Utilization of flue gas for cultivation of

microalgae Chlorella sp.) in an outdoor

open thin-layer photobioreactor

Ji Doucha,
Frantiek Straka,
Karel Lvansk
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Abstract
Flue gas generated by combustion of natural gas in a boiler was used for outdoor
cultivation of Chlorella sp. in a 55 m2 culture area photobioreactor. A 6 mm thick layer of
algal suspension continuously running down the inclined lanes of the bioreactor at 50 cm
s1 was exposed to sunlight. Flue gas containing 68% by volume of CO2 substituted for
more costly pure CO2 as a source of carbon for autotrophic growth of algae. The degree of
CO2 mitigation (flue gas decarbonization) in the algal suspension was 1050% and
decreased with increasing flue gas injection rate into the culture. A dissolved CO2 partial
pressure (pCO2) higher than 0.1 kPa was maintained in the suspension at the end of the 50
m long culture area in order to prevent limitation of algal growth by CO2. NO X and CO
gases (up to 45 mg m3 NO X and 3 mg m3 CO in flue gas) had no negative influence on
the growth of the alga. On summer days the following daily net productivities of algae [g
(dry weight) m2] were attained in comparative parallel cultures: flue gas = 19.422.8; pure
CO2 = 19.122.6. Net utilization () of the photosynthetically active radiant (PAR) energy
was: flue gas = 5.586.94%; pure CO2 = 5.496.88%. The mass balance of CO2 obtained
for the flue gas stream and for the algal suspension was included in a mathematical model,
which permitted the calculation of optimum flue gas injection rate into the photobioreactor,
dependent on the time course of irradiance and culture temperature. It was estimated that
about 50% of flue gas decarbonization can be attained in the photobioreactor and 4.4 kg of
CO2 is needed for production of 1 kg (dry weight) algal biomass. A scheme of a combined
process of farm unit size is proposed; this includes anaerobic digestion of organic
agricultural wastes, production and combustion of biogas, and utilization of flue gas for
production of microalgal biomass, which could be used in animal feeds. A preliminary
quantitative assessment of the microalgae production is presented.

Tris
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Esta obra deriva de la traduccin de Tris, publicada bajo la Licencia de

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Tris

Estructura qumica del Tris.

Nombre (IUPAC) sistemtico

2-Amino-2-hidroximetil-propano-1,3-diol
General

Otros nombres

TRIS, Tris, Tris base,

Tampn tris,
TrizmaTM, Trisamina,
THAM,
Trometamina, Trometamol,
Trometano

Frmula
semidesarrollada

(HOCH2)3CNH2
Identificadores
77-86-1[1]

Nmero CAS

Propiedades fsicas
Estado de agregacin

Slido cristalino

Apariencia

Polvo blanco

Masa molar

121,14 g/mol

Punto de fusin

448 K (175 C)

Punto de ebullicin

492 K (219 C)

Peligrosidad
Frases R

36, 37, 38

Frases S

26-36
Riesgos
External MSDS
Irritante

Piel

Valores en el SI y en condiciones estndar

(25 C y 1 atm), salvo que se indique lo contrario.

Tris es el nombre abreviado del compuesto orgnico conocido

como tris(hidroximetil)aminometano, de frmula (HOCH2)3CNH2. Se utiliza
ampliamente en bioqumica y biologa molecular,[2]en particular para preparar
disoluciones tampn (por ejemplo, tampones Tris-HCl, Tris-Gly, TAE y TBE).
Es una amina primaria, con la reactividad tpica, por ejemplo la condensacin
conaldehdos y el establecimiento de un equilibrio cido-base (responsable de su
capacidad tamponante).

ndice
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1 Caractersticas tamponantes
2 Sntesis
3 Usos
4 Referencias

Caractersticas tamponantes[editar editar cdigo]

El Tris tiene un pKa de 8,06, lo que le aporta capacidad tamponante efectiva en
un intervalo de pH entre 7,0 y 9,2.
El pKa disminuye aproximadamente 0,03 unidades por cada grado centgrado de
incremento de temperatura.
La forma de uso ms frecuente se llama Tris base (es la forma bsica, no
ionizada, de la amina); en ocasiones se utiliza tambin la forma cida o
hidrocloruro (TrisHCl). Para ajustar el tampn a un pH especfico se puede usar
OH- para TrisHCl o H+ para Tris base, o bien mezclar dos disoluciones de
TrisHCl y Tris base hasta que el pH sea el deseado. El resultado es equivalente

en los 3 casos, pero para conseguir la concentracin esperada de tampn debe

tenerse en cuenta que las masas moleculares de las formas bsica y cida
(hidrocloruro) son diferentes.
La denominacin Tris-HCl, que se usa habitualmente para los tampones, no
indica que el tampn se haya preparado con el hidrocloruro de Tris, sino que se
puede haber preparado con Tris base y la cantidad precisa de cido clorhdrico
para ajustar el pH al valor deseado. Como alternativa, por ejemplo, un
tampn Tris-Gly est preparado con Tris base y glicina suficiente para ajustar el
pH (el contrain en este caso, en lugar de cloruro, ser la forma aninica de la
glicina).
El Tris es incompatible con electrodos de pH de plata de unin simple, ya que se
produce una precipitacin de Ag-Tris que obstruye la unin. Los electrodos de
unin doble son resistentes a este problema, as como los electrodos que no
contienen plata.
Es txico para las clulas de mamfero.

Sntesis[editar editar cdigo]

Se prepara en dos pasos desde nitrometano con (HOCH2)3CNO2 como
intermediario. La reduccin de este ltimo produce el
tris(hidroximetil)aminometano.[3]

Usos[editar editar cdigo]

El intervalo til de tamponamiento del Tris (7-9) coincide con el pH fisiolgico
de la mayora de los seres vivos. Sumado a su bajo coste, esto hace del Tris uno
de los tampones ms comunes en laboratorios de biologa y bioqumica.

Referencias[editar editar cdigo]

Esta obra deriva de la traduccin de Tris, concretamente de esta versin,

publicada bajo la Licencia de documentacin libre de GNU y la Licencia
Creative Commons Atribucin-CompartirIgual 3.0
Unported por editores de la Wikipedia en ingls.

1. Ir aIr a Nmero CAS

2. Ir aIr a Gomori, G., Preparation of buffers for use in enzyme
studies. Methods Enzymology., 1, 138-146 (1955). Artculo en ingls.

3. Ir aIr a Sheldon B. Markofsky Nitro compounds, aliphatic Ullmann's

encyclopedia of industrial chemistry. 2002 por Wiley-VCH, Wienheim,
2002. DOI: 10.1002/14356007.a17_401. En ingls.

1. Hablar con fluidez y seguridad

Los hombres que hablan con gran fluidez, tienen un vocabulario amplio y estructuran frases
largas y claras, adems de expresar sus ideas con seguridad, son ms atractivos para las
mujeres.
Y es que aquellos que saben cmo hablar son percibidos como ms inteligentes, educados y
solventes, segn explica el doctor en psicologa Benjamin P. Lange, de la Universidad
alemana de Gttingen.
l recomienda usar palabras precisas y no hacer pausas muy largas. Lo ms importante es
mostrar confianza.
2. Buen sentido del humor
El buen sentido del humor es el rasgo de personalidad que ms aprecian las mujeres, segn
un estudio de la Universidad de Northumbria en el Reino Unido.
Theresa DiDonato, doctora en psicologa de la Universidad de Loyola que tambin particip
del estudio, dijo que las fminas consideran que el sentido del humor es un signo de
inteligencia y honestidad.
Eso s, segn la misma investigacin las mujeres valoran a aquellos hombres que hacen
bromas ingeniosas e inofensivas, no a los que usan el sarcasmo, insultos o se burlan de los
dems.
3. Ser interrumpidas
Aunque suene raro, las mujeres pueden sentir que estn en sintona con alguien, cuando ste
las interrumpe, segn una investigacin realizada por la Universidad de Stanford.
Y es que mientras los hombres tienden a dejar que los dems terminen de hablar para
comenzar ellos a hacerlo, las mujeres se interrumpen constantemente las unas a las otras
durante sus conversaciones. Por ello, cuando un hombre las interrumpe, se sienten cmodas
y cercanas, pero slo si apoyan lo que est diciendo, explican los investigadores.
Si la interrumpes para cambiar el tema o contradecirla, se produce el efecto contrario, as que
no lo intentes.
4. Besos en el momento preciso y la forma adecuada
El primer beso con alguien es tan importante que puede evaporar el inters por esa persona
en un instante, segn un estudio de la Universidad de Albany.

La investigacin identific los tres elementos fundamentales de un primer beso ganador: Buen
aliento, poca o nada de lengua, y asertividad. Si quieres que quede rendida a tus pies toma su
rostro con tus manos y dale un suave y profundo beso.

Respuesta de la microalga Chlorella sorokiniana al pH, salinidad

y temperatura en condiciones axnicas y no axnicas
R. Moronta, R. Mora y E. Morales1
1

Laboratorio de Microorganismos Fotosintticos. Departamento de Biologa, Facultad de

Ciencias, Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela.

Resumen
El cultivo de microalgas de inters econmico en condiciones no axnicas puede ser
utilizado para acuicultura y tratamiento de aguas residuales; mientras que el cultivo
axnico es utilizado para la extraccin de productos comerciales. Sin embargo, el
comportamiento de las microalgas axnicas puede variar con respecto a las cultivadas
en condiciones no axnicas. El objetivo de este estudio es evaluar la respuesta de la
microalga Chlorella sorokiniana en funcin del pH (5, 6, 7, 8 y 9), temperatura (25,
30, 37, 40 y 42C) y salinidad (15, 25 y 35 ppm) en cultivos no axnicos y axnicos.
Todos los bioensayos se realizaron con fotoperodo 12:12h, 98mol.quanta.m-2.s-1,
28C. Los cultivos no axnicos con medio ALGAL por triplicado se mantuvieron en
volumen de 250ml, en matraces de 500ml de capacidad. Mientras que, los cultivos
axnicos por cinco rplicas se realizaron en tubos de ensayo con volumen de 15ml, en
condiciones autotrficas, mixotrficas y heterotrficas con medio organotrfico. En
cultivos no axnicos, la microalga fue ms sensible a la salinidad, temperatura y pH
<5, con un crecimiento ptimo a 30C y pH 7-8 en medio no salino. En cambio, en
condiciones axnicas, la microalga fue capaz de crecer hasta 42C, 35 ppm de
salinidad, a partir de pH 3 alcanzando mayor crecimiento a pH 7-8, entre 0 y 25 ppm y
a 37C en mixotrofa. La sntesis de clorofila fue mayor en cultivos no axnicos. Estos
resultados sugieren que la respuesta de C. sorokiniana, al pH, temperatura y salinidad
puede ser modulada por la flora bacteriana asociada.
Palabras clave: Chlorella sorokiniana, pH, salinidad, temperatura, axnico, no
axnico.
Response of the microalga Chlorella sorokiniana to pH, salinity and
temperature in axenic and non axenic conditions
Abstract
Microalgal culture in non axenic conditions can be used as food source for aquaculture
species, wastewater treatment and in axenic conditions for the extraction of valuable
chemicals. However, the response of the microalgae in axenics conditions can be
modulated with respect to non axenic conditions. The aim of this study was to test the
response of the microalga Chlorella sorokiniana in function of pH (5, 6, 7, 8 and 9),
temperature (25, 30, 37, 40 and 42C) and salinity (15, 25 and 35 ppm) in non-axenic

and axenic cultures. All bioassays were carried out with photoperiod 12:12h,
98mol.quanta.m-2.s-1, 28C. Non-axenic cultures in ALGAL medium and by triplicate
were maintained at volume of 250ml in flasks with 500ml in capacity. Whereas, axenic
cultures by fire replicas were carried out in test tubes with volume of 15ml in
autotrophic, mixotrophic and heterotrophic conditions with organotrophic and ALGAL
medium. In non-axenic cultures, the microalga was more sensible to salinity,
temperature and pH below 5, with optimal growth at 30C and pH 7-8 in non saline
medium. Instead, in axenic conditions, the microalga was able to grow up to 42C, pH
above 3 and salinity up to 35 ppm in mixotrophy, reaching the highest growth at pH 78, between 0 and 25 ppm and 37C. Chlorophyll synthesis was older in non axenic
cultures. These results suggest that the response of C. sorokiniana, to pH, temperature
and salinity can be modulated by associated bacterial flora.
Key words: Chlorella sorokiniana, pH, salinity, temperature, axenic, non-axenic.
Recibido el 24-4-2002

Aceptado el 22-7-2004

Introduccin
La variacin de las condiciones de cultivo, tales como el tipo y concentracin de
nutrientes, temperatura, pH, intensidad luminosa, fotoperodo, rgimen de cosecha de
cultivos discontinuos, continuos o semicontinuos, manipulacin gentica, entre otros
(15, 27 y 37) ha contribuido a establecer sistemas dirigidos hacia la obtencin de
biomasa microalgal (17 y 18). La respuesta de las microalgas al pH vara ampliamente,
debido a que este factor determina la solubilidad del dixido de carbono y de los
minerales en los cultivos e influye directa o indirectamente en su metabolismo (28, 32
y 38). La temperatura no solo afecta las reacciones celulares, sino tambin los
requerimientos nutricionales y la composicin de la biomasa, as como la solubilidad de
los gases en el agua (1, 14, 24, 37, 38 y 40).
Los cultivos masivos de microalgas se obtienen tpicamente de manera fotoautotrfica,
bien sea por el uso de estanques abiertos y luz natural o por una variacin de sistemas
ms intensivos. Sin embargo, se presentan alternativas de produccin de biomasa
microalgal, tanto en condiciones mixotrficas como heterotrficas. Es decir, cuando
son capaces de asimilar fuente de carbono orgnica exhibiendo un crecimiento
organotrfico (26, 27 y 35).
Los cultivos mixotrficos producen una elevada cantidad de biomasa comparada a la
autotrofa y heterotrofa y ello se debe posiblemente al efecto energtico de la luz y del
sustrato orgnico (19, 25, 28 y 36). Mientras que los cultivos heterotrficos, desde una
perspectiva de ingeniera tienen ventajas sobre los sistemas fotosintticos ya que se
logra obtener protenas, carbohidratos, lpidos, entre otros, a un menor costo, por
prescindir de la iluminacin (10 y 43).
Cuando las microalgas estn asociadas a bacterias en la naturaleza (no axnicas), se
ejerce una interaccin que puede ser beneficiosa para ambos; de tal manera que la
microalga es capaz de asimilar productos de la actividad bacteriana en el medio. As
mismo, la flora microbiana asociada est implicada en la regulacin de parmetros
fisiolgicos como pH, temperatura y salinidad. En cambio, en condiciones axnicas, las
microalgas no llegan a alcanzar un crecimiento ptimo, por carecer de la flora
microbiana asociada; la cual le aportar factores esenciales para estimular el
crecimiento (7 y 10).

En condiciones de laboratorio, las cepas de microalgas axnicas son de suma

importancia en estudios bioqumicos, fisiolgicos, genticos y taxonmicos (19). Los
trabajos realizados con microalgas desde el punto de vista fisiolgicos son de gran
inters, ya que permiten dilucidar si la microalga posee o no mecanismos fisiolgicos
que le permitan regular condiciones ambientales estresantes, tales como elevada
salinidad, pH, temperatura, limitacin de nutrientes, deshidratacin, entre otros (12,
13 y 41). Es por ello que es necesario realizar estudios sobre la reaccin de una
microalga ante factores ambientales, la cual puede variar en funcin de la ausencia o
presencia de bacterias asociadas.
Entre las microalgas de mayor importancia se encuentra Chlorella por su valor
econmico y nutricional, tanto a nivel animal como humano. Por ejemplo, Chlorella
vulgaris ha sido utilizadapor su calidad proteica (28) e incluso presenta propiedades
antitumorales (30). Actualmente, representa un sistema biolgico ideal para diferentes
lneas de investigacin y adems presenta una alta eficiencia por su fcil adaptacin en
condiciones de laboratorio (4, 5, 6, 9, 19, 21, 28, 31 y 32).
Los cultivos axnicos de microalgas de inters en biotecnologa pueden ser utilizados
para fines farmacolgicos y de nutricin humana. Mientras que, los cultivos no
axnicos en los cuales se mantiene la flora bacteriana asociada pueden ser
seleccionados para acuicultura, nutricin animal o para biofertilizantes. Sin embargo, la
respuesta de las microalgas para cada condicin de cultivo es susceptible de ser
modificada en funcin de diversos parmetros de cultivos. No obstante, actualmente se
tiene poca informacin fisiolgica de cepas de Chlorella cultivadas tanto en condiciones
axnicas como no axnicas (32). En este sentido, se reporta el efecto del pH, salinidad
y de la temperatura sobre el crecimiento y contenido de pigmentos de la microalga
Chlorella sorokiniana en cultivos discontinuos axnicos y no axnicos y en condiciones
mixotrficas y heterotrficas.
Materiales y mtodos
Microalga estudiada. Se seleccion la microalga Chlorella sorokiniana, procedente
del Embalse de Tul ubicado en la Costa Nor-Occidental del Lago de Maracaibo,
Municipio Mara, estado Zulia, Venezuela y aislada mediante la tcnica de dilucin en
serie en cultivo selectivo lquido y slido. La ubicacin taxonmica de la microalga se
determin mediante el uso de claves taxonmicas y estudio fisiolgico y bioqumico
realizado a la cepa (3, 19, 20, 21 y 44).
Descripcin de Chlorella. Se describi la microalga Chlorella mediante la
observacin de sus clulas en un examen al fresco y en lminas fijadas a travs del
microscopio ptico. Adems se observaron las caractersticas morfolgicas coloniales
de la microalga tanto en medio inorgnico como orgnico.
Obtencin del cultivo axnico de la microalga Chlorella. Colonias de la microalga
libres de bacterias se aislaron a partir de cultivos unialgales, mediante siembra en
medio slido inorgnico (figura 1). Las placas se incubaron a temperatura ambiente,
bajo un sistema de iluminacin continua a una intensidad luminosa de 98 mmol
quanta.m-2.s-1. Posteriormente las colonias de la microalga aisladas se sembraron en
medio de cultivo organotrfico (8), como control para garantizar las condiciones
axnicas de la microalga en cultivo lquido y slido.

Chlorella sorokiniana

Figura 1. Aislamiento de colonias de la microalga Chlorella sorokiniana.

Estudios fisiolgicos. Todos los cultivos se realizaron con medio comercial ALGAL
con un fotoperodo de 12:12 h, a una intensidad luminosa de 98 mol quanta.m-2.s-1,
28C y a pH inicial de 7. Los cultivos no axnicos con aireacin constante, se iniciaron
con un inculo de 1x106 cel.ml-1 en un volumen de 250 ml en matraces de 500 ml de
capacidad. Mientras que, los cultivos axnicos con agitacin mecnica, se iniciaron por
quintuplicado con 5x105 cel.ml-1 en un volumen de 15 ml en tubos con tapa de
baquelita.
pH. El crecimiento y la produccin de pigmentos de C. sorokiniana, se evaluaron a pH
1, 3, 5, 6, 7, 8 y 9, tanto en cultivos axnicos como no axnicos. Los cultivos no
axnicos fueron tamponados con Tris HCl a 25mM. A cada tratamiento se le ajust el
pH dos veces por da, mientras que el control correspondi a cultivos sin ajuste de pH.

El pH en los cultivos axnicos se evalu en medio de cultivo organotrfico con una

intensidad luminosa de 98 mol quanta.m-2.s-1, mediante la condicin mixotrfica y
en condiciones heterotrficas bajo oscuridad. El control correspondi a cultivos
autotrficos realizados con medio inorgnico ALGAL.
Todos los cultivos se mantuvieron durante 15 das a 25 2C y al trmino del cual se
determin la densidad celular, contenido de pigmentos y el pH final. Los cultivos
axnicos no fueron tamponados a fin de evitar efecto del mismo sobre las clulas libres
de bacterias.
Salinidad. Este experimento se realiz tanto en cultivos axnicos como no axnicos y
se utiliz agua de mar ajustada a las salinidades de 15, 25 y 35 ppm. El control
consisti en cultivos no salinos. A los de 15 das de iniciado el experimento se
determin el crecimiento celular y el contenido de pigmentos.
Temperatura. Los cultivos se hicieron crecer a 25, 30 y 37C en condiciones no
axnicas, y a 25, 37, 40 y 42C en condiciones axnicas. El medio de cultivo
organotrfico se utiliz en cultivos mixotrficos y heterotrfcos, mientras que el
control se mantuvo con medio inorgnico ALGAL y correspondi a los cultivos
autotrficos.
Medios de cultivo: a) Inorgnico. Se utiliz agua destilada esterilizada mediante
autoclave a 121C y 15 psi durante 20 minutos. Posteriormente, el agua se enriqueci
con medio de cultivo ALGAL a una concentracin equivalente a 6,0 y 8,0 mM de NaNO3
(14). El medio slido se realiz con agar-agar 1,5% suplementado con nutrientes
ALGAL. b) Orgnico. Se prepar medio lquido en tubos con tapa de baquelita de
capacidad 20 ml y medio slido en placas de Petri. Luego de esterilizado el medio
organotrfico conformado por extracto de levadura, peptona y glucosa a 5,0; 1,5 y 2,5
g.L-1 respectivamente, se procedi a adicionarle medio ALGAL a una concentracin
equivalente a 8,0 mM de NaNO3 (8).
Evaluacin de la biomasa:
A) Recuento celular. El crecimiento se calcul mediante el recuento de clulas con un
microscopio ptico binocular en cmara de Neubauer mejorada de 0,1 mm de
profundidad (15).
B) Determinacin de pigmentos. La clorofila a, b y los carotenoides totales se
determinaron mediante extraccin metablica. La concentracin expresada en pg.cel-1
fue determinada a partir de la ecuacin propuesta por Wellburn (42).
Anlisis estadstico. El crecimiento y la produccin de pigmentos de la microalga en
los cultivos no axnicos y axnicos se analizaron a travs de la prueba de Scheff
mediante el programa estadstico Stat Most for Window versin 3.0 (Stat Most
Corporation, 1995).
Resultados y discusin
Caracterstica morfolgica de Chlorella. Es una microalga unicelular inmvil, sin
constriccin en la parte media de la clula, de forma esfrica, con pared celular lisa y
con un cloroplasto en forma de copa (4, 5 y 22). Las colonias de Chlorella a veces

estn rodeadas de muclago y la modalidad de la agregacin de la clula es

caracterstica de las especies lo que facilita su identificacin. Aproximadamente, el
90% forman parte del plancton o del bentos de aguas dulces (16).
pH. El crecimiento de la microalga (densidad celular) tanto en cultivos axnicos como
no axnicos, se increment con el pH. Para los cultivos no axnicos, se obtuvieron los
mayores valores a pH 8 y 9, con 344,6833,45 y 352,3451,47x106 cel.ml-1,
respectivamente (cuadro 1). Siendo el pH 1 y 3 letal para la microalga. Por el
contrario, cuando el pH se increment a 5 comenz el crecimiento de la microalga,
pero an con una inhibicin del 81,79% respecto al control.
En condiciones axnicas, la microalga tambin increment su crecimiento en funcin
del pH, lo cual indica que su densidad celular se optimiza en el rango alcalino, pero a
diferencia de los cultivos no axnicos present tolerancia a pH 1 y 3, aunque el
crecimiento se mantuvo inhibido a pH 1 la microalga fue capaz de crecer a partir de pH
3, en cultivos autotrficos, heterotrficos y mixotrficos con un incremento de 4; 77,5
y 169 veces respectivamente, en relacin a la densidad celular (0,5x106 cel.ml-1) con
la que se inici el cultivo (figura 2). Los cultivos mixotrficos y heterotrficos con un
pH final de 7,8 produjeron los mayores valores de densidad celular con 122,641,33 y
109,431,48x106 cel.ml-1. A diferencia de ste ltimo, en los cultivos autotrficos se
encontr el valor ms elevado de crecimiento celular a pH final de 8,2 y 9,6 con
15,290,03 y 16,870,04x106 cel.ml-1 respectivamente.
Cuadro 1. Densidad celular (x106 cel.ml-1) y contenido de pigmentos (pg.cel1) de la microalga Chlorella sorokiniana en funcin del pH en condiciones no
axnicas.
pH
Control
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0

Densidad celular
168,2701,43
0,2200,01
154,5201,11
192,4606,46
344,6833,45
352,3451,47

Clorofila
1,580,04
ND
0,330,01
1,590,01
1,600,01
1,400,05

Carotenoides
0,370,04
ND
0,060,01
0,270,01
0,170,01
0,190,02

Chlo/caro
4,17
ND
5,35
5,88
9,41
7,37

Cultivos realizados en condiciones axnicas. Control: no tamponado y no ajustado, con

pH final de 9. Chlo/Caro: relacin clorofila /carotenoides. Cultivos a pH 5,0 con un
porcentaje de inhibicin del 81,79% en relacin al cultivo control. ND: no determinado
por baja densidad celular.
As mismo, el crecimiento de la microalga fue estimulado en funcin de la presencia de
sustratos orgnicos en el medio de cultivo (autotrofa< heterotrofa<mixotrofa) (figura
2). Es decir, el medio de cultivo organotrfico con iluminacin fue el que indujo un
mayor crecimiento de la microalga Chlorella. Diversos reportes indican que la condicin
mixotrfica de crecimiento contribuye a una mayor produccin de biomasa en diversas
microalgas, con respecto a la heterotrofa y autotrofa (10, 11, 23, 33 y 38).
Estos resultados indicaron tambin que, el medio de cultivo adems del pH, ejercieron
influencia sobre el crecimiento. En el medio inorgnico, la mayor densidad celular se
alcanz a pH final de 9,6, mientras que en medio organotrfico con iluminacin y bajo
oscuridad, se produjo un pH final de 7,8 (figura 2). Es posible, que la carga neta de

ciertos sustratos orgnicos en el medio de cultivo, vare en funcin del pH, lo cual
puede influir en el crecimiento.

*Cultivo control con pH final de 8.9

Figura 2. Influencia del pH sobre el crecimiento (x106 cel.ml-1) de la
microalga Chlorella sorokiniana en cultivos axnicos y no axnicos.
Por otra parte, el hecho de que esta cepa de Chlorella fuese capaz de tolerar un medio
de cultivo en condiciones axnicas result de inters fisiolgico. Sin embargo, en su
hbitat natural, caracterizado por su asociacin con bacterias, la microalga no creci y
perdi viabilidad a pH inferiores a 6. Esto significa que en condiciones axnicas
present mecanismos fisiolgicos inherentes exclusivamente a la microalga, capaces
de regular condiciones ambientales muy cidas, las cuales muchos microorganismos
fotosintticos no son capaces de tolerar, an cuando estn libres de bacterias. En este
sentido, se ha reportado que a las especies C. ellipsoidea y C. saccharophila crecen

satisfactoriamente a pH entre 2 y 3 y que esta propiedad constituye adems una

caracterstica taxonmica til para separar especies dentro del gnero (21).
La produccin de clorofila en condiciones no axnicas fue superior en el control y en los
cultivos a pH 7 y 8, con diferencia significativa (P<0,05). En cambio, en condiciones
axnicas, el pH no ejerci influencia en el contenido de clorofila, debido a que entre pH
3 y 9 se encontraron valores similares, entre 0,37 y 0,45 pg.cel1 (figura 3). Sin
embargo, este pigmento se produjo ms en condiciones no axnicas con diferencia
significativa (P<0,05), con valores de 3,5; 5,3 y de 5,7 veces ms superiores a los
obtenidos en los cultivos axnicos mixotrficos, heterotrficos y autotrficos,
respectivamente. Estos resultados se reflejan de igual manera por las elevadas
relaciones clorofila/carotenoides registradas en los cultivos no axnicos. Es decir, la
sntesis de clorofila fue estimulada en la medida que el pH aument, mientras que la
concentracin de carotenoides presenta tendencia a disminuir (cuadros 1 y 2).
Para el caso de los carotenoides se alcanzaron los valores ms elevados a pH 7
independientemente de la condicin axnica; aunque sin diferencia significativa entre
ambos tipos de cultivos (cuadros 1 y 2).

Figura 3. Influencia del pH sobre el contenido de clorofila (pg.cel-1) de la

microalga Chlorella sorokiniana en cultivo axnicos y no axnicos.
Cuadro 2. Relacin clorofila/carotenoides en cultivos mixotrficos y
heterotrficos de la microalga Chlorella sorokiniana en funcin del pH, en
condiciones axnicas.
pH
Inicial
1
3
5
6
7
8

Final
1,1
3,4
5,8
6,4
7,8
8,2

Relacin clorofila/carotenoides
Autotrofa
Mixotrofa
Heterotrofa
ND
ND
ND
ND
1,61
1,05
1,25
1,85
1,06
1,36
1,95
1,10
1,47
1,96
1,11
1,53
2,05
1,41

9,6

1,53

1,95

1,46

ND: no determinado por baja densidad celular.

Los resultados indican que la mayor produccin de clorofila en cultivos no axnicos
posiblemente estuvo relacionada con el aporte de nutrientes ricos en fuentes
nitrogenadas y de minerales que pudieron ser aportados por las bacterias asociadas a
la microalga, a pesar de que el medio organotrfico en el cual se hizo crecer la
microalga libre de bacteria, estuvo muy enriquecido con diversas fuentes nitrogenadas.
Salinidad. Las densidades celulares en fase estacionaria ms elevadas se alcanzaron en
medio no salino con 59,183,63x106 cel.ml-1 para los cultivos no axnicos y de
109,111,07 y 89,701,0x106 cel.ml-1 para los cultivos mixotrficos y heterotrficos
con diferencias significativa (P<0,05) (figura 4). Sin embargo, el incremento de la
salinidad produjo un efecto in hibitorio sobre el crecimiento de la microalga. A 25 y 35
ppm, la densidad celular disminuy en un 97,9% y en un 98,5% respectivamente, en
cultivos no axnicos. En cultivos mixotrficos, la microalga creci a todas las
salinidades, con un descenso hasta del 61,8% cuando se cultiv a 40 ppm. En cultivos
heterotrficos tambin creci a todas las salinidades, hasta crecer slo 1,3% respecto
a los cultivos no salinos.
Estos resultados indican que el efecto de la salinidad fue ms drstico en cultivos
axnicos autotrficos y heterotrficos que en los no axnicos. Sin embargo, cuando la
microalga creci en cultivos mixotrficos fue capaz de mantener elevadas densidades
celulares hasta salinidades de 25 ppm. En cambio, a 35 ppm llega a alcanzar el 62,3%
del crecimiento obtenido en ausencia de salinidad (figura 4). Es importante indicar,
que el medio de cultivo organotrfico utilizado favoreci el crecimiento de la microalga
y al parecer, en presencia de iluminacin, la microalga toler ms la salinidad. En este
sentido, la salinidad ejerci un efecto ms drstico bajo oscuridad, siendo la relacin
de crecimiento mixotrofia/heterotrofa 30 veces mayor. Es decir, en cultivos
mixotrficos se produjo un aumento de la inhibicin hasta 38,3%; mientras que, en los
heterotrficos lleg a alcanzar hasta 98%.

Figura 4. Influencia de la salinidad (ppm) sobre el crecimiento (x106 cel.ml1) de la microalga Chlorella sorokiniana en cultivos axnicos y no axnicos.
Asimismo, la salinidad produjo un incremento del contenido celular de clorofila y
carotenoides totales, en condiciones no axnicas. Los valores ms altos se alcanzaron
a 25 y 35 ppm con relacin a los cultivos no salinos (figura 5). Probablemente la
mayor talla celular producto de una baja velocidad de crecimiento de la microalga con
la salinidad, estuvo relacionada con la acumulacin de metabolitos y por lo tanto, el
contenido celular de clorofila y carotenoides fue superior a los encontrados en las
clulas no expuestas a medio salino. La microalga acumul 20 y 24 veces ms clorofila
y carotenoides en medio dulceacucola, respecto a las cultivadas a 35 ppm en
mixotrofa. Sin embargo, cuando creci en oscuridad slo produjo 1,8 y 1,6 veces ms
clorofila y carotenoides respectivamente, comparadas con las mantenidas a 35 ppm
(figura 5).

Figura 5. Influencia de la salinidad (ppm) sobre la produccin de clorofila

(pg.cel-1) en cultivos axnicos y no axnicos de la microalga Chlorella
sorokiniana.
El anlisis estadstico demostr que hubo diferencia significativa (P<0,05) en cuanto a
clorofila, entre los cultivos a 35 ppm y los controles (cuadro 4). Para los carotenoides
tambin se obtuvieron diferencias significativas (P<0,05) entre el control y los cultivos
a 15 y 25 ppm. Esto se debi quizs a la presencia de sales de Mg, Ca, S04 y Fe en el
agua de mar, con lo cual se logr una mayor disponibilidad de nutrientes para mejorar
la produccin de biomasa y de clorofila en microalgas como Chlorella.
En ambas condiciones de cultivos, la relacin clorofila/carotenoides disminuy con la
salinidad (cuadro 3). El incremento de la salinidad estimul la sntesis de carotenoides
por efecto de estrs salino, de tal manera que aument la proporcin de molculas de
estos pigmentos en relacin a las de clorofila.

Aunque estos resultados sugirieron que la microalga fue sensible a la salinidad en su

hbitat natural, en condiciones axnicas fue capaz de mantener un elevado crecimiento
en un medio de cultivo enriquecido y hasta salinidades de 35 ppm. Se desconoce la
razn por la cual las clulas toleran ms la salinidad bajo iluminacin que en oscuridad
cuando crecieron en medio organotrfico.
Temperatura. En cultivos no axnicos la microalga creci a todas las temperaturas
estudiadas, con un ptimo a 30C. Sin embargo, a 37C el crecimiento disminuy en
un 25,4% en relacin a la temperatura ptima (figura 6). Las elevadas densidades
celulares producidas entre 25 y 35C, indicaron la adaptacin de esta microalga a
cuerpos de aguas tropicales. Por lo tanto, esta cepa de Chlorella puede desarrollarse
eficientemente en cultivos abiertos en nuestras zonas tropicales (26).
Cuadro 3. Relacin clorofila/carotenoides en cultivos axnicos y no axnicos
de la microalga Chlorella sorokiniana en funcin de la salinidad.
Relacin Clorofila total/Carotenoides
Salinidad (ppm) Autotrofa

Mixotrofa

Heterotrofa

0
15
25
35

1,41
1,43
1,11
1,00

1,44
1,40
1,29
NC

1,60
1,30
1,25
NC

No axnico
autotrfico
4,71
5,30
3,05
1,04

NC: No hubo crecimiento

En cultivos axnicos, Chlorella manifiest un excelente crecimiento entre 25 y 42C,
con un ptimo a 37C. En condiciones mixotrficas se alcanz el mayor crecimiento a
37C, el cual fue de 2 y 15 veces superior al obtenido en cultivos heterotrficos y
autotrficos, respectivamente. De igual manera, a 40C y 42C, la microalga exhibi
un crecimiento elevado con 72,620,75 y 58,790,04 x106 cel.ml-1, mientras que en
cultivos autotrficos la microalga slo toler temperaturas hasta de 37C, aunque el
crecimiento fue siempre menor en relacin a mixotrofa y heterotrofa (figura 6). Esto
fue debido a que las microalgas en cultivos no axnicos, requirieron de nutrientes
adicionales derivados de la flora bacteriana asociada. En este sentido, que su
crecimiento no fue estimulado cuando estuvo libre de bacterias.
Estos resultados encontrados en relacin a la temperatura coinciden con los reportados
en cultivos axnicos de la microalga Tetraselmis suecica, donde tambin se produjo un
bajo crecimiento en condiciones autotrficas, en ausencia de sustancias orgnicas
(18).
Los resultados indicaron que esta cepa de Chlorella fue capaz de crecer a elevadas
temperaturas entre 37 y 42C. Esta caracterstica, adems de la tolerancia a pH cidos
y elevada salinidad, tambin permiti ubicar a esta cepa en la especie C. Sorokiniana
(17, 19, 38 y 39). En cultivos no axnicos de Chlorella vulgaris se ha reportado una
temperatura ptima para su crecimiento de 32,4C (20 y 30). Sin embargo, el
comportamiento de las microalgas en condiciones axnicas y unialgales en relacin a la
temperatura pueden variar, ya que en cultivos no axnicos de la especie de Chlorella
estudiada, se obtuvo una temperatura ptima de 30C (resultados no reportados).

Es importante destacar que la elevada productividad de ciertas microalgas en

condiciones mixotrficas est relacionada con la utilizacin simultnea y eficiente de
compuestos orgnicos y de CO2 como fuente de carbono, y de luz como fuente de
energa, de tal manera que la produccin de biomasa fue incrementada respecto a
cultivos heterotrficos o autotrficos (6 y 34).

Figura 6. Influencia de la temperatura en el crecimiento. (x106 cel.ml-1) de la

microalga Chlorella sorokiniana, en condicin axnica y no axnica.
Los cultivos axnicos de microalgas constituyen los de mayor rigidez cientfica; puesto
que aportan resultados directos producto de diversos factores ambientales sobre su
crecimiento, fisiologa o bioqumica. Es as como, estos cultivos son necesarios para
estudios taxonmicos (38), remocin de metales (2), biotransformacin (29). En este
caso, Chlorella sorokiniana en condiciones axnicas present caractersticas
diferenciales con respecto a su comportamiento en presencia de su flora bacteriana
asociada.

Conclusiones
La respuesta de la microalga Chlorella sorokiniana al pH, salinidad y temperatura,
vari en funcin de la presencia o ausencia de su flora bacteriana acompaante. En
condiciones no axnicas slo fue capaz de crecer satisfactoriamente a pH entre 6 y 9,
optimizar su densidad celular a 30C y crecer en ausencia de salinidad.
En condiciones axnicas cambi su respuesta de tolerancia a pH cidos; a
temperaturas de hasta 42C y de salinidades de 25 ppm.
Este comportamiento sugiere que la respuesta fisiolgica de la microalga ante el
ambiente natural, fue modificada cuando eximi la relacin con sus bacterias
asociadas. Adems, la mixotrofa demostr ser la condicin ms adecuada que
favoreci el crecimiento de la microalga frente a cambios ambientales.
Por lo tanto, esta microalga autctona, bajo condiciones axnicas presenta un gran
potencial biotecnolgico por su capacidad de crecimiento en cultivos mixotrficos y
heterotrficos en presencia de nutrientes orgnicos y a un intervalo de pH muy amplio.
Esto puede servir como alternativa a la condicin autotrfica de crecimiento para la
produccin de biomasa a elevadas temperaturas, con lo cual puede inducirse la
produccin de enzimas, de protenas o de compuestos con actividad biolgica con fines
farmacolgicos.
Agradecimientos
Los autores agradecen al FONACIT por el apoyo financiero atravs del proyecto S12000000786.
Literatura citada
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(Estado Zulia, Venezuela). Bol. Centro Inv. Biol. 16: 19-95.

Reactivos empleados en la electroforesis

de DNA
Tampn TAE

Es el medio usado para preparar el gel y desarrollar la electroforesis. Recibe

este
nombre
de
las
iniciales
de
sus
componentes.
El pH es alcalino, para que todos los grupos fosfato del DNA estn ionizados por
completo y ste se mantenga cargado negativamente. La composicin habitual es
Tris 40 mM, c. actico 19 mM, EDTA 1 mM, pH=7,5
En la electroforesis, permite mantener las molculas de DNA con una carga
negativa uniforme y constante. Es, por ello, componente del gel y del tampn de
electroforesis, o tampn de cubeta.

Tris
+

Actico
+

EDTA

Tris

Es
el
nombre
comn
de tris(hidroximetil)aminometa
no. Se trata de un compuesto
muy utilizado en el laboratorio
para
preparar
disoluciones
tampn; el grupo cido-base que
ejerce el tamponamiento es el
amino. Se comercializa en sus
formas bsica ("Tris base") y
cida
("Tris
hidrocloruro"),
aunque la primera es la de uso
ms
comn.
Un
tampn
denominado
"Tris-HCl"
se
prepara con Tris base a la
concentracin indicada y con el
HCl necesario para ajustar el pH
al valor indicado.
En la electroforesis, es el
agente tamponante que mantiene
el pH.

(HOCH2)3C-NH2
Mr 121 g/mol

EDTA

Acrnimo
de EthyleneDiamine TetraAcetic
acid, cido etilendiaminotetraactico (a veces
AEDT en espaol). En sus formas desprotonadas
(2 y 4), es un conocido agente quelante de cationes
divalentes, en especial Ca2+ y Mg2+.
Dado que el Mg2+ es un cofactor requerido por la
mayora de nucleasas, su secuestro por el EDTA
evita la degradacin del DNA durante la preparacin
y la electroforesis.

pulsa para ver un modelo en 3D

Azul de bromofenol

Se trata de un compuesto coloreado y con carga, utilizado para

comprobar el progreso de la electroforesis.
En la electroforesis, por su menor tamao, se mueve ms
rpido que la mayora de molculas de DNA (siempre que stas
sean superiores a 300 pb), es decir, marca el "frente de avance".
Puesto que su color azul-violeta es bien visible, permite detener la
electroforesis con la confianza de que las molculas de DNA no
se hayan salido del gel.
pulsa para ver un modelo en 3D

Xileno-cianol

Se trata de un compuesto coloreado y con carga, utilizado

para comprobar el progreso de la electroforesis.
En la electroforesis se mueve aproximadamente como las
molculas de DNA de 9000 pb. Puesto que su color azul es bien
visible, permite detener la electroforesis con la confianza de que
las molculas grandes de DNA no se hayan salido del gel.
pulsa para ver un modelo en 3D

Bromuro de etidio

Se trata de un compuesto intercalante, es decir, que tiene

afinidad para unirse al DNA, pues se introduce entre sus
bases apiladas. Esto se debe a su geometra plana y su
estructura aromtica, que interacciona favorablemente con
el interior hidrfobo de la doble hlice. En menor medida,
interacciona tambin con DNA monocatenario.
Su utilidad deriva asimismo de su fluorescencia, exaltada
al encontrarse en un entorno hidrfobo, es decir, al estar
unido al DNA. Se excita con luz ultravioleta de onda corta,
254 nm, y emite su fluorescencia como luz visible, de color
rosado-anaranjado.
En la electroforesis, se utiliza para "teir" el DNA, para
revelar su posicin en el gel. Se puede baar el gel tras la
electroforesis en una disolucin de bromuro de etidio, o bien
incorporar ste a la disolucin de agarosa con la que se
prepara el gel.
GelRed

Es la marca comercial de un compuesto adecuado para

revelar el DNA en geles. Su estructura es un secreto
comercial bajo patente, pero es algo similar al compuesto
mostrado a la derecha.

Dos ncleos aromticos: le confieren capacidad

intercalante, es decir, que tiene afinidad para unirse al
DNA, pues se introduce entre sus bases apiladas. Esto se
debe a su geometra plana y su estructura aromtica,
que interacciona favorablemente con el interior
hidrfobo de la doble hlice.
Una cadena aliftica larga que hace de conector entre
ambos ncleos intercalantes.
Por otra pare, su ligera carga positiva tambin facilita su
unin al DNA (recurdese que ste es una molcula
polianinica).

Su utilidad deriva asimismo de su fluorescencia:

En forma libre, los dos ncleos aromticos interaccionan

entre s y por ello la molcula apenas es fluorescente.
Al unirse al DNA los dos ncleos se separan y, al
encontrarse en un entorno hidrfobo, emiten una
fluorescencia intensa. Se excitan con luz ultravioleta de
onda corta, 254 nm, y emiten luz visible, de color rojo
(de ah el nombre del reactivo).

pulsa para ver un modelo en 3D

pulsa para ver un modelo en 3D

En la electroforesis, se utiliza para "teir" el DNA, para

revelar su posicin en el gel. Se puede baar el gel tras la
electroforesis en una disolucin de GelRed, o bien
incorporar ste a la disolucin de agarosa con la que se
prepara el gel.

Quiero preparar 100 mL un buffer de TRIS-HCl 0.2 molar a

un pH de 8.1?
1.-El Clculo es :
100ml(0,2 mol-g Tris/1000ml)(157,56 g Tris/1mol-gTris) = 3,1512g Tris
2.- Lo que se hace es:
-Pesar 3,1512 g de Tris: Tris(Hidroximetil)aninimetano- HCl.
- Disolverlo en una porcin por ejemplo 80ml de agua desionizada.
- Ajustar el pH a 8,1 con HCl.Una vez conseguido el pH, llevarlo hasta 100 ml agregando mas agua
a una fiola de 100 ml y enrazar.
- Envasar y rotular.

Mtodo de lectura rpida: Cmo leer

un 300% ms rpido en 25 minutos

Tema: Mejora Personal

Lo que tardes en leer y probar este artculo es lo que se tarda en leer un libro como este con un
mtodo de lectura rpida.

Tiempo de lectura de este post: 5-8 minutos.

Seguir a @VicBlaz

Imagina poder tardar en leer los libros de la universidad, los

expedientes del trabajo o los apuntes de otro compaero tres o
cinco veces ms rpido que antes. Eso quiere decir poder leer en

quince minutos lo que antes tardabas una hora. Y solo necesitas 25

minutos de tu tiempo.
Con 14 aos lleg a mi el mtodo de lectura del recordman
mundial Ramn Campayo. Ramn es uno de los hombres con el
coeficiente intelectual ms alto del mundo y es capaz de leer 10-20
veces ms rpido que la mayora de personas (pinsalo framente,
tarda una hora en leer lo que el resto tarda diez o veinte horas). Lo
mejor es que es un mtodo sencillo que todos podemos usar (yo
soy un ejemplo de como terminarme en una tarde un libro en vez de
semanas) y que podrs ponerlo en prctica con veinte minutos de tu
tiempo (ms cinco minutos leyendo este artculo).
Lo que necesitars es: un libro de texto (sin dibujos) de ms de 200
pginas que se pueda mantener abierto en una mesa, un bolgrafo,
un cronmetro (el del mvil es perfecto) y 20 minutos sin
interrupciones.

Conceptos bsicos
1- Debes reducir el tiempo que tus ojos pasan en cada lnea.
No tienes que leer de una sola pasada. El truco se basa en hacer
pequeos saltos dentro de cada lnea. Cada uno de esos saltos son
como pequeas fotografas que recogen el mximo contenido en el
mnimo tiempo posible. Estos saltos durarn entre un cuarto de
segundo y medio segundo y son la clave de la lectura rpida.
2- Debes eliminar el hbito de volver a leer lo que acabas de
leer.

Gastar el tiempo en leer una y otra vez algo que ya se ha ledo hace
que pierdas un 30% de tu tiempo de lectura. La principal razn es
que pensamos en demasiadas cosas mientras leemos y eso en
parte se debe a leer demasiado despacio.
3- Debes entrenar a tus ojos para usar la visin perifrica
horizontal y para aumentar el nmero de palabras que se ven
por salto.
Sin entrenamiento la visin predominante es la visin central que
reduce en un 50% el nmero de palabras que pueden leerse en
cada salto visual.

Primer paso
limitacin

Conociendo

nuestra

Lo primero que debes saber es cual es tu velocidad de lectura.

Coge tu libro de prctica y cuenta las palabras que hay en cinco
lneas. Una vez tengas ese nmero divdelo entre cinco y tendrs la
media de palabras por lnea.
Ejemplo: 60 palabras / 5 lneas = 12 palabras por lnea.
Coge tu cronmetro y ajstalo en un minuto exacto. Empieza a leer
hasta que suene tu cronmetro. No leas ms rpido que de
costumbre e intenta comprender lo que lees. No hagas trampas y no
te entretengas mirando el cronmetro y pensando si sonar o s se
habr roto. Al acabar cuenta todas las lneas que has ledo y
multiplcalo por el nmero de palabras por lnea que has calculado
antes. Rodea con un crculo ese nmero.

Segundo paso Seala y dispara

El releer, el tiempo en cada salto y la prdida de concentracin se
puede resolver sealando y disparando. Cuando has contado las
palabras y las lineas has usado un bolgrafo o el dedo?. S la
respuesta es afirmativa ah tienes el poder de sealar y disparar. Si
para contar algunas palabras has usado tu dedo, para la lectura
ultrarrpida es igual de necesario.
Para nuestra prctica usaremos un bolgrafo para sealar y disparar
y el mecanismo tratar de subrayar (con la tapa puesta) cada lnea
que leamos. Esto provocar que mantengamos el tempo y la
atencin intactas.
1- Tcnica (2 minutos):
Practica usando tu bolgrafo para sealar y disparar. Subraya cada
lnea que leas centrndote en la punta del bolgrafo. No te centres
en entender lo que lees sino en aprender la tcnica. Cada lnea
deber ser leda y subrayada en, como mximo, 1 segundo. Lee,
pero bajo ninguna circunstancia pases ms de 1 segundo por lnea.
2- Velocidad (3 minutos):
Repite la tcnica subrayando cada lnea durante medio segundo.
Puede que no entiendas nada pero entra dentro de nuestro plan.
Subraya durante los 3 minutos que dura este ejercicio y no pases
ms de medio segundo en cada lnea sin dejar de leer. Concntrate
y no dejes volar tu imaginacin. Es algo muy comn en esta parte
del ejercicio acabar pensando en otras cosas.

Tercer paso Visin perifrica

Si te centras solo en lo que tienes frente a ti te perders dos tercios
de informacin. Si consigues usar tu visin perifrica podrs
aumentar en un 300% tu velocidad.
1- Tcnica (1 minuto):
Usa el bolgrafo para dar saltos en cada lnea. Empieza colocando
tu bolgrafo en la primera palabra de la linea y despus llvalo hasta
la ltima palabra. Este proceso no debe durar ms de 1 segundo y
tu intencin es intentar captar el mximo de palabras fijndote
siempre en la punta del bolgrafo.
No te preocupes por comprender e intenta aumentar la velocidad
cada vez que pases de pgina. Lee, pero bajo ninguna circunstancia
bajes el ritmo de una linea por segundo.
2- Tcnica (1 minuto):
Vuelve a repetir el ejercicio apuntando ahora a la segunda y
penltima palabra de cada lnea.
3- Velocidad (3 minutos):
Repite el ejercicio apuntando ahora a la tercera y antepenltima
palabra de cada linea. Esta vez, debes cambiar de linea cada medio
segundo.
Puede que no entiendas nada, es algo normal. Puliendo la tcnica
acostumbrars a tus reflejos a poder fijarte y entender cada palabra

que fotografes. No bajes el ritmo de una linea cada medio segundo

durante los 3 minutos. Cntrate en el bolgrafo y mantn la
velocidad. Son solo 3 minutos, no pienses que es un ejercicio eterno
y tampoco pienses en lo que te vayas a poner el fin de semana.
Concntrate.

Cuarto paso Calcular tu nuevo nmero

de palabras por minuto.
Empieza una nueva pgina y lee durante un minuto como lo haras
normalmente (sin bolgrafos ni puntos de apoyo) lo ms rpido que
puedas manteniendo la comprensin. Multiplica el nmero de lneas
al acabar por elnmero de palabras por lnea que calculaste antes y
tendrs tu nuevo nmero de palabras por minuto. Compralo con
el nmero rodeado anterior a ver si has mejorado o no (te aseguro
que s).
Felicidades. Has dado el primer paso para dominar la lectura
ultrarrpida.
Effect of alternative mediums on production and
proximate composition of the microalgae Chaetoceros
muelleri as food in culture of the copepod Acartia sp.
Efecto de medios alternativos sobre la produccin y composicin
proximal de la microalga Chaetoceros muelleri como alimento en
cultivo del coppodo Acartia sp.

Luis R. Martnez-Crdova1, Alfredo Campaa-Torres2, Marcel MartinezPorchas3 Jos A. Lpez-Elas1 & Celia O. Garca-Sifuentes3
1

Department of Scientific and Technological Research of the University of Sonora

(DICTUS) Luis Donaldo Colosio w/n, Colonia Centro, ZC 83000, Hermosillo, Mxico.

Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste, La Paz BCS, Mxico.

Centro de Investigacin en Alimentacin y Desarrollo, A.C. km 0,6 Carretera a La
Victoria ZC 83304, Hermosillo, Mxico.
3

Correspondencia a:

ABSTRACT. Microalgae Chaetoceros muelleri was cultured in three different mediums

consisting on an agricultural fertilizer (Agr-F), aquacultural fertilizer (Aq-F) and a
conventional medium (F/2, control). These microalgae were later used as natural food
to culture the copepod Acartia sp. The productive response and chemical proximate
composition of microalgae and copepods were monitored. Growth rate and final cell
concentration were higher in microalgae cultured in Agr-F compared to the control. In
addition, the final biomass and cellular concentration were also the highest in Agr-F.
Microalgae from Agr-F and Aq-F had higher carbohydrate and lower protein contents
than those in the control. No differences in lipid and ash contents were observed.
Regarding copepod production, higher densities and fecundity indexes were observed
for those fed with microalgae previously cultured in Agr-F and Aq-F, compared to the
control. The adult-nauplii ratio was also higher in copepods fed on microalgae from
Agr-F compared to Aq-F and control. Copepods fed on Agr-F and Aq-F microalgae, had
higher protein content compared to those fed on control microalgae; carbohydrates
were higher in copepods fed on Agr-F as compared to Aq-F microalgae. No differences
in lipid and ash contents were registered. Agr-F and Aq-F were adequate alternative
mediums to produce C. muelleri, which produced higher quality microalgae that
increased the copepod production.
Keywords: agricultural fertilizer, aquacultural fertilizer, microalgae quality, productive
response, proximate composition, copepod production.

RESUMEN. La microalga Chaetoceros muelleri fue cultivada en tres medios diferentes

basados en un fertilizante agrcola (Agr-F), un fertilizante acucola (Aq-F) y un medio
convencional (F/2, control). stas microalgas fueron posteriormente utilizadas como
alimento natural para cultivar el coppodo Acartia sp. La respuesta productiva y la
composicin proximal de las microalgas y coppodos fueron monitoreadas. La tasa de
crecimiento y concentracin final de clulas fueron mayores en la microalga cultivada
en Agr-F, comparada con el control. La biomasa y concentracin celular finales
tambin fueron ms altas en Agr-F. Las microalgas de Agr-F y Aq-F tuvieron mayor
contenido de carbohidratos y menor contenido de protena en comparacin con el
control. No se observaron diferencias en los contenidos de lpidos y cenizas. Respecto a
la produccin de coppodos, las mayores densidades e ndices de fecundidad se
observaron en los organismos alimentados con microalgas producidas en Agr-F y Aq-F,
en comparacin con el control. La proporcin adulto-nauplio tambin fue mayor en
coppodos alimentados con microalga de Agr-F comparada con Aq-F y el control. Los
coppodos alimentados con microalgas del Agr-F y Aq-F, tuvieron un mayor contenido
de protenas que el control; la cantidad de carbohidratos fue mayor en coppodos
alimentados con microalga del Agr-F comparada con Aq-F. No se observaron
diferencias en los contenidos de lpidos y cenizas. Agr-F y Aq-F fueron medios
alternativos adecuados para producir C. muelleri, los cuales produjeron microalgas de
alta calidad que incrementaron la produccin de coppodos.

Palabras clave: fertilizante agrcola, fertilizante acucola, calidad de microalga,

respuesta productiva, composicin proximal, produccin de coppodos.

INTRODUCTION
One of the aquaculture resources that are mainly fed during nursery and larval phases
of cultured fish and crustacean is the zooplankton; moreover, recent reports propose
the use of natural feed in pre-grow and/or grow-out phases of shrimp culture (Jory,
2000; Campaa-Torres et al., 2009, 2010).
Nonetheless, the production of natural food such as microalgae and zooplankton
species is commonly accompanied by high economical investments, often attributed to
the high cost of culturing mediums used for the production of microalgae; additionally,
these mediums are highly specialized and sometimes difficult to obtain in local
markets. Furthermore, such microalgae is used to produce Artemia larvae, which are
also expensive and sometimes scarce (Lin et al., 2009; Gonzlez et al, 2010). It is
therefore necessary to study alternative strategies aimed at decreasing costs without
affecting the production. For instance, some efforts have been made in order to find
alternative mediums for microalgae culture; also, different organisms such as
copepods, rotifers and cladocerans have been proposed to replace Artemia (St0ttrup,
2000; Voltolina & Lopez-Elas, 2002; Martin et al., 2006; Campaa-Torres et al., 2009;
Farhadian et al., 2009). From these experiments, some promising results have
emerged.
Although several experiments have been performed in order to analyze the effect of
different media on the productive response and proximate composition of microalgae,
most of those studies do not include the subsequent effect of such microalgae on the
productive response of zooplankton species (Wikfors, 1986; Fidalgo et al, 1998;
Toyub et al., 2007). The quantity, but also the quality of the zooplankton consumed by
fish or crustacean, may have an impact on their productive response. Gusmo &
McKinnon (2009) demonstrated that the production and nutritional composition of
copepods was related to the type of feed they consumed.
The calanoid copepod Acartia sp., can be used as an alternative natural food for
diverse aquacultural species, since these organisms can be massively produced in
laboratory and have demonstrated to be widely consumed by aquatic species
(Schipp et al., 1999); additionally, they can be found in commercial laboratories
and/or a wide diversity of ecosystems. St0ttrup (2000) remarked the great potential of
copepods as live feed in marine aquaculture. Micro-algae such as Chaetoceros
muelleri has been widely used in aquaculture due to their rapid growth rate, resistance
to adverse conditions and nutritional quality; in particular, it has been used to
feed Acartia sp. (Gusmo & McKinnon, 2009).
The aim of this study was to analyze the effect of two alternative media on the
productive response and proximate composition of microalgae C. muelleri, and the
subsequent effect of such microalgae on the productive response and proximate
composition of the copepod Acartia sp.

MATERIALS AND METHODS

Experiment 1- Microalgae culture
Two alternative media based on an agricultural and aquacultural fertilizers, and a
special medium for microalgae production, were used to culture the microalgae C.
muelleri. A simple experimental design was performed with four replicates per
treatment. Microalgae inoculums were obtained from a commercial laboratory
(Maricultura del Pacifico S.A.) at Sonora, Mxico. Guillard F/2 media was used to
maintain the inoculums alive.
The control was based on the commercial medium Guillard F/2 (Guillard, 1975;
ProLine F/2 Algae Feed, Aquatic 1cosystems, Florida). The treatment 1 (Agr-F), was
based on an agricultural fertilizer (Monoammonium Phosphate; 1uroChem, Moscow)
prepared as follows: 137 g of the fertilizer +30 g of sodium metasilicate diluted in 1 L
of distilled and sterile water. Treatment 2 (Aq-F) was based on an aquacultural
fertilizer (Nutrilake), enriched with vitamins (Bedoyecta) (Table 1). The three
different media were added to each treatment at the beginning of the trial (1 mL L-1).

Table 1. Chemical proximate composition of

the fertilizers used to culture of microalgae C.
muelleri.
Tabla 1. Composicin qumica proximal de los
fertilizantes utilizados para cultivar la
microalga C. muelleri.

A multi-step system was performed to increase microalgae volume. Thereafter, the

microalgae were distributed into 12 fiberglass columns (80-L; 4 columns/treatment) at
an initial concentration of 2 x 105 cells mL-1. Treatments were maintained under the
same following conditions for four days: light 140 m 2 s 1, temperature 21-23C,
pH 8.2-8.5, salinity 35 psu and constant aeration, as suggested by Lopez-Elas et
al. (2004).
Microalgae response
The productive response of C. muelleri was evaluated during and at the end of the
bioassay; the cellular density was measured using a Neubauer chamber (VWR
Scientific, Los Angeles, CA., USA) and an optical microscope (Ward's, Rochester,
N.Y., USA).

where was considered as the growth rate, B0 microalgae density (cells mL-1) at the
beginning, Bn microalgae density at any time, and tn-t0 the period of microalgae
culture since inoculation. The generation

was estimated after filtration with a 0.2 membrane average pore and dried in an
oven (70C) until constant weight.
To analyze microalgae proximate composition (protein, lipid, carbohydrate and ash),
samples were filtered using fiberglass filters (47 mm; Whatman Maidstone UK)
previously dried. The protein content was measured following the methodology
described by Lowry et al. (1951), and modified by Lpez-Elas & Voltolina (1993). The
carbohydrate concentration was estimated by the "phenol-sulfuric acid" method
reported by Dubois et al. (1956). The lipid content was calculated by a colorimetric
method described by Pande et al. (1963) and modified by Bustillos-Hurtado & LpezElas (1994). Ash was estimated by incineration at 550C (AOAC 1995). Thereafter,
the percentage of the organic fraction was calculated for microalgae from each
treatment.
Experiment 2- copepod culture
Microalgae cultured in the different media (control, Agr-F and Aq-F) were thereafter
used to culture the copepod Acartia sp. for 15 days. The experimental design was
similar to that for microalgae, with four repetitions per treatment; the experimental
units consisted on 10-L tanks provided with constant aeration ( 6 mg L-1),
temperature 28C, salinity 35 psu and pH 8.0-8.3. The copepod cultures were initiated
with 2400 organisms per experimental unit, and a microalgae density of 3.0 x 10 4 cells
mL-1 was maintained within each tank; the microalgae density was estimated and
readjusted twice a day (06:00 and 18:00 h) for each experimental unit.
At the end of the culture, copepods were harvested with a net (70 mesh screen [212
]), and copepod density, nauplii-adult ratio and fecundity index were estimated;
subsamples (10 x 20 mL) were collected from each unit and counted by stereoscopic
microscopy (40x) (Del Valls et al, 1996). Fecundity index was estimated following the
methodology proposed by Ramrez-Sevillaet al. (1991), considering the number of
eggs and the female number.
The proximate composition on dry basis (DB) of copepods was estimated only for those
adult organisms; a special net (50 mesh screen [300 ]) was used to separate adult
copepods. Protein, carbohydrate, lipid and ash content of copepods were estimated by
using the standard methods of the Association of Official Analytical Chemists (AOAC).
Statistical analysis
Production parameters of microalgae and copepods were analyzed by a one-way
ANOVA and a posteriori comparison test (Tukey). If data did not comply with normality
(Shapiro-Wilk) and homoscedastic (Bartlett) tests, a non-parametric test was used
(Kruskall-Wallis). Proximate composition of microalgae and copepods was analyzed by
a chi-square test. A level of = 0.05 was considered significant.

RESULTS
The culture mediums had an effect on the productive response of microalgae (Table 2).
Growth rate was 19% higher in microalgae cultured with Agr-F compared to those

cultured in Aq-F; however, such difference was not reflected in the generation time,
which was lower than Aq-F (24.7 vs 27.9 h) but not statistically different. The
increases in cellular concentration and biomass are shown in Fig. 1. The highest final
cellular concentration was achieved in Agr-F (3.75 x 106 cells mL-1), followed by control
(2.94) and Aq-F (2.28) respectively. The highest biomass was also found in Agr-F
(0.34 g L-1), while no differences were observed among Aq-F (0.25 g L-1) and the
control (0.26 g L-1) (Table 2).

Table 2. Production parameters of C.

muelleri cultured in different media.
Tabla 2. Parmetros de produccin de C.
muelleri cultivada en diferentes medios.

The carbohydrate level was significantly higher (> 21%) in microalgae cultured in AgrF and Aq-F compared to those cultured in the control (< 19%), (Table 3). In the case
of protein level, microalgae from the control had ~3% more protein content, compared
to both treatments. No statistical differences were observed among treatments for lipid
or ash content (Table 3). The same tendencies were observed for protein, lipid and
carbohydrate proportion when the organic fraction was considered (Fig. 2).

Table 3. Chemical proximate composition

(dry basis) of C. muelleri cultured in three
different mediums.
Tabla 3. Composicin qumica proximal
(base seca) de C. muelleri cultivada en
tres medios diferentes.

Figure 2. Proximate composition

percentage of the organic fraction of C.
muelleri cultured in different mediums.
Agr-F (medium based on an agricultural
fertilizer), Aq-F (aquacultural fertilizer)
and control (conventional medium F/2).
Figura 2. Porcentaje de la composicin

proximal de la fraccin orgnica de C.

muellericultivada en diferentes medios.
Agr-F (medio basado en un fertilizante
agrcola), Aq-F (fertilizante-acucola) y
control (medio convencional F/2).
The productive responses and proximate composition of copepods were affected by the
consumption of microalgae from the different treatments (Table 4). Fecundity index
was significantly higher in copepods fed on microalgae produced in Agr-F and Aq-F (>
0.7) compared to those fed on control microalgae (< 0.5). The nauplii-adult ratio was
higher in copepods from Agr-F compared to the, other treatments. The final copepod
density was not different among both treatments (> 2.3 copepods mL-1), but the
density of copepods fed on Aq-F microalgae was significantly higher than that observed
in the control-m (1.97 copepods mL-1) (Table 4).

Table 4. Production parameters of the

copepod Acartia sp., fed with
microalgae C. muelleripreviously cultured
in different mediums.
Tabla 4. Parmetros de produccin del
coppodo Acartia sp., alimentado con la
microalga C. muelleri previamente
cultivada en diferentes medios.

The carbohydrate content of copepods fed on Agr-F microalgae (15.7%), was

significantly higher those fed on Aq-F (12.8%), while no differences were found among
Agr-F and the control (Table 5). No statistical differences were observed among
treatments regarding lipid (21-23%) or ash content (~5.5%). The protein content was
higher in those copepods fed on control microalgae (> 58%) compared to those fed on
Agr-F and Aq-F (< 55%).

Table 5. Chemical proximate composition

(DB) of copepod Acartia sp., fed on C.
muelleripreviously cultured in different
mediums.
Tabla 5. Composicin qumica proximal
(BS) del coppodo Acartia sp., alimentado
con C. muelleri previamente cultivada en
diferentes medios.

DISCUSSION
Microalgae cultured in the agricultural fertilizer (Agr-F) had a similar productive
response to that observed in the control; both results, were similar to those reported
as successful for C. muelleri using conventional mediums (Medina-Reyna & CorderoEsquivel, 1998). Pacheco-Vega et al. (2010) cultured C. muelleri in different mediums,
not finding any significant difference in growth response among those microalgae
cultured in F/2 and those produced in a medium based on an agricultural fertilizer;
moreover, the biomass and cells production with Agr-F was higher than that reported
by Becerra-Drame et al. (2010) using an alternative system to increase their
productions of C. muelleri cultured outdoor. These results may be explained by the
slight decrease in generation time of Agr-F, which indicates that these microalgae
duplicate their cell number in less time. Thus, the agricultural fertilizer seems to be an
adequate alternative to replace the conventional mediums. Microalgae cultured in the
aquacultural fertilizer (Aq-F) had poorest lower productive response; however, the
results were within the range reported for commercial laboratories specialized on
shrimp larvae production (Lpez-Elas et al, 2003). In particular, Aq-F had the same
efficiency than the conventional F/2 media, in terms of biomass, which support the use
of Aq-F as a reliable strategy for microalgae production.
The proximate composition of diatoms varies widely, because they are affected by
several factors. However, the results of the three treatments were similar (except for
protein) to those reported by Medina-Reyna & Cordero-Esquivel (1998) for C.
muelleri cultured in Guillard F/2 medium (carbohydrate 28.7%, lipid 21.3%, protein
30.2% and ash 44.8%) at seven days of culture. The higher protein content observed
in microalgae cultured with the conventional medium (control) may be associated to
the higher content of total nitrogen in F/2 (12.4 g L-1) prepared medium, compared to
that of the agricultural and aquacultural fertilizers ( 10 g L-1). For carbohydrate
concentration, Pacheco-Vega et al. (2010) reported a slight increase in
carbohydrate content of microalgae cultured with an agricultural fertilizer, compared to
those cultured in F/2, which was a similar response than the observed in this
experiment. Valenzuela-Espinoza et al. (2002) explained that factors influencing the
carbon fixation of microalgae may result in modifications of their carbohydrate content;
however, specific studies have to be done to elucidate if the mediums used affected
the carbon fixation of C. muelleri.
The microalgae cultured in different media, had a subsequent effect on the productive
response and proximate composition of copepods. The copepod production in terms of
ind L-1, was lower than that reported in other experiments (Hernndez-Molejn &
Alvarez-Lajonchre, 2003), probably because a mixture of microalgae species are
commonly used to feed the copepods, in order to have a more complete nutrient
profile, whereas in this experiment, a single microalgae species was used. Knuckey et
al. (2005) observed that copepods (Acartia sinjiensis) feed with mono-algal diets had a
lower level of development; herein, diets containing a mixture of different microalgae
may have a more complete aminoacid and lipid profile than mono-algal diets.
Despite the productive responses of microalgae cultured in the conventional medium
(F/2) and Agr-F were statistically similar, the lower productive response of copepods
was achieved when they were fed on control microalgae; thus, the high protein
content, was not reflected in high copepod production; it is possible that amino acid,
fatty acid and sugar profiles from control microalgae were not adequate for culturing
copepods. Contrarily, Agr-F and Aq-F mi-croalgae had a positive effect on the

productive performance of copepods, which suggests that the quality of microalgae

cultured in those mediums was more adequate for the species. The higher proportion
of adults and higher fecundity index of copepods fed on Agr-F microalgae may provide
a better production. Regarding to fecundity index, the higher index found in both
alternative mediums compared to the control, could be associated to the higher
carbohydrate content of microalgae from Agr-F and Aq-F. Herein, Guisande & Harris
(1995) implicated carbohydrates as a source of metabolic energy for embryogenesis
and thus it is possible that carbohydrate reserves are also an energy source during
embryogenesis.
In general, copepod proximate composition of the different treatments had a similar
composition than that reported for A. southwelli (Protein 63.8%, lipid 16.9%,
carbohydrate 10.5% and ash 5.1%) and A. centrura (Protein 63.9%, lipid 17.0%,
carbohydrate 10.5% and ash 5.3%) (Vengadeshperumal et al, 2010). However, the
microalgae consumption had an effect on the proximate composition of copepods;
some of the changes were related to the proximate composition of the microalgae, for
instance, copepods fed on control microalgae which had the highest protein content,
showed a higher protein percentage in their proximate composition. A similar tendency
was observed for carbohydrate content. It is important though, to study the proximate
composition from a deeper perspective in further experiments, considering the amino
acid, fatty acid and sugar profiles of microalgae and copepods. Nevertheless, the
results indicate that the quality of copepods have a dependence on the medium used
to culture the microalgae they consume.
From the results, it can be concluded that both fertilizers (Agr-F and Aq-F) can be
adequate alternatives to be used for C. muelleri culture. In particular, Agr-F can
achieve higher microalgae productions than F/2 medium. Microalgae cultured in the
conventional medium F/2, are not adequate for copepod rearing; rather, the use of
Agr-F or Aq-F are more recommendable if the microalgae will be used for copepods.
The productive response and the quality of copepod as feed source for aquaculture
purposes, depend not only upon the microalgae species they consume, but also on the
nutritional quality of such species.

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AVANCES EN EL DISEO CONCEPTUAL DE

FOTOBIORREACTORES PARA EL CULTIVO DE MICROALGAS
Coral Contreras-Flores, Julin Mario Pea-Castro, Luis Bernardo Flores-Cotera y Rosa
Olivia Caizares-Villanueva
Coral Contreras-Flores. Ingeniero Bioqumico, Instituto Tecnolgico de Celaya, Mxico.
Estudiante de Maestra, Laboratorio de Biotecnologa de Microalgas, Departamento de
Biotecnologa y Bioingeniera, CINVESTAV-IPN. Mxico.
Julin Mario Pea-Castro. Maestro en Ciencias en Biotecnologa y Estudiante de
Doctorado, CINVESTAV-IPN. Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera,
CINVESTAV-IPN. Mxico.
Luis Bernardo Flores-Cotera. Doctor en Ciencias Bioqumicas, Universidad Nacional
Autnoma de Mxico. Profesor, Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera,
CINVESTAV-IPN, Mxico.
Rosa Olivia Caizares-Villanueva. Doctor en Ciencias en Ecologa, Instituto Politcnico
Nacional. Profesora, CINVESTAV-IPN. Direccin: Laboratorio de Biotecnologa de
Microalgas, Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera, CINVESTAV-IPN. Av. IPN
2508, C.P. 07360 D.F., Mxico. e-mail: rcanizar@mail.cinvestav.mx.
Resumen
Durante la dcada pasada se han usado mltiples diseos de fotobiorreactores para el
cultivo de organismos fotoautotrficos microscpicos como microalgas y cianobacterias.
Los avances en el diseo de estos sistemas han permitido mejorar notablemente la densidad
celular, la productividad y por ende la economa de los cultivos para distintos fines. En este
trabajo se revisan diferentes aspectos del diseo de fotobiorreactores, tanto aquellos que
implican el aprovechamiento adecuado de la energa luminosa (ciclos luz-oscuridad,
trayectoria de la luz y geometra de fotobiorreactores) como los basados en conceptos
fisiolgicos (fotoinhibicin por oxgeno, cultivos de alta densidad celular, ultra alta
densidad celular, heterotrofa y mixotrofa). Se presentan las principales aplicaciones de los
diferentes diseos, en la produccin de compuestos de alto valor agregado y su uso
potencial en la biotecnologa ambiental.
Summary
During the last decade, many different photobioreactor types have been used for culturing
autotrophic microorganisms like microalgae and cyanobacteria. Advances in reactor design
allowed considerable improvements of cellular density, productivity and overall economy
of cultures for diverse purposes. In this paper, several important photobioreactor design

concepts are reviewed, including those involved with adequate use of light energy
(light/dark cycles, light path and reactor geometry) as well as those based in physiological
concepts (oxygen photoinhibition, high cell density cultures, ultra high density cultures,
heterotrophy and mixotrophy). A brief account of the current applications of new
photobioreactors in fine chemicals production and possible uses in environmental
biotechnology is made.
Resumo
Durante a dcada passada se tem usado mltiplos desenhos de foto bio reatores para o
cultivo de organismos foto autotrficos microscpicos como microalgas e cianobactrias.
Os avanos no desenho destes sistemas tem permitido melhorar notavelmente a densidade
celular, a produtividade e por isto a economia dos cultivos para distintos fins. Neste
trabalho se revisam diferentes aspectos do desenho de foto bio reatores, tanto aqueles que
implicam o aproveitamento adequado da energia luminosa (ciclos luz-escurido, trajetria
da luz e geometria de foto bio reatores) como os baseados em conceitos fisiolgicos (foto
inibio por oxignio, cultivos de alta densidade celular, ultra-alta densidade celular,
heterotrofia e mixotrofia). Apresentam-se as principais aplicaes dos diferentes desenhos,
na produo de compostos de alto valor agregado e seu uso potencial na biotecnologia
ambiental.
PALABRAS CLAVES / Biotecnologa / Cianobacterias / Fotobiorreactores /
Microalgas /
Recibido: 20/03/2003. Aceptado: 29/07/2003
En la dcada de 1950 se postul por primera vez que el empleo de luz solar y agua marina,
para obtener cultivos masivos de microalgas ricas en protena de alta calidad, podra ser una
buena alternativa para obtener alimento para el ser humano (Becker, 1994). Durante los
aos 60 y 70, diversos grupos de investigacin tanto de pases desarrollados como en vas
de desarrollo, dedicaron esfuerzos a intentar lograr rendimientos de biomasa que pudieran
equipararse a los obtenidos con microorganismos no auttrofos (principalmente levaduras).
En el transcurso de los aos se pudieron diversificar las reas donde las microalgas
eucariotas (Vilchez et al., 1997) y cianobacterias (Morales et al., 2002; Prosperi, 2000)
cultivadas masivamente tienen aplicaciones prometedoras, especialmente en la produccin
de compuestos qumicos "finos" y combustibles, en el tratamiento de aguas residuales,
como intercambiadores inicos y biofertilizantes, para la obtencin de compuestos
teraputicos o aplicados a la teraputica, y como alimento de consumo humano o animal.
Sin embargo, la productividad terica estimada de 100 toneladas anuales por hectrea de
cultivos microalgales (Richmond, 2000), no pudo ser alcanzada ni siquiera en los
laboratorios de investigacin, sino hasta principios de la dcada de los 90. Una limitante
para lograr los estimados tericos se debi a que el sistema en carrusel, que inicialmente
fue el mejor sistema para desarrollar cultivos en masa por su facilidad de construccin y
operacin, paradjicamente result inapropiado como punto de partida para el desarrollo de
sistemas de cultivo de alta productividad (Richmond, 2000). El cultivo intensivo de
microalgas ha sido posible en gran medida gracias al desarrollo de nuevos diseos de

fotobiorreactores. A continuacin se revisan los avances que han tenido lugar en este
campo, principalmente durante la ltima dcada.
Existen dos diseos bsicos para la produccin de microorganismos fotoautotrficos
(Grobbelaar, 2000), los sistemas abiertos en los que el cultivo est expuesto a la atmsfera
y los sistemas cerrados, comnmente denominados fotobiorreactores, en los que el cultivo
tiene poco o ningn contacto con la atmsfera. La mayora de los sistemas de produccin
industrial de biomasa de microalgas construidos antes de los aos 90 fueron esencialmente
sistemas abiertos tipo carrusel (Figura 1), que permiten alcanzar densidades celulares de
hasta 0,7g de clulas (base seca) por litro. Estos sistemas, constituidos por canales poco
profundos (nivel de agua de 15-20cm) en forma de circuito cerrado, en los que el medio de
cultivo es impulsado mediante paletas rotatorias, generalmente requieren de grandes reas
de terreno (500-5000m2), pero tienen como ventaja el bajo costo de produccin de biomasa
algal en algunas zonas geogrficas especficas. Sin embargo, el perfeccionamiento de esta
tecnologa hace tiempo lleg a su lmite, restringiendo as el desarrollo de la biotecnologa
de microalgas. La baja densidad celular origina varios inconvenientes, incluyendo baja
productividad, fcil contaminacin, costosa recuperacin del producto de medios diluidos y
dificultad para el control de la temperatura. Estos inconvenientes estimularon el desarrollo
de fotobiorreactores construidos con materiales transparentes como vidrio y policarbonato,
entre otros materiales. Los primeros fotobiorreactores fueron propuestos por Pirt et al.,
(1983), Gudin y Chaumont (1983), y Torzillo et al., (1986). En la ltima dcada los
fotobiorreactores tubulares y de placas planas (Figura 1) han recibido, entre otros, mucha
atencin, ya que permiten establecer cultivos de alta densidad celular, 3 o ms veces en
comparacin con los sistemas convencionales de carrusel. Esto tiene ventajas como 1)
facilidad para cosechar la biomasa, 2) mantenimiento del cultivo sin contaminacin, 3)
mejor control de las condiciones de cultivo y 4) menor inversin de capital en el
fotobiorreactor. Este ltimo factor es un elemento importante en el costo de produccin de
productos derivados de microalgas.

La Curva Dosis-Respuesta a la Energa Luminosa

Un aspecto de suma importancia en el cultivo de organismos fotoautotrficos en general, es
el relacionado con el aprovechamiento de la energa radiante durante la fotosntesis. La tasa
de fotosntesis celular F (capacidad de captacin de fotones) depende de la energa
luminosa que reciben las clulas. La curva dosis-respuesta que describe esta relacin
representa una respuesta tpica del crecimiento respecto a la disponibilidad de sustrato
(Richmond, 2000). A bajos niveles de intensidad luminosa la rapidez de la fotosntesis
aumenta con la intensidad de luz, pero niveles de energa incidente superiores a un cierto
valor (Ek) inducen slo pequeos cambios en F (Figura 2). La constante especfica Ek,
caracterstica para cada organismo, indica el nivel de energa luminosa al que comienza a
saturarse el fotosistema de un organismo. La energa incidente puede llegar a niveles que
causan inhibicin de los fotosistemas celulares, lo cual puede deteriorar el cultivo y causar
incluso un dao irreversible. Por otro lado, la eficiencia (F/E) con la que la luz incidente es
utilizada, es decir la fraccin de energa luminosa incidente convertida a energa qumica,
disminuye rpidamente al aumentar el flujo de fotones y tiende a valores mnimos cuando
la energa incidente alcanza niveles superiores a Ek (a medioda en cultivos expuestos a la
luz solar).

La curva dosis-respuesta describe lo que sucede cuando la luz es el factor limitante y todas
las clulas reciben la misma cantidad de energa luminosa, como sucede en una capa celular
delgada o en cultivos de muy baja densidad celular. Sin embargo, estos conceptos aunque
generales no describen la realidad en la gran mayora de los cultivos que se desarrollan en
el laboratorio o a gran escala, en especial si se trata de cultivos de alta densidad celular
(>3g/l; Javanmardian y Palsson, 1991). Bajo ciertas condiciones, los cultivos con mayor
densidad celular, son capaces de utilizar la luz incidente con mayor eficiencia en
comparacin con cultivos convencionales diluidos. Por ejemplo, en cultivos de Spirulina en
los que se optimiza cuidadosamente la densidad celular, no se observa una disminucin
significativa de la eficiencia al aumentar la intensidad de la luz incidente. Es decir, la
fotoinhibicin puede no presentarse an en cultivos expuestos a intensidades de luz
elevadas. Esto en gran medida se debe a una dilucin de la luz, como resultado del
autosombreado, ms marcado entre las clulas conforme aumenta la densidad celular. Un
exceso de luz a una densidad de 1,8g/l, puede resultar ptimo para un cultivo a 16g/l en el
cual cada clula recibe una porcin menor de la luz incidente (Hu et al., 1996a). Siempre
que la densidad celular aumenta con relacin a la luz incidente, el cultivo no alcanza a
saturarse por completo. Entonces, la inhibicin del crecimiento por un exceso de luz
(fotoinhibicin) implica en esencia que la densidad celular no se ajusta a la intensidad de la
fuente de luz. Slo en estos casos se puede apreciar una disminucin significativa de la
eficiencia al aumentar la intensidad de iluminacin. La omisin de estos conceptos condujo
a que el diseo de sistemas comerciales frecuentemente se basara slo en los clculos de
profundidades para evitar la digestin anaerobia del cultivo y en los clculos de potencia de
las paletas rotatorias para imprimir movimiento al cultivo, hasta el lmite de esfuerzo de
corte tolerado por la microalga en cuestin (Ogbonna y Tanaka, 2000).
Diseo de Fotobiorreactores Basado en Conceptos sobre Distribucin de Luz
En cultivos de microorganismos fotoauttrofos en los que otros factores no son limitantes,
la disponibilidad de luz determina la intensidad a la que se realiza la fotosntesis y, como
consecuencia, determina tambin la velocidad de crecimiento (). Sin embargo, en todos

los sistemas de cultivo, las clulas ms cercanas a la superficie iluminada impiden la

penetracin de la luz hacia el seno del medio de cultivo y producen un efecto de sombreado
sobre las clulas ms alejadas de la superficie. En algunos cultivos se ha estimado que la
luz penetra solo de 1 a 2mm ms all de la superficie, de manera que la zona ftica
representa solo una pequea fraccin (10-30%) del volumen total del cultivo (Figura 3).
Debido a que el medio de cultivo est en constante movimiento, las clulas solo son
expuestas por breves instantes a la luz, en ciclos que pueden durar desde milisegundos a
unas cuantas dcimas de segundo. En condiciones reales, el factor que determina la
actividad fotosinttica es la cantidad de energa disponible para cada clula individual, ms
que la cantidad de energa luminosa incidente (Lu y Vonshak, 1999).

Los parmetros que pueden considerarse como bsicos para describir la disponibilidad de
energa bajo una iluminacin intermitente son dos, la relacin de los periodos luz/oscuridad
(L/O) y la frecuencia de los ciclos L/O. Estos, junto con la intensidad de la luz y la
trayectoria de la luz en el reactor, que se describir ms adelante, establecen en gran
medida el rgimen de iluminacin, el cual es un indicador de la disponibilidad de luz para
una clula individual (Fernndez et al., 2002). Para asegurar la mxima actividad
fotosinttica y la mejor utilizacin de la luz incidente, se requiere de un rgimen de
iluminacin ptimo. No obstante, a pesar de su importancia, ste no puede determinarse
cuantitativamente, razn por la cual es comn usar los parmetros citados antes para
caracterizar la incidencia de luz en los fotobiorreactores.
Trayectoria de la luz
La trayectoria de la luz es la distancia transversal que debe recorrer un fotn para pasar a
travs de un fotobiorreactor (Richmond, 1996), concepto que se ilustra en laFigura 3. Su

magnitud es determinada por diferentes medidas en los diferentes tipos de reactores. As, la
trayectoria de la luz es determinada por la profundidad de lquido en un reactor de tipo
carrusel, por la separacin entre las placas en un reactor de placas (horizontal o vertical) o
por el dimetro del tubo en un reactor tubular. Incrementar la trayectoria de la luz implica
reducir el volumen iluminado en relacin al volumen no iluminado en el fotobiorreactor,
debido a que el autosombreado entre las clulas slo permite a la luz penetrar una corta
distancia dentro del cultivo. En consecuencia, un incremento de la trayectoria de la luz
reduce tanto la frecuencia promedio con la que las clulas son expuestas a la luz, como la
relacin de los periodos L/O (Grobbelaar, 1994; Ogbonna y Tanaka, 1998). Por el
contrario, una trayectoria pequea de la luz aumenta la relacin de volmenes
iluminado/obscuro, permitiendo as periodos L/O mayores, una mayor frecuencia con la
que las clulas son expuestas en promedio a la luz y por ende un mejor rgimen de
iluminacin. En reactores tubulares de dimetro pequeo (1-3cm) se pueden lograr ciclos
de alta frecuencia de L/O, que contribuyen a obtener una alta productividad. Lo anterior ha
sido verificado en cultivos de Spirulina platensis y de diversas especies de microalgas,
tanto en reactores tubulares horizontales como en reactores planos verticales e inclinados.
Hu et al. (1996a) han reportado que al reducir la trayectoria de la luz se obtiene un aumento
significativo de la densidad celular ptima y de la velocidad especfica de crecimiento. En
un fotobiorreactor de plano inclinado estos autores observaron adems que con una
trayectoria de la luz de 10,4cm, la productividad fue slo 6% de la obtenida en otro reactor
con una trayectoria de la luz de 1,3cm. En fotobiorreactores tubulares, se han reportado
resultados similares al reducir la trayectoria de la luz. Richmond et al. (1993) usando un
nuevo diseo de reactor tubular horizontal reportaron un aumento de 77% en la
productividad volumtrica cuando el dimetro del tubo disminuy de 5 a 2,8cm. La
productividad en este ltimo caso fue 640% superior a la obtenida en un sistema
convencional de carrusel con 15cm de profundidad. Las rutas luminosas que mejores
resultados han dado en diferentes fotobiorreactores estn entre 2,6 y 3,0cm; sin embargo, en
cultivos de alta densidad celular, una trayectoria de la luz de 1cm aumenta la probabilidad
de que las clulas en promedio estn expuestas a un rgimen de iluminacin ptimo
(Javanmardian y Palsson, 1991). En virtud de lo anterior, actualmente no es recomendable
utilizar rutas luminosas de ms de 10cm en ningn tipo de biorreactor.
Otros Factores Importantes en el Diseo de Fotobiorreactores
Debido a que una condicin necesaria para el xito comercial de una biotecnologa es tener
una productividad alta y consistente, los diferentes tipos de fotobiorreactores se comparan
con frecuencia en base a su productividad por unidad de volumen de reactor (g de
biomasa/m3da), a su productividad por unidad de rea ocupada de reactor (g/m2da) y a
la productividad por rea iluminada de reactor (g/m2da), siendo la primera la ms
utilizada. En un cultivo continuo la productividad volumtrica (Pv) es proporcional a la
velocidad especfica de crecimiento y a la concentracin celular x (Pv= x). As, para
lograr una alta productividad se deben mantener altas densidades celulares, pero sin que la
velocidad de crecimiento disminuya significativamente, por ejemplo debido a un mayor
sombreado entre clulas. La factibilidad de esto depende, como ya se discuti, de un
suministro adecuado de luz a las clulas, pero adems se requiere alinear cuidadosamente
las condiciones ambientales en el reactor con las necesidades de la cepa seleccionada.
Independientemente de la configuracin del fotobiorreactor se deben considerar adems de

los factores ya discutidos que afectan el suministro de luz, otros fundamentales como el
mezclado, el autosombreado entre las clulas, el suministro de nutrientes (incluyendo CO2),
el control de la temperatura y la remocin del O2 producido fotosintticamente. Algunos
requerimientos del cultivo como lo son el suministro de nutrientes y el control de la
temperatura, son relativamente fciles de cubrir (Morita et al., 2002), pero otros como el
suministro de luz, adems de ser crtico, es difcil de controlar. En especial la consideracin
cuidadosa del mezclado, el autosombreado y la remocin del O2 es importante para lograr
altas productividades.
A continuacin se discuten los efectos del mezclado y de la densidad celular, que son
factores que juegan tambin un papel crucial en el rgimen de iluminacin y que de
ninguna manera pueden considerarse menos importantes que la trayectoria de la luz o que
la intensidad de luz.
Importancia del Mezclado en Fotobiorreactores
El mezclado favorece el intercambio gaseoso, evita la sedimentacin de clulas, la
formacin de gradientes de condiciones ambientales y de concentracin de nutrientes, pero
su funcin principal es permitir que todas las clulas puedan acceder a las zonas iluminadas
en un fotobiorreactor (Ogbonna y Tanaka, 2000; Ugwu et al., 2002). El mezclado puede
inducirse de muy diversas formas; sin embargo, los sistemas basados en la aireacin del
cultivo con aire comprimido (columnas burbujeadas o airlift), se usan comnmente por su
sencillez y porque pueden disearse para inducir un esfuerzo de corte pequeo que no cause
dao mecnico a las clulas (Richmond et al., 1993; Snchez et al., 2000).
El tiempo que las clulas permanecen en zonas iluminadas y la frecuencia con la que son
iluminadas (frecuencia de los ciclos L/O) dependen de la trayectoria de la luz, pero al
mismo tiempo dependen del mezclado del medio de cultivo (Grobbelaar, 1994). En un
mismo fotobiorreactor es posible establecer diferentes condiciones de mezclado para
manipular el rgimen de iluminacin y as la tasa de fotosntesis. Richmond (1996) ha
reportado que la eficiencia fotosinttica disminuye al aumentar la intensidad luminosa en
cultivos de baja densidad celular con una aireacin de 0,6l de aire/l-min. En cambio, a una
densidad celular ptima y una aireacin de 4,2l/l-min, las eficiencias fueron similares a
pesar de aumentar la intensidad de luz en un factor de 4. Adicionalmente, al aumentar la
aireacin de 0,6 a 4,2l/l-min la productividad aument al doble. En cultivos de alta
densidad celular en los que se utilizan niveles de iluminacin como los que se presentan
tpicamente al medioda, con frecuencia se reportan aumentos de la productividad al
aumentar la intensidad de mezclado. Por ello, para lograr una alta productividad y un
aprovechamiento ptimo de la luz, Richmond (1996) recomienda una iluminacin intensa
(medioda), el uso de reactores con una trayectoria de la luz pequea, y un mezclado
vigoroso hasta donde lo permita la fragilidad de las clulas. Por otra parte, Grobbelaar
(1994, 2000) determin experimentalmente la contribucin de los ciclos L/O y de la
transferencia de nutrientes, y concluy que los dos componentes del mezclado actan
sinrgicamente sobre la productividad. Una frecuencia alta o mediana de ciclos L/O ayuda
a evitar la fotoinhibicin, an a niveles elevados de iluminacin, debido a que las clulas no
estn expuestas permanentemente a la luz (Grobbelaar, 1994). La tasa de fotosntesis y la
productividad de los cultivos aument al aumentar la frecuencia de los ciclos L/O en el

intervalo de 0,05-5000Hz. La metodologa empleada podra adecuarse para optimizar los

ciclos L/O en diferentes especies de algas.
El mezclado de un cultivo permite una utilizacin ptima de la luz y un "mejor rgimen de
iluminacin", sin embargo, puede tambin causar dao a las clulas. La fragilidad celular es
con frecuencia un factor que limita la intensidad de mezclado que puede aplicarse a un
cultivo. En virtud de que la fragilidad celular y las caractersticas fotosintticas entre otros
factores pueden variar de cepa a cepa, los niveles ptimos de mezclado dependern de cada
especie cultivada (Gudin y Chaumont, 1991).
Circulacin del Medio de Cultivo en el Reactor
La eleccin del mtodo para circular el lquido es otra consideracin importante en el
diseo de fotobiorreactores. Las paletas rotatorias, las bombas de tornillo, rotatorias o de
desplazamiento positivo, y en general cualquier mtodo mecnico, tiene la desventaja de
producir importantes esfuerzos de corte y dao celular. Por ello, en fotobiorreactores
tubulares dispuestos horizontalmente, es comn usar el mtodo hidroneumtico basado en
el principio airlift. (Richmond et al., 1993; Snchez et al., 2000). La velocidad del medio
de cultivo en los tubos tiene que ser suficiente para asegurar un flujo turbulento que evite el
crecimiento en la pared del tubo o la sedimentacin de las clulas por una parte, y por otra
que asegure un rgimen de iluminacin favorable para establecer una fotosntesis intensa
(Gudin y Chaumont, 1991, Camacho et al., 1999; Molina et al., 1999). Una baja velocidad
de circulacin del lquido (<15cm/s) casi siempre produce crecimiento en la pared y
posiblemente inhibicin del crecimiento por altas concentraciones de O2 disuelto. Una
velocidad de lquido en los tubos de 30-50cm/s es apropiada en la mayora de los casos.
Como ya se mencion, disminuir la trayectoria de la luz incrementa la eficiencia de
utilizacin de luz y la productividad. Sin embargo, emplear rutas luminosas muy cortas
implica obstculos tcnicos adicionales, ya que la fuerza motriz necesaria para mantener un
flujo turbulento es inversamente proporcional al dimetro del tubo empleado. Entonces, las
mayores densidades celulares y mayores viscosidades asociadas con dimetros de tubo
pequeos pueden producir limitaciones diferentes a las impuestas por la luz; por ello es de
suma importancia optimizar el dimetro del reactor. Tanto en reactores tubulares como
planos, una trayectoria de la luz de 1-2cm podra ser el mnimo prctico para operar
fotobiorreactores cerrados.
Cultivos de Alta y Ultra Alta Densidad Celular
Una tecnologa que surgi a finales de los aos 80 fue la de cultivos algales de Alta
Densidad Celular (ADC) y Ultra Alta Densidad Celular (UADC), que implican mantener
concentraciones celulares superiores a 3g/l de biomasa para los primeros (Lee y Palsson,
1994) y de 15 a 80g/l para los segundos, ambos en base seca (Huet al., 1996a, b; 1998). Al
aumentar la densidad celular es posible evitar la fotoinhibicin, an a altas intensidades de
luz incidente, pero por otro lado los efectos de sombreado entre las clulas se vuelven ms
severos debido a que la luz penetra menos en cultivos densos en comparacin con cultivos
de menor densidad. Cuando el suministro de nutrientes y las condiciones ambientales no
son limitantes, el mezclado es determinante para la eficiencia fotosinttica y la

productividad a densidades celulares por encima de 3g/l. Altas densidades celulares solo
son posibles mediante una combinacin de alta intensidad de luz, una trayectoria de la luz
pequea (1-5cm) y un mezclado vigoroso inducido por burbujas de aire (Javanmardian y
Palsson, 1991). Hu et al. (1996b) midieron la relacin entre las fluorescencias variable y
mxima de la clorofila, que es un indicador de la integridad de los fotosistemas. En clulas
mantenidas a varias densidades celulares encontraron que la cantidad de energa luminosa
que para clulas en cultivos de menor densidad celular es sumamente txica, para las de
cultivos de mayor densidad es ptima.
Una dificultad adicional de los cultivos a altas densidades celulares es que las microalgas
secretan sustancias autoinhibitorias (Richmond, 2000). En consecuencia, la produccin
microalgal a alta densidad celular requiere de una solucin prctica al problema de la
acumulacin de estas substancias. El desarrollo tanto de cultivos de ADC como de UADC
fue posible gracias a los avances ya descritos en materia de fotobiorreactores, pero
adicionalmente a la inclusin de etapas de ultrafiltracin o filtracin en lote o
semicontinuas que permitieron la eliminacin de sustancias autoinhibitorias y la adicin de
medio fresco. Concentraciones de hasta 80g/l se han obtenido en reactores verticales con
una trayectoria de la luz pequea, una agitacin vigorosa y con remocin de substancias
autoinhibitorias. Hasta ahora la remocin de estas substancias ha sido semicontinua y
externa al fotobiorreactor en cultivos de UADC. Recientemente se han utilizado
membranas de ultrafiltracin sumergidas en el medio de cultivo, para la recuperacin
continua del pigmento marenina producido por una diatomea (Rossignol et al., 2000), idea
que podra ser de inters para el desarrollo de otras tecnologas en las que la ultrafiltracin
continua sea deseable.
Para lograr cultivos de UADC se han utilizado diversas geometras de fotobiorreactores y
fuentes de iluminacin, tales como reactores planos verticales con lmparas fluorescentes
de luz blanca (Hu et al., 1998), reactores iluminados cuasi-internamente por diodos (Lee y
Palsson, 1994), reactores iluminados internamente mediante fibra ptica (Javanmardian y
Palsson, 1991), y reactores planos inclinados con iluminacin solar mantenidos en
exteriores (Hu et al., 1996b). Una comparacin de los rendimientos logrados en diferentes
sistemas se presenta en la Tabla I.

Una ventaja de mantener cultivos de UADC es la disminucin de la respiracin nocturna,

en la cual la clula consume O2 y oxida los carbohidratos endgenos acumulados durante el
da. La prdida de peso celular puede llegar a ser de hasta 50% en el sistema de carrusel,
mientras que en UADC la prdida puede ser menor del 5% debido a que la alta densidad
celular reduce de manera importante la disponibilidad de O2 que cada clula puede utilizar
en la respiracin (Hu et al., 1996b). Por otra parte, en cultivos de UADC el contenido
proteico de las clulas puede ser inferior en un 40% con respecto a clulas crecidas a baja
densidad celular. Si se piensa utilizar el producto como fuente de protenas en alimento
humano o animal esto podra representar una desventaja. No obstante, los rendimientos
celulares son tan altos, que la ganancia en productividad proteica de clulas con 35% de
protena crecidas a alta densidad es positiva en ms de un orden de magnitud en
comparacin con clulas con 55% de protena crecidas a una densidad baja (Hu et al.,
1996b).
Fotoinhibicin por Oxgeno
Para escalar fotobiorreactores planos, usualmente se aumenta la capacidad del cultivo con
unidades conectadas en serie o "cascada" (Hu et al., 1996a). En el caso de reactores
tubulares y de serpentn, el escalamiento se hace aumentando la longitud de la tubera.
Cuando se usan solo estos criterios de escalamiento, la acumulacin de O2 disuelto puede
representar un fuerte obstculo para el crecimiento de las algas. Altos niveles de O2 disuelto
en el medio de cultivo causan inhibicin de la fotosntesis (Camacho et al., 1999) y en
condiciones extremas pueden incluso causar la muerte de las clulas por dao oxidativo. En

cultivos algales mantenidos en exteriores en reactores planos inclinados, se pueden alcanzar

concentraciones de hasta 9,5mg/l de O2 durante las horas de mayor energa radiante, lo que
representa 30% ms que la concentracin de saturacin de O2 (Hu et al., 1996a). En los
reactores tubulares horizontales la concentracin alcanzada puede ser an mayor
(Camacho et al., 1999), por lo que usar la longitud de la tubera como nico parmetro de
escalamiento de fotobiorreactores puede conducir a una falla total de las plantas diseadas.
Este error fue frecuente en los aos 80 y condujo a creer en la imposibilidad de escalar
procesos algales fuera de la opcin de los sistemas de tipo carrusel (Richmond, 2000). La
remocin del O2 producido fotosintticamente es una necesidad al escalar reactores
cerrados. En los reactores tubulares horizontales, una estrategia comn es instalar etapas de
aireacin tipo airlift para remover por desorcin el O2 del medio de cultivo. Despus de
estar en contacto con el medio de cultivo, el aire enriquecido con O2 puede separarse del
lquido en un desgasificador. El tiempo entre etapas de aireacin depende de la velocidad
lineal del medio de cultivo, de la distancia entre etapas de aireacin y de la velocidad de
fotosntesis (Richmond et al., 1993).
Control de pH
Cuando se lleva a cabo el escalamiento de fotobiorreactores, el pH del medio de cultivo
puede variar significativamente. En reactores tubulares, el pH al final del tubo se eleva al
disminuir la concentracin de CO2 debido al consumo algal. La concentracin de
CO2 puede ser controlada mediante su inyeccin en las zonas donde la concentracin ya no
permite la capacidad fijadora mxima. El pH se controlar al mismo tiempo debido al
conocido equilibrio del CO2 con el agua (Camacho et al., 1999).
Recomendaciones para el Diseo de Fotobiorreactores
De la discusin anterior se pueden proponer varias recomendaciones para el diseo de
fotobiorreactores:
1- La trayectoria de la luz debe ser pequea (2,5cm)
2- Mantener una alta densidad celular (>8-15g/l)
3- Un mezclado vigoroso para asegurar ciclos L/O de alta frecuencia
4- Usar tramos cortos de tubera (20-30m) para evitar inhibicin del crecimiento por
acumulacin de O2
5- Evitar acumulacin de substancias inhibitorias
6- Mantener temperatura y pH ptimos
La luz es uno de los factores ms importantes que limitan la productividad de los cultivos
microalgales. Sin embargo, algunas microalgas son capaces de crecer adems de en
condiciones de fotoautotrofa, en mixotrofa (uso de una fuente de carbono orgnico y
energa luminosa como fuente de electrones) y heterotrofa (con una fuente de carbono
orgnico en la oscuridad). Las fuentes de carbono orgnico ms comnmente citadas son el
etanol, el acetato y la glucosa. Se ha reportado queHaematococcus pluvialis puede
sintetizar astaxantina en heterotrofa y mixotrofa utilizando acetato de sodio como fuente
de carbono, en ambos casos la concentracin del pigmento es mayor a la obtenida en
condiciones de fotoautotrofa, debido en parte a que el acetato promueve la obtencin de

mayores concentraciones celulares (Kobayashi et al., 1992). Tambin se ha estudiado la

produccin de -tocoferol con Euglena gracilis usando etanol como sustrato, la produccin
del antioxidante aument hasta 2,9 veces con relacin a lo obtenido en fotoautotrofa
(Ogbonna y Tanaka, 1998). La investigacin acerca de la capacidad de las microalgas para
utilizar diferentes fuentes de carbono orgnico es importante, debido a que permitira el
cultivo de microalgas en biorreactores ms convencionales (airlift o de columna aireada por
ejemplo), en los que el aprovechamiento ptimo de la energa luminosa no es factible ya
sea tcnica o econmicamente; sin embargo ste es un campo de la biotecnologa
microalgal que se encuentra en su desarrollo inicial.
Aplicaciones de los fotobiorreactores
Produccin de compuestos qumicos finos
Las microalgas han sido reconocidas como fuentes de compuestos qumicos "finos" de alto
valor agregado como vitaminas, ficobiliprotenas, pigmentos, cidos grasos esenciales, etc.
Varios de estos productos son todava producidos comercialmente en sistemas en carrusel o
en lagunas abiertas. Ejemplos de sto son la produccin de ficobiliprotenas y biomasa de la
cianobacteria Spirulina, en pases como los Estados Unidos, India, China y Cuba, as como
la producccin de -caroteno utilizando Dunaliella en Israel y Australia (Lorenz y
Cysewski, 2000). La produccin comercial de astaxantina utilizando Haematococcus
pluvialis se lleva a cabo en dos fases, una de crecimiento y otra de produccin del
pigmento. Una empresa en Hawaii ocupa lagunas abiertas para la produccin de la
biomasa, y reactores tubulares para la induccin de la sntesis del pigmento, mientras que
en Suecia otra empresa utiliza fotobiorreactores iluminados artificialmente en ambas fases
(Olaizola, 2000). La produccin de estas substancias a partir de microalgas es costosa, pero
se justifica debido a la mayor aceptacin del consumidor por productos naturales en lugar
de productos obtenidos por sntesis qumica. El nicho comercial de productos derivados de
microalgas y cianobacterias es altamente cambiante y depende de las regulaciones
aplicadas por las agencias de proteccin al consumidor a los productos sintetizados
convencionalmente y al uso final de estos productos, que en varios casos no est an muy
extendido y contina siendo diversificado (ficobiliprotenas) o bien tienen usos regionales,
como por ejemplo en la acuacultura del salmn (astaxantina). No obstante, el empleo de
fotobiorreactores modernos sin duda ser una contribucin importante para reducir el costo
de produccin de estos compuestos y hacer ms competitiva su produccin mediante la
utilizacin de microalgas.
Descontaminacin ambiental
Las microalgas han sido propuestas para el tratamiento de aire (fijacin de CO2 y NOx) y
de aguas (remocin de DBO, NXx, PXx, y metales pesados) (Gonzlez et al., 1997;
Prakash et al., 1999). La mayora de los reactores utilizados para estos fines son de tipo
carrusel a bajas densidades celulares (Oswald, 1988; Rovirosa et al., 1995; Sylvestre et al.,
1996; Prosperi, 2000). Solo en el cultivo a UADC de Chlorococcum littorale se han
utilizado los avances tecnolgicos aqu revisados para remover CO2 (Hu et al., 1998). El
principal impulsor de los avances en el diseo de fotobiorreactores ha sido la produccin de

compuestos qumicos "finos", y no la ya comprobada capacidad de las microalgas para

convertir desechos orgnicos (agroindustriales, porccolas, aguas municipales, etc.) en
insumos de alto valor agregado. El uso sistemtico de esta capacidad en sistemas intensivos
consistira en un hito ecolgico pues las microalgas, al ser la base de la cadena trfica
acutica, son los microorganismos apropiados para cerrar el ciclo ecolgico con el
aprovechamiento de compuestos inorgnicos que las normatividades actuales consideran
como peligrosos cuando estn libres en el ambiente.
Conclusiones
Debido al entendimiento limitado de la curva dosis de energa luminosa-respuesta que
presentan los organismos auttrofos y al estancamiento en la utilizacin comercial del
sistema en carrusel, los rendimientos de biomasa obtenidos en la prctica fueron durante
mucho tiempo considerablemente inferiores a los rendimientos tericos que se estimaban
en los primeros aos de la biotecnologa algal. En los ltimos 15 aos, diversos grupos de
investigacin han encontrado soluciones para "diluir" la energa luminosa y por ende
optimizar el rgimen luminoso para aumentar los rendimientos de diferentes cultivos de
microalgas. Los fotobiorreactores cerrados con rutas luminosas pequeas, con ciclos L/O
elevados y de frecuencia media o alta, con mezclado eficiente y la utilizacin de unidades
de filtracin y ultrafiltracin, han contribuido a sobrepasar incluso los rendimientos tericos
predichos en los inicios de la biotecnologa de microalgas.
Agradecimientos
Coral Contreras-Flores y Julin Mario Pea Castro son becarios del CONACYT-Mxico.
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CULTIVO DE
MICROALGAS
martes, 26 de marzo de 2013

AISLAMIENTO
Es necesario el aislamiento de una unidad algal y la colocacin de la misma en un medio
de cultivo adecuado para su multipliacin, a fin de establecer un cultivo unialgal
(monoespecfico). El trmino unidad se refiere a cualquier clula, colonia, filamento,

pieza o parte del talo y cuerpo reproductivo. Un cultivo unialgal establecido es necesario
para preparar un cultivo axnico.

De todos los mtodos nombrados para aislamiento el de pipeta capilar y el de rayado en

agar son los ms empleados para este fin. Las algas menores a 10 difcilmente son
aisladas con pipeta capilar. Filamentos pueden aislarse con pipeta capilar .

Pipeta capilar (simplificado)

La tapa de un plato Petri invertido se emplea como rea para aislamiento:

a) Coloque de 10 a 15 gotas de una coleccin natural en el centro de la tapa invertida.

b) Coloque 8 gotas de un medio de cultivo adecuadoen 8 posiciones rodeando la
coleccin natural. Marque primero con nmero la posicin de cada gota por la cara interior
de la tapa.
c) Usando una pipeta Pasteur nueva estirada y estril, transfiera las algas deseadas de la
coleccin natural a la gota nmero 1 del medio de cultivo.
d) Transfiera una sola alga desde la gota nmero 1 hasta la gota nmero 2.
e) Repita este proceso de transferencia con el resto de las gotas del medio de cultivo
hasta asegurarse que una sola unidad algal requerida est presente en una gota.
f) Transfiera esta unidad algal a tubos de ensayos que contienen el medio de cultivo
esterilizado. Como precaucin, esta unidad algal en una gota puede ser transferida
primero a un fragmento de un cubreobjeto que descansa en un portaobjeto, para
examinarla con el microscopio compuesto. El fragmento con la gota y la unidad es
entonces transferido al tubo de ensayo con el medio de cultivo para su desarrollo. De esta
manera se asegura que una sola unidad algal es aislada y que efectivamente va al medio
de cultivo.
g) Coloque los tubos bajo condiciones favorables para crecimiento.

Rayado en Agar

Este mtodo brinda mayor facilidad para aislar algas de tamao igual o menor a 10 m de
dimetro. Tambin produce cultivos axnicos

a) Prepare cajas de Petri (vidrio o plstico) de 100 x 15 mm, conteniendo medio de cultivo
solidificado con 1 a 1,5% de agar.
b) Coloque dos gotas de coleccin natural cerca de la periferia en el medio solidificado.
Con el asa de platino (punta esterilizada sumergida en alcohol y quemada), bajo criterio
de asepsia, rayar en paralelo la muestra de la coleccin en el agar.
c) Cubra el plato, inviertalo e incubar de 4 a 8 dias bajo adecuada condicin de
crecimiento.
d) Pasado este tiempo observar directamente en el estereomicroscopio el rayado y
seleccione las colonias deseadas que estn libres de otros organismos.

e) Remueva las colonias seleccionadas usando una pipeta Pasteur estirada estril o el
asa de platino y colquelas en una gota de medio de cultivo estril sobre un cubreobjeto.
En un microscopio compuesto observe las unidades de algas deseadas y que sean de la
misma especie.
f) Repita el procedimiento de rayado de una sola zona, constatar y nuevamente incubar
para que se formen las colonias. Este segundo rayado reduce la contaminacin por
bacterias y asegura agrupaciones de unidades algales de la misma especie.

Esquema del cultivo en laboratorio

g) Transfiera las unidades algales de una colonia a un medio lquido (tubo de ensayo) o
solidificado. Posteriormente podra realizar un cultivo prolongado. Tenga presente que
cualqueir tipo de contaminacin puede alterar el cultivo.