturao reprodutiva, a qual iniciaria aps o quinto e sexto ano de
vida.
Alm do aumento dos percentuais de enraizamento em propgulos mais
juvenis, a melhor qualidade e a maior rapidez de formao do sistema radicial
tambm tm sido citadas (GOMES, 1987), denotada pelo aumento no vigor radicial
(nmero e comprimento de razes) relatado por Schneck (1996). Sand (1989) avaliou
o comprimento mdio das maiores razes de estacas oriundas de plantas de ervamate com seis meses, 18 meses e 60 anos de idade em comparao com estacas
oriundas de rebrotes de plantas de 60 anos. Obteve 11,5; 10,6; 8,4; e 5,8 cm,
respectivamente, para os quatro tratamentos, ressaltando a importncia do fator
juvenilidade dos propgulos no vigor do sistema radicial.
De maneira geral, pode-se admitir que quanto mais juvenil for o propgulo
vegetativo a ser propagado, maior a chance de sucesso de enraizamento quer em
termos de percentual, rapidez de formao e qualidade das razes, quer pela
capacidade de crescimento da nova planta.

Competncia Reprodutiva
A competncia reprodutiva, definida como a capacidade das plantas para a
formao de estruturas reprodutivas sob condies naturais ou induzidas, tem sido
utilizada tradicionalmente como critrio para caracterizar a fase adulta da planta, ou

29
seja, a mudana da fase juvenil para adulta (HACKETT & MURRAY,1993;
HARTMANN et al., 2002). Na maioria dos casos, a produo regular de flores o
nico critrio prtico para identificao do final da fase juvenil em uma planta
(HACKETT, 1987).
Entretanto, recentemente este critrio de troca de fase tem sido bastante
questionado, uma vez que a inaptido de plantas jovens em florescer no
necessariamente indica incompetncia reprodutiva, visto que a manipulao das
condies

ambientais

ou

tratamentos

hormonais

pode

induzir

florao

repetidamente nestas plantas (GREENWOOD & HUTCHISON, 1993). Na grande

maioria dos casos, porm, a competncia reprodutiva se manifesta quando a planta
apresenta um tamanho mnimo e entra no estado maduro.
Na maioria das conferas, caractersticas como a relao de estrbilos
masculinos e femininos produzidos tm sido usada como melhor indicador do estado
de maturao quando comparado competncia reprodutiva. De modo geral,
quanto maior a idade destas plantas, maior a produo de estrbilos masculinos em
relao aos femininos (GREENWOOD & HUTCHISON, 1993).

Alteraes Bioqumicas
Uma srie de estudos tm sido conduzidos em espcies lenhosas visando a
identificao de marcadores bioqumicos de juvenilidade dos propgulos. Em
Castanea sativa, Vazquez & Gesto (1982) encontraram maiores teores endgenos
de substncias promotoras de enraizamento em propgulos juvenis. Garcia et al.
(2000) avaliaram possveis diferenas na composio protica de vrios rgos
juvenis e adultos de plantas de oliveira (Olea europeae). Concluram que a
composio protica de rgos adultos e juvenis de uma mesma planta ou de
plantas diferentes foi qualitativamente similar, porm, pelo menos um grupo de
polipeptdeos de 29 kDa foi mais fortemente expresso em tecidos adultos. Relaes
similares tambm foram obtidas em vrios cultivares de diferentes origens genticas.
Nveis endgenos de reguladores de crescimento tm sido medidos em
tecidos juvenis e maduros de vrias espcies por diferentes autores. Segundo
extensa reviso realizada por Hackett (1987), h diferenas dos contedos
endgenos de auxinas e outros promotores entre tecidos juvenis e adultos, os
maiores teores foram encontrados em propgulos juvenis em relao aos maduros.

30
Estudos realizados por Mullins (1985), Fouret et al. (1986), Moncaln et al (2001)
resultaram na concluso de que propgulos maduros apresentaram maior contedo
de ABA, quando comparado aos juvenis. Resultados similares foram encontrados
para cultivares de macieira. Moncaln et al (2001) e Andrs et al. (2002) concluram
que a relao citocinina / IAA decresce com o decorrer da maturao dos
propgulos. Day et al. (1995) concluram que folhas juvenis continham mais
citocininas ativas do que folhas adolescentes ou adultas. Geneve (1985), citado por
Hackett (1987), encontrou diferenas significativas entre contedo de etileno em
tecidos maduros e juvenis, porm, estas diferenas no afetaram o percentual de
enraizamento.
Em estudo com Pinus radiata, Fraga et al. (2002) concluram que indivduos
juvenis foram caracterizados por um menor grau de metilao de DNA e uma alta
relao de poliaminas livres e poliaminas solveis conjugadas com cido perclrico,
enquanto que rvores adultas mostraram maior grau de metilao no DNA e uma
baixa relao de poliaminas livres e poliaminas solveis conjugadas com cido
perclrico. Baseados nestes resultados, os autores propuseram que ambos os
indicadores estariam relacionados com a perda da habilidade morfognica com o
avano da maturao e, conseqentemente, com a no-aptido de estabelecimento
in vitro de propgulos adultos de Pinus radiata.
Alm das variaes entre tecidos juvenis e adultos citadas anteriormente,
outras tm sido relatadas, como a concentrao de protenas solveis em tecidos,
concentrao de DNA em folhas (ALI & WESTWOOD, 1966), teor de poliaminas
(REY et al., 1994), contedo de clorofila (HUANG et al., 2003) e de antocianina nas
folhas (GREENWOOD, 1992; HACKETT & MURRAY, 1993).

Expresso Gnica
A expresso gnica tambm influenciada pelos efeitos da maturao dos
tecidos vegetais, pois a ativao ou supresso gnica transcricional ocorre de forma
diferenciada ao longo do desenvolvimento das plantas. Pesquisas tm reportado o
efeito da idade ontogentica dos propgulos na expresso gnica, principalmente
dos genes relacionados fotossntese. Hutchison et al. (1990) mostraram que a
famlia do gene CAB mais fortemente expressada em propgulos juvenis de
plantas de Larix SP crescendo sob condies de luz em relao a propgulos

31
adultos. Os mesmos autores no encontraram diferenas na expresso dos genes
rbc S com a idade. Woo et al. (1994) demonstraram que os pecolos juvenis e
adultos de Hedera helix crescidos in vitro responderam diferentemente a expresso
de HW 101 e HW 103 mRNA. Na seqncia, Kuo et al. (1995) descreveram um
sistema de fosforilao em Sequoia no qual uma protena de 32 kDa pode ser
fosforilada somente em tecidos adultos enquanto que naqueles juvenis uma protena
de 31 kDa foi fosforilada.
De modo geral, existem poucas informaes disponveis quanto ao
relacionamento entre a expresso gnica e a mudana de fase (maturao) em
plantas lenhosas. Os modelos buscando explicar a regulao da expresso gnica
na maturao so mais especulativos do que preditivos.

Rejuvenescimento e Revigoramento
Na silvicultura clonal, a seleo dos clones ocorre normalmente na fase
adulta da rvore devido a maior confiana no processo seletivo, visto a rvore
expressar o seu mximo potencial silvicultural, tecnolgico, adaptao a stios
especficos, entre outras, na idade de rotao desejada, para determinada
finalidade.
Em geral, a eficincia do processo seletivo dos clones inversamente
relacionada com a facilidade de propagao vegetativa. Dessa forma, para obteno
de sucesso na multiplicao de plantas adultas, necessrio explorar a maior
capacidade de propagao de material juvenil, seja pela utilizao de propgulos
provenientes de partes juvenis da planta, seja pela promoo do rejuvenescimento
de partes da planta adulta.
Rejuvenescimento pode ser considerado como uma forma de reverter a
planta do estdio adulto para o juvenil, recuperando a competncia da totipotncia.
Em geral, algumas caractersticas relacionadas maturao mostram-se mais fceis
de serem revertidas do que outras e os respectivos tratamentos para promoo do
rejuvenescimento

influenciam

de

forma

diferenciada,

sugerindo

que

rejuvenescimento ocorre em termos relativos e no absolutos (HACKETT &

MURRAY, 1993). De forma geral, pode-se dizer que a maturao estvel, mas

32
reversvel ou manipulvel em certas condies, e que o rejuvenescimento pode
ocorrer de forma total, parcial ou progressiva.
Uma srie de mtodos para reverter ou manter a juvenilidade das plantas
tem sido descritos: aplicao de cido giberlico; propagao vegetativa seriada;
poda drstica ou poda de gemas apicais; neodiferenciao de gemas; apomixia,
meiose para clulas, induo de ramos adventcios em pores de razes, utilizao
do crescimento juvenil originado dos esferoblastos (crescimento em forma de
verrugas que s vezes so encontradas no caule), entre outros. Hackett (1987) cita
a propagao sexuada natural como sendo o mtodo mais eficiente em promover o
rejuvenescimento de partes adultas de uma planta, uma vez que se origina a parte
mais juvenil da planta (embrio) a partir da parte mais madura (rgo frutfero).
Entretanto, entre os mtodos de rejuvenescimento mais utilizados na rea
florestal, relacionam-se propagao vegetativa seriada pela enxertia, pela estaquia
e pela micropropagao, sendo os demais menos estudados e relatados, resultando
em menores conhecimentos dos seus efeitos sobre o rejuvenescimento ou
manuteno da juvenilidade.
Com relao ao revigoramento, esta metodologia consiste em adotar
prticas culturais que propiciem maior vigor fisiolgico planta de tal forma que
origine propgulos vegetativos com melhor performance na propagao clonal.
Dessa forma, a adoo de manejo nutricional e hdrico buscam uma melhoria na
condio fisiolgica da planta, assim como o uso da poda drstica visa a induo de
brotaes dormentes em regies mais juvenis, constituindo-se em um mtodo de
revigoramento eficiente em um processo de propagao clonal.

Rejuvenescimento por Enxertia Seriada

Neste processo, propgulos maduros so enxertados em partes juvenis de
um porta-enxerto e, a partir de sua brotao, so coletados novos propgulos os
quais so novamente enxertados em um novo porta-enxerto juvenil, e assim
seriadamente at obter os resultados desejados (Figura 6). Dessa forma, o
rejuvenescimento pela enxertia seriada consiste em enxertar em srie propgulos
vegetativos do clone desejado.
A enxertia seriada um mtodo de rejuvenescimento que demanda muito
tempo (ELDRIDGE et al., 1994), podendo ainda apresentar problemas de

33
incompatibilidade (KIM et al., 1993) em algumas espcies florestais. Para Eucalyptus
e Pinus este mtodo de rejuvenescimento tem sido aplicado em algumas
circunstncias nos programas de silvicultura clonal.

1a Enxertia

2a Enxertia

rvore
Selecionada

Obteno de resposta
ao Enraizamento

Enxertia n

Figura 6 - Esquema para rejuvenescimento pela tcnica da enxertia seriada visando a

restaurao da competncia ao enraizamento adventcio de estaca de Pinus taeda.

O grau de rejuvenescimento obtido depende do nmero de re-enxertias do

enxerto no porta-enxerto juvenil, bem como da espcie/clone envolvido (HUANG et
al., 1990). Resultados experimentais tm mostrado que duas (KIM et al., 1993),
quatro (KAO & HUANG, 1993; ASSIS, 1996) ou quatro a seis (ELDRIDGE et al.,
1994) re-enxertias so suficientes para rejuvenescer o material at o ponto deste
enraizar facilmente, tendo-se suas variaes em termos de espcie/clone.
A tcnica de rejuvenescimento por enxertia seriada foi empregada com
sucesso na obteno de material juvenil satisfatrio para o enraizamento de estacas
de matrizes selecionadas de Pinus oocarpa e Pinus caribaea var. hondurensis, aps
a terceira enxertia seriada (MURAYAMA & FERRARI, 1988). Em experimentos de
enxertia seriada com Eucalyptus x trabuti, Siniscalco e Pavolettoni (1988) concluram
que propgulos adultos foram revertidos a condies juvenis, de forma gradual

34
conforme os sucessivos ciclos de enxertia. Nas seis re-enxertias feitas, os resultados
de sobrevivncia dos enxertos encontrados foram: 52%, 69%, 78%, 71%, 57% e
76%, respectivamente, da primeira at a sexta re-enxertia.
Para seringueira (Hevea brasiliensis), Muzik & Cruzado (1958) testando o
enraizamento de propgulos oriundos de plantas com uma a cinco enxertias
seriadas (matrizes de 8 a 10 anos de idade), obtiveram em torno de 30% de
enraizamento em oito semanas com estacas coletadas de plantas com a quarta e
quinta re-enxertia. Segundo os mesmos autores, estacas coletadas do clone original
e da primeira, segunda e terceira enxertias, no obtiveram nenhuma resposta para
enraizamento.
O fato de enxertar propgulos adultos de uma planta em porta-enxertos
juvenis promover o rejuvenescimento evidencia a translocao de substncias da
parte juvenil (porta-enxerto) para a parte adulta (enxerto), induzindo um estdio mais
juvenil nesta ltima. No entanto, Hackett (1987) salienta que o potencial de
enraizamento (que atualmente ainda a maior expresso de maturidade ou
juvenilidade) de tecidos juvenis e adultos uma caracterstica das clulas do stio de
iniciao radicial, no sendo, portanto, relacionado translocao de promotores ou
inibidores.
Alternativamente, o rejuvenescimento pela enxertia seriada realizada em
condies in vitro, denominada de enxertia in vitro ou microenxertia, pode ser obtido
com maior rapidez e eficincia em comparao a enxertia convencional, uma vez
que propgulos com menores dimenses e mais juvenis so utilizados. A
microenxertia ou enxertia in vitro consiste em enxertar, sob condies asspticas,
um meristema ou pice caulinar sobre um porta-enxerto estabelecido in vitro.
Aplicaes da enxertia in vitro, visando o rejuvenescimento de algumas espcies de
plantas, so descritas por diversos autores. Pliego-Alfaro & Murashige (1987) e
Zaczek & Steiner (1997), por exemplo, obtiveram resultados satisfatrios mediante o
uso da enxertia in vitro com explantes coletados de plantas adultas, mostrando a
restaurao da competncia ao enraizamento para Persea americana e Quercus
rubra. Huang et al. (1996) citam que sucessivas enxertias in vitro, em curtos
intervalos de tempo, a partir de pices meristemticos extrados de tecidos adultos
de Sequoia sempervirens, restauraram caractersticas juvenis mais rapidamente,
podendo esta tcnica ser aplicada com o propsito de rejuvenescimento.
Kretzschmar & Ewald (1994) e Ewald & Kretzschmar (1996) tambm confirmaram a

35
influncia do rejuvenescimento por meio da enxertia in vitro, em explantes oriundos
de rvores adultas de Larix na propagao clonal desta espcie. Em Eucalyptus,
Bandeira (2004) concluiu que a enxertia in vitro apresenta potencial de aplicao no
rejuvenescimento de clones adultos de interesse comercial.

Rejuvenescimento por Estaquia Seriada

Neste processo, propgulos maduros (estacas) so enraizados e a partir de
sua brotao, so coletados novos propgulos (estacas) os quais so novamente
enraizados e, assim, seriadamente, at obter os resultados desejados. Desta forma,
o rejuvenescimento pela estaquia seriada consiste em enraizar em srie, propgulos
adultos do clone desejado.
O efeito da confeco de estacas a partir de brotaes das estacas
enraizadas em relao ao rejuvenescimento em Eucalyptus spp, resultando em
efeito positivo sobre o enraizamento, foi citado por Eldridge et al. (1994). Segundo
estes autores, resultados satisfatrios no enraizamento de Eucalyptus, decorrentes
do efeito do rejuvenescimento, podem ser obtidos aps duas ou mais geraes de
estaquia seriada.
Segundo Wendling (2002), em avaliao da miniestaquia seriada em quatro
clones de Eucalyptus grandis, aps sete subcultivos, esta tcnica mostrou-se mais
eficiente no rejuvenescimento de clones com menor grau de juvenilidade, para as
caractersticas

de

enraizamento,

sobrevivncia,

vigor radicial e

areo. O

reaparecimento de caractersticas morfolgicas juvenis e melhoria no enraizamento

de estacas pelo uso da estaquia seriada, tambm foi mencionado por Bonga &
Aderkas (1993).
Entretanto, apesar destas citaes de uso da estaquia seriada visando o
rejuvenescimento em espcies florestais, ainda existem poucos relatados com base
cientfica, embora a tcnica seja considerada potencial para tal propsito.

Rejuvenescimento por Micropropagao

O rejuvenescimento por micropropagao consiste em estabelecer em
cultura in vitro explantes do clone desejado, subcultivar sucessivamente em meio de
cultura adequado com reguladores de crescimento, resultando em plantas com
caractersticas mais juvenis.

36
Em muitos casos, os resultados obtidos pelo uso da micropropagao
visando obter efeitos de rejuvenescimento so comparveis aos da enxertia e
estaquia seriada. Nestas condies, rejuvenescimento parcial tem sido obtido pelos
sucessivos subcultivos de meristemas apicais de brotos micropropagados,
proporcionando melhoria no enraizamento de gemas alongadas in vitro. Segundo
Bonga & Aderkas (1993), aps cinco ou seis subcultivos in vitro, clones adultos de
Eucalyptus so considerados suficientemente rejuvenescidos ou com reatividade
capaz de permitir uma subseqente propagao por estaquia. Entretanto, vale
salientar que as dificuldades inerentes ao processo de micropropagao, bem como,
a prpria resposta das espcies cultura in vitro, proporciona respostas
diferenciadas, onde somente aps alguns subcultivos pode-se avaliar a resposta do
rejuvenescimento.
Segundo Franclet et al. (1987), a tcnica da micropropagao eficiente no
rejuvenescimento de propgulos maduros, embora muitas espcies arbreas
maduras no possam ser micropropagadas em escala comercial, provavelmente em
razo da falta de otimizao das condies de cultura in vitro e do nmero
insuficiente de subcultivos adotados. Em experimento conduzido com explantes de
Sequoia sempervirens coletados de rvores com 50 e 500 anos de idade, esses
autores chegaram concluso de que o principal fator de rejuvenescimento pela
micropropagao foi o tempo de exposio dos explantes a citocinina BAP
(benzilaminopurina). Assim, menores perodos entre um subcultivo e outro
aumentaram o rejuvenescimento, principalmente, dos propgulos das rvores de
500 anos.
Uma aplicao direta do rejuvenescimento pela micropropagao seriada na
rea florestal a propagao clonal pela microestaquia, a qual baseada no
mximo aproveitamento da juvenilidade dos tecidos vegetais, cujo desenvolvimento
e aplicao em Eucalyptus tiveram como origem os trabalhos realizados por Assis et
al. (1992). Na propagao clonal de alguns clones de Eucalytpus pela microestaquia
no Brasil, onde o objetivo principal a melhoria da performance de enraizamento
das microestacas, resultados satisfatrios tm sido obtidos aps 10 a 12 subcultivos
pela micropropagao, onde os efeitos de rejuvenescimento alcanados so
atribudos principalmente aos subcultivos intensivos e da utilizao da citocinina
BAP (benzilaminopurina) nos meios de cultura.
Titon (2001), avaliando a sobrevivncia na sada da casa de vegetao,

37
enraizamento na sada da casa de sombra e sobrevivncia das mudas aos 50 dias,
observou, em clones de Eucalyptus, resultados superiores na microestaquia em
relao miniestaquia. Essa diferena foi mais pronunciada em clones com maior
dificuldade de enraizamento, indicando, nesses casos, possvel efeito de
rejuvenescimento dos clones com o uso da microestaquia. Para o mesmo
experimento, as mudas oriundas da microestaquia apresentaram altura e dimetro
de colo aos 50 dias e peso de matria seca de raiz aos 28 dias iguais ou superiores
aos da miniestaquia, reforando a suposio de maior grau de juvenilidade das
microestacas em detrimento das miniestacas.
Tambm resultados de pesquisa obtidos por Xavier et al. (2001) apontaram
a eficincia do rejuvenescimento de dois clones hbridos de Eucalyptus grandis pela
micropropagao, a qual foi constatada pela superioridade dos resultados obtidos
na microestaquia sobre a miniestaquia, em relao ao percentual e velocidade de
enraizamento. No entanto, tem sido constatado que aps algum perodo de coleta
de microestacas nas microcepas, estas tm perdido gradativamente o grau de
juvenilidade obtido pelo rejuvenescimento quanto ao enraizamento, indicando que o
rejuvenescimento obtido pela micropropagao no permanente. Da mesma
forma, o uso de mudas de microestacas no reproduz os mesmos efeitos de
juvenilidade das mudas de micropropagao.
Apesar das dificuldades encontradas para propagao clonal pela
micropropagao de clones de Eucalyptus, esta tem sido considerada como a
principal tcnica potencial para incrementar o enraizamento de gemas alongadas in
vitro, principalmente devido aos recentes avanos com plantas transgnicas,
embriognese somtica e a tecnologia de sementes sintticas usadas para restaurar
a condio juvenil de plantas fisiologicamente maduras.
De modo geral, a micropropagao tem sido considerada como uma tcnica
com grande potencial no rejuvenescimento de espcies florestais. Entretanto, esta
tcnica ainda carece de desenvolvimento cientfico para sua plena utilizao, alm
de ser uma tcnica onerosa e exigir mo-de-obra especializada.

Revigoramento Vegetativo
De forma geral, pode-se caracterizar o revigoramento como certas prticas
culturais visando propiciar maior vigor fisiolgico em brotaes da planta de tal forma

38
que proporcione propgulos vegetativos vigorosos e responsivos propagao
clonal.
Existem inmeras formas de se obter o revigoramento vegetativo, sendo que
uma das principais utilizadas na silvicultura clonal pelas podas drsticas ou corte
raso. Neste processo, propgulos juvenis so obtidos pelo abate de rvores adultas
selecionadas buscando induzir o crescimento de gemas dormentes existentes na
base da cepa. Este procedimento de obteno de propgulos vegetativos est
baseado no fato de que as caractersticas juvenis so mantidas naquela poro de
crescimento da rvore. Assim, com base no gradiente de juvenilidade em rvores,
brotaes juvenis surgem a partir das gemas dormentes presentes na poro da
cepa remanescente, aps serem dadas s condies para crescimento em funo
da retirada do efeito de dominncia apical exercido pela parte area decepada pelo
abate da rvore. Este sistema tem sido usado com sucesso na produo de estacas
mais juvenis de Eucalyptus, onde aps a decepa da rvore, as brotaes obtidas
so utilizadas como a base para a propagao clonal comercial desta espcie.
Outras formas de obteno de brotaes juvenis como o anelamento e o uso do
fogo na base da planta matriz tambm so citadas (ALFENAS et al., 2004).
O revigoramento por tratos silviculturais tambm tem sido adotado com
eficincia no processo de propagao clonal. Dentre estes, citam-se adubaes,
irrigaes e manejo direcionado para a obteno de maior nmero possvel de
brotaes vigorosas.
Outra forma de revigoramento em plantas so as podas sucessivas, as quais
visam aumentar a produo de propgulos vigorosos e manter a juvenilidade dos
mesmos. Este procedimento o que vem sendo adotado em jardins clonais, nos
seus diferentes sistemas de manejo das cepas, em que as mesmas so mantidas
baixas para produo de brotaes juvenis aptas para a formao de propgulos
com bom potencial de enraizamento.
O melhor conhecimento das exigncias nutricionais, hdricas e de manejo
dos clones componentes de programas de silvicultura clonal tambm leva
formao de brotaes mais vigorosas e aptas para o processo de propagao
vegetativa. Em Eucalyptus, isto se comprova pelo fato de que clones com maior
tempo no programa de clonagem respondem melhor ao enraizamento e formao
das mudas, visto seu melhor conhecimento e ajuste mais refinado de suas
exigncias.

39
Em algumas situaes, ocorre certa confuso entre revigoramento e
rejuvenescimento,

em

que

revigoramento

refere-se

ao

vigor

fisiolgico

proporcionado pela prtica adotada, enquanto que o rejuvenescimento obtido pelas

diferentes tcnicas citadas anteriormente buscam a obteno de uma reverso da
maturao para uma condio mais juvenil.

Efeito C (Efeito da Clonagem)

O efeito C ou efeito da clonagem, amplamente conhecido no setor
florestal, refere-se aos efeitos no genticos, decorrentes das interaes de aes
no processo de produo de mudas, interaes com o meio ambiente, interao
nutricional e fisiolgica (efeito ciclfise e topfise), o qual modifica a resposta
esperada na clonagem, ou seja, crescimento por igual das plantas originrias de um
mesmo clone.
Segundo Scarassati (1993), o efeito C que causa esta alterao nos clones
no pode e no deve ser visto como uma anomalia do desenvolvimento da planta,
mas sim como um fator que no pode ser controlado durante o processo e, ou que
por falta de conhecimento adequado, no controlado. De forma geral, o efeito C
pode ser agrupado em efeito decorrente das variaes ambientais, variaes no
padro de qualidade das mudas produzidas e dos aspectos de morfologia e
fisiologia dos propgulos vegetativos utilizados na propagao clonal.
Entre os efeitos ambientais, pode-se citar aqueles relacionados com a
densidade de plantio, competio nutricional, diferenas entre a regio de seleo e
a regio do plantio do clone (interao clone x ambiente), idade de avaliao, entre
outros. Quantos aos efeitos decorrentes do padro de qualidade das mudas, estes
so aqueles atribudos a desuniformidade no processo de produo das mesmas,
levando a heterogeneidade na sua qualidade, gerando padres de respostas de
crescimento desiguais no futuro plantio clonal.
O efeito C decorrente dos aspectos de morfologia e fisiologia dos
propgulos vegetativos recai, principalmente, sobre os efeitos ciclfise e topfise.
Com o advento das tcnicas de miniestaquia e microestaquia, as variaes em

40
termos morfolgicos e fisiolgicos entre mudas de um mesmo clone tm sido
reduzidas (diminuio do efeito C) em virtude de uma menor variao nos padres
de propgulos utilizados.
Frampton & Foster (1993) citaram que o efeito C tem merecido a ateno
da comunidade cientfica e a sua quantificao tem sido realizada por diversas
maneiras, como a instalao de testes clonais visando mensurar a magnitude do
efeito C decorrente do efeito da idade ontogentica.

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