Anda di halaman 1dari 5

penggunaan yang dimaksudkan

virus dengue, anggota Flaviviridae tersebut, yang dilapisi tunggal terkait, tapi antigen yang berbeda.
mereka ditransmisikan di daerah tropis dan subtropis di siklus yang melibatkan manusia dan nyamuk
(aedes aegypti). infeksi pada dari serotipe tidak memberikan kekebalan protektif silang.
virus dengue menghasilkan spektrum penyakit yang luas pada manusia, dari demam berdarah ringan
(DF) demam berdarah mengancam kehidupan (DBD) dan sindrom syok (DHS). Dengue adalah
penyakit virus nyamuk sangat penting dengan perkiraan 00000000 kasus per tahun.
IgG IgM ELISA ang saat ini metode yang paling berguna untuk memberikan diagnosis serologis
spesifik. Antibodi IgM yang terdeteksi 3 hari setelah onset penyakit, antibodi IgG sekitar setelah 14
hari / infeksi sekunder antibodi IgM mungkin muncul dan antibodi IgG yang terdeteksi pada tingkat
yang lebih tinggi.
.
Prinsip -Sandwich EIABerdarah manusia IgG ELISA didasarkan pada sandwich teknik ELISA. sumur microtiter jalur sebagai
fase padat yang dilapisi dengan dengue-anigens (DEN-Ag). Pada pertama inkubasi langkah yang
sesuai antibodi spesifik (DEN-IgG-Ab) hadir dalam spesimen pasien atau kontrol mengikat antigen
pada fase padat. pada akhir inkubasi komponen terikat yang whased keluar. untuk kedua tahap
inkubasi konjugat anti-IgG (antibodi IgG anti-manusia, peroksidase konjugasi) ditambahkan yang
mengikat secara khusus untuk antibodi IgG kelas mengakibatkan formasi immunocomplexes khas.
setelah tahap pencucian kedua untuk menghilangkan kelebihan konjugat, TMB / Substrat
ditambahkan (langkah 3). warna biru berkembang berubah menjadi kuning setelah menghentikan
reaksi. intensitas warna adalah derectly sebanding dengan konsentrasi DEN-IgG-Ab dalam spesimen.
Absorbansi kontrol dan spesimen ditentukan dengan menggunakan ELISA pembaca lempeng atau
sistem ELISA otomatis (seperti HUMAREADER MANUSIA atau jalur ELISYS). Hasil untuk sampel pasien
diperoleh dengan perbandingan dengan memotong nilai pr ekspresi di unit (U / ml)
reagen dan isinya
MIC 12: strip microtiter (dalam 1 pegangan strip). 8 juga snap off strip dilapisi dengan antigen
dengue
NC 2ml: dengue IgG kontrol negatif (cap hijau), siap untuk digunakan, manusia
PC 2ml: kontrol positif dengue IgG (topi merah), siap untuk digunakan, manusia
DIL 100 ml: penyangga pengenceran (cap putih), siap untuk digunakan, pH kuning berwarna, 7,2
CON 20ml: Anti IgG konjugat (cap hitam), siap untuk digunakan, berwarna merah, anti manusia IgG
(kelinci), peroksidase terkonjugasi
WS 50ml: solusi cuci (tutup putih), berkonsentrasi untuk sekitar 1000ml
SUB 15ml: reagen substrat (cap hijau)

BERHENTI 15ml: berhenti solusi (topi merah), asam sulfat, siap untuk digunakan, strip perekat
pengawet: Jumlah konsentrasi <0,2%
catatan keselamatan
tidak menelan reagen. menghindari kontak dengan mata, kulit dan selaput lendir. semua spesimen
pasien dan kontrol harus ditangani sebagai berpotensi menular. kontrol telah diperiksa pada tingkat
donor untuk HCV dan HIV 1/2 antibodi dan HBsAg dan menemukan negatif. memakai pakaian
pelindung dan sarung tangan sekali pakai sesuai dengan praktek laboratorium yang baik.
semua bahan yang terkontaminasi dengan spesimen pasien atau kontrol harus dinonaktifkan oleh
prosedur divalidasi (autoklaf atau perlakuan kimia) sesuai dengan ketentuan yang berlaku.
BERHENTI, SUB dapat mengiritasi mata, kulit dan selaput lendir. pada kontak, bilas hingga bersih
dengan jumlah berlebihan pf air dan berkonsultasi dengan dokter.
stabilitas
reagen yang stabil sampai dengan tanggal kadaluwarsa dinyatakan pada label individu bila disimpan
pada 2-8 derajat celsius
.
MIC
- Disegel dalam kantong aluminium dengan desikan
- Harus pada suhu kamar sebelum membuka
- Tidak terpakai: kembali dengan pengering untuk tas kunci zip dan simpan dengan cara ini pada 2-8
derajat celsius
tidak menyentuh tepi atas atau bagian bawah sumur dengan jari.
.
preparasi Reagen
membawa semua reagen ke suhu kamar (15-25 derajat celsius) sebelum digunakan / reagen tidak
digunakan harus selalu disimpan pada 2-8 derajat celsius
.
Bekerja solusi mencuci (WASH)
- Encer (WS) 1 + 20 dengan air deionisasi segar, misalnya 50ml (WS) + 1000ml = 1.050 ml
- Stabilitas 4 minggu di 2-8 derajat celsius
.
contoh

serum
tidak menggunakan spesimen yang sangat lipemic atau hemolisis. Spesimen dapat disimpan selama
7 hari di gelar 2-8 celsius atau lebih pada -20 derajat celsius. membekukan dan mencairkan sekali
saja. spesimen dicairkan harus homogen. menghilangkan partikel dengan sentrifugasi atau filtrasi.
.
prosedur
ikuti prosedur persis seperti yang dijelaskan
catatan prosedural
P1: jangan mencampur topi dari botol (risiko kontaminasi). tidak menggunakan reagen setelah
tanggal kedaluwarsa mereka
P2: Jangan gunakan reagen yang dapat terkontaminasi atau melihat atau mencium berbeda dari
biasanya
P3: catatan spesimen dan kontrol dengan hati-hati pada spread sheet disertakan dengan kit
P4: (MIC) - pilih jumlah yang diperlukan dan menempatkan tegas dalam pemegang
P5: Jalankan duplikat untuk kontrol negatif / positif dan spesimen. kontrol pipet dan spesimen di
bagian bawah di microwell.
P6: Selalu menambahkan reagen dalam urutan yang sama dan waktu untuk meminimalkan
perbedaan waktu reaksi antara sumur. ini importan untuk hasil direproduksi. pipetting spesimen
tidak melebihi 5 menit. jika pipet kurva kalibrasi di posisi yang ditunjukkan pada saat setengah jalan
dari seri. jika lebih dari 1 piring yang digunakan, ulangi kurva respon dosis untuk setiap lempeng.
P7: hindari / menghapus gelembung udara sebelum incubations dan pembacaan absorbansi
P8: (SUB) - menetaskan dalam gelap. (SUB) memulai reaksi kinetik, yang diakhiri oleh (STOP)
prosedur cuci
prosedur mencuci sangat penting. cuci cukup akan menghasilkan presisi yang buruk atau absorbansi
palsu tinggi.
W1: menghapus strip perekat, aspirasi dari isi menjadi 5% larutan natrium hipoklorit dan tambahkan
(WASH) ke masing-masing dengan baik, aspirasi off setelah 30 detik, rendam waktu dan ulangi
mencuci dua kali.
W2: dalam kasus mesin cuci otomatis. mengisi dan perdana dengan (WASH). kemudian mencuci
jalur 3 kali. memastikan mesin cuci mengisi semua sumur lengkap dan aspirasi dari efisien setelah 30
detik. (cairan yang tersisa: <15ul)
W3: setelah mencuci, menghilangkan cairan yang tersisa dengan menekan piring terbalik di kertas
tisu

Skema pemipetan
reagen dan spesimen harus pada suhu kamar sebelum digunakan.
ersiapan sampel:
encer sera pasien 1 + 100 dengan (DILL), misalnya 10 ul serum + 1 ml (DILL), aduk rata
control siap untuk digunakan.
Langkah 1
Well (ul)
A1
B1/C1
D1/E1
F1...
Blanko
(NC)
(PC)
sempel
(NC) in duplicate
-100
--(PC) in duplicate
--100
-Pengenceran sempel
---100
(MIC) Tutup dengan strip perekat
Inkubasi selama 30 menit pada suhu 370C
(WASH)
300
300
300
300
Langkah 2
(CON)
-300
300
300
(MIC) Tutup dengan strip perekat
Inkubasi selama 30 menit pada suhu 370C
Cuci 3x seperti yang telah di jelaskan (W1-W3)
(WASH)
300
300
300
300
Langkah 3
(SUB)
100
100
100
100
Inkubasi 15 menit pada suhu 250C (Lihat P8)
(STOP)
100
100
100
100
Campur hati-hati
nol ELISA plate mikrotiter pembaca (HUMAREADER) menggunakan substrat kosong di sumur A1
Ukur Serapan pada panjang gelombang 450 nm sesegera mungkin atau dalam waktu 30 menit.
setelah penghentian reaksi, gunakan panjang gelombang referensu antara 630-690 nm (jika
tersedia)
perhitungan nilai kontrol dan memotong
berarti nilai absorbansi (NC) di sumur B1 dan C1 (MNC) dihitung sesuai dengan:

memotong nilai (COV) = MNC +0,35


THe uji coba dapat dianggap sah asalkan memenuhi kriteria sebagai berikut:
1. substrat kosong di sumur A1 <0,100
2. MNC

0,3000

3. PC: nilai absorbansi sama atau lebih besar dari nilai cut-off.
interpretasi hasil
sampel dianggap positif jika nilai absorbansi lebih tinggi dari 10% dari cut off

sampel dengan nilai absorbansi dari 10% di atas atau di bawah memotong tidak harus dianggap
sebagai jelas positif atau negatif - GREY ZONE.
Sampel dianggap NEGATIF jika nilai absorbansi lebih rendah dari 10% di bawah cut-off
A450(pasien)

COV +10% : anti-dengue-IgG-Ab-Positif

A450(pasien) < COV 10% : anti-dengue-IgG-Ab-negatif


Satuan anti-Dengue-IgG Ab

Cut-off

10 U/ml

Zona Abu

9 11 U/ml

Negatif

< 9 U/ml

Positif

11 U/ml

karakteristik kinerja
Data kinerja khas dapat ditemukan dalam laporan verifikasi, diakses via
www.human.de/data/gb/vr/el-deng.pdf