INDICE PRINCIPLOS DE ABSORCION ATOMICA, EMISION Y FLUORESCENCIA ..- DESARROLLO HISTORICO ....seesseeeeesceeeeeeeee PRINCIPIOS BASICOS 2... ececeescsc cece cceeeccesceeseeseeetsaee Origen de los espectros atOmicos ......eesseeeeeee sees CARACTERISTICAS DE LOS ESPECTROS ATOMICOS .....-.eseeeseeeee Emision .........e.eee ee Absorcion Atomica ........00..0- Comparacién entre emisién y absorcién atémica .......-- FIUOLESCENCIA 1.6 ee eee eee eee eect eee ee teen eee TECNICAS EXP! NTALES ees eeeeeeeee Emisi6n ...-. ee eeeeeeeee Absorci6n Atomica .. RESUMEN . INSTRUMENTACION DE ABSORCION ATOMICA ........0sseeeeeeseees PRINCIPIOS BASICOS «1. ..e000seseeeeeee FUENTES DE LUZ ...eesseeeee ee ceee eee eeeece eects eeeeeeeneees EL_MONOCROMADOR ........2..45 EL CTOR ... I SPOS: DE_LE beet e ence e cece ee sete eee e eee eee EL_ATOMIZADOR ....... TIPOS DE INSTRUMENTOS 1.6... eee e eee c cece eee eect cece eee e eee AUTOMATIZACION .......005 RESUMEN . 2... ees eeee eee ee eens . sees eee TECNICAS Y APLICACIONES DE ABSORCION ATOMICR ........ eeee ee NECESIDADES INSTRUMENTALES ..........0000..05 23 23 24 29 31 32 32 32 40 40 46LEY BEER Y EL CALIBRADO .. Sette eee eee 48 SON \CION Ci CT: CA_Y LIMITE DE DETE ON... - eee 50 CIS: YE UD see ee eee eee eee eee eee eee ae 54 LU FER} See eee eee eee tee eee e ene + 55 ICAS. SORA eee eee ee eee ees eee e cece r eres 61 Soluciones de referencia ....++--+e0+ 61 Métodos de calibrado . . 61 Preparacién y manejo de mestras .1... 64 Aplicaciones tipicas .. 66 c| | RESUMEN oe 6 a METODOS DE GENERACION DE VAPOR Y¥ ANALISIS POR INYECCION EN FLUJO COMBINADA CON ABSORCION ATOMICA ......... aeeee ee eee 69 METONOS DE GENERACION DE VAPOR .. 69 Técnica del vapor frio . 69 Generacién de hidruros . 70 ANI OR _INYEC! FLUJO COMBINADA ABSORCION ATOMICA . . . oe sees 73 Introduccién sete tees beeeeee 73 Instrumentaci6n .... seen eee 74 Paraémetros de control de la técnica FIA . 75 @ LA TASAAS .... 76 € a) Aplicaciones FIA-Generacién de vapor .. 76 b) Aplicaciones FIA-AAS llama ......e...0e 79 RESUMEN .. sees aeeee 82 OPTIMIZACION DE LOS PARAMETROS INSTRUMENTALES EN AR ........ 83 CRITERIOS DE OPTIMIZACION .......seeeeeseeee se teeeeees 83 FUNCIONES PRINCIPALES DE UN INSTRUMENTO DE ABSORCION ATOMICA ...-.-ceeeeeeeeeeeee pee eeseeeeeeeeeeeenees 87 PARANETROS INSTRUMENTALES .---+ +6 -eeeeeeeeeee renee seteeeeeee 8B a) Parametros que afectan a la gener: 88 b) Paraémetros asociados a la produccién de Stomos 93 c) Paraémetros asociados al procesado de la sefial . 96 PROCEDIMIENTO DE OPTIMIZACION ... seeeee 99al MEDIDAS DE SEGURIDAD EN ESPECTROSCOPIA DE ¢ ABSORCION ATOMICA ..-.------ eee eee cess eres ttt ee seeeeeee 101 g ELECPRICIDAD ...- ceteeeeeetesees 201 103 BAN 106 109 RD 110 ae OCF) COMPROBACION we sees eseceeeeeeet eee eerencees LOD A BB2D Qu Or PRINCIPIOS DE ABSORCION ATOMICA, EMISION Y FLUORESCENCIA Este programa tiene cuatro objetivos. Primero hablaremos sobre el desarrollo histérico de los métodos espectroquimicos de andlisis elemental. continuaremos hablando sobre los principios basicos de estos métodos, incluyendo una explicaci6n del origen de los espectros aténicos. Seguidamente haremos una descripcion y comparacién de las principales caracteristicas de los espectros de emisién, absorcién y fluorescencia. Por Gltimo hablaremos sobre los principios de las técnicas experimentales utilizadas en los métodos espectroquimicos modernos, con especial énfasis en la absorcién atémica. DES: "ORTCO La importancia de la espectroscopia atémica en el analisis quimico se entiende rapidamente al observar su gran aplicacién. En la siguiente tabla periédica vemos que hay 70 elementos, subrayados, que pueden deterninarse Girectamante por métodos espectroscépicos atémicos. #H He Li Be B¢N O F Ne Na Mo ALSIP § Cl Ar K Ca ScTiV cr Mn Fe Co as) Se Br Kr Rb Sx XY Zx Nb Mo Te Ru Rh ) sb Tei xe cs Ba La Hf Ta W Re Os Ir Bi Po At Rd Fr Ra Ac ce Br Né Pm Sm Eu Gd Tb Dy Ex Tm Yb La Th Pa J Np Pu Am Cm Bk Cf Fm Md No LwLos materiales que pueden analizarse por métodos espectroguimicos son ilimitados. Se encuentra aplicacion en campos tan diversos como mineria y metalurgia, alimentacién y agricultura, biologia y quimica médica, etc. : vamos a considerar algunos aspectos sencillos de los espectros Opticos. A finales de siglo XVI, Newton observé el espectro formado cuando 1a luz del sol atravesaba un prisma de cristal. Unos 100 afios nds tarde, Wollaston descubrio que él espectro solar contenia varias lineas oscuras. Estas ineas fueron llamadas posteriormente LINEAS FRAUNHOFER, en honor de dicho cientifico que las estudié con detalle. En 1831, Herschel escribié un articulo sobre la distinta coloraci6n que tomaba una llama cuando contenia Giferentes sales netAlicas, sugiriendo que este podria ser tun nétodo de deteccién de metales. Otros autores publicaron observaciones similares. & En 1859, fueron demostrados los principios baésicos del q anélisis espectroscépico, mediante los experimentos a lasicos ae Kirschhoff y Bunsen. Utilizando un sencillo aparato calentaban las sales de varios metales alcalinos y j Alcalinoterreos en un mechero Bunsen, lo que vaporizaba las d muestras. Los diferentes colores que tomaba la llama eran é cxaninades a través de un espectroscopio. Sus observaciones q estuvieron, por tanto, limitadas a la regién visible del d espectro. @ Kirechhoff y Bunsen observaron gue cada metal producia 4 una combinacién caracteristica de colores, es decir, un : espectro atomico caracteristico. Las sales de sodio, por - ejemplo, producian siempre una llama amarillo brillante, q mientras que las de litio una llama roja intensa. Los é distintos colores que aparecen en diferentes posiciones del espectro, corresponden a diferentes longitudes de onda. d ga de color se extiende en un rango muy estrecho de Jilama LINEA ESPECTRAL, La Tongitudes de onda, y se.1 I @ aparicion de estas lineas a longitudes de onda especificas 4 indican 1a presencia de un elemento dado. Esta importante a Felacion es la base de las técnicas de enisi6én atomica. 4 adenés de la emisién, Kirschhoff y Bunsen estudiaron d la absorcién de luz por la llama. Hicieron que luz blanca ‘ precedente de una fuente intensa de luz, atravesare una a Yiama, encontrando que las llamas coloreadas que emitian | isneas agudas brillantes, también absorbian luz a esa misma e jongitud de onda. Por ejemplo, una llama que contuviera d sodio absorbia exactamente a la longitud de onda de 1a linea de enisién amarilla del Na; una llama con litio , absorbia a la longitud de onda de la linea roja del i.ADAASA DA Aanaoa Gans Pan Por tanto, como Ja enisién, la absorcién de radiacion onda espécificas indica la"presencia de un 1 nto. da Esto proporciona la base para la técnica de absorcién atémica. La relacion entre las longitudes de onda de las lineas de emisién y absorcién, llevé a Kirschhoff a comprender el origen de las lineas Fraunhofer del espectro solar. Dedujo gue estas lineas oscuras eran debidas a la absorcion por los atomos de la atmésfera solar. Por tanto, los elementos presentes podian identificarse segtin las longitudes de cnda de las lineas Fraunhofer. Estas observaciones fueron una espectacular demostraci6n del poder de los métodos de ebsorcién atémica. De todos nodos, e1 potencial de la absorcion atémica para el an4lisis cuantitativo no fué verdaderamente tenide en cuenta hasta 1952. Entre tanto la atencion se dirigio casi por completo al desarrollo de los métodos de emisi6n. NCIPTO: LCOS De todo lo dicho anteriormente se concluye que les métodos espectroscopicos estan basados en la observacién de Kirschhoff y Bunsen sobre el hecho de que el vapor de un elemento emite y absorbe radiacién solo a longitudes de onda especificas y caracteristicas. En todo esto hay dos aspectos importantes: primero, las longitudes de onda de las lineas del espectro aténico a@é-emision y absorcion, proporcionan un medio poderoso de identificacién elemental, es decir, andlisis cualitativo. Segundo, Como veremos més tarde, le intensidad de la emisién o absorcién varia con 1a concentracion del lement6, lo cual proporciona un medio de andlisis cuantitativo. ~~ La emision y la absorcién atémica son las dos técnicas espectroquimicas principales utilizadas hoy dia, pero los métodos pueden también estar basados en la medida de la fluorescencia atémica. Origen de los espectros atémicos Las teorfas modernas dicen que los atomos de un elemento dado poseen solo ciertos valores discretos de energia. Podemos visualizar estos valores refiriéndonos a diagramas de niveles de energia como los que se muestran en la Figura 1.2 OBL a Excitectén Estados Estados excitados excttades, Estado fundanental Estado fundanental Figura i. Los estados de energia atémica de un elemento dado son pastante diferentes de aquellos de cualquier otro elemento. En general, los atomos de cada elemento tienen un conjunto ‘nico de estados de energia. A temperaturas normales, los atomos estén en el estado més bajo de energia, llamado ESTADO FUNDAMENTAL. No obstante, pueden pasar temporalmente a los estados mas altos de energia o ESTADOS EXCITADOS. un &tomo en estado excitado es inestable y permanece alli un tiempo extremadamente corte. Répidamente y de forma Scponténea vuelve al estado fundamental, bien directanente o via estados intermedios. Cada transicién a un estado {nterior puede ir acompafiado por enisién de radiaci6n. Un aspecto fundamental de la emisién, por tanto, es que se origina en los atomos excitados. La medida dela luz emitida por estos atomes_excitados al pasar a estados Garériores de energia, es la base de las técnicas de euisicn espectroguimicas. Vamos a hablar sobre la longitud deonda de la radiacion emitida.onda corresponden precisamente a las energias necesarias para “elevar" el détomo de un estado a otro, EF. como 10s incrementos de energia, E, son idénticos @ aquellos de las transiciones de emision, las longitudes de Ghda de absorcién, 1, 2, etc, son exactamente las mismas que las longitudes de onda de emisién. Indicar que mientras las lineas de emisién DEBEN originarse en estados excitados, las lineas de absorcién pueden originarse en el estado fundamental. Como verenos mas tarde, la absorcién por atomos en el ade es, de hecho, la base para los métodos espectroquint “absorcién atomica. ~— ~ Ahora, para completar la discusién sobre transiciones de energia, vamos a considerar los procesos de 3 fluorescencia atémica. o & é d oe] [68 | al [Aa 4) | oe mf * 6: SSTECTED OE ErttsiCN Te RUCRESCARAA, j A 8 Figura 3. ‘ Cuando la radiacién procedente de una fuente de luz liega a un vapor atémico, puede estimular emision de > yadiacién llamada FLUORESCENCIA ATOMICA. Este proceso da eS 4 jugar a un espectro de emisién de fluorescencia. ° come se muestra en la Figura 3-A, la fluorescencia q atomica es el resultado de dos procesos secuenciales. La 4 abeoreién "eleva" al 4tomo a un estado excitado. El atomo e puede entonces volver a su estado original como en A, @ predauciendo la linea de flucrescencia 1. Observar que la radiacion emitida tiene 1a misma @ longitud de onda que la absorbida. Este proceso se conoce g cone linea directa o linea de resonancia de fluorescencia.a SPT ESPECTI ATONTCO: 1 método normal de producir emisi6n es generar un vapor atémico a alta temperatura. El calentamiento aumenta las colisiones entre los atomos de los varios elementos presentes. La intensidad de cualquier linea de un elemento depende de cierto némero de factores. En particular depende de la concentracién de atomos de aquel elemento en el vapor. A bajas concentraciones, la intensidad de enisién es proporcional a la concentracién. Este importante hecho proporciena la base para las determinaciones cuantitativas. La intensidad de emisién también depende de forma critica de la temperatura. A bajas temperaturas, como ambiente, se excitan un nimero despreciables de dtomos. Por lo tanto no vemos emisién. A 2000 K, una pequefia fraccién de la poblacién atémica pasa a bajos estados excitados. Como resultado vemos, en la zona amarillo-roja del espectro, lineas de resonancia de elementos facilmente excitables, como Na, Li, K y Cs. A temperatura més alta, 3000 K, el namero de atomos de Na, Ld, K y Cs on estos bajos estados excitados, aumenta en gran manera, lo que da lugar a una mayor intensidad de emisién. Adenés, el aumento de temperatura hace que aumente la poblacién de los estados excitados més altos de elementos como Ca, Cu y Mg, que son mas dificiles de excitar. Por tanto, ahora es posible observar emisién desde los estados excitados de estos elementos en la regi6n azul-UV. De nodo similar, a 5000 K, las intensidades aumentan de forma dramAtica y la poblacién de los estados excitados de los elenentos més dificilmente excitables, como Bg y Pb, da lugar a lineas incluso més all4 del ultravioleta. En general, se observa un aumento en la complejidad espectral a las temperaturas nés altas. Todas las lineas son nés intensas y aparecen algunas nuevas. Absorcién Atémic: Para vapores atémicos a temperaturas de hasta unos 3000 K, la proporcién de dtomos excitades es mucho menor del 0.01% del total. Por tanto, a estas temperaturas, que son de interés prinario en absorcién atémica, mas del 99.99% de todos los A4tomos estan en estado fundamental. También hemos visto que el proceso de absorcién envuelve§ 4 4 ¢ é Qs SOLS Ou LOGO 2, aff. LO GE. ee transiciones de atomos desde los estados infericres a los superiores. Los métodos de absorcién atémica estén muy relacionados con la absorcién de radiacion por dtomos en estado fundamental, por lo tanto la absorcién ocurre precisamente a las longitudes de onda de las lineas de resonancia, \R. Las lineas de resonancia para los 67 elenentos determinables por absorcién atémica se encuentran en la zona de longitud de onda entre 190 y 900 fit. Comparacién entre emisién y absorcién atémica A.ABSORUON ADMICA C. BHISION B. ESECRD ABEIRCON tii ll PR AR RA Figura 5. Primero, el espectro de absorcién atémica de cualquier elemento dado es relativamente simple. Recordemos que las transiciones de absorcién atémica deben originarse en el estado fundamental, como se muestra en A. Por tanto, las lineas de resonancia resultantes, \R, son bastante menores en nimero, como refleja el espectro de absorcién B. En la emisién, como se muestra en C, es posible mayor nimero de transiciones, ya gue se originan desde varios estados excitados. Como se observa en D, esto da lugar a que el espectro de emisién sea més complejo.QBAQARBE 29. eae € é CAAORBABD AR eae Cad @ POR OAD OG x 10 Las caracteristicas espectrales de la absorcion atémica y la emisién difieren tambien en otros aspectos. Por ejemplo, a 2000 K, como henos visto, el espectro de emisién de tna mezcla elemental contiene solo las lineas de Jongitua de onda larga, de unos pocos elementos facilmente excitables. Por el contrario, vemos que las lineas de absorcién atémica se extienden por todo el UV, y pueden observarse las lineas de muchos elementos. A _temperaturas més altas, por ejemplo 5000 K, aumentan las _intensidades de emision, Y aparecen lineas de otfes Slementes. Por tanto el espectro de emisi6n se va haciendo cada vez més complejo al aumentar la temperatura. Por el contrario, los espectros de absorci6n a las dos temperaturas son muy similares. Esto es debido a que Ja_ temperatura tiene un efecto despreciable. sobre el na@mero de ‘Stomos en estado fundamentel- El comportamiento de los elementos quimicos a bajas temperaturas tiene una importante consecuencia. La mayorta de los elementos quimicos se transforman en 4tomos en estado fundamental a reletivamente baja temperatura. A 2000 K, por ejemplo, muchos elementos pueden existir como vapor atomico y, por tento, exhibir fuerte absorcién. Por el contrario, como ya hemos visto, a esta temperatura los Yapores atémicos de muy pocos elementos exhiben una fuerte enisién. . Fu nei: Recordemos por los diagramas A y B, que 1a fluorescencia atémica es el resultado de absorcién seguida por emision de fluorescencia. oe d < PRESTO. PUPS NCA M unas 5 BSPeOEO (ee ‘ARs02004 Figura 6.SG BO BOD OO DA Au a aa El espectro de fluorescencia, C, generalmente contiene limeas, 1, a Ja misma longitud de onda de resonancia que el espectro de absorcién, D. El espectro de fluorescencia, no obstante, puede también’ contener una o més lineas extra, como se ilustra en C. Estas son debidas al paso de un estado excitado a uno intermedio, como muestra el diagrama B. En la figura, la transicién £2 en B, produce una segunda linea a 2 en C. Como la absorcién, la fluorescencia puede observarse a todas las longitudes de onda, y la intensidad no depende de forma critica de la temperatura. TECI EXP) nisi En la Figura 7 vemos el esquema del aparato utilizado para realizar los espectros de enisién, llamado ESPECTROGRAFO. Tiene tres componentes principales. Primero a fuente de excitacién. Esta convierte una pequefa cantidad de muestra en vapor atémico caliente que contiene Atonos excitades. La radiacion caracteristica' emitida se enfoca sobre la rendija de entrada del espectrégrafo. Un dispersor, como una red de difraccién concava, separa la radiacién en las longitudes de onda analiticas. Estas se hacen incidir sobre una placa fotogréfica, que registra las intensidades de las lineas. EMISION ATOMICA — Monocromadar Detector Llama Figura 7.BODE 2 Gag OND ELOCAD@ASALE 2S Qe ALE Hea € az Indicar que puede registrarse ol espectro entero en una tnica exposicion. Por tanto, el espectrégrafo es una excelente herramienta cualitativa, ya que podemos determinar la presencia de varios elementos por las Jongitudes de onda de las lineas. La concentracion de cualquier elemento se determina midiendo las densidades de las lineas en la placa. una variacién del espectrégrafo, més conveniente para trabajo cualitativo es el ESPECTROMETRO DE LECTURA DIRECTA. En este instrumento, en vez de pelicula fotogréfica, se utilizan detectores fotoeléctricos. Se hacen incidir lineas espectrales seleccionadas, sobre rendijas de salida localizadas en posiciones de longitudes de onda caracteristicas. Fotomultiplicadores localizados detrés de cada rendija producen sefiales eléctricas proporcionales a las intensidades de linea. Las sefiales amplificadas pueden @arse en medidores o digitalizades para imprimirlas o para un tratamiento de datos por ordenador. Si cada linea medida corresponde a un elenento diferente, podriamos determinar muchos elementos simultanea y rapidamente. Recordemos que la emisién precisa que los dtomos estén excitados. Esto generalmente se consigue con alguna forma de calentamiento. as fuentes principales de excitacién son llamas y plasmas, para el andlisis de soluciones, y descargas eléctricas para el andlisis de sélidos. Las llamas producen espectros simples a causa de su relativamente baja temperatura, 2000 a 3000 K. Como hemos visto, no obstante, jas fuentes de baja temperatura no producen una excitacién eficiente en muchos elementos. con descargas eléctricas se consiguen temperaturas més altas, unos 5000 K. Estas incluyen arcos simples DC.y AC y chispas de alto voltaje. Los plasmas con acoplaniento inductivo y DC utilizan excitacién electronica de un gas noble, para generar vapores atémicos a alta temperatura, por encima de 8000 K. Estos proporcionan sensibilidades excelentes y alta precisién para un amplio rango de elementos. Las necesidades de resolucion de los sistemas de dispersion utilizados en espectroscopia de emision, dependen de forma critica de la complejidad de los espectros emitidos. Con una llama de baja temperatura, como aire-propano, solo emiten de manera importante el Na y otros metales alcalinos. Sus espectros son tan simples que incluso un filtro con 10 nm de resolucién, es adecuado. Laq c 4 t eLial-RaLnl Sf 2 ARABS e llama de éxido nitroso-acetileno a 3000 X, da lugar a espectros més complejos, requiriendo una separacién de lineas de enisién lo m4 préxima a 0.1 nm. A temperaturas cercanas a 5000 K, los arcos y chispas pueden producir espectros muy complejos. Pueden ser necesarias resoluciones tan buenas como 0.03 nn, Finalmente, las fuentes de plasma, con temperaturas de 8000 K, pueden requerir una resolucién de 0.01 nm. Vamos a ver ahora como se utilizan los espectros de emision para determinar concentraciones de elementos. Los instrumentos de emisién se calibran, como se muestra en la Figura 8.A, midiendo y representado la intensidad de las muestras de referencia. La concentracién Gesconocida, Cx, se determina entonces por interpolacion sobre la curva de calibrado. TAS, Figura &. Con el método del patrén interno, B, se mide y representa 1a relacién IA/IMC, es decir, la relacion de intensidades de la linea del analito y la del constituyente nayoritario. Este metodo ayuda a compensar inestabilidades de la fuente, un problema particular de los arcos y chispas.a4 En los instrumentos modernos, se almacenan los datos ae calibracién y los datos de intensidad se transforman Gutonéticamente, para dar valores de concentracién directamente. como en todos los nétodos espectroguimicos, es esencial que todas las medidas se hagan en idénticas condiciones. Tambien, para evitar posibles efectos matriz, es deseable utilizar muestras de referencia lo més parecidas posible a la muestra desconocida. vemos a resumir lo dicho sobre métodos de emision. La técnica puede utilizarse para analizar una amplia variedad de elementos en sélidos y en solucién- Con un cepectrégrafo, una Gnica exposicién da lugar a1 espectro complete, haciéndolo nés atil pare 1a identificacion del Glemento, Los espectrémetros de nedida directa pueden Yealizar determinaciones multielemento simultaneas, répidamente. Las intensidades de las lineas de emisién dependen de forma critica de la excitacién y, por tanto, de 1a tenperatura. También hemos visto que se necesitan altas tenperaturas para excitar muchos elementos. En este caso, los espectros de emisién podrian ser muy complejos, requiriendo sistemas de alta resolucién éptica- Las concentraciones se determinan mediante calibrados con muestras de referencia. Absorcién atémica El principio de analisis se muestra en la Figura 9. “—~ at roe = Ee o 5 Figura 9.15 3 O En esencia, la radiacion de una fuente se hace atravesar el vapor atémico de la muestra, que absorbe selectivamente. Se miden la intensidad incidente, I0, y la intensidad transmitida, It. Conociendo estas puede evaluarse 1a absorbancia, A, definida como el 1og(10) I0/It. En la zona donde se cumpla la ley de Beer, existiré una relacién lineal entre la absorbancia, A, y la concentracion. Para el anélisis estadistico, es obvio que la absorbancia de la linea del analito debe medirse con precisién. Vamos a examinar esta medida de la intensidad con mas detalle. Las lineas de absorcién de los vapores atomicos son mucho més estrechas que las bandas de absorcién de lés sélidos y soluciones. Estas bandas de absorcién tienen, tipicamente, una anchura a media altura entre 10 y 100 nm. Bandas de este tipo son relativamente f&ciles de medir. En cambio, las lineas de absorcién atémica, son muy estrechas. Son muy normales anchuras a media altura entre 0.002 y 0.006 nm. Este es un problema dificil a la hora de medir sus intensidades. No obstante, esto se soluciona utilizando como fuente del instrumento, una lémpara espectral atémica, que enite un espectro de lineas. Una fuente de lineas tiene dos caracteristicas importantes para las medidas de absorcion atomica. Primero, se utiliza una_lémpara que. emite el espactro atémico del elemento analito; esto lugar a una emisién de lineas de resonancia cuyas: longitudes de onda coinciden exactamente con las lineas de absorcién. Segundo, 1a anchura de la linea de resonancia es del orden.de 0,001 ni; por-tanto, es incluso m&s estrecha que la linea de absorcién de“la muestra. Utilizando como fuente ‘esta linea de emisién tan estrecha, es posible medir la absorbancia del pico de manera bastante mas facil, utilizando incluso un espectrémetro simple. Esta técnica para medir absorbancias en absorcién atémica es caracteristica y de vital importancia para el éxito de los métodos de absorcién atémica actuales. e 2.) CLE CE , vamos ahora a considerar el aparato utilizado en las medidas analiticas de absorcién atémica. LB ODD CL £ea>Re QOS REBOR & LD ®, 16 ABSORCION ATOMICA Lampera Co Monocromador Detector Llama Figura 10. Los componentes esenciales de un espectrometro de absorci6n at6mica son: 1.- Una fuente de luz 2.- Un monocromador 31- un sistema de deteccién y amplificaci6n 4.= AlgGn medio para atomizar la muestra Los instrumentos modernos tienen estos componentes integrados en una unidad compacta y simple. En la practica, la radiacién de la fuente se dirige a través de la muestra atomizada hacia el monocromador, donde se aisla la linea de resonancia analitica de otras longitudes de onda, y se envia al detector. Las medidas se realizan en presencia y ausencia de la muestra para tener una relacion de intensidades. £1 amplificador convierte la sefial en absorbancia o concentracién, y se muestra en el dispositivo de lectura. Vamos ahora a examinar la funcién de cada componente principal, empezando con el atomizador. La funcién del) atomizador len absorcién atémica es convertir la muestra en un vapor atémico. En la técnica mas utilizada, se vaporiza una solucién de la muestra que se dirige hacia una llama que necesita anicamente estar lo suficientemente caliente como para descomponer los componentes moleculares. En el nebuli:ador y c&mara de premezcla ocurren tres pasos baésicos. Primero, el nebulizador convierte la muestra en una niebla muy fina, gue se mezcla con los gases combustible y oxidante, en la camara de premezcla.a7 > Mixing Chamber with Bumer Head PAC TOs ‘ RRS NA “ Y Eno Cap Figura 11. Los gases con las fines gotas de muestra, emergen por la cabeza del quemador con un flujo laminar, hacia la llama. En esta llama las gotas de muestra se evaporan y descomponen en atomos del analito. Adends de llamas, los Gnicos atonizadores utilizados son Hornos calentados eléctricamente. El tubo es, normalmente, de grafito.pirolizado. Est4 rodeado, por dentro y por fuera, por una “ ~eorriente protectora de un gas inerte como argon.o nitrogeno. Esto elimina el. oxigeno que podria causar que el grafito se quemara répidamente, a las altas temperaturas ye se utilizan..- “ La solucién de muestra se introduce a través de un pequefio agujero, con una micropipeta. El volumen de muestra inyectado esta, normalmerte, entre 1 y 100 yl. Durante la medida, la nuestra se vaporiza totalmente en unos pocos segundos, produciendo una sefial de absorcién transitoria.18 vamos a hablar ahora sobre las fuentes|Las fuentes née Utdlizedas en absorcion atomica”son las LAMPARAS DE watobo HURCO y las de DESCARGA SIN ELECTRODOS. Proporcionan Sha dccearga eléctrica en un gas inerte a baja presién, ana cient 5-10 Torr. El elemento analito esta presente en ao ettode hueco o en el interior de las lémparas sin electrodes. ej La descarga eléctrica vaporiza y excita al elemento. » @ causa de la baja presién y temperatura de trabajo, estas fuentes proporcionan 1as_lineas.de emision. echas, para las medidas de absorcion atémica. “ Las lineas més importantes en absorcién atémica son & jag de resonancia del analito,\R. La linea principal a ae resonancia,) R2, es la més Sensible, es decir 1a que a Corresponde a la longitud de onda @ la que ocurre 1a mayor © Sbsorcién. Las dem4s lineas de resonancia son menos | Gtilizadas en las medidas de absorcion atémica. Las lineas ho de resonancia no son Gtiles, y, como les lineas del gas de relleno, deben ser rechazadas. @ c Las intensidades relativas de estas lineas de emisién pueden cambiar con el disefio de la lémpara y la potencia @ ( aplicada. € vanos ahora a hablar sobre otro componente principal & dei sisten a 6ptico, el|monocromador}. Su funcién principal @s aislar la linea de resonancia,) R, de las lineas de ne Eesenancia y de las del gas de relleno. El paso espectral @el monocromador por tanto, funciona como un filtro ajustable, que transmite solo una banda de lengitud de onca centrada en la linea de resonancia. Normalmente no es necesaria alta resolucién, ya que la fuente proporciona la pequefia anchura de linea necesaria para las medidas de absorcién efectivas. Como consecuencia, By monceromador en absorcién atomica es, generalmente, Simple y més compacte que aquel usado es espectroscopia de emision. Despues de atravesar la muestra atomizada y el monocromador, la radiacién de la fuente se dirige al Eetecten), es decir, a un tubo fotomultiplicador. La sefal Sesuitante se envia a un amplificador de AC y a un Gispositivo de lecture. Los modernos sistemas AC de Geteceién responden solo a la radiacién emitida por la lampare y no por la muestra. antes do alcanzar la llama, la radiacion de la lémpara se convierte en una sefial pulsada o alternante. Para esto puede utilizarse un CHOPPER (un disco) que gira, o 1a propia fuente puede ser pulsada electrénicamente.ARAL @B@BAADS 19 La radiacién emitida por la muestra no est4 modulada y por lo tanto da una senal continua o Dc, El amplificador ac esté disefiado para responder solo a las sefales de freciiencia modulada, por tanto rechaza las sefieles de emisién-de la muestra. El manejo de los instrumentos de absorcion atomica presenta poca dificultad, pero hay un aspecto particularmente importante. Henos viste que_un aspecto esencial de la técnica.es utilizar una fu gue emita una linea de resonancia apreciablemente mas estrecha que la linea de absorcion que ‘Se Va_a medir. > Para hacer esto, las lémparas modernas estén disefiadas para operar a temperaturas y presiones internas mucho més bajas que aquellas de la llama o la camara. Cono cohsecuencia las lineas emitidas por la lémpara son del orden de 0.001 nm de anchura media, mientras que las lineas de absorcién son normalmente, varias veces mis anchas. \ BID ABSOBION ASO INVERSION A a B a de mn de tye onal AR PORN wR 2oR FOENA ABSORBADIA ARBDEBANUA BAM FoRNUA ATA SOTEHUA BNLOAEAUON D Figura 12.20 La intensidad de la linea de resonancia enitida aunenta normalmente con la potencia de la lampara, como se Questra en la Figura 12-A.. No obstante, la linea también se Snsancha debido a un efecto conocido como autoabsorcion. Este se debe a una generacion de concentraciél ~genasiado alta del elemento vapor en la lampara. En algunos casos, Somo en B, hay un efecto especial de absorcién conocido Como auto-inversién. Esto da lugar a grandes Cozanshanientos y a una pérdida selectiva de intensidad en el centro de la linea. Estos efectos de ensanchamiento dan lugar a una disminuci6n en la medida de absorbancia, como se muestra en c, y aumenta la curvature de la recta de calibrado, D. Eétos efectos perjudiciales se evitan restringiendo 1a potencia de operacicn de la 1émpara. vamos a resumir un procedimiento tipico de anélisis por absorcién aténica. 1.- Preparar las soluciones necesarias de patrones Y muestras. © 2.- Seleccionar la lémpara apropiada y establecer la potencia de operacién éptima- 3.- Colocar el monocromador a la longitud de onda de 1a linea de resonancia deseada. Ajustar la rendija espectral al mAximo que permita un aislamiento de 4 linea satisfactorio. & 4.- Ajustar los controles del atomizador para unas a condiciones apropiadas de trabajo. & g 5.- Nedir las absorbancias de las soluciones patron y @ de las muestras. 6.- Preparar una curva de calibrado y determinar 1a Concentracion de analito en las muestras desconocidas. como alternativa al Gltimo paso, muchos in: pueden calibrarse con soluciones de referencia, directamenté en. concentracion de muestra. os métodos de absorcién atémica tienen ciertas caracteristicas atractivas para el andlisis de elementos. _» primera, tienen gran versatilidad, ya que pueden analizarse gran namero de elementos y muchos tipos de materiales. —v segunda, pueden tener gran precisién y bajos limites de deteccién.4 21 s, Tercera, normalmente son efectivos para el andlisis de micromuestras. ~\ Cuarta, son répidos y relativamente directos. -& Quinta, pueden realizarse muchos anélisis con instrumentos simples y no muy caros. Por otra parte, las medidas de absorcién atémica estan limitadas por la determinacién de un solo elemento cada vez. Los métodos de enmisién son nfs convenientes para el anélisis simult4neo multielenental y el anélisis directo de sélidos, como minerales y netales.22 RESUMEN Para empezar un repaso de lcs principios de estas técnicas, recordenos las tempranas investigacicnes de Newton, Fraunhofer, Herschel, Kirschhoff y Bunsen. Gracias @ estas ce pudo observar la utilidad de los nétodos espectroscépicos en el andlisis elemental. Los resultados experimentales se explican en términos ae transiciones atémicas entre =stados de energia. Estan Yan aconpafiadas de absorcién 0 emision de radiacién a Jongitudes de onda Gnicas pera cada elemento. Repasemos ehora las caracteristicas espectrales de la enisién y la absorcion. Para cualquier elemento dado, el espectro atémico de enisién puede ser relativamente complejo, e1 espectro de absorcion es més simple. A bajas temperaturas, solo unos cuantos elementos fAcilmente excitables producen lineas de emisién, y solo se gbservan a largas longitudes de onda. La absorci6n ocurre para muchos mas elementos, y a lo largo de la region UV~ visible. . La intensidad y complejidad del espectro de emisisn depende mucho de la temperatura. La absorcion es practicamente independiente de la temperatura~ £1 repaso final concierne a aspectos experimentales. Los espectros de emisién se miden con espectrografos Y espectrémetros de lectura d-recta. La instrumentacién Gepende mucho de la temperacura de la fuente de excitecion. te tecnica es especialmente conveniente para anélisis multielenental simaltaneo. Los espectrémetros de absorcién consisten en: i.- una fuente ce emisién de lineas de resonancia estrechas 2.- Un monocrom.der para aislar esas lineas 31- Un sistema de deteccién modulado AC, y 4.- Un medio eficiente de atomizacion de la muestra. Ambas técnicas Son ampliamente utilizadas en el anélicis de una gran variedad de elementus y tipos de muestra.ao ag RAG ee 2 ¢ 2 OB & 22 23 INBTRUMENTACION DE ABSORCION ATOMICA Los objetivos de este programa son examinar el disefio, uso y forma de trabajo de los instrumentos convencionales de absorcién atomica. El programa comienza con un breve repaso de les principios bacicos de la técnica. Describiremos los Eomponentes principales del espectrémetro: la fuente de Suz, monocromadpr, detector, ampliticador, dispositive de lectura y atomizador. El programa continuar4 con una discusi6én sobre los instrumentos de haz simple o doble, y sobre alguno de los accesorios principales. Terminar4, por fin, con una seccién sobre automatizacién. PRU cos Como se vié en el primer programa, los métodos de. absoreién atémica se basan en la absorcion selectiva que tiene lugar cuando le radiacién atraviesa un vapor atomico. La absorcién por los 4tomos ocurre dentro de un rango muy estrecho de longitudes de onda, por ello se habla popularmente de "linea" de absorcién. La longitud de onda Ge una linea particular es caracteristica del elemento presente, mientras que el grado de absorcién indica su concentracién. La abeorcién y la concentracién del analito estan cuantitativamente relacionadas por la Ley de Lambert-Beer, expresada simplemente por la ecuacion A= a.b.c donde "A" es la absorbancia, el parémetro determinade espectrofotométricamente. "a" es la absortividad, una constante dependiente del elemento y la longitud de ond: "pn es la longitud del camino optico (paso éptico) y "ce", la concentracién. Generalmente se utilizan soluciones de referencia para calibrar el sistema instrumental. La absortividad y el paso Sptico permanecen constantes y por tanto una representacién de la absorbancia frente a la concentracién de analito debe ser lineal. No obstante, en la practica a menudo aparecen desviaciones de la ley de Beer a causa de las limitaciones instrumentales. Esto da lugar a curvaturas en la recta de calibrado, Més tarde discutiremos alguna de estas limitaciones.24 1 principie de trabajo de un espectrémetro de absorcién atémica se ilustra en la Figura 13. La radiacién de una fuente de luz se hace atravesar la muestra atomizada, ocurriendo la absorcién selectiva. La radiacién transmitida entra entonces en el monocromador, que aisla le Jongitud de onda analitica y la envia al detector. El resultado es una sefial eléctrica proporcional a la intensidad de la radiacién. La sefial, entonces, es procesada por el amplificador y finalmente aparece en el dispositivo de lectura. Golda te Necide de luz especitice jo tems pales ; { { 1 ' ! ae og HET Toormer weer estar g \ | Electronica t | time | Figura 13. Actualmente son necesarias dos medidas para cada lectura de absorbancia: primera, Io, la intensidad del haz incidente y segunda, It, la intensidad del haz transmitido. [a relacién entre las dos intensidades se utiliza para determinar la absorbancia. Normalmente, los componentes que agui se muestran por separado, integran una unidad compacta. Vamos ahora a examinar cada componente con detalle, empezando por la fuente. FUENTES DE LUZ En general, se utilizan dos tipos de fuentes de luz en espectroscopia. Fuentes continuas emiten en un rango ancho de longitudes de onda. Ejemplos son las familiares lémparas de tungsteno y deuterio, y el arco de xenon. Las fuentes de lineas emiten radiacién, principalmente, en forma de lineas discretas. Las tipicas fuentes de lineas incluyen las lamparas de cétodo hueco y25 las de descarga sin electrodos. Los ldéseres son también fuentes de lineas, pero no son praécticos para la rutina de absorcién atémica. Idealmente, las fuentes de absorcién atémica deberian enitir radiacion solo a las longitudes de onda analiticas. Las fuentes de lineas se acercan a esta condicién ideal, pero no las fuentes continuas. Como resultado, la mayor parte del trabajo analitico se realiza con fuentes de lineas. La fuente més utilizada en absorcién atémica es la LAMPARA DE CATODO HUECO.. Hay muchas variaciones; la construccién basica de la lampara se muestra en la Figura 14. veins 3 caTOME Hueco sade ensane 4 4 @ tds bos oe reltene ¢ d e ROSES €1 LA LAPARR oF cATOOD MCR S Ar ut mu” » re) ol] - q ” i ol] EN & Art 4 © ¢ Figura 14. CAO € CO FLD6 d § AHOAL OLE IARALSEAOSOSADBAQ Le: O GS e 26 En el interior de un envoltorio de vidrio sellado, que contiene una ventana transparente, hay dos electrodos de trabajo, el Anodo y el c&todo hueco. El cAtodo esta construido o contiene al elenento analito. La lampara contiene también un gas inerte como neon o argon. La presién del gas se mantiene baja, alrededor de 5 Torr, para minimizar los efectos de ensanchamiento de lineas. La . lampara de cdtodo hueco trabaja tipicamente, a voltajes alrededor de 200 voltios, con corrientes dentro del rango de 2 a 25 mA. cuando se aplica potencia a la lampara de cétodo hueco, la descarga produce el efecto llamado, "sputtering" (arrancar los 4tomos del c&todo). Como se muestra en la figura los étomos de gas se ionizan y aceleran hacia la superficie negativa del cAétodo, donde 1a colisién produce una salida de los &tomos de analito. Los 4tomos de analito chocan con 4tomos de gas con un exceso de energia, y se excitan. Los &tomes excitados emiten fotones, h , dando lugar al espectro caracteristico del elemento. En el espectro atémico emitido por una lémpara de cétodo hueco estén presentes muchas lineas de diferentes intensidades, las lineas originadas por los atomos excitados del material del catodo o del gas de relleno. Lo-m4s importante para la ebsoreién atémica son las limeas de resonancia del analito, R. La principal linea de resonancia R2 es la mas sensible, es decir, corresponde a la linea de absorci6n mas fuerte. Frecuentemente, pero no siompre, es la linea de emisién mas intensa. Otras lineas de resonancia se utilizan menos en las medidas de absorcién atémica. Las lineas de no resonancia no son tiles, y, como las lineas del gas de relleno, deben ser rechazadas. Las intensidades relativas de las lineas de emision pueden cambiar con el disefio de le lampara. También les afecta la corriente de ldmpara. Una elevada corriente de jampara produce un haz de luz intenso, y por tanto mejora la relacién sefial-ruido, como se muestra en la Figura 15-A. En algunos casos esto beneficia la precisién analitica. Desafortunadamente, una corriente elevada puede también tener efectos indeSeables; Primero, como se muestra en la figura B, podria haber un descenso de absorbancia a medida que aumenta la corriente, debido a efectos de énsanchamiento de lineas. Segundo, puede haber pérdida de la linealidad del calibrado, como se muestra en la figura ¢. Por lo tanto la elecci6én de la corriente debe ser un conpromiso. Como regla general, las lamparas de cdtodo hueco deberian operar por debajo de su méxima relacion. La corriente nas baja no solo mejora la sensibilided y la ~~ iinealidad, sino que también prolonga el tiempo de vida Gil de 1a “lampara. eoPOLO Id DQ a 27 BRSOOONIA = ABSORB seh, ROUS A e a a \ Z aaeare PRONE Figura 15. Las lamparas de cétodo hueco no son posibles para todos los elementos determinables por absorcién atémica. Son fuentes simples con intensidades de salida estables. Cuando operan de forma apropiada, sus lineas de emisién son m&s estrechas que el perfil de absorcién de la muestra, un factor clave en las medidas de absorcién atémica, para asegurar la absorcién éptima. Las lémparas de cétodo hueco modernas son también bastante duraderas. Muchas pueden utilizarse durante al menos 1000 horas. Existen varias l4mparas multielemento, que son convenientes y ahorran coste en ciertos anélisis. Las ldmparas de descarga sin electrodos o EDL, que se muestran en la Figura 16, es otro tipo de fuente de lineas utilizadas en absorcién atémica.28 LAMPARA DE DESCARGA SIN ELECTRODOS Lampare € Soporte 6 de ceramice € « d & € Figura 16. “ ‘| En este tipo de laémpara, una pequefia cantidad de é analito netal o una eal de este, se situa en un tubo de & anatzo seilado que contiene un gas inerte a baja presién. a El tubo de cuarzo est& rodeado por un hilo RF que : opera a 27 megahertz. £1 tubo y el hilo estén protegidos g por una armadura que tiene una ventana transparente. Cuando poraplica potencia, un campo de alta potencia excita al gas 6 Sette y vaporiza el metal o la sal. Los étomos de analito g jnertitan por colisién con los Stones de gas y emiten e1 4 espectro de lineas caracteristico del elemento. a Las lamparas de descarga sin electrodos proporcionan d una salida espectral intensa para elenentos volatiles como e Sey AS. Las lamparas de cétodo hueco son generalnente : jineficaces para estos elementos. G por otro lado, las EDL necesitan su propia fuente de & RF. Esto da lugar a un mayor tiempo de estabilizaci6n para 4 este tipo de lamparas que para las de cétodo hueco, pero son bastante mas estables una vez calientes. Para la mayoria de los elementos 1a lémpara de c4todo hueco es mas simple y méc econémica. a29 EL_MONOCROMADOR La funcién del monocromador es proporcionar un aislamiento espectral de la linea de resonancia, \ R, procedente de la fuente de radiacién. Esto es necesario porque un calibrado lineal solo se obtiene con radiacién monocromatica. El monocromador, por tanto, actua como un filtro ajustable que solo transmite una estrecha banda de radiacién centrada en la longitud de onda de resonancia. Los instrumentos modernos de absorcién atémica utilizan monocromadores de red de difraccién, que se describen a continuacién. La Figura 17 muestra una configuracién tipica de una xed de difraccion. La radiacién incidente en la rendija de entrada, es reflejada por un espejo esférico como un rayo colimado. Este haz se dirige a la red, donde se dispersa en distintos angulos, segiin la longitud de onda. Cuando la red se coloca en el Angulo apropiado, la linea de resonancia, R, es dirigida por el segundo espejo a través de la rendija de salida. otras longitudes de onda se dispersan con 4ngulos que impiden su paso a través de la rendija de salida del monocronador. HONOCROMADOR Apertura Espectral de salida oO» Fotomul tiplicador \ Red de Difraccion f Apertura Expectral de salida Figura 17.30 La salida espectral de un monocromador no es una longitud de onda simple, sino una banda espectral de longitudes de onda. Una salida ideal tiene una distribucion de intensidad de luz dependiente de la longitud de onda, como se muestra en la Figura 18. INFENSIDAD we an ANGHUBA. af SPECTRAL & @ ~ ; HONGITUD BE ONDA & q 5 a Figura 18. ée 4 La intensidad de la banda es maxima a la longitud de d onda nominal, n, y decae a ambos lados., La anchura de la ESPECTRAL, © banda a-nedia ‘altura es conocida como AN (spectral bandwidth) ,.un_pardmetro muy comGn para la i nm dela resolucion. Un monocromador dé "red de ‘pico on absorcién atémica, puede proporcionar Fs a i aan alBO 31 una anchura espectral de 0.1 nm o incluso menos. ba_xesolucién.del monocromador requerida en absorcién depende principalnente de-la fuente. Con fuentes de Ta proxinidad de lineas veei Sun factor clave. Cuando la linea de resonancia esta bién aislada, como en el Cu, solo es necesaria una resolucién moderada. Es decir, la anchura espectral del instrumento puede ser relativamente grande. No obstante, cuando hay lineas cercanas, como es el caso del Ni, es necesaria una resolucién més elevada o una anchura espectral més pequefia. Si el monocromador es incapaz de rechazar 1ineac cercanas, este afectaré a la sensibilidad analitica y a la linealidad. La mayoria de los monocromadores est4n equipados con rendijas ajustables que capacitan al eperador para obtener la resoluci6n més apropiada para el andlisis. Las anchuras espectrales més adecuadas suelen estar entre 0.1 y 1.0 nm. En general, el monocromador deberfa cubrir un rango ancho de longitudes de onda. Hay lineas de resonancia en el Uv-visible y en el IR cercano. Hay lineas incluso mas alla del As (200 mm), pero las dificultades experimentales no yeconiendan su uso para anflisis de rutina. Las lineas atomicas son extremadamente agudas y a menudo estan muy proximas; para hacer una buena seleccién, entences, ol monecromador deberia establecer de forma muy exacta la jongitud de onda. Por conveniencia, la lectura directa de longitudes de onda debe ser en decimas de nn. EL_DETECTOR La funcién del detector es convertir la radiacién en una sefial eléctrica medible. Un tubo fotomultiplicador proporciona amplificaci6n y deteccién, dando por tanto, una elevada sefal de salida. Los fotones entran en e] detector a través de una ventana y golpean un fotocAtode. Los electrones son expulsados del fotocétodo y acelerados mediante una diferencia de potencial nacia el primer dinodo, donde se “producen" mAs electrones. Estes se aceleran hacia el segundo dinodo, repitiendo el paso de multiplicacion de los electrones. El proceso se repite en cada dinodo hasta que finalmente el chorro de electrones alcanza el 4nodo, amplificando la sefial del orden de 100 millones de veces. La sefial eléctrica resultante se dirige entonces al amplificador principal.DOSRD 2H PA PLO BAG SRL 32 ANPLIFICADOR En los sistemas de abcorcién atémica pueden utilizarse dos clases de anplificacion. El primero, amplificacion D La radiacién de la fuente, y la de la muestra ¥ + alcanzan el detector como una sefial continua o fija. Como no hay distincién entre los dos tipos de componentes, son procesados por el amplificador como una sefial eléctrica Dc Simple. La emicién de la muestra y la llama, por tanto, Gontribuyen a la sefial medida y pueden dar lugar a errores en la medida de absorcién atomica. El problema es particularnente serio en elenentos que emiten fuertemente Y con llamas de elevada luminosidad. El rechazo de la enisién de la nuestra puede hacerse con una operacién AC. Antes de llegar a la llama la Yadiacion de la fuente se convierte primero en una sefial pulsada o alternante. Un simple Chopper puede utilizarse para realizar esto, © como alternativa, 1a propia fuente puede pulsarse eléctricamente. La sefial éptica que llega Bhora al detector consiste en dos componentes distintos: tna senal DC y Una sefial AC. Bl amplificador esté disefado para procesar solo el componente AC. Por tanto, la sefial De be 1a emision de la muestra o de la llama, no se registra cn el sistema de medida, y solo se recoge la verdadera sefial de absorcién atémica. Por esta razén, todos los Gisefios modernos emplean amplificacién AC. OS: OS. Después de la amplificacién, 1a sefial puede mostrarse mediante una gran variedad de dispositivos de lectura. Estos incluyen medidores simples, medidores digitales, impresoras, teletipos y registros. Cada tipo puede disefiarse para leer directamente en absorbancia © concentracién. Les instrumentos modernos, a menudo poseen una salide adicional para ordenador. EL_ATOMIZADOR La mayoria de las medidas de absorcioén atomica se realizan con atomizadores de llama del tipo mostrado en la Figura 19, conocides como "de flujo laminar" o “camara de premezcla". Tiene tres elementos principales: 1.- el nebulizador 21- la camara de premezcla, y 3.- el mechere o quemador33 SISTEMA DEL QUEMADOR DE PREMEZCLA Cabeza de Quemador Entrada del ‘oxidante Deflector auxi liar de Flujo Entrada del \ combustible Nebulizador Reguiable Entrada Oxidante Figura 19. Cada elemento se discutira posteriormente, pero primero vamos a repasar la secuencia de procesos que ocurren antes de la atomizaci6n en la llama. Para una muestra en solucién, la atomizacién comienza con la formacién de una fina niebla o spray, un proceso llamado NEBULIZACION. La muestra, al mezclarse con el oxidante y el combustible, adquiere un flujo laminar, antes de alcanzar la cabeza del quemador. La mezcla, entonces, entra en la llama donde 1a muestra sufre la evaporacién del disolvente, vaporizacién y finalmente atomizacion. La secuencie termina con la produccién de &tomos libres neutros, una de las necesidades de la absorcion atomica. Cada paso de esta secuencia es importante para el analisis, empezando con la nebulizacién.34 La forma de trabajo de un nebulizador tipico es la siguiente: el gae oxidante que fluye a través del sistena da lugar a una presion reducida en la zona del efecto Ventury. Como consecuencia, 1a solucién de la muestra es absorbida a través de un tubo capilar, normalmente con un flujo de 1a 10 mi/min. Cuando la solucién sale del Capilar, el flujo de gas 1a dispersa en una fina niebla- Sara obtener resultados precisos la_cantidad absorbida de muestra y el tamafio de gota, deben Ser reproducibles de ure queetra-a otra. Estos dos pardémetros pueden depender de las propiedades fisicas de la solucién, por tanto deben ser iguales en patrones y muestra. La segunda parte del sistema de atomizacién es 1a camara de prenezcla. Para reducir el tamafio de gota, se Golocan en el paso de la muestra obstaculos como bolas de Vidrio o deflectores de flujo (Figura 19). Las gotas grandes se rompen al chocar, aumentando 1 nimero de gotas finas. Las gotas grandes que quedan, condensan y se @liminan a través del drenaje. Esto produce una pérdida de gran cantidad de la muestra, lo cual es una de las mayores Yimitaciones de este tipo de atomizador. Las gotas mas pequefias entran en la corriente de los gases oxidante y Fombustible y continuen a través de la camara. La mezcla emerge con un flujo laminar, cuando finalmente llega a la llama. Vamos a considerar ahora con mas detalle, la tercera parte del atomizador, la cabeza del quemador. Las dimensiones de la rendija del quenador dependen de varios factores. El area total debe ser lo suficientemente pequefia come para mantener la velocidad del flujo de salida Racia el exterior, mayor que el de la velocidad de quemado (hacia el interior). De otra manera puede ocurrir un tetroceso de llama, es decir, explosiones_en_la _prenezcla. = En general es deseable un paso éptico grande, ya que mejora la sonsibilidad. No obstante, més alla de una cierte longitud, el haz de luz no puede atravesar la muestra atomica, dando lugar a una reduccién de sensibilidad. una vez establecidas las dimensiones del area y jongitud de le ranura del mechero, podemos calcular 12 anchura de la ranura. Yas dimensiones de la ranura no deberian cambiar durante Jas medidas analiticas, ya que esto afectaria a la relaci' de flujo y geometria de llama. Para eviter estos cambios, Sa cabeza del quemador es de un material duro, por ejemplo, a menudo se utilizan metales no corrosivos como Ti.| 35 4 Las dimensiones tipicas de la ranura para mezcles “| somunes de gases son: relativamente grandes, 100 mm de € largo y 1.5 mn de ancho, para mezclas de aire-propano. La llama de aire-acetileno se utiliza generalmente con una fe eanura més estrecha, 0.5 mm, Una rendija mis pequefia, 50 mim, €§ la necesaria para 1a5 llamas de 6xido nitroso- Gacetileno, ya que esta mezcla de gases se quema a mayor | temperatura y més raépidamente. El mismo mechero puede ©utilizarse también con una llama de aire-acetileno, pero la sensibilidad es més baja que con una longitud de 100 mm. AM Vamos a ver ahora dos aspectos importantes de la propia 4 llama, temperatura y composicién quimica. : La temperatura de la llama tiene una fuerte influencia q en el proceso de atomizacién, ya que llamas més calientes € son necesarias para vaporizar algunas sales y para descomponer ciertos compuestos. En la llama fria de @ aire-propano, con temperatura Cercana a 180°C, solo se @miden con eficacia los elementos fécilmente atomizables, @como los metales alcalinos y algunos metales pesados. Las q Hamas de aire-acetileno son m4s calientes, alrededor de 2 é 0°C. Mas de 30 elementos Se atomizan a esta temperatura, “haciendo de esta llama el caballo de batalla de la ‘jabsorcién atémica. Las llamas de éxido nitroso-acetileno alcanzan temperaturas cercanas a 3000°C. Estas altas C temperaturas son necesarias para atomizar elementos como en si y Ti, que forman Oxidos refractarios. q d La atomizacién también depende de 1a composicién ;quimica o estequiometria de la mezcla combustible-oxidante. d Son una llama rica en combustible, quimicamente reductora, (10s étomos libres del analito estén presentes hasta 4 om “por encima de la salida del quemador. Las concentraciones n&s altas se encuentran a 1 cm por encima del quemador. En {ana llama oxidante, los 4tomos estan confinados en una zona mas pequefia, casi enteramente por debajo de 1 cm. Es obvio, @ 2ntonces, que al menos para algunos elementos, 1a relacién | sombustible/oxidante en la mezcla, influye en la zona donde ese van a concentrar los &tomos en la llama. q Cuando se realizan medidas a diferentes alturas de la qliana, se encuentran variaciones de absorbancia. Este efecto se muestra en la Figura 20 donde se representa la {| apsorbancia en tuncion de ia altura.‘ Q OBR & LOD Q.O¢ Ae BB QE ODD ED ooh P-NZ Bw PONIDOy ATURA EF PEDIDA Figura 20. Muy cerca del mechero, punto A de la figura de la jzguierda, la concentracién atémica es baja y se observa la baja absorbancia correspondiente. En el punto B, donde 1a poblacien aténica es mayor, la absorbancia tiene un valor haximo. En el punto més alto de la llama, C, tanto la concentracién como la absorbancia disminuyen de nuevo. La telacion entre la absorbancia y la altura es distinta segin las condiciones de trabajo y también de un elemento a otro. por tanto, una misma altura no es la éptima para todos los andlisis. Por esta razon, en la mayoria de los sistemas de quenador, la altura puede ajustarse dependiendo del haz de luz. para acabar la discusién sobre atomizadores de llama, encontranos que ofrecen un cierto namero de ventajas. Los modernos quemadores con simples y faciles de usar. Son efectivos para unos 67 elementos distintos. Les atomizadores de llama son rapidos y precisos. PuedenAo AQR 4 & el g € 37 analizarse 10 muestras por minuto, con un coeficiente de variacién del 0.2%. Los efectos matriz son generalmente pequefios y bien entendidos, por tanto la compensacion es hormalmente posible. Las liamas tienen tres limitaciones, principales. Requiereh volumenes de muestra relativamente Grandes, normalmente de varios ml; tienen sensibilidad limitada, y no son aplicables a ciertos tipos de muestra. Rhora vamos a examinar algunos métodos de atomizacién alternatives, que superan estas limitaciones. 1 método DELVES es una variante muy itil de la técnica de llama. Primero, la solucién de la muestra se coloca con una micropipeta en un recipiente de Ni. Segundo, se calienta cerca de la llama para secar la muestra. El recipiente se inserta raépida y directamente en la llama. Esto convierte-la muestra en vapor atémico que fluye hacia un tubo cilindrico. El haz de luz se dirige a través de un tubo para medir la sefial de absorcion transitoria. Pueden analizarse por este método muestras tan pequefias como de 100 wl, una mejora significativa sobre la operacién con lama convencional. La precisién, no obstante, es mas pobre, del orden del 5%. Una aplicacién tipica del Delves es la determinacién de elementos volatiles, como el cd y el Pb, en sangre. Les métodos de generacién de vapor representan otra variacién de la atomizacién. Un ejemplo es la TECNICA DEL VAPOR FRIO DE Eg. Cuando se afiade cloruro estannoso a la solucién de la muestra, el Eg se reduce a estado metélico- Un flujo de aire o Ng se utiliza para barrer el vapor de Hg hacia una célula de cuarzo colocada en el haz de luz. No se requiere llama con este método ya que el analito, Hg, ya est en estado atémico. Se obtiene una sefial de absorcién transitoria al pasar el vapor a través de la célula. Generalmente se utiliza un registrador o un integrador, para registrar el valor de la absorbancia. Los métodes de GENERACION DE VAPOR también son aplicables a los siguientes elementos, que forman hidruros volatiles: As, 8e, Te, 8b, Bi, 8n, Ge. Un aparato como el descrito para el Bg se utiliza para la reaccién de formacién del vapor. Cuando se aflade borohidruro s6dico a la solucién de muestra acidificada, se produce Hz, y el analito se reduce a hidruro metélico. El hidruro volatil se barre hacia una llama fria, o a una célula de cuarzo caliente, Se producen 4tomos libres del analito, dando una sehal transitoria similar a la descrita para el Hg. Muchos de los elementos de la lista son problemiticos cuando se usan métodos de llama convencionales. Como se discutiré nés tarde, los métodes de generacién de vapor superan los problemas experimentales y mejoran las medidas de absorcion atémica de estos elementos.AA OAD g EO CMG ALG GL § 2 LD 38 comparados con las llamas convencionales, de generacién de yapor proporcionan varias ven $yinero se reducen mucho los efectos matriz, ya que el analite se destila de otros componente de la muestra. Otra ventaja es la nejora de la precisién, especialmente para elementos con lineas de resonancia en el UV lejano. Los fubos de absorci6n y las llamas frias utilizadas para el vapor de Hg y los hidruros, son relativamente transparentes en esta region, dando lugar a un bajo ruido. La tercere ventaja es una mayor sensibilidad. Puede obtenerse, para aigunes elementos, incluso una mejora de 1000 veces, con limites de deteccién por debajo del nivel de ng. una alta sensibilidad es también la gran ventaja de otro tipo de atonizador, 1a CAMARA DE GRAFITO. Una camara de Grafito tipica, < ‘como la que se muestra en la Figura 21, consiste en un cilindro hueco con un pequefio agujero para la inyeccién. ig jento gralite ts exterro majo de gis eter Figura 21. Para proteger el tubo de grafito de las altas temperaturas y disminuir la permeabilidad de la muestra, normalmente se utiliza grafito pirolizado. Durante la operacion el tubo esta rodeado por argon o nitrégeno. El horne generalmente se calienta en tres etapas, mediante corriente eléctrica. Como se ve en la Figura 22, la muestraprimero se seca, luego se mineraliza y por iltimo se atomiza. El haz de luz se dirige a través del tubo para medir la absorbancia. Se obtiene una sefal transitoria similar a la observada en los métodes de generacién de vapor. TEMPERATURA ATOMISACION AOe U2AO0N E =] MLD &, S TIEMPO eg PR Figura 22. Vamos _compararlas_ventajas de los atomizadores de llama y de Ja cémara de grafito. Los métodos dé llama son ms répidos y precisos y generalmente hay menos problemas de efectos matriz.SLOORARAL 40 Los métodos de horno son més sensibles y mas converientes para micromuestras. También proporcionan un medio mas conveniente y directo para el andlisis de materiales dificiles como aceites pesados, o incluso Sdlidos, como tejidos biolégicos y plasticos. $e han utilizado otros métcdos de atomizacion, pero jos considerades hasta ahora son los més populares. Vamos a resumirlos. La atomizacién de llama con quemadores de flujo laminar, es el método més ampliamente utilizado para el gnélisis de soluciones. Seleccionando una mezela apropiada Ge combustible y oxidante, puede optimizarse la temperatura @e la llama y la composicién quimica, para cada analito. El nétodo Delves es una variacién eficaz para muestras pequenas. Los métodos de generacién de vapor utilizan reacciones quimicas para destilar el analito de otros componentes. Gsto reduce los efectos matriz y mejora los limites de deteccion. El Hg y los elementos que fornan hidruros Golatiles son particularmente adecuados para 1a generacién de vapor. Las cémaras de grafito son utilizadas normalmente para analizar muestras pequefias y nateriales dificiles. Proporcionan sensibilidades muy elevadas. Tr Di 2UMI 10S Ahora que ya hemos hablado sobre cada uno de los componentes principales, vamos a considerar el sistema instrumental completo. pn absorcion atémica se utilizan dos tipos de sistemas de medida, haz sencillo y doble haz.20 ADD We SQM © BB LAD QQ2a 4 [CQL E 41 ESPECTROFOTOME TRO DE AESORCION RTORICA OE UN SOLO RATD Fuente of “ur Medéda de ‘ur especttsea Monecromidey Detector Registredor Nodulador Electrantca ofp - iN ® I | I | ' i per 2 ' Figura 23. Con haz sencillo, Figura 23, se utiliza el de luz para obtener tanto la intensidad incidente cono la transmitida, Io é@ It. como se mencionéd anteriornente, utiliza “radiacién."chopeada" o pulsada para proporcionar una sefal AC. Para medir, la seflal Io se ajusta primero a un nivel fijado sin presencia de muestra. Entonces, se introduce la muestra y se mide la sefal It xrelativa a Io, proporcionando la base para la determinacién de la absorbancia o la concentracién. Por conveniencia, algunos instrumentos estén disefiados para establecer automaticanente Io, al presionar el-botén de operacién, En un aparato de doble haz, que se muestra esquem&ticamente en la Figura 24, Io e It se obtienen por medio de un divisor del haz que dirige parte de la radiacién de la fuente a través de la muestra y parte fuera de ella. Un espejo chopper rotante combina entonces los dos haces, 1a linea de trazos de la figura, envidndolos alternativamente a lo largo del mismo paso hacia el monocromador. El detector "ve" dos pulsos de luz en una r4pida sucesién, uno de Io y otro de It. Bl amplificador reconoce estas como una sefial AC. Después de una conversién analégica, la sefial puede mostrarse como absorbancia o concentracién.42 ESPECIROFOTOPC"PO BE ABSORCION ATOMICK DE DORLE “AZ Kar de referenc'e eX ¥ eo) Famer peter teqistrador otu'ator LO Electronica tence mutts econ trader fen Figura 24. En general, los instrumentos de haz simple tienen un sistema éptico més sencillo y compacto. También, ya que se titilizan pocos espejos, al detector le llega mas luz, dando una relacién més elevada sefal-ruido. Los sistenas de doble haz, con su medida continua de Io, estan menos afectados por fuentes inestables y otros problemas de deriva. Las @esviaciones de la l4mpara son un problema particular Gurante el calentamiento inicial en los instrumentos de haz Simple. Por esta razén el doble haz proporciona medidas més rapidas y nés precisas.durante el calentaniento. No obstante, para mayor precisi6n y exactitud, es recomendable dejar_un_periodc Galentamiento en ambos casos. qanto en instrumentos de haz sencillo, como de doble haz, es deseable alg&n medio de realizar correccién de fondo. Esto es necesario flormaltiénte con las caémaras de grafitc y ocasionalmente con atomizadores de llama, para Gompensar la. ABSORCION NO ESPECIFICA, NSA. La naturaleza Gel probloma de 1a NSA se muestra en la Figura 25. Cuando especies moleculares residuales estan presentes en la muestra atémica, un efecto similar se produce por dispersion de las particulas, la absorcién molecular solapa cor la linea de radiacion de la fuente. Esta absorcién Sfecta la lectura observada y, si no se corrige dara lugar 2 errores en los resultados analiticos.GASCAP AAD QIAO APALOADBSOHAHSFASAASAASAANA OAD OLD CDBAAG EL aes 43 Absorption profile ee .----| LINEA DE EMISIOM Figura 25. Con la técnica que se ilustra en la Eigura 26, es posible una correccién automética de la NSA44 'SISTENA BE CORRECCION 3E FONDA ~ FUENTE CATIA mo q So Primecia d Figura 26. Se utilizan dos fuentes, 1a fuente de lineas normal (en este caso un c&tode hueco) y una fuente continua. pa {Sdiseién de ambas entra en un ciclo alternante a través de la zona del atomizador. Este "chopping" produce también una Sefial AC en el detector. Cuando se introduce la muestra, Se | mide la diferencia de absorbancia entre las dos fuentes. | Esta ‘tperencia representa la verdadera absorcion atomica, orregida. Aunque él sistema que se muestra aqui es el Gtilizado en un instrumento de haz simple, un método sinilar puede aplicarse a aparatos de doble haz- AUTOMATIZACION En muchas unidades de absorcién atémica van integrados ‘ nicroprocesadores electrénicos que se nanejan a través de Un teclado. Casi todos los aspectos de una medida pueden es mejorarse con el microprocesador. Estos incluyen seleccién de parametros de medida, calibracién, expansion de escala, Seduecion de ruido, nedidas de alturas o Greas de pico ¥ terreccion de fondo. Les microprocesadores también mejoran Sas funciones de tratamiento de datos; por ejemplo, computacién rutinaria para el método de adiciones estandar y evaluaciones estadisticas, Algunos instrumentos también yevizan rutinas de “auto-dlagnéstico" que advierten del nal funcionamiento del instrumento. Bf) QOD QO & vamos ahora a considerar tres aplicaciones comunes de los microprocesadores: medida de sefiales raépidas, ajuste de los datos de calibrados curvados y autoinyeccién.BO BOM aS 45 Los nicroprocesadores electrénicos son extremadamente rapidos, por ello son ideales para procesar sehales transitorias, como las de las medidas con cémara de grafito y generacién de vapor. Las lecturas individuales pueden hacerse tan rapido como cada 20 ms. Se comparan sehales sucesivas hasta encontrar la mayor para establecer la altura del pico, h, o se suman las sefales para dar un drea de pico integrada, 6An. Tanto la altura como el 4rea del pico pueden relacionarse con la concentracién de analito. El ajuste de curvas es la segunda aplicacién importante de los microprocesadores. Como se menciond anteriormente, varios factores dan lugar a desviaciones de ja ley de Beer. En los instrumentos nas simples pueden hacerse c&lculos analégicos para “linealizar" la recta de calibrado, pero las correcciones solo son aproximadas. Con los microprocesadores, la curva de calibrado puede tratarse natemaéticamente para dar el "mejor ajuste" de los datos experimentales. Los microprocesadores también realizan una automatizacién completa. Al instrumento basico se le afiade un inyector automatico de muestras que permite una alimentacién de muestra a la llama o cémara sin necesidad de atencién. El sistema total est& entonces controlado por el microprocesador. La automatizacion o no, depende de la éantidad de trabajo. Si se analizan muchas muestras del mismo tipo, la automatizacion ahorra tiempo al operador y generalmente mejora la precisién. No obstante, la automatizacién también aumenta el coste del equipo.yas 46 Vamos ahora a resumir lo que se ha dicho de la instrumentacién de absorcién atémica. Este programa ha considerado los aspectos mas importantes de la instrumentacion moderna de absorcién atémica. Primero, hablanos sobre los componentes individuales del espectrometro, empezando por la fuente de luz. Las laémparas de cétodo hueco y de descarga sin electrodos son las mas populares. Anbos tipos emiten lineas estrechas e intensas que proporcionan un alto grado de pureza espectral, necesaria para las medidas de absorcién atomica. Les monocromadores de difraccién se utilizan normalmente para aislar la linea de resonancia analitica. El tubo fotomultiplicadror es el detector conv: para absorcién atémica. Proporciona alta amplificac: bajo ruido. Los sistemas AC rechazan sefiales interferentes de emisién de la muestra y Ja llama. Se utilizan varios dispositivos de lectura, desde simples nedidores analégicos a computadoras sofisticadas. Comunmente se utilizan llamas para la atomizacién, pero para algunos andlisis son preferibles técnicas de generaci6én de vapor o camaras. Hemos considerado dos tipos de espectrématros de absorcién atémica, de haz simple y de doble haz. Los Sistemas de haz sencillo son generalnente nés simples y compactos. Los sistemas de doble haz se afectan menos por problemas de desviaciones. Se han desarrollado varios accesorios para simplificar © mejorar la medida analitica. Por ejemplo, sistemas para correcci6n automaética de fondo se utilizan normalmente para obtener resultados més fiables, especialmente con camaras. Los microprocesadores son también un aditivo importante en los modernos instrumentos de absorcién atomica. Realizan una variedad de funciones, incluyendo procesade de la sefal, cAlculos y control de sistemas automatizados.Set ee Date Oa OTR OA PRA RD CO ERS I TO GTIAG UD Aa & ECNICAS Y APLICACIONES DE ABSORCION ATOMICA Nuestros objetivos son ensefiar las técnicas précticas para la aplicacién de la absorcién atémica al andlisis de huestras reales; en este programa acentuamos la atomizacion de llama. La seccién de técnicas de medida empieza con un repaso de las necesidades instrumentales, la ley de Beer y los nétodos de calibrado. Hablaremos entonces de dos parémetros importantes, CONCENTRACION CARACTERISTICA y LIMITE DE DETECCION. Nuestra discusién sobre los errores en las medidas de absorcién atémica incluyen precision y exactitud, y varios tipos de interferencias. En la seccién de técnicas de laboratorio, consideraremos los métodos de calibracién y preparacién para varios tipos de muestras. Concluiremos con una breve discusién sobre algunas aplicaciones tipicas que muestran la versatilidad del método, CESIDI NS: La absorcioén atémica es una técnica altamente versatil para la determinacién cuantitativa de los elementos. zCuantos elementos pueden determinarse por absorcién atomica?. iH He Li Be Boo N O F Ne Na Mg AlSiB S Cl ar K ca Se Ti ¥ Gr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga Ge As Se Br Kr Rb Sr ¥ Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I xe Cs Ba La Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Ha Tl Pb Bi Po At Rd Fr Ra Ac Ce Px Nd Pm Sm Eu Gd Tb Dy Er Tm Yb Lu Th Pa U Np Pu Am Cm Bk Cf Fm Md No Lw48 Aquellos subrayados en este Tabla Periédica pueden determinarse DIRECTAMENTE. Resaltar que estos incluyen caci fedos los metales pero muy pocos no metales. No obstante, no todos estos metales pueden determinarse a RSneentraciones suficientemente bajas como para que el etodo de absorcion atémica sea Gtil en todas las BStuaciones analiticas. Aden4s, alguno de los no metales Gl, P, 8, F, Cl, I, Ce, Ta), pueden determinarse INDIRECTAMENTE. Estos se analizan convirtiéndolos guantitativamente en compuestos que contienen un netal Gnalito conveniente. Por ejemplo, el P se nide foansformandolo cuantitativanente en fosfonolibdato. Bl Ho Ee determina entonces por absorcién atémica de la forma normal. vamos a empezar ahora 1a discusién sobre la medida de absorcion atémica considerando primero las necesidades experimentales. Para la determinacién directa de un elemento por absorcién atémica, existen cuatro requerimientos. Estos son: 1.- Una fuente de luz de lineas agudas que emita yaaiacién "resonante” caracteristica del elemento analito. 2.- Un nonocromador que aisle 1a linea de resonancia @e cualquier otra radiacién que enita la fuente a otras longitudes de onda. 3.- Un detector apropiado, amplificador y lector pare medir la intensidad de sefial. 4.- Un atomizador, es decir, un medio de atowizacién del elemento analito. La funcién del atomizador es convertir la muestra en un vapor atémico. Generalmente, se utiliza una llama o un horno; se coloca en el paso de luz entre la fuente y el jnonocromador. El vapor at6mico absorbe parte de 1a vadiacion de resonancia. Por tanto, 1a sefial del detector @isminuye su valor. La fraccién de radiacién resonante absorbida por el vapor atémico se relaciona con 1a concentracién del elemento analito. LA LEY DE BEER ¥ EL CALTBRAD: En términos mateméticos, a la intensidad de la radiacién incidente en el vapor de la muestra, la llamamos Te. ta intensidad de radiacién transmitida por el vapor de muestra la llamamos It. El instrumento mide Io e It. Estas Gos cantidades pueden medirse por separado, pero en la mayoria de los instrumentes, su relacién se lee de la49 at manera mas Util, llamada absorbancia, A. La absorbancia viene dada por ¢1 logaritmo (en base 10) de la relacién de Io a It, Los instrumentos modernos convierten electronicamente esta relacion, dando la absorbancia directamente. ao La ley de Lambert-Beer dice que para un paso 6ptico constante, b, la absorbancia es proporcional a la concentracién de Atomos absorbentes en el vapor de la muestra, CV. Bs decir, proporcional a la concentracién de analito en la solucién de muestra CS. Normalmente no es necesario determinar el valor de 1a constante de proporcionalidad, a. En vez de esto, medimos la absorbancia Ge SOLUCIONES DE REFERENCIA que contienen concentraciones conocidas del analito. Comparamos entonces estos resultados, con la absorbancia obtenida bajo las mismas condiciones instrumentales para la muestra desconocida. Una representacién de la absorbancia frente a CS en las soluciones patrén, da lugar a una curva de calibrado. ® QAP AS PAO Oa Si se cumple la ley de Lambert-Beer, 1a absorbancia es proporcional a la concentracién en solucién del elemento analito, CS. Es decir, la absorbancia es proporcional a CS en un amplio rango y da lugar a una representacién lineal que se muestra en la Figura 27. & CHPUMIENT DE A wy 0 % pesvpoones AAG @NLENTBACION, Cs Figura 27.AQAD QD PCa 50 No obstante, en la praéctica a menudo aparecen desviaciones de la ley, y la representacién se curva en la zona de concentraciones mas altas. En tales casos se puede todavia definir la curva de calibrado representando las absorbancias de un nGmero de soluciones patr6n frente a sus concentraciones. Interpolando entonces la absorbancia de la muestra en esta curva, la linea de trazos, conoceremos 1a concentracién desconocida del analito proyectaéndola sobre el eje de concentraciones. Si se sabe que se cumple la ley de Lambert-Beer, solo es necesaria UNA solucién de referencia, para determiner la curva de calibrado. La mayoria de les instrunentos permiten leer directamente en unidades de concentraci6én. Esto se realiza mediante una transformacién electronica de la sefial de absorbancia. De esta forma se convierte la lectura digital de absorbancia en cualquier unidad de concentraci6n que se desee. Donde el calibrado no es lineal, el instrumento puede corregir la curvatura. La forma més simple de realizar esta correccién es mediante analogia electronica. Primero se miden las soluciones patrén de nés baja y mas alta concentracién, Ly H, y‘se ajusta 1a lectura para dar los valores de concentracién apropiades para estas dos muestras. Finalmente, se mide la solucién de la muestra desconocida, X. Su concentracién, determinada en 1a curva corregida, aparece directamente en el lector digital. Métodos de ajuste de curvas més sofisticados se utilizan en instrumentos que tienen microprocesadores electrénicos- Con estes deben medirse, como poco, 5 soluciones patron. Las lecturas de concentracién y sus correspondientes absorbancias son almacenadas en memoria. Estos valores se utilizan entonces para calcular la ecuaci6én de la curva de calibrado. Con algunos instrumentos se utiliza un polinomio para cbtener el nejor ajuste de los datos de todos los picos. Como antes, se mide la solucién problema, X, y su concentracién aparece directamente en el lector digital. Este método es bastante més exacto incluso cuando el calibrado muestra una gran curvatura. ONCENTRACION CARACTERISTICA Y LIMIT! para describir la forma de trabajo de un espectrometro de absorcién atémica en un anélisis, normalmente se citan dos valores, la CONCENTRACION CARACTERISTICA y el LIMITE DE DETECCION. La CONCENTRACION CARACTERISTICA, también llamada cominmente SENSIBILIDAD, se define como la concentracién de analito en solucién que, cuando se atomiza en elbL instrumento, da lugar a una absorbancia de 0.0044, es decir, una absorcién del 1%. Para un analito en particular, este valor depende de la linea de resonancia utilizada, paso éptico y eficiencia del.atomizador. La concentracién caracteristica es una cantidad Gtil ya que permite el cAlculo de las concentraciones de las soluciones patron. Estas son normalnente de 20 a 200 veces la concentracién caracteristica. La concentracién caracteristica es una medida de la sensibilidad del método de absorcién atémica para la determinacién de un metal en particular, utilizando una linea de resonancia en concreto. Cuanto mas alta es la pendiente de la curva de calibrado, A/ C, m&s sensible es la determinacién, y més baja es la concentraci6on caracteristica. La sensibilidad varia con la linea de resonancia, asi como con el metal. Una linea secundaria de la Ag, 338.1 nm, tiene la mitad de pendiente que la linea de Ag de 328.1 nm; como consecuencia la concentracién caracteristica es dos veces més grande. Es decir, una concentracién dos veces mis grande es necesaria para producir el mismo valor de absorbancia. La segunda cantidad utilizada frecuentemente para describir una operacién de un instrumento de absorcién atomica es el LIMITE DE DETECCION. como la concentracién caracteristica, este varia de elemento a elemento. £1 limite de deteccién se define de esta forma: es la concentracién m4s baja del elenento que puede detectarse con un nivel de probabilidad del 95%. Se determina estadisticamente.ABaa G Se Ln QLD CAO Be 52 TRAZADO DEL LIMITE OE OETECCION Figura 28. La determinaci6én del limite de deteccién no es simple. Necesita una serie de medidas a una concentraci6én cercana al blanco. Se utiliza una amplificacién alta, por lo que pueden observarse las variaciones debidas al ruldo. Esqueméticamente, esto da lugar a una serie de resultados Ay, Ap, Az, etc, que varian debido al ruido. Se promedian al menos 10 resultados para obtener A. Se calcula la desviaci6n estandar, s, de la forma usual segin la férmila de la Ecuacién [1)}. 2] Finalmente, el limite de deteccién se calcula segin la ecuacién 2, donde C es la concentracion del analito utilizada en el experimento. c {21et ROS LAG PLSABRDS @ & 2 @, es 53 Indicar de nuevo que se requiere cierto ndmero de medidas para determinar el limite de deteccién; también, que las medidas analiticas hechas en.o cerca de este limite son menos exactas debido a la incertidumbre del ruido, que a niveles de concentracién més elevados. Ya que por definicién el limite de deteccion esta relacionado con el ruido, seré mayor, lo que es peor, con niveles de ruido mas altos. Algunos factores que tienden a aumentar el ruido y afectan de modo adverso al limite de detecci6n son: primero, cualquier cosa que cause fluctuaciones en la velocidad de atomizacién, por ejemplo, absorcién o dispersién de los componentes de la matriz. Segundo, emisién fuerte de la llama a la longitud de onda de la linea de resonancia. Tercero, salida débil o errdtica de la lampara; sefiales més débiles requieren operar a ganancias més altas dando mayor ruido. Cuarto, un detector gue sea insensible a la longitud de onda del analito. Finalmente, absorcién de la radiacion de 1a fuente por componentes atmosféricos o gases de la llama, un problema para elementos como AS que se mide por debajo de 200 nn. Dos elementos podrian tener similares concentraciones caracteristicas, pero muy diferentes limites de deteccién. Por ejemplo, Al y As tienen concentraciones caracteristicas de aproximadamente 1 ug/ml, pero limites de deteccién de 0.05 y 0.4 ug/ml respectivamente. Esto se debe a los diferentes niveles de ruido del sistema cuando se mide uno u otro. En resumen, hemos hablado sobre dos términos utilizados para describir la operacién de un instrumento para un elemento analito dado. La concentracién caracteristica es la concentracién que produce una absorbancia de 0.0044, sin tener en cuenta el nivel de ruido. Depende principalmente de la eficiencia Ge atomizacion, y sugiere un rango de concentraciones de trabajo, Gtil. El limite de deteccién es la concentracién mas baja detectable por encima del nivel del ruido de fondo; da una idea de la cantidad mas pequefia que puede medirse con una confianza del 95%.54 PRECISION Y_EXACTITUD ‘Ahora pasemos a hablar de errores en/las medidas de absorci6n atémica. Empezaremos.con los -términos, EXACTITUD y PRECISION. os > = Me : La EXACTITUD mide cuanto se acerca un resultado al valor aceptade o verdadero. La exactitud es 1a primera meta de un andlisis y se mide por el error. E1 ERROR ABSOLUTO es 1a diferencia.entre los valores verdadero y nedido. El ERROR RELATIVO o en TANTO POR CIENTO Se el error absolute expresado coo porcentaje del valor Serdadero. Por ejemplo, si el contenido de metal verdadero de cierta muestra es 50 pg/ml, y experimentalmente medinos 48, el error absoluto es 5 g/ml; el error relativo es 5/50 en 100 veces, es decir, el 10%. La PRECISION mide la reproducibilidad de los resultados. Una precisién alta no garantiza alta exactitud. vamos a considerar ahora algunos factores que afectan a Ja precisién de una medida. - Una fuente de pobre precisién es la medida de absorbancias elevadas, donde el calibrado normalmente se Surva. A causa de la pendiente mas pequefia en el extrenc superior del calibrado,. incluso una pequefia variacion de Sbborbancia, A, da lugar a un error de concentracién Telativamente grande, ¢. En el extremo inferior, los valores también son imprecisos. En este caso, 1a Yacertidumbre on la lectura es comparable con la propia ieetura. Para la mayoria de los elementos las absorbancias @ptinas estén entre 0.1 y 1.0. Las lecturas en este rango Venarén dadas por concentraciones de analito entre 20 y 200 veces la concentracion caracteristica. otra fuente comin de pobre precisién son las condiciones instrumentales variables. La llama, especialmente, es un sistema dindmico de atomizacion; no es posible mantener 1a velocidad de produccién de dtomos Epsolutamente constante durante largos periodos de tiempo- Por tanto, no hay que calibrar el instrumento una sola vez a todo un conjunto de muestras, sino que hay que medir yee soluciones patron inmediatamente antes y después de cada grupo de soluciones problema. Un bloqueo parcial del fepulizader © quemador, conduce a lecturas de absorbancia g@rroneas y no reproducibles. Este hecho es probable que Gcurra cuando las soluciones aspiradas contienen altas Goncentraciones de s6lidos disueltos, o particulas en suspensién.Faas gtatha owes 8S Una técnica analitica pobre da lugar tanto a pobre precisién como a pobre exactitud. Por ejemplo, un manejo inadecuado de la muestra, pesada, pipeteo y diluciones, son fuentes cémunes de error. La limpieza es especialmente importante en absorcién atomica, ya que normalmente se miden bajas concentraciones de analito. La contaminacién puede proceder de distintas fuentes, desorcién de iones metélicos de las superficies de vidrio, depdsitos de particulas del aire. Estas fuentes de contaminacién dan lugar a errores positivos, es decir, altas lecturas sistematicas.. Por otra parte, muchas soluciones diluidas, a menos que estén convenientemente acidificadas, y almacenadas, disminuyen su concentracién con el tiempo. Esto es debido a adsorcién de iones metélicos sobre las paredes del recipiente. Esto da lugar a errores negativos, a bajas lecturas sistenéticas. INTERFERENCIAS Probablemente las fuentes mis importantes de errores en las medidas de absorci6én atomica sean las INTERFERENCIAS. En general, estas son cualquier cosa que altere las lecturas de absorbancia de las muestras patrén y problema. Podemos distinguir 5 tipos principales de interferencias. El primero es ESPECTRAL. Causado por una linea de absorcién de un componente de 1a matriz que solapa con la linea de resonancia del analito. Afortunadamente, este tipo de interferencia es muy raro es espectrometria de absorcién atomica. A causa de que las lineas atémicas son muy estrechas, milésimas de nm, la oportunidad de solapamiento es muy poco frecuente. La carencia de interferencias espectrales es, de hecho, una de las mayores ventajas de la absorcién atémica. El segundo tipo de interferencia es FISICA. . Diferencias de viscosidad y tension superficial entre la muestra y los patrones, produciraén diferencias en la velocidad de flujo de muestra y tamafio de gotas. Si las soluciones patr6n tienen baja viscosidad dan lugar a una velocidad de flujo elevada; adem4s tensiones superficiales mas bajas producen gotas mas pequefas. Ambos efectos tienden a aumentar la concentracién de Atomos en la llama, dando valores de absorbancia elevados. Por el contrario, si la solucién de muestra tiene viscosidad y tensién superficial mayor, se obtendrén valores bajos de absorbancia. Tales interferencias fisicas se minimizan, nornalmente, asenejando las soluciones de referencia a la de la muestra, al menos en sus componentes mayoritarios. Si esto falla, podemos utilizar el método de adiciones estandar que se discutira mas tarde.56 Tercero, interferencia QUIMICA. Esto ocurre cuando los distintos compuestos del elemento analito se vaporizan y atomizan de forma diferente en patrones y muestra. Un ejemplo importante de anélisis biolégico es la interferencia quimica sobre la absorbancia de Ca en presencia de P. El fosfato célcico, Ca3(PO4)z, es menos volatil,por tanto se atomiza de forma menos eficiente en una llama de aire-acetileno, que el cloruro cAlcico, CaCl2, utilizado en los patrones. Como resultado, los calibrados de ca con y sin P son muy diferentes. Si el instrumento est4 calibrado con patrones hechos con Caclz, los resultados analiticos seran muy bajos si la muestra también contiene P. Observando la linea de trazos de la Figura 29, vemos que se obtienen diferentes concentraciones en las dos curvas para la misma lectura de absorbancia. En este caso particular, la interferencia quimica puede minimizarse q tilizando una llama més caliente, como la de oxido “ nitroso-acetileno, que descompone el fosfato. De forma e@ alternativa podemos obtener el mismo efecto afiadiendo una J relativamente alta concentracién de un agente relajante como cloruro de estroncio, 8rcl, o de lantano, Lacl3. El sr © La "bloquean" al fosfato dejando libres los atomos de Ca. CaD2 e 22%. 7 LODPOADALE AL a GRD ®. 37 ABSCRRANUA @.(@02) o.+P GNEMTRACON ©. Figura 29. Cuarto, interferencia de IONIZACION. El ambiente dinamico dela llama contiene muchas especies de metal analito, M. Estos incluyen M°, dtomos neutros en estado fundamental, ¥*, Atomos excitados, MY, compuestos no disociados, MO, S5xidos net&licos, y N*, iones metélicos. No obstante, solo M° es capaz de producir absorcion atomica. Cualquier proceso competitivo, como la formacién de M+, ionizacién, reduciré la concentracién de M°, y la sefial de absorcién del analito. Un cierto nGmero de metales, particularnente los alcalinos y alcalinoterreos, se ionizan de forma apreciable a las temperaturas de la llama. Con la llama més caliente de Sxido nitroso-acetileno, se ionjzan el 84% de los atonos de 8r._E1 Atomo neutro analito, sr°, existe en equilibrio con 8r*, la forma iénica, més un electrén libre.an aa A Qoan ere 2 OLR CLD CLO @ 58 sro =< srt +e7 + Nat => na? La ionizacién del analito puede suprimirse afiadiendo un exceso de otro metal facilmente ionizable, como Na. Esto produce un gran nimero de electrones libres. El efecto tampén tiende entonces a revertir la ionizacién del Sr, manteniendo un alto nivel de atomos de sr para la absorcioén. La determinacién de Sr en agua de mar, presenta una aplicacion interesante de esta técnica. Como el agua de mar tiene un alto contenido de Na, e1 Sr existe casi por completo como 4tomos neutros en la llama. Si los patrones solo contuvieran Sr, obtendriamos una curva de distinta pendiente, y por tanto, las muestras de agua de mar darian resultados analiticos altos. La interferencia de ionizacién se soluciona afiadiendo un exceso de SUPRESOR a los patrones. Una quinta fuente de interferencias es la ABSORCION NO ESPECIFICA, NSA. Este término se utiliza para reéferirse a Yalsas sefiales procedéntes de ab: ién molecular o de dispersion dé particulas én el atomizador. Es mas grave con atomizadores de horno, pero puede causar_probléenas también eh una llama. Cuando la banda ancha dela absorcién molecular con la longitud de onda de. la linea de YéSonancia, Fe absorcién MOLECULAR de la radiacién de la fuente. Esto da lugar a una Sefial de absorcién que no es debi. absorcién ATOMICA. A menos que esta NSA sea” compensada, se produciré una lectura incorrecta. Por ejemplo, en la determinacién de trazas de ca en agua de mar, se utiliza la linea del Cd de 228.8 nm. EL componente principal de la matriz, NaC] no disociado, adsorbe tambien a esta longitud de onda. Esto produce un desplazamiento positive de la curva de calibrado del Cd. Es decir, todas las lecturas de absorbancia, Abs. TOTAL,,son lla suma de (AA + NSA). Para compensar la absorcion no especifica, de nuevo es una buena préctica asemejar las soluciones de referencia a la muestra, al menos teniendo en cuenta los componentes principales de la matriz. En este caso, aNadinos 11.000 ug/ml de Nacl a las soluciones patrén de C4. Esto da lugar a puntos en la parte superior del calibrado. Donde no se pueda realizar esto, el efecto puede corregirse con una fuente continua -de correccién de fondo. Para la correccion con este dispositivo, en la préctica el instrumento hace dos medidas.ae Ban DOLLOAG*L 59 ani 10K 1 Fond - Fe CoE soreign Tt q RE ante contin rina Contin Prin artis Figura 30. La primera, se hace con una fuente de luz de lineas estrechas, como la lémpara de cétodo hueco. Esta medida cérresponde a_la (AA + NSA), Para determinar solo la NSA se hace la segunda medida con una fuente continua de luz, como una LAMPARA DE DEUTERIO.. Esta fuente emite a través del paso espectral completo del monocromador. El continuo mide absorcién molecular, ya que la absorcién atémica tiene un efecto despreciable sobre la sefial. La diferencia entre los dos valores medidos, es decir (AA + NSA) - NSA, da el valor eorrecto de absorcién atémica. Con la instrumentacién noderna, las medidas de absorcion con las dos fuentes se hacen casi simulténeamente y en pantalla se muestra el resultado neto. vamos a resumir las 5 fuentes de error deb:das a interferencias.q Qaogee AOOd ILO OLDS DO ¢ 60 La primera fuente potencial de interferncias es ESPECTRAL, el solapamiento de una linea de un elemento matriz con la linea de resonancia del analito. Afortunadamente, esto es muy raro en absorcién atémica. Las interferencias FISICAS se deben a diferencias en la velocidad de flujo del nebulizador y en la eficiencia de formacién de gotas de muestra y patrones. Las interferencias QUIMICAS aparecen cuando un constituyente de la muestra forma un compuesto con el elemento analito que se vaporiza y atomiza de forna diferente que en los patrones. ba IONIZACION reduce la poblacién de atomos neutros disponibles para la absorcion atémica. La ABSORCION NO ESPECIFICA, NSA, interfiere cuando componentes noleculares de la matriz producen sefiales falsas. Las interferencias se minimizan generalnente asemejando las soluciones patrén y de muestra. Para la NSA, frecuentemente se utiliza también correccion de fondo. Antes de dejar el tema de los errores en las medidas de absorcién atémica, vamos a considerar brevemente los errores del instrumento. Una discusién detallada de los parémetros de optimizacién del instrumento esta mas 2114 de nuestro cometido actual, y se tratar4 posteriormente. No obstante, el operario debe ser advertido de que los resultados dependen en gran manera de los siguiente puntos: 1.- Eleccién de la llama. Son necesarias temperaturas mas elevadas para una atomizacién apropiada de algunas muestras. 2.+ Condiciones de la llama, es decir, si la llama proporciona un ambiente oxidante o reductor. 3. Posicion de observacién de la llama, determina si se mide en la zona de maxima poblacion atomica. 4.- Anchura de rendija, Gobierna tanto la energia del sistema como el aislamiento apropiado de la linea de xesonancia. 5.- Eleccion de linea y paso éptico, dos de los muchos factores que afectan a la sensibilidad y los limites de deteccin.2 So. > im Cae eae: 61 TECNICAS DE LABORATORIO Soluciones de referencia Empezanos con la preparacién de las soluciones de referencia. Comercialmente estén disponibles soluciones muy convenientes para tener almacenadas, que contienen 100 o 2000 pg de metal por ml. © pueden preparase mediante pesada exacta de metal o una sal apropiada. Estas se disuelven y acidifican para prevenir la hidrélisis o la adsorcién sobre las paredes del recipiente. Las soluciones se diluyen hasta un volumen conocido. Las soluciones de calibrado se obtienen de estas soluciones almacenadas, acidificando, afiadiendo materiales de control de interferencias y diluyendo. Todos los recipientes de vidrio deben ser de Pyrex o de otro cristal de borosilicato, y deben ser lavadas al Acido. Las botellas de polietileno son adecuadas para el almacen, pero soluciones de pocos g/ml no deben guardarse. mas de unos dias. A niveles de baja concentracién deben tomarse las mayores precauciones para evitar la contaminacién. Métodos de calibrado El método tradicional de realizacién de un an4lisis utiliza una curva de calibrado. Normalmente se utilizan 3 o 4 solucionesde referencia. Como se comentd anteriormente, concentraciones en el rango de 20 a 200 veces la concentracién caracteristica dan lugar a absorbancias entre 0.1 y 1.0, el rango de mejor precisién. Es una buena practica medir las soluciones de referencia tanto antes como después de la muestra. Para mayor exactitud, se realizan varias medidas y se representa el resultado medio. En esta curva, la concentracién de la muestra puede leerse por interpolacion. La representaci¢n del calibrado no es necesaria en instrumentos que tienen lectura directa en concentracién y correccién de curvatura. Aunque la absorcién atémica se utiliza generalmente para andlisis de trazas, a veces es necesario determinar un componente mayoritario con exactitud. Por ejemplo, la determinacién de Ca en cemento. Las soluciones de referencia se hacen, normalmente, de manera que "encierren" la concentracién esperada de la muestra. Como siempre, deben hacerse de forma que se parezcan lo mas posible a la muestra, con respecto a los componentes mayoritarios. En la determinacién de Ca en cemento, por ejemplo, deben afiadirse Si, Al, Fe y Mg.« e ks ‘ 62 cuando se va a determinar un componente mayoritario, demasiada sensibilidad puede ser un inconveniente. Para mantener las sefales “dentro de escala", tenemos varias opciones; Primero, podriamos diluir 1a nuestra lo suficiente como para que la concentracién entre dentro del rango requerido. La dilucién puede ser bastante engorrosa si estén involucradas muchas muestras. Segundo, puede obtenerse una absorbancia mas baja utilizando un paso éptico, b, m&s pequefio. Para ello se rota la cabeza del quemador. En ese caso, el haz atraviesa el ancho de la llama en vez del largo. Finalmente, a veces es posible elegir una linea de resonancia menos sensible. Por ejemplo, cuando se determina Cu en latén a un nivel del 70%, puede utilizarse la linea de 249.2 nm en vez de la linea normal de 324.8 nm. Esto permite medir soluciones 100 veces mas concentradas. Observar la gran diferencia entre la pendiente de los dos calibrados. Algunas veces es dificil asemejar las soluciones de referencia a las soluciones de muestra con respecto a los constituyentes mayoritarios. No obstante, a menudo podenos compensar las interferencias quimicas y fisicas con el método de ADICIONES ESTANDAR, Figura 31.| a ROAD ARE Qa LG @S @ HABA Cm @ ene ER GAS 63 X4Cg CONE NTO BERK? 4 phe) 4 c 4 2 o 2 4 CNENTEOOON DE BALI BRROIDA, 18 fy Figura 31. Primero se hace una medida de la muestra desconocida, X. La lectura de X se representa en la ordenada de absorbancia a concentracién cero. Se afiade a la muestra una concentracién conocida del metal analito, Cl, 2 ug/ml el este ejemplo, y se realiza una segunda medida. La lectura de (X + Cl) se representa como concentracion Cl. Opcionalnente, para verificar la linealidad, puede hacerse otra adicion, c2, a la muestra, y la lectura de (x + C2) representarla como concentracién C2, es decir, 4 ug/ml- Se dibuja la recta que mejor se ajuste a todos los puntos y se extrapola hacia el lado negativo del eje de concentracion. El valor obtenido en esta interseccién es la concentracién presente en la muestra original. En este ejemplo, X es aproximadamente 4 ug/ml. Una vez establecida la linealidad de la curva de calibrado, pueden medirse muestras desconocidas adicionales del mismo tipo, como ¥ y Z, sin realizar adiciones, Figura64 32. Los valores de absorbancia para ¥ y Z se representan en el eje de ordenadas (de absorbancia). Se dibujan entonces Jas lineas paralelas a la reprentacién original. Las concentraciones de Y y Z se encuentran de nuevo en la interseccién con la parte negativa del eje de concentracién. Es importante darse cuenta de que este método NO compensa la absorcién no especifica, NSA. ASSERBANA CONENIRACION CRODNEAOCN BE DESLONDE ANBUTO ARADIDA Figura 32. n_y mane: mu vanes a considerar ahora la preparacién y manejo de muestras para el andlisis por absorcion atémica. Las soluciones acuosas diluidas son, por supuesto, el caso ideal. No obstante, para concentraciones muy bajas de analito, es necesaria alguna forma de.preconcentraci6n. A veces el exceso de disolvente se evapora simplemente en una placa calefactora. Un método mas contin de concentracion esAP ABO & So2da ROB EBSARELLS, nee € q 65 la quelacién y extraccién en un disolvente inmiscible con el agua. Agentes comunes de quelacién son el APDC, pirrolidin ditiocarbamato aménico y la 8-hidroxiquinoleina. La MIBK, metil isobutil cetona, es el disolvente orgénico nas utilizado para la extraccién. otros métodos de preconcentracién son la cromatografia de intercambio iénico y la coprecipitacién. En algunos casos, se puede evitar la etapa de concentraci6n utilizando un atomizador més sensible, como un horno. Los atomizadores de horno son més sensibles tanto para andlisis de trazas, como microanélisis. Este es el resultado de una eficiencia de atomizacién m4s elevada que en llama. La camara de grafito consiste en un cilindro hueco de grafito a través del cual pasa el haz optico. La camara esta rodeada y llena de un gas inerte para eliminar el oxigeno. Muestras de 1 a 100 41 se inyectan con una nicropipeta a través de un pequefio agujero en la parte superior del horno. La cémara se calienta mediante corriente eléctrica. Normalmente se utilizan tres etapas de temperatura de distinta duracién. Un programa tipico de temperatura tiene tres etapas: secado, mineralizacién y atomizacién. Aunque no son tan répidas y precisas como los atomizadores de llama, las cAmaras mejoran del orden de 1000 veces la sensibilidad. Rara vez las muestras estan en disolucioén acuosa, de forma natural; a menudo requieren alguna forma de pretrataniento para el analisis en llama. Esto es especialnente cierto en las muestras biolégicas. Las soluciones que contienen proteinas, como el suero sanguineo, son viscosas y pueden bloquear el nebulizador o el quemador. No obstante, pueden ser desproteinizadas afiadiendo dcido tricloroacético. Los tejidos vegetales y animales también requieren un tratamiento preliminar para el trabajo en llama. El tratamiento de la muestra incluye calcinacién en seco en un horno de mufla, o una calcinacién hameda con una mezcla de Acidos. En cualquier caso, debe tenerse mucho cuidado para evitar la contaminacién y la pérdida de elementos volatiles al calentar. El pretratamiento de muestras inorgdnicas varia con la naturaleza de la muestra. Los metales y aleaciones normalmente se disuelven en acidos adecuados, eliminandc el exceso de 4cido antes de la medida. Las muestras geolégicas, como rocas y minerales pueden tratarse con Acido fluorhidrico, HF, para disolver completamente los silicatos. No obstante, para trabajo a gran escala, el grupo de metales pesados puede extraerse por digestionR2ADCAE RAND SOL AAO LOC Aaa eslaeniBzates 66 Acida. Se mide entonces el resultado de esta digestién. Como alternativa a la disolucién con HF, los minerales y rocas pueden fundirse con metaborato de Li. El resultado de la fusién se disuelve entonces con Acide diluido. Aplicaciones tipicas Ahora, vamos a ver algunas de las muchas aplicaciones de la absorcién atémica. La absorcion atémica es una técnica muy versatil. se aplica a campos tan diversos como la quimica clinica y prospecciones geolégicas. En quimica clinica se utiliza de forma rutinaria para la determinacién de Ca y Mg en suero sanguineo y otros fluidos biolégicos. Una alicuota de 200 #1 de suero se diluye a 10 ml con una solucion al 0.1% de ; El La actua como agente relajante evitando 1a interferencia quimica del fosfato sobre la absorcién del Ca. Las soluciones se miden en llama de aire-acetileno. Las soluciones patrén de Ca y Mg deben contener también La al 0.1%. Una aplicacion muy corriente de la absorcion atémica es la determinacién de 1a calidad del agua, desde agua potable hasta agua de mar. Vamos a describir un método tipico para determinacién a nivel de trazas de un gran ndmero de metales importantes, como Cd, Cu, Fe, Cr y Pb en agua de rio. Una muestra de 100 nl se extrae con pirrolodin ditiocarbamato aménico, en 10 ml de metil isobutil cetona. El extracto orgénico que contiene el quelato metalico se mide en una llama de aire-acetileno. Para el calibrado se utilizan soluciones patron del analito extraido de la misma forma. Por Ultimo, en lo que a aplicaciones se refiere, de nuevo, el campo de la geologia donde la absorcién atémica es ampliamente utilizada. En la determinaci6n de Al, Si y Ti en el mineral bauxita, la muestra se funde primero con una mezcla de NazC03-borato sédico. El fundido se disuelve entonces en HCl. Finalmente, la solucién’se mide en una llama de 6xido nitroso-acetileno. Esta llama ms caliente se utiliza normalnente para elementos refractarios como Al, Bi y Ti, para ayudar a la descomposicién de éxidos estables. Las soluciones patrén también deben contener NazC03, borato s0dico y HCl en concentraciones similares a aquellas de la muestra.Oe d G é & q ey RESUMEN Vamos a empezar el repaso resumiendo la técnica de nedida. La absorcién atémica permite la determinacién de casi todos los metales y algunos no metales. En la praéctica, necesitamos una fuente de lineas muy estrechas, un monocromader para aislar la linea de resonacia del analito, un detector y un dispositivo de lectura para medir la sefiai y, finalmente, un medio de atomizacion. La absorbancia debida al analito atomizade es proporcional a la concentracién del analito en solucion. Como la absorcién atomica no es una técnica absoluta, es necesario calibrar con soluciones de referencia de concentracién conocida del analito. La concentracién desconocida se determina entonces mediante la curva de calibrado o por lectura directa de concentraciones en el instrumento. La forma de trabajo de un instrunento de absorcién atémica se describe en términos de la CONCENTRACION CARACTERISTICA, que es la concentracién que produce una absorbancia de 0.0044, y el LIMITE DE DETECCION, que es 1a concentracién m4s baja detectable por encima del nivel del ruido de fondo. Normalnente, una pobre precisién se debe a una pobre técnica analitica y condiciones variables del instrumento. Una pobre exactitud se debe principalmente a las interferencias. Los cinco principales tipos de interferencias son: espectrales, fisicas, quimicas, ionizacién y absorcién no especifica. Se han sugerido varios medios para minimizar estos efectos. Por Gltimo, vamos a repasar las técnicas de laboratrio recomendadas y algunas aplicaciones tipicas de absorcién atémica. Las soluciones de referencia utilizadas en los calibrados deben ser lo més parecidas posibles a las muestras. Cuando esto no es posible, puede utilizarse el nétodo de adiciones estandar. Los constituyentes mayoritarios pueden determinarse con gran exactitud “encerrando" la concentracién de la muestra. Si es necesario puede reducirse le sensibilidad disminuyendo el paso éptico o escogiendo una linea menos sensible. La preparacién de la muestra depende de su naturaleza. Niveles de analito de ultratrazas necesitan preconcentracién o un atonizador mis sensible como un horno. Las muestras biologicas normalmente requieren pretratamiento y las inorganicas frecuentemente se extraen o se funden.2a¢ Se GbSPBQS Ee También hemos visto la gran versatilidad de la absorcién atémica al hablar de sus aplicaciones en campos tan diversos como la quimica clinica, determinacién de la calidad del agua y geologia. 68aga ‘ $ é & 4 é ee £QCLAEC rman SR IS? 69 METODOS DE GENERACION DE VAPOR ¥ ANALISIS POR INYECCION EN FLUJO COMBINADA CON ABSORCION ATOMICA Los objetivos de este programa son examinar la técnica, de atomizacién por generacién de vapor y la automatizacién de esta técnica y del trabajo en llama mediante la técnica de analisis por inyeccién en flujo. Primero, examinaremos la determinacién de mercurio por la técnica del vapor frio, y segudamente la determinacién de varios metales dificiles y analiticamente importantes, basandonos en la formacion de sus hidruros volatiles. Segundo, veremos las posibilidades que nos ofrece la técnica de anélisis por inyeccién en flujo conbinada con la absorcién atémica. ETODOS DE GEN! INDE Vi Vamos ahora a llevar nuestra atencién hacia los métodos de generacién de vapor. El primero de estos métodos es la técnica del vapor frio para la determinacién de mercurio. Técnica x En los dltimos anos se ha prestado gran atencién a la determinacién de cantidades de trazas de mercurio. En particular, el descubrimiento de que el pescado puede Contener cantidades téxicas de Hg ha aumentado el interés. Como pequefias trazas pueden ser muy perjudiciales, es necesario un método sensible tanto para diagnésticos como Para analisis de alimentos. Adem&s, es necesario un método muy sensible para la determinacion de Hg en muestras ambientales. En la técnica de vapor frio de Hg, la adicién de un agente reductor lleva al mercurio a estado elemental. Cuando se utiliza cloruro estannoso como agente reductor, ecurre la reaccién: 2+ Hg?+ + sn?+ ©. Hg? 4 + sn‘t El paso de una corriente de aire o nitrégeno a través de la solucién extrae el mercurio como vapor atémico. La medida del contenido de mercurio en la muestra se realiza entonces al pasar el vapor atémico a través de una célula de cuarzo. La célula esté situada en el paso de luz de unOLA PHBQAS® 2 OLB Qe. Q em 70 espectrofotémetro de absorcién atémica. como el mercurio est& como dtomos libres en estado fundamental, no es necesario calentar, por ello el nombre de TECNICA DE VAPOR FRIO. Bajo estas condiciones se produce la absorci6n de radiacién a la longitud de onda de resonancia del Bg. La absorcién es proporcional al contenido de Hg en la muestra. Si el flujo del Hg va directamente a través del sistema, se obServara una sefial transitoria. Este pico puede medirse con un registro o integrarse electronicamente. £1 flujo de gas puede también estar circulando continuamente, en cuyo caso se obtiene una sefial estacionaria. Con esta técnica de generacién de vapor, el contenido completo de Hg de una gran muestra acaba concentrado en un volumen de gas relativamente pequefio. Como resultado, este nétodo es muy sensible. Como no hay llama que contribuya al ruido, normalmente se obtiene una sefial my estable y pueden medirse con precisién absorciones muy pequefias. Con una expansién de escala adecuada, puede detectarse hasta un nanogramo de Hg. Sobre una concentracién base, con 50 ml de muestra, esto produce un limite de deteccion de unas 0.02 ppb. ién deh. Os El mercuric es tnico entre los metales a causa de su volatilidad. Es decir, concentraciones medibles de vapor de mercurio pueden existir a presién y temperatura ambiente. No obstante, por conversién a hidruros volatiles, hay un grupo de netales que también puede atomizarse facilmente. Estos metales son arsénico, selenio, teluro, antimonio, bismuto, estafio y germanio. Vamos a considerar ahora su determinacién utilizando el método de generacién de hidruros. Si se afiade una soluci6én de borohidruro sédico a una solucién 4cida de la muestra, se genera hidrégeno libre, con se muestra en la reaccién siguiente: NaBHy + ACIDO ----> 2 H* + Ha Este gas hidrégeno puede reducir los metales mencionados, y formar el hidruro volétil correspondiente mediante la reaccién: Mot 4 3 Ht ----> MEG (9) u2* 402 Ht ----> MH2 (g) 1COOBANABOLE PeQH 7 Los hidruros son arrastrados nuevamente por una corriente de gas. Los hidruros generados pueden descomponerse a atomos metdlicos por uno de los dos métodos siguientes. Primero, pueden pasar a una llama cuyo calor es suficiente para generar los 4tomos met4licos. LLamas relativamente frias como llamas de difusion de hidrégeno (una llama de difusion es aquella en la que el oxidante no es premezclado con el combustible. La combustién se produce gracias a la entrada de oxigeno del aire circundante) son lo suficientemente calientes para este propésito. En el segundo método, 1a corriente de aire pasa por una célula de cuarzo que estaé lo suficientemente caliente como para liberar e] vapor atémico. En cualquier caso, la llama o la célula se coloca en el paso de luz de un espectroémetro de absorcién atémica. Cuando el vapor de analito pasa por la llama o la célula se observa una sefial de AA transitoria. Toda la cantidad de metal puede extraerse de un volumen grande de muestra en poco tiempo. Como resultado, se produce una gran concentracién de dtomos en un periodo muy corto, El método del hidruro es por tanto muy sensible si se compara con la AA de llama convencional. Por ejemplo, une concentracién de As de 1 ppm da lugar a una sefial de 0.0044 unidades de absorbancia con un atomizador de llama convencional, por tanto una sensibilidad de 1 ppm. Por otra parte, con el método del hidruro, 10 ml de una solucién de 10 ppb da lugar a una absorbancia de 0.4; esta es una absorbancia 100 veces m&s grande con una muestra 100 veces menos concentrada. Un pico de 0.0044 unidades de absorbancia vendr& dado, de hecho, por 1 ng de As. Esto corresponde a 10 ml de una solucién de 0.1 ppb. Un beneficio adicional se observa con las técnicas de generacién de hidruros. Muchos de los netales que forman hidruros tienen lineas de resonancia a longitudes de onda muy cortas. El As y el Se, por ejemplo, se miden por debajo de 200 nm. A estas longitudes de onda las llamas convencionales absorben mucha de la radiaci6én de la fuente, como consecuencia las fluctuaciones de la llama producen sefiales muy ruidosas, afectando de forma adversa a los limites de deteccién. Las llamas de difusién utilizadas para descomponer los hidruros son, no obstante, relativamente transparentes incluso a pequefias longitudes de onda. Lo mismo ocurre con la célula de cuarzo. Como resultado, la sefial producida tendraé mucho menos ruido, y podran detectarse absorciones mucho menores. Por esta raz6n, los limites de detecci6én de estos metales cuando se analizan por el método de generacién de hidruros, son excelentes, Por ejemplo, para As, 8b, Bi y Se, los limites de deteccion son de 300.a 1000 veces mejores al utilizar la generacién de hidruros.BLS .AADABS. ageaac ROL 72 Los métodos de generacién de vapor descritos para el nercurio y los metales que forman hidruros volatiles tienen adem4s otra ventaja. A menudo se reducen las interferncias, ya que el metal se destila de la solucién de muestra. Esto permite trabajar con muestras conplejas como soluciones viscosas, © con alto contenido en sales 0 sélidos suspendidos. En algunos casos estos pueden impedir que la solucién se nebulice en un sistema nebulizador-quemador convencional, mientras que con los métodos de generacion de vapor descritos no hay problema.73 G 6 «| ANALISIS POR INYECCION EN FLUJO COMBINADA CON S ABSORCION ATOMICA Introduccién El analisis por inyeccién en flujo continuo es una técnica de andlisis descrita inicialmente por Ruzicka y Hansen, en 1975, 1a cual consiste en la realizaci6n de procesos sobre muestras que se incluyen en una corriente de un liquido portador, y en la que ademas de introducir de manera discreta la muestra en la corriente podemos realizar sobre ella diferentes procesos fisicos (mezclados) o quimicos (reacciones quimicas), de tal manera que todos aquellos tratamientos que requieren las muestras para ser analizadas por AAS (llama o MHS), se pueden realizar de manera automética en una corriente de un liquido portador, figura 33. 2DIBQAGAH * Flow Injection Analysis (FLA) was described initially by Ruzicka and Hansen in 1975. Sample Reagent Carrier ———_» t & & Figura 33. ¢ ce La combinacién de la técnica de an&lisis por inyeccién en o flujo continuo con otras técnicas analiticas (AAS, ICP, @ ICP-MS, etc.), permite automatizar anAlisis, reducir costos @ y tiempos de anélisis, mejorar la calidad del andlisis e G incluso desarrollar nuevos métodos de anélisis. q a < En el caso particular de la combinacién de la técnica FIA con AAS (otra de las innovaciones de PERKIN ELMER), las posibilidades de manipulacién de muestras permiten: eAeaseaseng7A ae Total automatizacién de analisis. Bajo consumo de muestra. Alta capacidad de muestreo. Economia debida al bajo consumo de reactivos. Manipulacién de muestras en continuo. Nuevas 4reas de aplicacién. Determinacién de masas absolutas en vez de concentracién. terene PORDAS Intrumentacién q Los elementos para construir un sistema de analisis por inyeccién en flujo, figura 34, sont - Bomba o bombas peristAlticas. Responsables de la ejecucién del proceso en el tiempo (aporte del J liguido portader, incorporacién de la muestra y G de los reactivos). g é - Inyector. Encargado de la dosificacién y & entrada en la corriente del portador, de la nuestra. - Tubos y conexiones. Responsables de la versatilidad de esta técnica, al permitir, al igual que un mecano, configurar el sistema para diferentes aplicaciones. - Accesorios. Junto con los tubos, son los que permiten completar la funcionalidad de la técnica FIA (camara de reaccién, separador liquido/gas, columnas intercambiadoras, conexiones para gases con control de flujo, etc). BALL 3 a. ~ Software. Permite un control centralizado de las metédicas, mediante el control de los diferentes pardmetros que influyen en la técnica FIA. (tiempo, velocidad bombas, posici6n de la valvula, control otros dispositivos) aega8 - Automuestreador. Responsable de la total d automatizacién del anélisis el suministrar les patrones para calibrado y las muestras. eeeFIAS — 200 Pumps, Valve, and Chemifold OGRMAL 5 Figura 34. 4metros de control de la técnica FIA a El anélisis por inyeccién en flujo es una técnica que podemos comparar en su manejo y configuracién a un mecano, Gisponiendo los elementos que hemos mencionado anteriormente en la disposicién apropiada para la finalidad que perseguimos con nuestro andlisis. Los parametros que disponemos para el control de esta técnica son: - Configuracién con los elementos constitutivos del instrumento. ~ Control de flujos de liquide portador y reactivos. Este proceso se realiza de dos maneras: primera con la seleccién de los tubos apropiados para cada uno de los ligquides que intervienen en el an&lisis; segunda con OC HKAAGOCLPHAROARHLS76 el control de la velocidad de las bonbas peristalticas y de la presién que se ejerce sobre los tubos en la propia bomba peristaltica. = Control de 1a carga del bucle del inyector, mediante Ja seleccién del tubo, velocidad de la bomba y tiempo de funcionamiento de 1a bomba. - Programacién en el tiempo de las etapas requeridas para el andlisis, como son: tiempo de carga del bucle del inyector, momento en el que se realiza la inyeccién, velocidad, tiempos de funcionamiento de las bombas y accionamiento de otros sistemas en el instante preciso (Ej. puesta en marcha del accesorio de analgamacién).. - Coordinacién del proceso realizado por la técnica FIA, con el instrumento de deteccién (en general un software que controle al instrumento de detecci6n y al FIA.) LICACIONES DE LA TECNICA FIA“! La técnica FIA asociada con AAS, da lugar a unas posibilidades de trabajo que podemos desdoblar en dos importantes grupos a) Aplicaciones FIA-Generador de vapor b) Aplicaciones FIA-AAS llama. a) Aplicaciones FIA~: acién de vapor sin lugar a dudas, donde se obtienen unoas mayores prestaciones de la técnica FIA con absorci6n atémica, es en el an&lisis de aquellos elementos que se determinan por generacién de hidruros (As, Se, Te, Sb, Bi, Sn, Ge) o por reduccién al netal (Hg), métodos que requieren de un proceso previo de 1a muestra antes de la lectura de absorcién, y que en la actualidad se realizan mediante procesos discretos y con minima automatizacién. El proceso quimico es el mismo que el explicado para los métodos clasicos de generacién de hidruros (o la técnica de vapor frio para Hg), com la diferencia que la tecnica FIA nos permite automatizar #1 proceso. De este modo sustituimes el clésico generador de hidruros por el FIAS-200, manteniendo la célula de medida en el espectrofotémetro (calentada por llama o por resistencia7 eléctrica). Como podemos ver el la figura 35, la configuracién del FIAS-200, se adapta a la propia necesidad del anélisis, incorporando en la linea de transporte de la muestra, entre la valvula de inyeccién y la célula de medida, una cdmara de mezcla y reacci6n (chemifold), que permite el mezclado homogéneo de 1a muestra incluida’en una corriente de una disolucién &cida (¢1H), con el agente reductor (generalmente NaBH,), para pasar casi inmediatamente a la camara de mezcla con el gas inerte de arrastre, que sera el que transporte el hidruro correspondiente o el metal vapor aun sistema de separacién gas/liquido, gracias al cual dejamos pasar Gnicamente el vapor arrastrado por el gas inerte a la célula de lectura, en la que se efectua la lectura, que como en el caso de la generacién de hidruros clasica, se comporta como una sefial transitoria. Principle of FIA—Mercury Hydride Technique ‘oorca, Figura 35.78 La incorporacién de la vélvula de inyeccion, permite el control preciso de los voltimenes de muestra que evaluamos, y automuestreador permite la total automatizacion del proceso. La automatizacién llega al extremo de poder realizar determinaciones multielementales de aquellos elementos formadores de hidruros o de metal vapor por reducci6n, ya que las condiciones analiticas para todos ellos son: = Los nismos tubos (mismos didmetros internos) para todos los elementos que generan hidruros. - La misma disolucién transportadora para todos los elementos (3% C1H), excepto para el Sn que requiere de Acido bérico + ClH. - El mismo agente reductor para todos los elementos (0.2% NaBH, en 0.05% NaH). - El mismo volumen de muestra para todos los elementos. Como ejemplo practico se presenta, figura 36, la determinacién de As en aguas, combinando la técnica FIA con AAS-generacién de vapor, pudiendo ver le reproducibilidad del andlisis realizado.AAD Bs 4 AA CAPRA GACLOAHDDAD DAG AANAAQALD LDOLD 79 FIA — Hydride AAS Determination of Arsenic in Water Calibration curve and typical atomization signal Sample: Drinking water containing £45 pp/L As, RSD 0.7 % ten + ae a a twe (ee tos. Figura 36. Otra posibilidad que permite la técnica FIA asociada a AAS- generacién de vapor, es la automatizacién de los procesos de amalgamacién para la determinaci6n de Kg, intercalando entre el sistema FIAS-200 (generador del vapor de mercurio) y la célule de medida el correspondiente accesorio de analgamacion, de tal modo que podemos automatizar el proceso, con una gran fiabilidad de los resultados, y obteniendo unos limites de deteccién del orden de partes” por trillén. b) Aplicac: Li AAS. La versatilidad de la técnica FIA, permite automatizar y crear nuevos métodos de trabajo en absorcién atomica con liama, ya que la unica limitacién en esta combinacién sc encuentra en igualar los flujos de salida del sistema FIA y de nebulizacién. Este proceso se efectua en escasos 5 minutos, dando opcién ha realizar, entre otros, los siguientes procesos:MOABAADIATAY QQ QASMASAE De LOL ALA ODL CMM 2M. agcaneaganga LAOA 20 ~ Determinacién de micromestras por llama. - AnAlisis de soluciones concentradas + Adicién de soluciones reguladoras y modificadores. - Dilucién por mezcla o dispersion. - Nuevos métodos de calibracion. - Separaci6én de la matriz y concentracién del analito en corriente. = Deterninacién indirecta por absorcién atomica. Como ejemplo se presenta la configuracién necesaria para realizar el analisis de muestras con alto contenido de sales disueltas, que presentan graves problemas de obtruccién del nebulizador y mechero, y que son resueltos perfectanente por FIA, figuras 37 y 38. Principle of FIA—Flame AAS Technique ——— Figura 37.81 FIA—Flame AAS 1s, Time {h) Img? Cu in o soturated lithium borate soltion oO 2 SERESS FERRED Ssass° 8ases aSuoqsgy s1eq0sqy Figura 38. TOO SE STU SUS STE UVE FTG FS OTE eG @ TOSCO STS:q é & q e q é€ d ° 5 i d § é d d 82 RESUMEN En este programa hends discutido el uso de otro sistema de atomizaci6n en absorci6n atémica, siendo un método alternative al atomizador de llama convencional y ofreciendo varias ventajas para un grupo limitado de metales de particular importancia. Los métodos de generacién de vapor descritos ofrecen una sensibilidad excepcional y gran flexibilidad, pudiendose automatizar con la utilizacién de la técnica de analisis por inyecci6n en flujo.SABOSAND ADA 83 OPTIMIZACION DE LOS PARAMETROS INSTRUMENTALES EN ABSORCION ATOMICA Los objetivos de este programa son examinar los parémetros de absorcién atémica que deben optimizarse para una realizacién instrumental éptima. Primero definirenos los criterios de una realizacién optima. Segundo, repasarenos las tres funciones principales en una operacién de un instrumento de absorcién atomica. Tercero, examinaremos el efecto de varios parametros instrumentales en un experimento. Por Gltimo, presentaremos un procedimiento sistenatico de optimizacién. CRITERIOS DE OPTINIZACLON La absorcién atémica se utiliza principalmente como técnica cuantitativa. La concentracién del elemento se determina utilizando la relacién de Lambert-Beer, A = a.b.c. Es decir, para un paso optico, b, constante, la absorbancia, A, es proporcional a la concentracién de atomos que absorben en el vapor de la muestra, CV. Es decir, es proporcional a la concentracién de analito en soluci6n, CS. En la préctica, se utilizan patrones de referencia de concentracion conocida, para establecer una curva de calibrado de la absorbancia frente a CS. La concentracién de una solucién desconocida podria entences determinarse midiendo su absorbancia e interpolando en la curva de calibrado. E1 éxito de este proceso depende del cuidado con que el analista optimice las condiciones instrumentales. Vamos a examinar la optimizacion con detalle. Definimos la optimizacién como el proceso de determinacién de las condiciones instrumentales nés apropiadas para nuestro andlisis. Lo que es apropiado puede variar ampliamente segin las metas del andlisis. gNececitamos la mejor exactitud posible, o solo una indicaci6n de la presencia o ausencia de un elemento?. gNecesitamos saber si un elementc esta por encima o por debajo de un cierto nivel, o entre dos niveles?. gNecesitamos una precisién del 0.1%, o m&s o menos un cierto nivel de confianza?. ¢Esperamos un rango deBa concentracién pequefio y bien definido, o de 3 o 4 érdenes de magnitud?. zEsperanos altas concentraciénes, 0 cercanas al limite de deteccién?. zPuede el analista recoger muestras representativas, hacer patrones exactos y operar con el instrumento con total capacidad?. Este programa trata principalmente de la optimizacién para obtener la mejor realizacion instrumental posible, un hecho que requiere cuidado y habilidad. Los criterios principales a tener en cuenta son EXACTITUD y PRECISION. La exactitud mide como de cerca esta el resultado del valor real o aceptado, representado en la Figura 39 por las barras. La precisién mide la reproducibilidad de los resultados. Figura 39. En la Yigura A, los puntes representan una serie de resultados anal‘ticos, encerrados alrededor de un valor medio. Aunque ei rango de valores, o precisién, es bueno, os resultados estan lejos del valor verdadero. Por tanto tenemos buena precisién pero pobre exactitud. En la figura B, los puntos estan extendidos, indicando una pobreAOD OAR AAO ALD OD Onin Ou 2 2B 19 GOO DAO PGRPARPAAG O8 Goa POLGS precisién, pero el resultado medio es, por casualidad, el mismo que el valor verdadero. En 1a figura C, los puntos est&n todos cercanes al valor verdadero, este es el caso ideal de buena precisi6n y buena exactitud. Es importante resaltar que la exactitud est4 limitada por Ja precisién. ambas requieren une cuidadosa optimizacion, medida y calibracién. La mejor precisi6én se obtiene, normalmente, en la zona central de la curva de calibrado. Para la mayoria de los elementos, este rango corresponde a lecturas de absorbancia entre aproximadamente 0.1 y 1.0. Fuera de esta zona, o en los extremos, la precision disminuye. Por debajo de aproxinadamente 0.1 unidades de absorbancia, por debajo del limite de deteccién, la precisién es atin menor y la incertidumbre de la medida alcanza el nivel de la propia medida. Por encima de aproximadamente 1.0, la precision disminuye, mientras que la curva de calibrado se desnivela. En esta regién, peguefias variaciones de absorbancia, A, dan lugar a relativamente grandes errores de concentracién, c. Es posible trabajar en un rango més ancho que el de la mejor precisién, siendo esta m&s pobre en los extremos. Este rango, llamado RANGO DE TRABAJO ANALITICO, es el intervalc de concentracién en el que las medidas pueden hacerse utilizando un Gnico conjunto de condiciones analiticas. Se extiende desde el limite de deteccién hasta un nivel arbitrario donde la curvatura del calibrado es excesiva; es tipicamente de 3 a 4 érdenes de magnitud. Vanes a definir ahora dos criterios de trabajo que miden la capacidad del instrumento para realizar un anélisis. El primero es la SENSIBILIDAD. Para un analito dado la sensibilidad depende de la linea de resonancia, paso Sptico y eficiencia del atomizador. La sensibilidad es proporcional a la pendiente de la curva de calibrado...... (A/C). Una cantidad llamada CONCENTRACION CARACTERISTICA describe numéricamente la sensibilidad. Se define como la concentracién de analito en solucién que produce una absorbancia de 0.0044, © un 1% de absorcién. Cuanto més pequefia es la concentraci6n caracteristica, mas sensible es a determinacién. La concentracion caracteristica es también util para determinar el rango de concentracién donde existe una mejor precision. Este rango es, normalmente, de 20 a 200 veces la concentracién caracteristica. El LIMITE DE DETECCION es e] segundo valor utilizado comurmente para describir el trabajo del instrumento. Es aquella concentracién que da una absorbancia justo distinguible del ruido de la linea base, Estadisticamente, es la concentracién més baja que puede detectarse con un86 nivel de confianza del 95%. Podemos visualizar el] limite de deteccién utilizando el concepto de relacién sefial-ruido. En el limite de deteccién, el nivel de sefial se aproxima al nivel de ruido. El limite de deteccioén se determina estadisticamente. Para ello se realizan una serie de medidas de un patrén de concetracion cercana al blanco. Asi se obtiene una serie de resultados Al, AZ, A3, etc, que varian debido al ruido. Antes y después de cada medida del patrén, se mide la absorbancia del blanco. Al menos 10 valores de A se promedian para calcular A. La desviacion estandar, s, se calcula de la forma normal segin la formula de la ecuacién [1]. \/22 iy)? ss woe aesnec merce (2) donde, blanco anterior + blanco posterior Anyi ~ abs. patrén - (--=------ aremecncien) El limite de deteccion se calcula con la ecuacion [2], donde ¢ es la concentracién patron de analito utilizada en el experimento. [2} Hay que volver a indicar que para determinar el limite de deteccién son necesarias muchas medidas, asi como que debido al ruido, las medidas analiticas hechas en o cerca del limite de deteccién, son menos exactas que las hechas a niveles de concentracién més elevados. Resumiendo: el trabajo experimental de absorcién atémica se mide por varios criterios. La EXACTITUD mide Como se acerca un resultado al valor verdadero o aceptado. La PRECISION mide la reproducibilidad de los resultados. Se define mediante la desviaci6n estandar relativa (RSD). El RANGO DE TRABAJO ANALITICO describe el rango en el que las medidas pueden hacerse con una serie de condiciones analiticas. La SENSIBILIDAD es proporcional a la pendiente de la curva de calibrado y se define numéricamente por la CONCENTRACION CARACTERISTICA. El LIMITE DE DETECCION es laJABOD » PARR a BOLD OB. q EDCLLEAD a? concentracién minima detectable de un elemento. Esta relacionado con la relacién sefial-ruide y se determina estadisticamente mediante una serie de medidas. Ahora que hemos definido los criterios de trabajo, vamos a examinar las funciones principales de un instrumento de absorcion atomica. FUNCIONES PRINCTPAT UN_INS' NTO Los componentes de un instrumento de absorcién atémica pueden clasificarse segin tres funciones principales. La prinera funcién es la generacién, transmisién y deteccién de luz. La fuente de luz, como una lampara de caétodo hueco, proporciona la radiacion adecuada. E1 nonecromador aisla la longitud de onda analitica y transnite la luz al detector, £1 detector, normalnente un tubo fotomultiplicador, convierte la energia luminosa en corriente eléctrica. Un sistema optimizado contiene una fuente de luz intensa, un monocromador que aisla la linea analitica y transmite la energia con pérdidas minimas, y un detector que recoge la radiacién que le liega, de forma eficiente, y la amplifica. La segunda funcién es la produccién de dtomos. El atomizador convierte la muestra, normalmente en fase ligquida, en vapor at6mico. En la mayoria de los anaélisis de absorcién aténica, este productor de dtomos es una LLAMA No obstante, atomizadores no de llama como HORNOS o GENERADORES DE VAPOR pueden utilizarse cuando se necesita gran sensibilidad o el volumen de muestra es limitado. Este prograna trata los atomizadores de llama, ya que hornos y generadores de vapor se tratan ampliamente en otro prograna de esta serie. Un atomizador de llama optimizado produce un denso vapor atémico partiendo de una minima cantidad de muestra. La tercera funcién es el procesado de la sefial y lectura. La sefial eléctrica de un fotomultiplicador se anmplifica y convierte en absorbancia. Los instrumentos mis modernos también proporcionan procesados de las sefiales de absorbancia. Por ejemplo, pueden promediarse varios valores de absorbancia para mejorar la confianza en la medida. Los valores de ebsorbancia pueden transformarse @irectanente a concentraciones. Tanto la concentracion calculada como los valores d2 absorbancia, pueden leerse en el panel digital. Adem4s, el valor mostrado puede sacarse a una impresora digital, 0, en forma analégica, a un registro. Un sistema procesado de sefial/display optimizado, convierte una pequefia sefial eléctrica en una cantidad88 utilizable sin afiadir incertidumbre 0 errores al valor. Ahora que hemos repasado las funciones instrumentales principales, vanos a considerar el efecto de cada uno de elles en un experimento. ‘ROS _I1 "ALE! a) PARAMETROS QUE AFECTAN A LA GENERACION DE LUZ Si las 1émparan operan a corrientes elevadas aumenta ja intensidad de la radiacién: ABSDORANOA BAA BRDENTE B ALTA. CORRIENTE fa- DEGHON 1.0. CONCERTRBOION Figura 40. como se muestra en la Figura 40-A, cuando se miden concentraciones cercanas al limite de deteccion, las Corrientes elevadas producen niveles de ruido mis bajos. No obstante, como se muestra en la Figura 40-B, las corrientes altas también dan lugar, frecuentemente, a wna reducci6én de la absorbancia, disminucion de la sensibilidad y pobre linealidad. Por tanto, cuando se miden concentraciones muy por ercima del limite de deteccién, el analista deberia elegir la corriente més baja que produzca una relaci6n sefial-rnido aceptable. Una ventaja adicional de las Gorriences bajas es un mayor tiempo de v-da ‘le la lémpara. Cuando se mide cerca del limite de deteccién, no obstante, nornalmente son beneficiosas corrientes de laémpara algo mas clevadas, ya que la precisién mejora si el ruido esaa 22.0 4 a 2 @L2Qae 2QAROL 89 pequefio. otra potencial fuente de error es el alineamiento de la lémpara. Primero, la l4mpara de cétodo hueco debe estar Opticamente alineada de forma que se obtenga una méxima energia de salida. Cuando es necesaria una correccién de absorci6én no especifica (NSA), 0 de fondo, una fuente continua, como una lampara de deuterio, es la que normalmente se utiliza. Para realizar una correccién exacta, el haz de la laémpara continua debe estar cuidadosamente alineada con el haz de la lémpara de cétodo hueco, de manera que atraviesen porciones idénticas de la llama. Cuando no est4n alineadas apropiadamente, minimas diferencias en la distribucién espacial de los atomos y las especies NSA, producen errores en la correccién de fondo. En los modernos instrumentos de absorcién atémica, el haz de la fuente continua puede ajustarse de manera que coincida en el espacio, con el haz de la lampara de catodo hueco. Tanto las fuentes de lineas como las continuas requieren un tiempo de calentamiento que depende de la lampara. Durante este tiempo la intensidad de salida cambia, debido a las variaciones de temperatura de la lampara. Los sistemas 6pticos de doble haz compensan de forma inherente estos cambios de intensidad, permitiendo medir durante el calentamiento. No obstante, pueden observarse pequefias variaciones de sensibilidad para muchos elementos durante el calentamiento, incluso con sistemas de doble haz. Este efecto es debido a cambios en la forma de la linea de emisién del cétodo hueco durante la estabilizacion. Para obtener la maxima exactitud, las lamparas de c&todo hueco deben calentarse durante unos minutos, mientras que las lamparas de descarga sin electrodos y las continuas pueden necesitar 20 minutos o més. Los instrumentos de absorcién atémica contienen componentes dpticos, como lentes o espejos, que deben transferir la luz de la fuente a las rendijas del monocromador con minimas pérdidas. Estos componentes también enfocan la luz hacia el vapor atémico en la llama o los atomizadores de horno. Tanto las lentes como los espejos deben comprobarse peri6dicamente para evitar el polvo o materias extrafias, y limpiarse cuidadosamente por personal cualificado. La limpieza y enfoque éptico apropiado permiten una transmisién maxima de luz y por tanto una mayor relacién sefial-ruido. La funcién del monocremador es aislar la longitud de onda de resonancia analitica, R, y transmitir la luz al detector. Por tanto, actua como una ventana espectral. La exactitud con que se seleccione la longitud de onda afectao g eG ‘ ® s © < 90 a la pendiente y a la forma de la curva de calibrado. Cuando el monocromador se selecciona exactamente a R, se obtiene una sensibilidad éptima y un calibrado lineal. Cuando 1a longitud de onda no esté bien seleceionada, pueden entrar en la ventana espectral lineas extrafias de la fuente. Esto produce una pobre sensibilidad y una mayor curvatura del calibrado. La exactitud de la longitud de onda también afecta a la energia de salida. Cuando la longitud de onda esta bien seleccionada, se transmite una energia néxima a través del monocromador, asegurando una Optima relacion sefial-ruido. Cuando la longitud de onda no coincide con la linea de resonancia, disminuye la energia de salida, reduciendo la relacién sefial-ruido. E1 resultado es una pobre precision. Por tanto, es necesario un cuidadoso ajuste de la longitud de onda para optimizar el trabajo. Esto se consigue nornalmente utilizando un ajuste de la longitud de onda que de una sefial de intensidad maxima. La eleccién de 1a linea de resonancia es también, a menudo, critica. Para anélisis que requieran la maxima sensibilidad, el analista elegiré la linea de resonancia m&s sensible. Para el Cu esta es 324.8 nm. Eligiendo la linea més sensible, la zona superior del rango de trabajo est4 limitado a unos 10 pg/ml. Esta no es una limitacion para anflisis de bajos niveles de concentracién, por ejemplo el Cu en agua potable, donde 1a concentracién de Cu es normalmente menor de 0.1 ug/ml. Por el contrario, el analista podria elegir una linea de resonancia menos sensible para determinar Cu en lat6n, donde las concentraciones esperadas son mucho més elevadas. En este ejemplo, la linea de 244.2 nm es la m&s adecuada. En este caso las concentraciones analiticas son tipicamente de varios cientos de pg/ml en solucién, que estén dentro del rango de trabajo de esta linea. Hemos visto que el monocromador actua como una ventana espectral y que la localizacién de esta ventana afecta a la sensibilidad, al rango de trabajo y a la precisién. La rendija de 14 ventana, llamada ANCHURA ESPECTRAL © SBH, también afecta a los mismos parémetros. Cuando se utiliza una SBW relativamente estrecha, la R se aisla casi por completo dando lugar a una curva de calibrado més sensible. Cuando se aumenta la SBW, se incluyen lineas extrafas adicionales. Por tanto para elementos como el Ni, Co y Fe cuyos espectros contienen muchas lineas cercanas, son mas adecuadas las SBW estrechas. Esto excluye lineas extrahas y mejora la sensibilidad y el rango de trakajo. En algunos cases, no obstante, anchuras espectrales m&s grandes mejoran la precisién; por ejemplo, cuando se realizan medidas de concentraciones cercanas al limite de‘ d e Q | an Oe € AS ONGGLAane a. 91 deteccién o con lémparas débiles. Como hemos visto, una anchura espectral grande podria dar lugar a pequefias absorbancias, debido a la inclusion de lineas extrafias. No obstante, las SBN anchas también dan menores fluctuaciones de absorbancia o ruido, A. En este caso observamos un neto aumento de la relacién sefial-ruido, A/ A. La mejora de ja relacién sefial-ruido utilizando una SBW m4s ancha puede llevar a un limite de deteccién mas bajo y una mejor precision. Para resumir, normaimente se recomiendan SBW estrechas para obtener una mejor sensibilidad y rango de trabajo. No Obstante, cuando se trabaja a concentraciones cercanas al limite de deteccién o con lamparas débiles, SBW mas anchas pueden mejorar la precision. ASO 4: BADO NIVA DE LID AD Bs ALONE ce We DAO RADIACION Re Avene ANPURICAGRH OMT AMPHAGOSN Pat Figura 41. El detector, en précticamente todos los instrumentos comerciales de absorcién atémica, es un tubo fotomultiplicador o PHT. Los PMT convierten la radiacién enBL BADOLL ROAQAC ARCERE ROG ve sefial eléctrica y la amplifican a niveles medibles. Como se muestra en el caso A, cuando la radiacion es baja, es necesaria una alta amplificacién. Con amplificacién elevada, se obtienen sefiales més ruidosas, dando lugar a una pobre precisién, cono se muestra en la curva inferior del caso A de la Figura 41. Podemos mejorar el asunto aumentando la radiaci6n que le llega al PMT, caso B. Esto se hace utilizando corrientes de lampara més elevadas o anchuras espectrales mas grandes. Esto aumenta el nivel de radiacién necesario para una menor amplificacién, dando lugar a un menor ruido y por tanto mejor precisi6n. Indicar de nuevo, no obstante, que es necesario un compromiso; mientras que el aumento de la corriente de lémpara o de la anchura espectral puede mejorar la precisién, esto frecuentemente significa una pérdida de sensibilidad y de rango de trabajo. vamos ahora a resunir la optimizacién de la generacién, transmisién y deteccién de luz, factores que afectan a la sefial luminosa. La fuente de luz debe operar a bajas corrientes para conseguir maxima sensibilidad y tiempo de vida de la laémpara. No obstante, para concentraciones cercanas al limite de deteccién, a menudo se alcanza una mejor precisién con corrientes mas altas. Los haces de la fuente de lineas y de la fuente continua deben estar perfectamente alineados para conseguir un m4ximo paso de luz y una correceién de fondo exacta. Las lamparas deben dejarse estabilizar durante unos minutos para consiguir una mayor exactitud. La éptica debe estar limpia, enfocada y alineada para conseguir el néximo paso de luz. La longitud de onda del monocromador debe seleccionarse exactamente a R. Las lineas de resonancia principales se utilizan con muestras de baja concentraci6n, mientras que otraslineas alternativas son mas convenientes para concentraciones mas elevadas. Son preferibles anchuras espectrales pequefias para elementos que tienen lineas vecinas muy cercanas a R. No obstante, SBW més anchas pueden mejorar la precisién cuando el paso de luz es bajo. una baja amplificacién del detector produce un ruido menor.An Me@oga+ AAVQASSHOVOIOARDAS ama 93 b) PARAMETROS ASOCIADOS A LA PRODUCCION DE ATOMOS Los sistemas de produccién de &tomos que utilizan llamas, consisten en un nebulizador, cémara de premezcla y quemador. El nebulizador convierte continuamente la solucién de 1a muestra, en un aerosol que se mezcla con el combustible y el oxidante en la camara de premezcla. La mezcla de gases y aerosol, sale entonces de la cAmara de premezcla y entra en la llama. alli tienen lugar los complejos procesos de evaporacién del disolvente, evaporacién de la muestra y atomizaci6n. Se han utilizado dos tipos de nebulizadores en absorcién atémica: uno con una toma constante de muestra de 5 ml/min, el otro con una toma de muestra variable entre 0 y aproximadamente 10 ml/min. A nedida que aumenta la velocidad de absorcién se genera m&s aerosol de muestra y aumenta la absorbancia. No obstante, el aumento excesivo de la velocidad de absorcién, pueden degradar la precisién. Esto se debe a la formacién de grandes gotas de aerosol. Por tanto, 5 ml/min representa un compromiso practico entre sensibilidad y precisién. Los nebulizadores ajustables son especialmente dtiles con disolventes orgaénicos. Como estos disolventes poseen distintas viscosidades, su velocidad de absorcién. varia. Adem&s los compuestos orgénicos también contribuyen a la combustién actuando como un combustible adicional. Come consecuencia, la velocidad de absorcién para disolventes orgaénicos se reduce normalmente a unos 2-3 ni/min. En el siguiente paso, el aerosol de la muestra se mezcla con el combustible y el oxidante en la cémara de premezcla y es transportado a la llama. Una bola de impacto estratégicamente colocada en el paso del aerosol, rompe la mayoria de las gotas grandes. Las gotas més pequefias se transportan con mayor eficacia a la llama, dando lugar a un aumento de la absorbancia sin aumento de ruido. Por tanto mejoran tanto la sensibilidad como la precision. Las gotas n4s grandes residuales golpean las paredes de la camara de premezcla y salen a través del drenaje. La eficiencia, es decir, la proporcién de solucién nebulizada que entra en la lama, es tipicamente de solo alrededor del 10%, nientras que el 90% sale por el drenaje. Vamos ahora a examinar la mision de la llama en la produccién de A&tomos y su contribucién a la medida. Vamos a estudiar los complejos procesos de 1a llama gue conducen a la atomizaci6n. La mezcla de aerosol y gases entra en la llama donde ocurre desolvatacion y erjstalizacién, produciéndose particulas sélidas. El calentamiento continuo en la llama da lugar a una fusion de Jos sélidos o a una sublimacién directa a gasesAQAA ROLLS DLE VLRO QB@ADBLAGAAR A ae 94 moleculares. cualquier liquido también se vaporiza a continuacién para formar gases noleculares. Finalmente ccurre la atonizacién cuando la energia de la llama rompe los enlaces moleculares para dar gases monoatémicos. El proceso completo de atomizacién tiene lugar en un tiempo tan pequefio como de 5 a 10 milisegundes. Cierto nGmero de paraémetros instrumentales asociados a la llama, afectan a estos procesos. Vamos a examinarles con detalle. La ‘mezcla combuctible-oxidante que..se ha elegido, determinara el filmer ce atemos formados.enla.llama_y por tanto la sensibilidad y.el limite de deteccién. La llama debe Ser lo, bastante. caliente como. para. vapo: _Y. descomponer los compuestos formados en la llama. La Llama dé aire-acetileno-es—lo- suficientemente caliente, 2300°C, para atonizar de manera eficiente mas de 30 elementos: Gtros elementos como el V, 8i y Al, réquieren la Ilama mas caliente de oxide nitroso-acetileno, a unos 3000°C, para romper los éxidos refractarios que forman estos elementos. La_relacién_combustible-oxidanta_enla_1la1 afecta A la.sensibilidad.y.al limite de deteccién. de éxido nitroso-acetileno se caracteriza por la presencia de una regién llamada "pluma roja" en la parte interior de la llama. Esta pluma roja es muy pequefia en una llama pobre en combustible o llama oxidante. Una llama reductora o rica ‘en combustible, por el contrario, tiene una gran pluma roja, de 1 o 2 cm de alta o mas. La relaci6én 6ptima varia con el elemento. Con Ca, por ejemplo, una llama redutora produce una mejor sensibilidad. otros elementos necesitan una llama estequiométrica, o incluso una llama mas reductora. Cuando se nebulizan disolventes erganicos, la relacién nominal combustible-oxidante se altera, ya que el aisolvente actua como combustible. En este caso, la proporci6n de combustible generalmente se disminuye, o se aumenta el oxidante para alcanzar la relacion optima. La naturaleza de la matriz)de la muestra también puede afectar a la relacién conbustible-oxidante éptima. Por ejemplo, 1a llama nds sensible para el 8i es normalmente una llama muy reductora de 6xido nitroso-acetileno. No obstante, a menudo es necesario HF en la preparacién de muestras que contienen Si. Su presencia produciria una gran disminucién de la absorbancia del 8i si se utilizan condiciones estandar. Cono resultado, se utiliza una llama de éxido nitroso-acetileno significativamente menos reductora, para minimizar la interferencia del EF. Por tanto sacrificamos algo de sensibilidad para mejorar la exactitud. E1 flujo total te gas medida. Con bajos flujos 1 Ao queda lugar a.MAPARAD AD AR 95 sensibilidad. No obstante hay que mantener una minina velocidad de fli ‘para évitar retrocesos de liama; la velocidad de salida de los gases debe ser al menos igual a la velocidad de quemado. Aunque los flujos bajos favorecen la _sensibilidad, a veces son necesarios flujos mas elevados. Por ejemplo,.en algunos momentos, corrientes turbulentas de aire cercanas, pueden producir fluctuaciones én la_llama, aumentando el ruido. Flujos mas elevados pueden mejorar la precision estabilizando la llama. tn aumento del flujo puede minimizar atascos en el quefédor cuando las muestras nebulizadas contienen_sélidos. La combinacién de temperatura, relacién combustible- oxidstite yvelocidad-del flujo total del gas, determina la posicién:de maxima poblacién de atomos en la llama. Para algunos elementos, como Ag, esta posicién no es critica. Puede medirse en cualquier posicién de la zona mas intensanente coloreada con la misma sensibilidad. No obstante se obtiene una mejor precisién si se mide en la parte inferior de la zona de medida donde las turbulencias de aire son minimas. Para otros elementos, como Mo, la altura optima para nedir es distinta y mucho mas critica; es necesario un mayor cuidado en la optimizacién de la altura del quemador. Para la mayoria de las aplicaciones es ventajosa una sensibilidad elevada. No obstante, en muchas medidas, como la determinacién de Fe en cemento, son preferibles unas condiciones de menor sensibilidad. Esto permite medir en el rango de éptima precisién, es decir, entre absorbancias de 0.1 y 1.0, sin multiples diluciones. Una manera de disminuir 1a sensibilidad es acortar el paso 6ptico, b. Esto puede hacerse convenientemente rotando ja cabeza del quemador 90°. Adem4s de disminuir 1a sensibilidad, el rango de trabajo aumenta unas 20 veces. Para.el Fe, esto significa un aumento del linite superior del rango de trabajo desde unos 20 ug/ml a cerca de 400 ug/ml. Ahora vamos a repasar los efectos de los paraémetros instrumentales en la produccién de atonos. ‘El nebulizadot Sonvierte 1a_muestra_Miquida_en una fina niebla. La velecidad de cién y su eficacia afectan a la sensibilidad y la precisién. La optima Velocida ién requiere un compromiso, ho obstante, ya que la ; Sensibilidad y consérvacion de Tacmuestra pueden requerir distintas velocidades. No dbstante, para disolventes orgénicos, la mejor sensibilidad y precision tienen lugar a bajas velocidades de absorci6n.96 La camara de premezcla, que contiene una bola de impacto 0 un spoiler, acondiciona el aerosol de la muestra rompiendo las gotas més grandes. Las gotas grandes residuales. se eliminan de la corriente gaseosa dejando principalnente la gotas mas pequefias. Esto mejora la sensibilidad y precision. La Llama convierte el aerosol de muestra en étomos, via procesos complejos. Los parametros instrumentales importantes son el tipo de llama, la relacién combustible- oxidante, el flujo de gas, la altura de medida y la rotacién del quemador. c) PARAMETROS ASOCIADOS AL PROCESADO DE LA SENAL La absorbancia puede leerse de varias maneras. Un medidor analégico muestra las absorbancias de forna continua. Un registro muestra los mismos valores de absorbancia en funci6n del tiempo y proporciona un informe continuo. El medidor digital y la impresora o teletipo, muestran los valores nunéricanente. La precisién y exactitud obtenibles mediante las lecturas analégicas dependen del juicio del analista y de la constante de tiempo de la lectura. Por ejemplo, con una sefal ruidosa el analista debe estimar el valor medio de la posicién de la pluma mientras que esta fluctuando. La mayoria de los instrumentos modernos, no obstante, combinan lecturas digitales con integradores electrénicos para minimizar los efectos de la incertidumbre de lectura. Vamos a examinar ahora como podemos utilizar la integracion para mejorar la exactitud y la precisién. Cuando la sefial contiene un pequefio ruido puede reducirse mediante un DAMPING (amortiguamiento) electrénico. Este suavizado de la sefial mejora la precisién. No obstante, mientras que el damping reduce el ruido, la disminucion de la respuesta necesita un aumento del tiempo de nebulizacién. Cuando la cantidad de muestra es linitada el damping puede no ser préctico. Un modo alternativo de minimizar el efecto del ruido es la integracién de sefial o promedio. El ruido no se suprime, pero la sefial se muestrea y los valores se promedian en un cierto periodo de medida, por tanto se mejora la precisi6én. Ademés, una integracién de 10 seg puede realizarse con menos de 15 seg de nebulizacién. Esto corresponde a solo 1 ml de muestra consumida. La eleccién del tiempo de integracion depende de la concentracién de analito y el nivel de absorbancia resultante. Altas concentraciones producen relativamenteDAL ALRMAARAMN OAD LESABEAD a 2 97 altas absorbancias. Para la mayoria de los elementos la precisién a absorbancias elevadas es mejor del 1% de RSD, incluso para tiempos de integracién tan pequefios como 1 seg. Por el contrario, bajas concentraciones producen velativanente bajas absorbancias. La precisién puede multiplicarse como mucho por 3 cuando el tiempo de integracién aumenta 10 veces. Tiempos de integracién mayores de unos 10 seg no son practicos, nornalmente. Para muestras que producen lecturas bajas de absorbancia podria utilizarse una expansi6én de escala para mejorar 1a capacidad de lectura. Mientras que, por ejemplo, la sefial se multiplica por un factor de 100, la incertidumbre de la sefial (o ruido) también se expande 100 veces. La relacién sefial-ruido, y por tanto la precision, Permanecen inalterables. Cuando se utiliza expansién de escala, no obstante, aumenta el némero de cifras significativas, para que la sefial pueda ser nas fAcilmente cuantificada. Noe obstante, es necesaria la integracién para reducir el ruido. En algunos casos, la expansién de escala permite al analista trabajar con muestras nfs diluidas y minimizar efectos de interferencias. Como la exactitud analitica depende mucho del calibrado, la eleccién de las soluciones de referencia es critica. Para muestras m4s complejas, las matrices de las referencias y muestra deben parecerse lo més posible para nminimizar efectos de interferencias. Cuando el calibrado cumple la ley de Becr, pueden utilizarse Gnicamente una o dos soluciones de referencia. 1 nimero total recomendado, no obstante, depende del grado de curvatura y del rango analitico. Normalmente se escoge una solucién cercana al tope de la zona lineal de la curva. Las medidas pueden entonces hacerse desde el limite de deteccién hasta ese nivel. A medida que aumenta la curvatura son necesarias més soluciones de referencia para establecer exactamente el calibrado, Tres o cinco soluciones son, nornalmente, suficientes para curvas no lineales y el rango m4s ancho que se ha podido encontrar en absorcién atomica. Las soluciones de referencia deben medirse periédicamente para comprobar el calibrado. Cuando se utilizan microprocesadores, pueden obtenerse calibrados muy exactos. Las concentraciones de referencia y sus Correspondientes absorbancias son guardadas en memoria. Se realiza entonces un ajuste polinémico con los datos almacenados, computandose y guardandose en el instrumento. Se mide entonces una solucién desconocida, X, se compara a ia funci6n polinémica almacenada, y se muestra la concentracién calculada. Las ventajas del ajuste matemético de la curva son: la ausencia de la influencia del operador98 en el ajuste de la curva a los puntos medidos, 1a capacidad de acondicionar las curvaturas, y resultados més consistentes. Cuando es dificil asenejar las matrices de muestra y referencia, se utiliza la técnica de adiciones estandar. as soluciones de referencia se hacen aumentando 1a concentracion del analito, afiadiéndolo a alicuotas de 1a fucstra, Por tante, la propia muestra proporciona la matriz @e las soluciones de referencia. La necesidad de esta fécnica se comprucba representando la curva de adiciones estandar junto con el calibrado convencional. Si las pendientes difieren, como se ve en la Figura 38, ie Soncentracién desconocida medida ser4 distinta segin el nétodo utilizado. Esto indica la necesidad de adiciones estandar. Si las pendientes coinciden, es decir, las rectas son paralelas, la técnica de adiciones estandar no es necesaria, y puede utilizarse el procedimiento de calibrade mas simple. La técnica no compensa la interferencia de la absorcién no especifica (NSA) y es valida solo cuando se utiliza en la zona lineal del calibrado. Mientras que les calibrados se hacen a menudo para aconodar anchos rangos analiticos, algunos analisis requieren resultados muy precisos en un rango de concentraciones estrecho. Como consecuencia, solo es snecesaria una pequefia zona de la curva de calibrado. Las soluciones patrén se hacen cuidadosamente muy semejantes a ja matriz de la muestra y se “encierra" de este modo 1a concentracién esperada de la muestra. Esta técnica permite una precisi6n y exactitud méximas. Su mejor aplicacion son uestras que estén bien caracterizadas y no varien mucho de muestra a muestra, como Ca en cemento. Ahora vamos a resumir los parémetros de procesado de sefial y lectura. Las lecturas analégicas, tales como las de los medidores analégicos y registros, dependen del juicio del analista. Las lecturas digitales, tales como las de los medidores digitales e impresoras, son mas f&ciles de leer, més exactas y consistentes. La reduccién del ruido se realiza mediante damping o preferiblemente por integracién. La mejora de la precision @epende del tiempo de integracién y el nivel de absorbancia. La expansién de escala mejora la capacidad de lectura de bajas absorbancias, para una mejor cuantificacion.d @ d & ¢ 4 G qd & & q @ LOL CHGRADAAD are 20 LLOL. 99 El mejor calibrado se obtiene por cAlculo del ajuste de la curva. Esto mejora la consistencia, elimina los errores del operador y acondiciona la curvatura. El método de adiciones estandar nejora la precisién y exactitud para muestras bien caracterizadas que caen en un rango estrecho de concentraciones. E_ OPT! vamos ahora a resumir aquellos parametros que afectan a la medida, siguiendo un procedimiento tipico de optimizacién. Cuando se realiza la optimizacién, el analista debe consultar los manuales para conocer los detalles de la operacion. Primero, debemos determinar los objetivos del anflisis. Para andlisis de rutina, los manuales dan las condiciones instrumentales adecuadas. Estas deben servir como punto de partida. No obstante, si queremos las mejores exactitud y precisién, es necesario cuidado y habilidad en la optimizacién. Procedimientos cuidadosos de optimizacion tienen también valor en la solucién de los problemas y se utilizan para establecer parémetros operacionales de rutina. 1.- Supeniendo que la exactitud y precisién son lo més importante, primero optimizaremos los parémetros que afectan a la generacién, transmisién y detecci6n de luz. Uno, seleccionar la corriente de lampara al minimo reconendado para obtener la mejor sensibilidad; no obstante, la corriente puede aumentarse para mejorar la precisién en aquellos casos en los que la sefial es ruidosa. Dos, alinear cuidadosamente la lampara. Cuando se utiliza corrector de fondo, tres, ajustar la lémpara de fondo de forma que haya una coincidencia espacial optima con la fuente de lineas. Mientras que las lamparas se calientan, cuatro, elegir Ja linea de resonancia analitica. La linea més sensible se utiliza para medidas de baja concentraci6n, mientra que una longitud de onda menos sensible puede utilizarse para concentraciones mas elevadas. Cinco, ajustar la anchura espectral. Se eligen pequefias anchuras cuando la sensibilidad es critica. No obstante, en algunos casos, son necesarias grandes anchuras espectrales para reducir el ruido y mejorar la precisién.100 2.- Lo siguiente es optimizar la produccion de étomos. uno, elegir la llama apropiada y, dos, 1a relacién conbustible-oxidante para el elemento en particular y la matriz. res, ajustar el flujo total de gas. Los flujos bajos ninimizan’ la dilucién, mientras que flujos mas elevados reducen atascos en el’ quemador, y ruido debido a corrientes de aire. cuatro, ajustar la altura del quemador de modo que el haz de luz atraviese la posicién de maxima densidad de &tomos en la llama; este procedimiento optimiza 1a Sensibilidad. Cuando se miden concentraciones mas elevadas, cinco, el quemador puede rotarse para reducir 1a Sensibilidad. Seis, 1a sensibilidad y precisi6n podrian tambien ajustarse cambiando la velocidad de absorcion del quemador. 3.- Finalmente se optimiza el procesado de la sefial y lectura. pamping, o preferiblenente integracién, se utiliza para reducir el ruido. La eleccion dei tiempo de Untegracién depende de 1a absorbancia. A veces se utiliza expansién de escala para medir valores bajos de Gbsorbancia, © cuando es necesaria la dilucién de muestra para reducir interferencias. El tipo de calibrado seleccionado varia. Para la mayoria de los analisis se utilizan de 2 a 5 soluciones patren, con al menosuna en la zona lineal de la curva de Palibrado y 1as demas en la zona curva. La técnica de Saiciones estandar se utiliza para minimizar interferencias matriz. Las técnicas de “encerrona" son fitiles cuando el rango de trabajo esperado es pequefio y esté bien definido-AaAO ee OD 0.29 OAD BA! AS eangane aren enoan 101 MEDIDAS DE SEGURIDAD EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION ATOMICA Los incidentes que ocurren en un laboratorio afectando a la seguridad personal, raranente son accidentes casuales. Normalmente son culpa del hombre, y es posible prevenirlos y evitarlos. Ocurre lo mismo con la espectroscopia de absorcion atémica. £1 peligro se crea normalmente por descuidos en las medidas de seguridad, puede evitarse teniendo en cuenta los riesgos, con profesionalidad y sentido comin. El objetivo de este programa es crear un sentimiento de seguridad al conocer los riesgos potenciales. Aprenderenos a evitarlos aplicando ciertas nornas simples de seguridad. La espectroscopia de absorcién atémica envuelve una serie de riesgos Gnicos entre las técnicas analiticas. Gases conprimidos, superficies calientes, productos téxicos, electricidad, llamas, radiacién' UV, liquidos corrosivos y disolventes inflamables son un’ potencial individual y colectivo de dafios personales y destrozos. Si todo esto suena atemorizador, hay que recordar que no tiene porque serlo. Si se sabe apreciar 1a naturaleza de este peligro, se aprenden las simples reglas para evitarlo, y se aplican'en el laboratorio, entonces se observara que la espectroscopia do llama e¢ tan segura como catisfactoria. Vamos ahora a considerer cada uno de estos peligros. RICIDAD Es esencial una buena toma de tierra para evitar descargas eléctricas importantes. Asegurarse de que la fuente de alimentacién del instrumento tiene toma de tierra. Confirmar que la potencia de la instalacién es la adecuada. Si el instrumento tiene un selector de voltaje, asegurarse de que esté bien seleccionado antes de conectar el instrumento. De otra forma, podria tener lugar una descarga importante, empezar un incendio, o dafiar al instrumento. Utilizar el cable de potencia suministrado por el fabricante del aparato, para conectar el aparato a la fuente de potencia. Si es necesario cambiar conexiones, debe canbiarlas un profesional. Los espectrofotémetros de absorcién atomica contienen componentes que operan a voltajes peligrosos. A menos que102 se tenga un entrenamiento especial, no hay que tocar el interior del instrumento, el "territorio" del analista esta fuera del aparato. El interior del instrumento es zona de Jos ingenieros de servicio cualificados. si D CON Es esencial un sistema eficiente de ventilaci6n para cualquier tipo de instrumento con llama. La energia calorifica producida es de unos 500 kilojulios por minuto (470 BTU). Los humos y vapores pueden ser téxicos. Bl sistema de ventilacién debe construirlo y disefiarlo un profesional. Hay que utilizar un ventilador para alta temperatura con una capacidad de unos 8 metros cibicos por minuto (300 cfm). Utilizar un tubo a prueba de llama, colocado lejos de las alarmas de incendios, extintores u otros dispositivos sensibles al calor. No utilizar juntas soldadas. Colecar 1a “capucha" justo sobre la llama, y el ventilador no més cerca de 4 metros (12 pies) de la llama y no nés lejos de la distancia especificada por el fabricante. Ventilar el sistema hacia el exterior. Colocar la salida fuera de la estancia, lejos de puertas, ventanas y entradas de acondicionadores de aire. La salida debe tener un reguiader de aire. Nunca deben obstruirse las entradas y salidas. Instalar un interruptor bien sefializado, con una bombilla de sefializacién. Encender siempre el sistema de ventilacién antes de encender 1a llama o al purgar las lineas de gases. ALTA TEMPERATURA Algunos de los riesgos del calor son obvios, otros no tanto. Por ejemplo, las llamas de aire-acetileno y de éxido nitroso-acetileno se observan a simple vista, mientras que Ja llama de hidrégeno es praécticamente invisible. Tanto si es £4cil ver la llama como si no, es una tonteria poner las manos dentro del compartimiento de muestra mientras la lama est& encendida. Hay que tener particularmente en cuenta los posibles puntos calientes" que pueden existir alrededor delAgar aade a LAD e 6 d e q 28 @ & ECERSAa 104 Los tubos de conexién generalmente siguen un codigo de colores, pero este puede variar de fabricante a fabricante. El cédigo més utilizado es el siguiente: ROJO para acetileno AZUL para éxido nitroso NEGRO para aire colocar los tubos de manera que no puedan caer objetos sobre ellos, romperse u obturarse. Recordar que incluso el tubo m4s fuerte puede romperse si se utiliza mal. Revisar todos los tubos con frecuencia. Aquellos que esten rotos o gastados cambiarlos inmediatamente. El aire puede ser suministrado del ambiente, con un compresor, o de una bala. Instalar uno o més filtros entre el compresor o bala y el instrumento, con objeto de evitar el polvo, aceite y agua en el sistema de control del aire. Recordar que la corrosién interna puede dafiar el sistema de control de flujo. Esto podria dar lugar a retroceso del quemador debido a un suministro de aire inadecuado. Si se Utilizan balas, asegurarse de que es aire comprimido. No utilizar nunca oxigeno, oxigeno enriquecido con aire o aire para respirar, porque podria causar una seria explosién en 1 quenador. Los quemadores de absorcién atémica no estén disefiados para llamas de oxigeno-acetileno. No utilizar nunca el acetileno a presién mayor de 100 kPa (15 psig). A presién superior, el acetileno puede explotar esponténeamente. En algunes lugares 1a Gnstalaciones de acetileno operan sobre 62 kPa (9 psig), para ello deben tener licencias especiales. Utilizar tubos de acero para las instalaciones. Nunca pasar acetileno a través de tubos de cobre o latén con mas fel 65% de cobre. Agunos metales como el cobre, plata y nercurio pueden fornar acetiluros explosives. Asi mismo, mantener el acetileno lejos del contacto con cloro, aceite Y grasa; también podrian formarse mezclas explosivas. Comprobar el sistema completo regularmente, aplicando una solucién jabonosa a todas las juntas y uniones- Observar si aparecen burbujas de jabén, 10 que indicarfa la existencia de una fuga. Normalmente el acetileno esté disuelto en acetona, ya que no puede comprimirse como gas seco sin alto riesgo de explosion, Algunos suministradores, no obstante, ofrecen un Acetileno empaguetado con algin otro disolvente que no es acetona. Este disolvente puede entrar en el sistema de control de gases del instrunento donde podria dafiar el tubo interior hasta romperlo. Esto puede originar riesgo de explosion. No utilizar nunca esta clase de acetileno.‘ & q q € c G € d dq S q ‘ g & é HO ODD CL 105 Utilizar solo "para AA" o el disuelto en acetona. No utilizar nunca una bala de acetileno después de que la presién sea menor que la recomendada por el fabricante del instrumento, generalmente @5 0 100 psig (600 0 700 kPa). De otra manera, la acetona podria entrar en el instrumento. El 6xido nitroso tiene tres posibles riesgos caracteristicos. Primero, es asfixiante, Respirar este gas puede ser muy peligroso. No dejar que se escape en el ambiente de trabajo. Asegurarse de que el sistema de suministro esta bien cerrado y comprobar regularmente las fugas. Segundo, el éxido nitroso puede producir combustién espont&nea del aceite y dar lugar a explosiones peligrosas. No hacer circular nunca el 6xido nitroso a través de lineas © equipos contaminades con aceite. Desengrasar completamente todas las lineas o equipos que se sospeche pueden estar contaminados con aceite, antes de utilizarlos con 6xido nitroso. Tercero, cuando el 6xido nitroso sale de la bala, el efecto de enfriamiento de la expansi6n puede congelar el diafragma del regulador. Esto lievaria a una pérdida de la regulacion y podria provocar un retroceso. Utilizar un regulador que posea, a su vez, un regulador de temperatura, o colocar una resistencia calefactora como tapadera del regulador. El hidrégeno es raramente necesario en espectroscopia de absorcién atémica y la praéctica actual tiende hacia las llamas de acetileno. Si debe utilizarse hidrogeno, recordar que puede incendiarse esponténeamente si hay una fuga. La llama de hidrégeno es también muy transparente, casi invisible a la luz del dia, y emite poco calor. Moraleja: No utilizar hidrégeno a menos que sea absolutamente necesario. Si debe utilizarse, tomar precauciones extremas contra las fugas; el hidrégeno se difunde f4cilmente incluso a través de pequefios agujeros. Ser especialmente cuidadoso de no poner las manos en el compartiniento de mestra. No utilizar nunca hidrogeno si e1 instrumento no esté disefiado para ello. Vamos a resumir las medidas de seguridad para los gases conprimidos: 1.- Colocar todas las balas fuera del laboratorio. 2.- Almacenar y transportar las balas de pie. Asegurarlas firmemente. 3.- Tener un sistema de tuberias instalado por un profesional. Etiquetar las tuberias y comprobar las fugas regularmente.106 4.- Utilizar Gnicamente aire comprimido, nunca oxigenc, oxigeno enriguecido con aire o aire para respirar. 5,.- Tuberia de acero para el acetileno. presién maxima pernitida de suministro 100 kPa (15 psig). Utilizar solo acetileno empaquetado con acetona. 6.- Evitar respirar 6xido nitroso, Utilizar tubos y equipos limpios de aceite. Calentar el regulador. 7.- Ser especialmente cuidadosos con el hidrégeno, evitar el utilizar llamas de hidrégeno si es posible. LA_LLAMA Cada combinacién combustible-oxidante tiene una velocidad de quemado particular, a la cual la llama viaja a través del medio de combustién. En un sistema de llama controlado, como un quemador de AA, el frente de la llama {ntenta viajar hacia el interior de la rendija del quemador a la misma velocidad de la llama, Vf. La premezcla de conbustible y oxidante fluye hacia el exterior de la rendija a la velocidad del gas, Vg. Siempre que Vg sea mayor que Vf, el frente de la llama permaneceré donde se ‘supone tiene que estar, en la parte superior de la cabeza del quemador. Sin embargo, si Vg desciende por debajo de VE, el frente de la llama se introducira rapidamente por 1a rendija del quenador hacia la cémara de premezcla donde explotaré la mezcla de combustible y oxidante. Es decir, se produciré un RETROCESO DE LLAMA. vamos a ver ahora los factores que pueden producir este peligroso retroceso: velocidad de gas, Vg, menor que Velocidad de llama, Vf. Para un 4rea Ge rendija de quemador Gada, la velocidad de salida del gas, Vg, viene dada por Q Vg = --- A donde A es el 4rea de la rendija del quemador, y Q la Gantidad total de combustible y oxidante que fluye a través Qe la rendija- Como A viene fijada para una cabeza de quemador dada, si se reduce e. flujo total de gas, Q, Vo Zambién disminuye, y esto juec~ dar lugar a retroceso. Las causas que en la préctica pueden conducir a retroceso por disminucién ¢2 flajo de gas son: - Fallo de suministro de gas en la fuente.IBS BQDRAD a 107 2.- Roturas en la linea de suministro. 3.- Pérdida del liquido de cierre, 1o que produciré que el gas vaya al drenaje en vez de atravesar la rendija del quemador. 4.- Fugas alrededor del quemador, camara de premezcla y nebulizador producidas por dafios en las juntas o un ensamblaje incorrecto. Casi todas las modernas cabezas de quenador son del tipo de rendija estrecha. La mayoria de ellas indican cual es la combinacién de combustible y oxidante para la que estan disefiadas. Colocar siempre 1a cabeza de quemador correcta para la llama que va a utilizarse. Los instrumentos modernos tienen cierres (interlocks) disefiados para prevenir la utilizacion de un quemador equivocado. No hay que intentar nunca ignorar estos cierres, estén colocados para la proteccién del usuario. La cabeza de quemador de la llama de aire-acetileno tiene una rendija relativamente larga. Esta no debe utilizarse nunca con una llama de éxido nitroso-acetileno. Si se hace pasar 6xido nitroso a través de una rendija larga, la velocidad del gas, Vg ser4 més pequefia que la velocidad de la llama, Vf, y se producira retroceso. Sin embargo, puede utilizarse un quemador de éxido nitroso-acetileno para una llama de aire-acetileno. De hecho este es un procedimiento de rutina, encender primero una llama de aire-acetileno, antes de cambiar a la combinaci6én de 6xido nitroso-acetileno. Este procedimiento evita retrocesos que podrian ocurrir si se intenta encender una llama de oxido nitroso-acetileno directamente. Los modernos acoplamientos de quemador/cdmara de premezcla estén disefiados de manera que pueden sacarse f4cilmente para limpiarlos y mantenerlos adecuadamente. Como consecuencia, incluyen un ntimero de uniones y arandelas para mantener el sistema hermético en la cabeza del quemador y nebulizador. Algunos disefios de cAmaras de premezcla incluyen un dispositivo de liberacién de presién. Cuando se cambie algGn componente de la camara de premezcla, ‘seguir las instrucciones de] fabricante, y cuidar el’no dafiar ninguna de estas uniones. Recordar que las fugas pueden dar lugar a incendios o causar retrocesos. Comprobar fugas en las uniones con frecuencia. Cambiar inmediatamente cualquier uni6n estropeada 0 gastada.108 En el manual de operacién del fabricante se incluyen instrucciones especificas para el manteniniento del quenador/cémara de prenezcla. Sin embargo, hay algunas reglas generales que deberian observarse siempre. primero, si el quemador empieza a bloquearse, apagar siempre la liama antes de intentar limpiarlo. Si se intenta limpiar con la llama encendida, podria introducirse ceniza ‘en la cémara de premezcla y producir un retroceso, 0, puede quemarse la mano seriamente. segundo, si se ha estado aspirando alta concentracion de ag, Cu o Hg en una llama de acetileno, recordar que en Seco pueden formarse espont&neanente acetiluros explosivos- {impiar completamente con disolvente el quenador, camara de premezcla y sistema de drenaje, hasta estar bien seguros de que se han eliminado todos 10s residuos. Finalmente, después de aspirer disolventes inflamables uu otros materiales peligrosos, limpiar el sistema entero completamente segGn descripicién del fabricante. No dejar hunea soluciones peligrosas en el sistema de drenaje. Problemas de seguridad en el nebulizaddor no deberfan ocurrir pero pueden suceder. Suponer, por ejemplo, que S¢ Sivida encajar perfectamente el nebulizador a 1a camara de . prenezela y que se produce un retroceso estando abierta la Buerta del compartimiento de la muestra. El nebulizador podria salir despedido violentamente de la cémara de Prenezcla. Esto podria herir al usuario directamente- 0, oaria golpear aigGn frasco que contuviera un disolvente Poflamabie o cualquier material peligroso e incendiarse o tirar un liquide corrosivo. Moraleja: Estar siempre bien seguro de que el nebulizador esta perfectamente acoplade a la cémara de premezcla. Mantener siempre cerrada la puerta del compartimiento de muestra. Més del 90% de la solucién aspirada por un nebulizador en AA nunca alcanza la llama, Por lo tanto es esencial Sacar la solucién no utilizada de la cémara de premezcla. Esto debe hacerse sin comprometer la hermeticidad del Sistema quemader/cémara de premezcla. Por ello se utilizan trampas de nivel de liquido constante. Si se utiliza e1 sistema de ciclo, asegurarse de que el ciclo se forma y funciona adecuadamente. Algunas veces el liguido de cierre se forma en un recipiente que puede Qcoplarse directamente a la cémara de prenezcla, o en un Tecipiente lejano. Generalmente se utilizan flotadores, detectores y cierres tanto para prevenir el trabajo sin Asquide de cierre en la union, como para asegurar que la109 unién es hermética. Los frascos de drenaje deben estar construidos de material que no reviente en el caso de un retroceso. No utilizar nunca vidrio. Utilizar siempre un recipiente de cuello ancho que permita un escape rapido de cualquier gas explosivo que haya podido quedar atrapado. Colocar el recipiente en un lugar abierto, bien ventilado donde sea claramente visible al usuario del instrumento. Cuando se utilicen disolventes orgénicos inflamables, utilizar el recipiente mis pequefio y vaciarlo con frecuencia. No acumular grandes cantidades de disolvente inflamable. Si es necesario, instalar una ventilacién en ese 4rea. Si se utilizan soluciones de cianuro, asegurarse de que el pH es superior a 7. Sila solucién fuera acida (pH<7) puede expulsar gas cianuro toxico. RADIACION A menudo las llamas, lémparas de cétodo hueco, de descarga sin electrodos y de deuterio eniten radiacion UV peligrosa. Tal radiacién puede producir quemaduras en la piel y fatiga de los ojos, o un dafo permanente en la vista. Una llama de éxido nitroso-acetileno puede emitir altos niveles de radiacién ultravioleta y visible. Cuando se aspira sodio a altas concentraciones puede producirse una llama amarilla muy brillante. Siempre que sea posible, utilizar potasio en vez de sodio como supresor de la ionizacién, ya que el X emite menos intensamente y a longitudes de onda més largas. Para protegerse de los efectos de la radiacién ultravioleta: ~ No mirar nunca directamente a las llamas o fuentes de luz. - Mantener siempre la puerta del compartimiento de muestra cerrada mientras que la llama esté encendida. - Llevar siempre gafas de seguridad que estén garantizadas para la proteccion de luz UV. Las gafas normales no suelen proporcionar una proteccién adecuada.110 DISOLVENTES Cuando se utilicen disolventes inflamables, recordar que los vapores explosives pueden subir hasta 15 metros (50 pies). Recordar también que mientras se aspiran estos disolventes hay materiales peligrosos en 25 cm alrededor de una llama. Mantener el compartimiento de muestra cerrado. Utilizar un disolvente que tenga el punto de ebullicién mas alto de acuerdo con las necesidades analiticas. No dejar nunca recipientes sin tapar, que contengan disolventes inflamables, en el laboratorio, mientras la llama esté encendida. Cuando se nebulice, utilizar un recipiente tapado e introducir el capilar del nebulizador a través de un pequefio agujero en la tapa. Utilizar el volumen més pequefio posible. Suponer, por ejemplo, que la nedida se repite 5 veces, cada una con un periodo’ de integracién de 5 segundos. Esto corresponde a ° menos de 1 minuto de muestreo, y con una aspiracién de 5 ml por minuto, se utilizaré menos de 3 ml de muestra. No hay razon, entonces, para mantener 50 ml de material inflamable a menos de 25 cm de la llama. Cuando el anélisis se haya completado, vaciar, limpiar y rellenar el sistema de drenaje segiin indique el fabricante. SUBPRODUCTOS Es, por supuesto, imposible especificar todos los posibles productos de combustion de una llama. Sin embargo, ‘los andlisis en llama dan lugar a subproductos. Estos pueden ser tnicamente olorosos y desagradables, pero pueden ser también muy téxicos y peligrosos para la salud. Por tanto, cuando se realice algun andlisis, incluso los mas normales, asegurarse siempre de conocer la descomposicion de los reactivos y muestras antes de empezar. Es decir, conocer lo que probablemente se esté produciendo en la llama. ua combustién de los hidrocarburos halogenados, por ejemplo, puede producir vapores muy peligrosos como fosgeno. Recordar que incluso aunque el sistema de ventilacion los esté expulsando del laboratorio, el usuario tiene una responsabilidad legal y moral sobre la exposicion a otras personas a riesgos de toxicidad.DRARBOQAD 8 ee SPAGAA GB. CPO PRAS 2 O29 aaga Gus. 2 & q aaa PROCED’ cor BACION LLevar a cabo siempre una comprobacién de seguridad antes de operar con el instrumento. Los detalles normalmente vienen incluidos en el manual de operacién del fabricante, pero un procedimiento general puede ser el siguiente: 1.- Limpiar el area de trabajo de todo material peligroso y de cualquier cosa que no sea necesaria para el trabajo analitico. 2.- Encender el sistema de ventilacién. 3.~ Realizar una simple prueba de humos en Ja boca de la chimenea. 4.- Colocar la cabeza de quemador adecuada y asegurar cualquier dispositivo de conexién segin las instrucciones del fabricante. 5.~ Asegurarse de que no hay otro equipo en el laboratorio que pueda producir arcos o chispas que podrian incendiar gases inflamables. 6.- Fijar y colocar el nebulizador correctamente en su lugar. 7,~ Asegurarse de que todos los dispositivos de liberacién de presién estén colocados. 8.~ Comprobar el drenaje y llenar la trampa de Liquido. 9.- Cerrar el compartimiento de muestra. 10.- Comprobar 1a linea de gases. Abrir las balas. Poner los reguladores a las presiones recomendadas. 11.~ Ponerse gafas protectoras. 12.- Encender la llama exactamente como describa el manual de operaci6n del fabricante. En el encendido de llama, hay que acentuar de nuevo la importancia de seguir las instrucciones del fabricante. Los procedinientos detallados pueden diferir en algo de un instrumento a otro. El sistema automatico de control de gases simplifica, por supuesto, la rutina de encendido. No obstante, para una llama de aire-acetileno el procedimiento general es el siguiente: 1.~ Realizar la comprobacién mencionada anteriormente.a2 2.- Asegurarse de que se ha fijado la cabeza de aire- acetileno en el quemador. 3.+ Ajustar el quemador a 1a altura recomendada para encender 1a llama. Si el quemador no esta suficientemente aito, puede que no esté 1o suficientemente cerca del encendedor de llama. Esto podria producir una acumulacion explosiva de combustible y oxidante. 4.- Seleccionar 1a posicién "aire" en la valvula de oxidante. Seleccionar la velocidad de flujo segan el valor recomendado. 5.- Ajustar el flujo de combustible segin 1a cantidad recomendada. 6.- Presionar el botén de ignicién. Para encender una llama de éxido nitroso-acetileno, los sistemas autométicos simplenente automatizan el siguiente procedimiento manual: - Primero, llevar a cabo la comprobacién de seguridad. - Segundo, asegurarse de haber colocado 1a cabeza del quemador de éxido nitroso-acetileno en su lugar. - Tercero, encender una llama de aire-acetileno exactamente como se explicé anteriormente, y esperar hasta que arda de forma estable. - Aumentar ahora el flujo de acetileno hasta el valor recomendado por el fabricante. Generalmente este ser& de 2.5 a 3 veces el valor de flujo recomendado para la llama de aire-acetileno. Muchos sistemas de control de gases proporcionan autométicanente la cantidad. adecuada de acetileno. En ese momento la llama debe ser grande y luminosa. - Finalmente, colocar la valvula de selector de oxidante, répidamente, en la posicién de 6xido nitroso. Los aspectos importantes que hay que recordar de este procedimiento son: 1.- No-intentar nunca encender directamente una llama de 6xido nitroso-acetileno. Encender siempre la llama de aire-acetileno y realizar después ¢1 cambio. 2.- Aumentar el flujo de combustible tal y como indique el fabricante.113 3.- Operar RAPIDAMENTE con la vélvula de seleccién de oxidante cuando haya que cambiarlo de aire a éxido nitroso. £1 procedimiento de apagado es muy directo. En los = sistemas de control automatico de gas, presionar la tecla de “apagar llama" ("flame off"). En los sistemas de control manual, un procedimiento general para aire-acetileno es el siguiente: quemado, nebulizando agua u otro disolvente apropiado, durante unos minutos. - cortar el suministro de acetileno cerrando la vAlvula localizada cerca del instrumento. Dejar que la lama se extinga. Esperar unos 20 0 30 segundos mas, 6 para lograr una purga adecuada con el aire todavia @ pasando. ¢q ¢ @ a - Primero, siempre limpiar completamente el sistema de € c q ¢ - A continuacién, cortar el suministro de aire. - Finalmente, cerrar el control de combustible en el teclado del aparato. 2 Cuando haya acabado el trabajo analitico, o al final de un dia de trabajo, SIEMPRE cerrar todas las vélvulas de los gases asi como las balas, y purgar todas las lineas. Om Para apagar las llamas de 6xido nitroso-acetileno, se sigue el camino de vuelta del encendido: - Primero, limpiar el sistema de quemado por completo, como se ha descrito para la llama de aire-acetilenoc. ~ Segundo, colocar la valvula de seleccién de oxidante en la posici6én de aire, RAPIDAMENTE. - Finalmente, dejar quemar la llama de aire-acetileno durante unos 10 segundos, y apagar esta llama segin el método descrito anteriormente. De nuevo, recordar que cuando se acabe con el trabajo analitico, o al final de un dia de trabajo, SIEMPRE cerrar todas las valvulas de gases y purgar todas las lineas. Hay que considerar el mantenimiento conc una de las partes del trabajo de laboratorio. Deserrollar un esquema de manteniniento para cada instrumento de AA, segan el equipo y el servicio, y regirse rigurosamente por este esquena. Por ejemplo, no suponer que las lineas de suministro de gases estén en perfectas condiciones.aa4 comprobar las fugas estrictamente de acuerdo con e1 esquena, utilizando una solucién jabonosa, 0 un detector de fugas comercial. No clvidar las conexiones. De forma similar, incluir el sistema de ventilacion dentro del esquema de mantenimiento. Una simple prueba de humos indicard cual es su funcionamiento. Comprobar el instrumento, Poner particular atencién en todas las uniones y juntas del quemador y camara de premezcla. Asegurarse de que el sistema de drenaje del instrumento est4 en buenas condiciones. No olvidar incluir todos los cables de conexién eléctrica en las comprobaciones regulares. Asegurarse de que los filtres de aire se limpian y cambian con regularidad. @BRBOAD Finalmente, ‘hacer que ingenieros de servivio cualificados comprueben regularmente el instrumento. un buen mantenimiento del lugar debe ser uno de los objetives de un laboratorio. Dentro del contexto de seguridad, un laboratorio limpio y bien organizado suele ser un laboratorio seguro. - Realizar todas las actividades de preparacién de muestras en un lugar completamente separado de los instrumentos. - antes de comenzar un proyecto analitico, asegurarse de que todo lo que no sea necesario para el anélisis se quite de alli. - cuando se acabe el trabajo, colocar todo en su : Sitio. Disponer de todo material no utilizado y soluciones gastadas, de la manera apropiada. No dejar nunca soluciones de referencia o muestras viejas por el laboratorio de AA. = Siempre de que se trate de limpieza y orden, recordar el viejo dicho "un lugar para cada cosa y cada cosa en su lugar". Por ejemplo, no colgar el abrigo o bata de laboratorio en una valvula de cierre de gas. Si ocurre una emergencia ser4 necesario cerrarila répidamente. No se podré hacer si la valvula se esta utilizando cono perchero. E RASAMGLA CADISAS EAE AGMAAGA La practica de la seguridad es esencial en un jaboratorio de absorcién atémica. Deberia escribirse un prograna de seguridad especifico para cada laboratorio. Puede extraerse de la referencia dada por este programa, de GAL ALD & fueLPAAA AG AR AADIAD AAe 2 RRL DD. ae. Bi 2D CA CMO O 2S 82.2 B. 115 los manuales de operacion de los fabricantes, y, por supuesto, de la experiencia préctica de los analistas de laboratorio. Los procedimientos generales deben ser simples y explicarse claramente. Deben tenerse en cuenta todos los riesgos, no pasar nada por alto. Debe indicarse claramente la naturaleza de los peligros; dar instrucciones explicitas de como evitar riesgos; explicar claramente las consecuencias de no seguir las instrucciones. Asegurarse de que el programa de seguridad en AA incluye un procedimiento de emergencia. Distribuir una copia del programa a cada analista y usuario. Asegurar el entrenamiento de nuevo personal y repasar este programa con regularidad. Coneienciar a todo el personal de 1a necesidad de un trabajo seguro. Al comienzo de este programa se sugirié que las situaciones peligrosas en espectroscopia de AA de llana, eran debidas a menudo a falta de conciencia de seguridad. éQue es esta conciencia de seguridad?. Es, por supuesto, un estado mental. Pero, més que eso, es la determinacién de que un laboratorio debe ser un lugar seguro de trabajo. Es un proceso continuo de observacién, reconocimiento y prevencién. = Observar el] laboratorio y todo 1o que haya en su interior con ojos criticos. ~ Reconocer los riesgos potenciales y las situaciones peligrosas de las que hemos hablado. > Actuar inmediatanente para eliminar los riesgos potenciales, y prevenir las situaciones peligrosas. Finalmente, recordar que la seguridad solo puede conséeguirse mediante vigilancia y accién constante.@ @ @e Age as 9 AOA GMS ©. LAB WAO SAS & 2 PAP So EO 7 ALS G BLD 6) PERKIN ELMER VENTAS Y SERVICIOS Espaiia, Portugal, Iberoamérica y Territorios de! Caribe Director Territorial: D. Luis G. Carmona ESPANA Madrid, 28780 D.Lus '@, Garmene ol, ind. de Tres Centos Ronda do Poniorte, 5 Tel: (61) 808 42 16 FAK: (61) 804 04 14 Barcelons, 98017 D. ditto Martinez. General Vives, 25-27 “Tol: (99) 212 22 58. FAK: (88) 212.60 01, Sevilla, 41014 B. José Luis de la Matta ay Rep, Argentina, 93 FR ised Granada, 10008 B.duan uz Polenio ompouter Ruz Rant, 7 ‘etree 61 96 12 FAX: (956) 18.35 68 Bilbao, 42014 . Jests tantocin Av. del Lenencakarl Aguirre, 11 Toi; (04) 447 10.81 FAK: (04) 476 15.69 Yalencta, 46018, Frandisco La. Cruz Manus! Sime, 43 Tel: (96) 878 69 22 FAK: (96) 378 78 03 SERVICIO TECNICO: Tel: (96) $77 23.38. FAK: (89) 877 29.41 Taragora, s90n8 COMERCIAL RAFER Dose M* Lima Boonia, 12 Tee ete) 207400, NGO) 21 7182 aijén, 90214 DisMED D. Javier Mendoza Poig, Promosa, nave 15 TRENANES: Tol: (85) 31 92.14 FAK: (985) 22 1 Bt PORTUGAL, Lisboa, 160° INOTRUENTOS CE LABORATORIO ECIENTIFCOS, .DA D. Jono Costa Rua Dr. Alvare de Casto, 77 Tol: (611) 76 21 72 Sporto. 4000 5 RUMENTOS DE LABORATORIO ECIENTIFIDOS, LOA. Eng Carlos Alves Moreira Av, de Boavista, 80, 3°, Sala 29 oi. (512) 88 75 U3 IBEROAMERICA Y TERRITORIOS DEL CARIBE ARGENTINA SANCO, SA, D. Brung Giuntiat Casila Postal 43 ‘Cottero Central 1000 Buenos Ares Tak: 501 47-0359, FAX: 541 602-0611 BRASIL, PERKIN ELVER INDUSTRIA E COMERCIO LIMTTADA D. Sorgio Dantas Rua Pacou, 76 04139 Sao Paulo/SP ‘Tat: S841 $78.0600 FAK: 5511 276-1864 GENTEC, INSTRUMENTOS CIENTIFICOS LIATT! . Ricardo Genokian Rua Marechal Camara 180, Sala 1017 EP 20020 Alo do vanovoir Tolu: 5521 262-0985 CHILE WEISER ANALITICA LIMITADA . Rlcardo Weissar_ FAX: 562 205-8565 coLomaia SRENTIFICA COLOMBIANA UMITADA Bold, Ree 95590, Bogois ree 0 Tole 671 257-4474 est FAX E71 240 66°2 ‘COSTA RICA ANALITICA DE CENTROAMERICA, S.A. B. Javier F. Vargas 0 ivorava- 2160 San José oe $1-0632, FA Bo 81-0678 MEXICO, PERKIN ELNER DE MEXICO, S.A, 1D. Joaquin Gano Apido, Postal 19-903, México D. ‘Tol: G26 681-7077 FAX: 625 £99-6228 Hethuenros ANAUITICOS SL Castle SB487, Nieto, Line Tol: 5114 48.6517 FAX: 5114 47-1187 PUERTO RICO THE PERKIN ELMER CORPORATION 3. thomas Philips (0, Box 25233, Univ. Station Bio Procras, 00891-3533 Tol: 609 768.3087 FAK: 808 793-7198 VENEZUELA CORFORACION CIENTIFICA VENEZOLANA CA Wan Jasst Aptdo, Postal 3019 Caracas 10108 ‘Tol: S62 241-0002 FAY: 582 241-7824