LAPORAN TETAP PRAKTIKUM BIOKIMIA II

I.
II.
III.

NOMOR PERCOBAAN

: II (Dua)

NAMA PERCOBAAN

: Isolasi Bromelin dari Nanas

TUJUAN PERCOBAAN

Untuk mengisolasi enzim bromelain dari buah nanas.

IV.

DASAR TEORI
Nanas yang dalam nama latinnya Ananas comosus merupakan salah satu

tanaman daerah panas yang dapat tumbuh tinggi ( 1000 m diatas permukaan
laut). Pada bulir nenas terdapat zat atau senyawa seperti air, gula, asam, vitamin,
asam amino dan berbagai jenis aroma. Senyawa khas yang terkandung dalam
buah nenas adalah enzim Bromelain. Enzim Bromelain dipergunakan dalam
industri makanan, minuman, farmasi dan obat-obatan.
Penelitian enzim Bromelain telah dilakukan oleh Peckolt (1870),
Chittenden (1892) dan Caldwell(1905). Penelitian yang dilakukan oleh pakar
tersebut meliputi cara-cara isolasi enzim bromelain dari sari buah nanas.
Penelitian untuk memproduksi enzim bromelain untuk skala industri dilakukan
oleh Balls dan kawan-kawan pada tahun 1942. kemudian dilanjutkan oleh
Heniche R.M dan Gortner W.A. pada tahun 1957, yaitu mengisolasi enzim
bromelain dari sari batang nenas. Ota.s. dan kawan-kawan pada tahun 1964
melakukan penelitian tentang berat molekul dan komposisi asam amino dari
enzim bromelain. Mereka melaporkan bahwa berat molekul dari enzim bromelain
adalah 33.000, dan melaporkan bahwa adanya perbedaan komposisi asam amino
dari enzim bromelain berasal dari batang nenas dengan enzim bromelain yang ada
dari buah nenas.
Bromelain adalah suatu protease sulfihidril (-SH) yang sudah menjadi
tidak aktif, disebabkan karena terbentuknya ikatan disulfida antara enzim-enzim.
Secara relatif hal ini dapat diatasi dengan penambahan senyawa pereduksi seperti
sistein, markaptoetanol, glukation, dan vitamin C. selain dengan cara penambahan
senyawa pereduksi juga dapat distabilkan dengan cara amobilisasi enzim.
Aktivitas enzim bromelain dipengaruhi oleh beberapa inhibitornya seperti
diisopropilfosfofluoridat(DIPF), yang dilaporkan oleh Murachi T dan Yasui.M
Lara Purnamasari (06111410018) 1

pada tahun 1965 dapat menghambat aktivitas katalitik dari enzim bromelain.
Disamping itu Husain S dan Lowe G juga meneliti bagian aktif dari enzim
bromelain, secara sederhana digambarkannya deretan asam amino pada pusat aktif
dari enzim bromelain sebagai berikut:
Cys Gly Ala Cys* - Trp
Dalam hal ini Cys* merupakan bagian aktif dari bromelain.

V.

ALAT DAN BAHAN

Alat
NO

Nama Alat

Ukuran (ml)

Jumlah

Blender

pisau

Gelas kimia

250

Plastik

Batang pengaduk

Gelas ukur

Neraca Analitik

Serbet

Bahan
Nama Bahan

Jumlah

Nanas

250 gram

Aceton dingin

153 ml

Es batu

Secukupnya

Aquades

100 ml

Lara Purnamasari (06111410018) 2

VI.

PROSEDUR PERCOBAAN
1. Nanas dibersihkan lalu dipotong kecil kecil dan ditimbang sebanyak 250 gram.
2. Ditambahkan 100 ml aquades dan lalu haluskan dengan blender.
3. Ampas nanas disaring dengan sapu tangan dan filtrat disimpan selama 15 menit.
4. Ditambahkan aceton dingin pada filtrat sedikit demi sedikit sambil diaduk
sampai kadar akhir aceton 30 % V/V kemudian didiamkan selama 24 jam.
5. Endapan yang terbentuk ditimbang.
6. Catat hasil pengamatan.

VII.

HASIL PENGAMATAN
No
1

Perlakuan

Hasil Pengamatan

Nanas dibersihkan

Dipotong kecil kecil

Timbang sebanyak 250 gram

Diketahui berat nanas diperoleh

1. 250 gram
2. 250 gram

Ditambah air 100 ml

Kuning cerah

Dihaluskan dengan blender

Setelah di blender warna kuning muda

Disaring untuk mendapatkan

Diperoleh volume fraksi I : 250 ml dan fraksi II

filtrat

; 250 ml

Menyimpan filtrat selama 15

menit

Ditambahkan aceton dingin

Fraksi I : Vaceton = 78 ml
Fraksi II : V aceton = 75 ml

Menimbang
terbentuk

endapan

yang

Fraksi I : warna menjadi kuning muda

Fraksi II : warna menjadi kuning cerah

Fraksi I : 59,8 gram

Fraksi II : 57,5 gram

Lara Purnamasari (06111410018) 3

VIII.

PERHITUNGAN

Gelas kimia I (fraksi I ) :

Diketahui:

Berat gelas kosong (m1) = 190,85 gram

Filtrat = 250 mL
Berat endapan + gelas (m2) = 250,65 gram
Ditanya :

a. Volume aseton yang diperlukan (V aseton) = . . . . ?

b. Berat endapan = . . . . .?
Jawab

a. V aseton = 30/100 x V filtrat = 30/100 x 250 mL = 75 mL

b. Massa (endapan + gelas kimia) = 250,65 gram
massa endapan I (e 1);
massa e 1= massa(endapan + gelas) massa gelas kosong
= 250,65gram 190,85 gram
= 59,8 gram.
Gelas kimia II (fraksi II ) :
Diketahui:

Berat gelas kosong (m1) = 190,85 gram

Filtrat = 250 mL

Berat endapan + gelas (m2) = 248,35 gram

Ditanya :

a. Volume aseton yang diperlukan (V aseton) = . . . . ?

b. Berat endapan = . . . . .?
Jawab :
a. V aseton = 30/100 x V filtrat = 30/100 x 250 mL = 75 mL
b. Massa (endapan + gelas kimia) = 250,65 gram
Lara Purnamasari (06111410018) 4

massa endapan I (e II);

massa eII = massa(endapan + gelas) massa gelas kosong
= 248,35gram 190,85 gram
= 57,5 gram.

IX.

REAKSI KIMIA

X.

PEMBAHASAN
Percobaan yang kedua dilakukan adalah isolasi bromelin..Bahan pokok pada

percobaan ini adalah buah nanas.

Praktikum ini bertujuan untuk mengisolasi enzim bromelain dari buah nenas. Salah
satu teknik isolasi enzim bromelain adalah dengan menggunakan aseton. Proses yang
dilakukan dalam percobaan ini adalah : Pertama yang dilakukan adalah menghaluskan
nenas sampai lembut dengan blender. Yang diambil dari nenas ini adalah daging buah dan
batang nenasnya. Karena pada bagian-bagian ini banyak terdapat enzim bromelain.Pada
proses ini harus di gunakan seminimal mungkin air, karena akan mempengaruhi jumlah
enzim yang diperoleh, dan harus digunakan air dingin sebab suhu tinggi dapat merusak
enzim.Kemudian setelah dihaluskan dilakukan penyaringan dengan menggunakan
serbet. Penyaringan dimaksud untuk memisahkan ampas dan filtrat. Filtrat ini yang
digunakan untuk proses isolasi enzim. Filtrat dari penyaringan tidak dapat langsung
digunakan namun arus didiamkan selama 15 menit. Kemudian menghitung banyaknya
aseton yang diperlukan untuk mendapatkan enzim bromelain dari filtrat nenas. Dari hasil

Lara Purnamasari (06111410018) 5

perhitungan, aseton yang diperlukan pada gelas kimia I dan gelas kimia II adalah 78 mL
dan 75 mL dengan filtrat nenas sebanyak 260 mL dan 250mL.
Setelah perhitungan aseton, filtrat yang di diamkan kemudian ditambahkan dengan
aseton hasil perhitungan. Kemudian campuran didiamkan selama 24 jam dalam keadaan
tertutup agar tidak terkontaminasi zat-zat lain dalam proses pengendapan enzim bromelain.
Setelah 24 jam, terdapat endapan yang kemudian dipisahkan dari larutannya. Setelah
ditimbang dan dikurangi berat gelas kimia kosong, dari hasil perhitungan diperoleh berat
endapan masing-masing gelas kimia adalah Fraksi I : 59,8 gram dan Fraksi II : 57,5 gram.
Endapan yang terbentuk berwarna kuning. Endapan inilah yang disebut enzim bromelain.
Setelah yang diketahui bahwa aktivitas enzim bromelain dipengaruhi oleh beberapa
inhibitornya seperti DIPF (diisopropilfosfoflouridat). Oleh karena itu bromelain adalah
suatu protease sulfihidril (-SH) yang sudah menjadi tidak aktif disebabkan karena
terbentuknya ikatan disulfida antara enzim-enzim. Jika sebagian contoh inhibitor dalam hal
ini adalah molekul iodoasetamida yang dapat bereaksi dengan gugus (-SH), misalnya pada
enzim bromelain maka reaksi yang terjadi adalah:
-SH + [CH2COCH2] -----> enzim S CH2CONH + HI
Reaksi ini berlangsung reversibel sehingga menghasilkan produk reaksi dengan sempurna.
Inhibitor lain adalah DIPF, inhibitor ini termasuk senyawa fosfor organik yang
bersifat racun, karena dapat berkaitan dengan asetil kolin esterase yang terdapat dan
berfungsi pada sistem syaraf pusat. Dengan terbentuknya enzim ini maka enzim tidak
dapat berfungsi sebagai mana mestinya. Ester yang terbentuk bersifat stabil dan tidak
mudah terhidrolisis.
XI.

KESIMPULAN
1. Salah satu teknik isolasi enzim bromelain adalah dengan menggunakan
aseton.
2. Enzim bromelain banyak terdapat pada buah nanas.
3. Dari hasil perhitungan diperoleh berat endapan masing-masing gelas kimia
adalah Fraksi I : 59,8 gram dan Fraksi II : 57,5 gram

Lara Purnamasari (06111410018) 6

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2011. Isolasi Enzim Bromelin. http:/pemulaawaliharimu.blogspot.com/2012/11/isolasi-ensim bromelin-praktikum..html.

Diaskes 19 April 2014.
Anonim. 2012. Kandungan Asam dalam Buah Nanas. http://manfaat-anekabuah.blogspot.com/2013/04/kandungan-asam-dalam-buah-nanas.html. Diaskes 19
April 2014

Lara Purnamasari (06111410018) 7

LAMPIRAN
Preparasi Sampel Ekstrak Kasar Bromelin

Lara Purnamasari (06111410018) 8