Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

Kalibrasi
Adalah suatu proses menghubungkan sinyal analitik
yang diukur (respon alat) dengan konsentrasi analit.

Metode Kalibrasi:
A. Kurva Kalibrasi (Kurva Baku)
B. Metode Adisi Standard
C. Metode Standard Internal
Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

A. KURVA KALIBRASI
Sejumlah larutan baku dengan dengan variasi konsentrasi
disiapkan, kemudian diukur menggunakan instrumen, dan respon
instrumen dicatat.
Larutan Baku
Larutan analit yg telah diketahui konsentrasinya.
Larutan baku dibuat agar dalam pengukuran
menggunakan instrumen tidak melampaui batas
linearitas (LOL = Limit of Linearity) dari
instrumen.

Kurva Kalibrasi Plot konsentrasi baku (X) versus respon

instrumen (Y).
Hubungan antara konsentrasi baku dan respon
instrumen adalah linier.

Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

A. KURVA KALIBRASI

1. Penyiapan Kurva Kalibrasi

Respon Instrumen (RI)

RI terkoreksi (Si Sbl)

0,00

0.013

0.000

6.01

0.101

0.088

31.80

0.811

0.798

63.50

1.498

1.485

88.90

2.094

2.081

0.924

0.875

Konsentrasi

Sampel
2.5

Kurva Kalibrasi

RI terkoreksi

2.0
1.5
1.0

0.5
0.0
0

Arie BS

20

40

60

Konsentrasi

80

100

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

A. KURVA KALIBRASI

1. Penyiapan Kurva Kalibrasi

Gunakan metode regresi linier untuk menghitung persamaan fitting y = mx + b

xi
yi
x i2
y i2
xiyi
Concentration
IR
Corr. IR
0.000
0.013
0.000
0.000000
0.000000 0.000000
2
6.010
0.101
0.088
36.120100
0.007744
0.528880
2

xi
2

S xx xi 0.636804
x x25.376400
Sy
i
31.800
0.811
0.798
1011.240000
N
2
x
1.498 2 1.485
S 63.500
xi24032.250000
2 i 2.205225 94.297500 S yy y

xx xi x
2 i
N
88.900
2.094 2 2.0812 7903.210000
4.330561
185.000900
2
yi
xi
2

xx
i
i
yy
i
i
190.210
4.452
12982.820100
7.180334
305.203680

N
Nx y

x
y

xy
i
i
i
Mean
38.042
0.890

S xy xi x yi y xi yi
x y
S xy xi x yi y xi yi i i
N

m S xy S xx (Slope)

xi

b y -

m S xy S xx (Slope )
b y -x m (Y - in
m S xy S xx (Slope)
b y -x m (Y - intercept)
r

Arie BS

S xy r
S xx S yy

S xy
S xx S yy

S xy

S xx S yy

Metode Kalibrasi Alat

A. KURVA KALIBRASI

1. Penyiapan Kurva Kalibrasi

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

A. KURVA KALIBRASI

2. Interpretasi Kurva Kalibrasi

Gunakan persamaan fitting y = mx + b untuk menghitung
konsentrasi sampel

m = 0.0236 & b = -0.00881

y = 0.0236x 0.00881
Sehingga:
x = (y b)/m
x = (y + 0.00881)/0.0236
dan:
x (konsentrasi sampel) = (0.875+0.00881)/0.0236
= 37.4
Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Digunakan untuk analit dalam matriks yang kompleks, yg
mengakibatkan terjadinya interferensi dalam respon instrumen (RI).
Contoh: darah, sedimen, serum, dll.
Sering disebut juga metode SPIKING.
Metode: 1. Siapkan beberapa aliquot identik, Vx, dari sampel.
2. Tambahkan sejumlah volume tertentu secara bervariasi, Vs,
larutan baku yang telah diketahui konsentrasinya, cs, pada tiap
aliquot.
3. Encerkan (add-kan) masing2 larutan hingga volume tertentu, Vt
4. Ukurlah dengan instrumen untuk mendapatkan respon
instrumen, S
5. Hitung konsentrasi sampel, cx, dengan persamaan berikut:
Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD

Persamaan Adisi Standard

S=
k =
Vs =
cs =
Vx =
cx =
Vt =

Arie BS

kVs cs kVx cx
S

Vt
Vt

sinyal atau respon instrumen

konstanta proporsionalitas
volume standard yg ditambahkan
konsentrasi standard
volume aliquot sampel
konsentrasi sample
volume total pengenceran

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Plot respon instrumen (S) vs volume standard (Vs)

Respons Instrumen ( S )

m = D y/ D x

b = y-intercept

(V s ) 0

Vs

S mV s b
Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Hitung konsentrasi sampel.

Kombinasikan:

S mV s b

dan

bcs
cx
mV x
Arie BS

kVs cs kVx cx
S

Vt
Vt

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Metode Adisi Standard
Arsenik in suatu sampel biologi ditetapkan dengan metode adisi standard.
10 mL aliquot sample dipipet ke dalam 5 buah labu takar 100 mL. Variasi
volume dari standard 22.1 ppm ditambahkan ke dalam 4 labu takar, masing2
diencerkan hingga batas. Absorbansi masing2 larutan ditentukan.
Sample (mL)

Standard (mL)

Absorbance

10.0

0.00

0.156

10.0

5.00

0.195

10.0

10.00

0.239

10.0

15.00

0.276

10.0

20.00

0.320

Hitung konsentrasi sampel!

Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Metode Adisi Standard

b.cs
cx
m.Vx

Adisi Standard Arsenik

0.45
0.40

m = 0.00818
b = 0.1554
sm = 0.000119
sb = 0.001463

Absorbance

0.35
0.30

cx

0.25

cx 41 .98 ppm

0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
0

10

Volume Standard (Vs )

Arie BS

(0.1554 )( 22 .1)
(0.00818 )(10 )

15

20

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Metode Adisi Standard
Penggunaan Adisi Standard untuk menghitung konsentrasi sampel
1) Buat 2 larutan yg mengandung aliquot sampel yg sama, tambahkan
standar pada salah satu larutan. Encerkan hingga batas (100 mL)
2) Ukurlah respon instrumennya (absorbansi) pada kedua larutan.
3) Hitung konsentrasi sampel dengan persamaan berikut:

S1csVs
cx
S2 S1 Vx
dimana: S1 = respon instrumen sampel
S2 = respon instrumen sampel + spike
Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Standard Addition 2 titik
Sebanyak 25.0 mL aliquot larutan quinine diencerkan hingga
50.0 mL dan diukur absorbansinya, mempunyai absorbansi
0.416 pada 348 nm diukur dalam kuvet setebal 1.00 cm.
Sebanyak 25 mL aliquot kedua dicampur dengan 10.0 mL
larutan yg mengandung 23.4 ppm quinine. Setelah diencerkan
hingga50.0 mL, larutan ini memiliki absorbansi 0.610 (kuvet
1.00 cm pada panjang gelombang yg sama). Hitung
konsentrasi (ppm) quinine dalam sampel.
S1 = 0.416
S2 = 0.610
Vs = 10 mL
cs = 23.4 ppm
Vx = 25.0 mL
Arie BS

S1csVs
cx
S2 S1 Vx
cx

(0.416 )( 23 .4)(10 .0)

20 .07 ppm
(0.610 0.416 )( 25 .0)

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

C. METODE STANDARD INTERNAL
Umumnya digunakan dalam GC dan HPLC
Suatu senyawa reference/pembanding (standard internal) dengan
volume/massa yg konstan ditambahkan ke dalam larutan standar
dan sampel.
Rasio analit terhadap standard internal digunakan sebagai sumbu
Y dalam plot kurva kalibrasi dan untuk menetapkan sampel.

Arie BS

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

C. METODE STANDARD INTERNAL
Hexane Calibration Curve
2.50E+06

y = 31641x + 142659

2.00E+06

Peak Area

R2 = 0.8171
1.50E+06

1.00E+06

5.00E+05

0.00E+00
0

10

20

30

Conc. (ppt hexane)

Arie BS

40

50

60

Analisis Instrumen I

Metode Kalibrasi Alat

C. METODE STANDARD INTERNAL
Hexane/Octane Calibration Curve
2.5

y = 0.0359x + 0.0772
R2 = 0.9998

Heaxne/Octane Peak Area

1.5

0.5

0
0

10

20

30

Conc. (ppt hexane)

Arie BS

40

50

60