Anda di halaman 1dari 7

Isolasi steroid dari ekstrak n-heksana dari daun

Saurauia roxburghii
Abstrak
Skrining fitokimia Umum daun Saurauia roxburghii (Actinidiaceae) mengungkapkan
adanya alkaloid, flavonoid, glikosida, O-glikosida, terpenoid, karbohidrat,
steroid, mengurangi gula, tanin, saponin dan phlobatannins yang hadir dalam tanaman ini
sedangkan
glikosida jantung tidak hadir. Dua senyawa steroid diisolasi dari ekstrak n-heksana
daun dari S. roxburghii. Berdasarkan IR bukti spektral,
1
H-NMR dan
13
C-NMR,
struktur ditentukan untuk menjadi stigmasterol (1) dan -sitosterol (2) ini adalah laporan pertama
sejauh
deskripsi kejadian dan rincian spektroskopi senyawa ini dari S. roxburghii
Pengantar
Tanaman telah membentuk dasar dari canggih
sistem pengobatan tradisional yang telah digunakan untuk
ribuan tahun di negara-negara, seperti Cina (Chang
dan Namun, 1986) dan India (Kapoor, 1990). penggunaan Para
tanaman dalam obat tradisional banyak lainnya
budaya telah banyak didokumentasikan. Ini
sistem berbasis tanaman terus memainkan penting
berperan dalam pelayanan kesehatan dan telah diperkirakan oleh
Organisasi Kesehatan Dunia bahwa sekitar 80%
dari penduduk dunia terutama mengandalkan tradisional
obat-obatan untuk perawatan kesehatan utama mereka, sementara tanaman
produk juga memainkan peran penting dalam kesehatan
sistem perawatan sisa 20% dari populasi
terutama yang berada di negara-negara maju (Farnsworth
et al., 1985).
Roxburghii Saurauia dikenal sebagai Singkrang, Sing
Khau (nama Bengali: Pannikomari, Pahari Kadam
atau Bhola Kadam) (Sarder Nasir Uddin, 2006) adalah
pohon cemara milik keluarga Actinidiaceae.
Familiy sinonim: Saurauiaceae. Sinonim dari
tanaman ini adalah Saurauja roxburghii dan Ternstroemia
serrata. Tanaman ini tersebar luas di pesisir
traktat hutan dan bukit Bangladesh dan juga menemukan
di luar Bangladesh seperti Vietnam, Nepal,
India, Myanmar, Thailand, Kamboja, Laos, Cina
(Termasuk Taiwan), Jepang, Malaysia dan spesies
kurang sering terjadi di distrik-distrik yang lebih besar dari Sylhet,
Chittagong dan Bukit Chittagong di Bangladesh

(Sarder, 2006) dan batang dan daun tanaman


banyak digunakan sebagai obat herbal melawan
sejumlah besar penyakit yang parah (Rizwana et al.,
2010) seperti asma, bronkitis, hepatitis B, bisul, dan
saraf pusat depresi dan juga dalam pengobatan
bisul, eksim, epilepsi, Demam, Gout dan Tumpukan
(Sarder, 2006).
Sebagai tanaman ini digunakan secara luas di kami
negara sebagai obat herbal, perlu untuk memiliki
pengetahuan tentang konstituen tanaman dari kami
spesies asli. Penyelidikan fitokimia Sebelumnya
mengakibatkan isolasi asam ursolat, asam corosolic,
Acid 24-hidroksi corosolic, asam maslinic dan 3b, 7b,
24-trihidroksi-urs-12-en-28-oic acid (Mazumder et
al., 2011). Dalam penelitian ini, ekstrak n-heksan yang
daun menjadi sasaran pemisahan kromatografi
untuk membeli dua steroid, termasuk stigmasterol (1) dan
-sitosterol (2) (Gambar 1). Kedua senyawa yang
diisolasi untuk pertama kalinya dari spesies ini

Bahan dan Metode


Koleksi, identifikasi dan persiapan tanaman
bahan
Daun segar dari S. roxburghii dikumpulkan dari kampus Universitas Chittagong, Chittagong di
bulan Januari 2011 itu diidentifikasi oleh. Petugas ilmiah, Sardar Nasir Uddin, Bangladesh
National Herbarium, Dhaka, di mana voucher spesimen (DACB 32.567) telah disimpan.
Ekstraksi dan isolasi
Bubuk daun (1,0 kg) dari S. roxburghii
direndam dalam 3 liter etanol dan kemudian 2 liter
etanol selama 7 hari. Seluruh Campuran kemudian
disaring melalui kertas saring dan filtrat kemudian
menguap di bawah tekanan di (40-50)
o
C menggunakan
a Buchii Rotary Evaporator untuk menyediakan 130 gm dari
konsentrat bergetah dari ekstrak kasar. Sebagian dari
ekstrak etanol (10,5 gm) dilarutkan dalam 90%
etanol. Itu dipartisi dengan n-heksana, kemudian dengan
kloroform (CHCl
3
) Dan akhirnya dengan etilasetat
(EA). Semua ekstrak disaring melalui kapas
pasang diikuti oleh kertas saring Whatman nomor 1 dan
kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotary vacuum evaporator

untuk memberikan n-heksana (2,5 gm), kemudian dengan kloroform


(CHCl
3
) (2,0 gm) dan akhirnya dengan etilasetat (1.0
gm) ekstraktif.
Pemisahan kromatografi
Kolom itu penuh sesak dengan baik TLC kelas
silica gel (gel 60H Kiesel) digunakan sebagai kemasan
material. Sebuah kolom memiliki panjang 40 cm dan 3 cm
diameter dikemas dengan gel silika (70 gm) sampai dengan
ketinggian 23 cm pada tekanan tereduksi. Kolom
dicuci dengan n-heksana untuk memfasilitasi kompak
pengepakan. Sampel disiapkan dengan menyerap
3,5 gram ekstrak larut n-heksana ke silika gel
(Gel 60H Kiesel, mesh 70-230), dibiarkan kering dan
kemudian diterapkan di atas lapisan adsorben.
Kolom kemudian dielusi dengan n-heksana diikuti
dengan campuran n-heksana dan diklorometana dan
maka diklorometana dan metanol (Stahl, 1969).
Polaritas secara bertahap meningkat dengan menambahkan
peningkatan proporsi diklorometana dan
metanol. Sebanyak 30 fraksi dikumpulkan masing-masing
dalam 100 ml gelas.
Itu
Fraksi 15 sampai 17 dari minyak mentah
ekstrak n-heksana menjadi sasaran Sub-Kolom
Chromatography) (Kieselgel 60, mesh 70-230)
untuk fraksinasi lebih lanjut. Kolom dielusi
dengan campuran n-heksana, etilasetat dan metanol
meningkatkan polaritas untuk memberikan 27 fraksi.
Fraksi-10 ditemukan untuk menghasilkan kristal di dinding
gelas. Kristal dicuci dengan n-heksana
hati-hati. Sebagai solusi hasil ibu diperoleh
meninggalkan kembali kristal berbentuk jarum yang
diisolasi sebagai senyawa 1.
Fraksi kolom 12-13 mentah n-heksana
ekstrak bulked bersama-sama karena mereka menunjukkan mirip
Fitur TLC. Fraksi campuran ditemukan untuk menghasilkan
kristal di dinding gelas. Kristal yang
dicuci dengan n-heksana dengan hati-hati. Akibatnya ibu
solusi diperoleh leavingback yang berwarna tajam
kristal. Kristal yang tajam ini memberikan senyawa
2.
Uji alkohol
Empat gram Ceric ammonium nitrat adalah
dilarutkan dalam 10 ml 2 N HNO

3
, Pada pemanasan ringan. A
beberapa kristal dari senyawa 1 dan 2 dilarutkan dalam
0,5 mL dioksan. Larutan ditambahkan 0,5 mL
Ceric dari amonium nitrat reagen dan diencerkan sampai 1
mL dengan dioksan dan terguncang dengan baik. Kedua senyawa
1 dan 2 dikembangkan kuning ke warna merah menunjukkan
adanya gugus hidroksil beralkohol (Harborne,
1998).
Uji steroid
Reaksi Salkowski
Beberapa kristal senyawa 1 dan 2 adalah
dilarutkan dalam kloroform dan beberapa tetes
asam sulfat pekat ditambahkan ke
solusi, kedua senyawa 1 dan 2 membentuk kemerahan
warna dalam lapisan kloroform atas (Harborne, 1998)
menunjukkan adanya steroid.
Reaksi Liebermann BurchardBeberapa kristal senyawa 1 dan 2 adalah
dilarutkan dalam kloroform dan beberapa tetes
asam sulfat pekat yang ditambahkan ke dalamnya diikuti
dengan penambahan 2-3 tetes anhidrida asetat. Di
hal ini kedua senyawa 1 dan 2 berubah menjadi violet
Warna hijau biru dan akhirnya terbentuk yang menunjukkan
kehadiran steroid (Harborne, 1998).
Karakterisasi spektroskopi
Metode spektroskopi yang berbeda digunakan untuk
menjelaskan struktur senyawa terisolasi dan 1
2. Diantara teknik spektroskopi IR,
1
H dan
13
C-NMR dilakukan. Spektrum inframerah
tercatat pada Shimadzu afinitas-1,
1
H dan
13
CSpektrum NMR direkam menggunakan CDCl
3
sebagai pelarut
pada BRUKER NMR DBX-400 MHz spektrometer,
Divisi penelitian analitik, Bangladesh Dewan
Penelitian Ilmiah dan Industri (BCSIR), Dhaka.
Stigmasterol (1): jarum kristal putih. IR
(KBr)

max
/ Cm
-1
: 3446,79, 2935,66, 2866,22, 1.653,0,
1458,18, 1375,25, 1055,06, 883,4.
1
HNMR (400
Hasil dan Diskusi
Senyawa 1 adalah jarum berbentuk kristal putih dengan titik leleh 138-140oC yang memberikan
hasil positif pada Salkowski dan Lieberman Burchard-tes untuk steroid. Spektrum IR (dalam
KBr) senyawa 1 pameran pita serapan karakteristik pada 3446,79 cm-1 adalah karakteristik dari
OH peregangan. Serapan pada 2935,66 dan 2866,22 cm-1 adalah karena alifatik CH peregangan.
Frekuensi lainnya termasuk 1653,00 cm-1 sebagai akibat C = C peregangan namun Band ini
lemah di 1.458,18 cm-1 adalah frekuensi untuk siklik (CH2) N dan 1375,25 cm-1 untuk CH
bending. Frekuensi serapan pada 1055,06 cm-1 disebabkan oleh CO peregangan. Spektrum 1H
NMR menunjukkan dua multiplet proton pada 3,53 dan 5.36 yang khas untuk H3 dan H6 dari
inti steroid. Dua olefin proton muncul sinyal downfield sebagai karakteristik pada 5.16 (1H,dd,
J = 15,0, 6,5 Hz) dan 5,03 (1H, dd, J = 15,0, 9,0 Hz) pada 1H NMR yang identik dengan
pergeseran kimia H22 dan H23 masing-masing dari stigmasterol. Spektrum juga ditampilkan dua
tiga singlet proton pada 1,00 dan 0,67 dialihkan untuk H19 dan H18 masing-masing. Selain itu,
dua doublet pada 0,82 (3H, d, 7,2 Hz) dan 0,80 (3H, d, 7,2 Hz) bisa dianggap berasal dari dua
kelompok metil pada H26 dan H27 dan lain doublet tiga proton pada 0,91 (3H, d, 6,8 Hz)
untuk H21. 13 C NMR menunjukkan 29 karbon termasuk karbon oxymethine pada 71 85,
adalah karakteristik spirostene dua karbon olefin muncul di 138,33 dan 129,0 yang identik
dengan pergeseran kimia dari C22 dan C23 masing-masing dari stigmasterol. Jika kita
membandingkan DEPT 90 dan 135 percobaan selama 1 maka kita menegaskan bahwa senyawa
ini memiliki enam metal, kelompok, sembilan metilen, sebelas methine (CH) dan tiga karbon
kuaterner (Cq). enyawa 1 diidentifikasi sebagai stigmasterol.
Senyawa 2 diperoleh sebagai kristal putih
senyawa dengan titik leleh 135-137
o
C yang
memberi Salkowski positif dan Lieberman Burchardmenguji steroid. Spektrum IR (dalam KBr) dari
senyawa 2 pameran pita serapan karakteristik
pada 3421,72 cm
-1
yang OH peregangan. Penyerapan
pada 2935,66 dan 2866,22 cm
-1
adalah karena alifatik CH
peregangan. Frekuensi lainnya termasuk 1653,00 cm
-1
sebagai akibat C = C peregangan namun Band ini
lemah di 1.458,18 cm
-1

adalah frekuensi membungkuk untuk


siklik (CH
2
) N dan 1375,25 cm
-1
untuk CH bending.
Frekuensi di 1.062,78 cm
-1
karena CO peregangan.
Frekuensi penyerapan ini mirip penyerapan
frekuensi diamati untuk -sitosterol (Patra et al.,
2010). Senyawa 2 diidentifikasi sebagai -sitosterol oleh
perbandingan
1
H dan
13
C NMR spektrum dengan orang-orang
dari 1. data NMR yang sangat mirip dengan
senyawa 1 kecuali dua proton olefin yang
absen sementara dua sinyal metilen hadir untuk
H22 dan H23 dan menunjukkan dua satu-proton multiplet
pada 3,51 ppm dan 5,34 ppm khas untuk H3 dan
H6 dari inti steroid. Itu
13
C NMR
menunjukkan 29 karbon termasuk karbon oxymethine
sinyal pada 71 84 dan dua karbon olefin pada 140 80
dan 121 73. The jenuh ikatan ganda pada
140,80 dan 121,73 adalah karakteristik spirostene
(Agarwal et al., 1985) dan dua karbon olefin yang
absen di 138,33 dan 129,0 sementara dua metilen
sinyal karbon hadir pada 34,0 dan 26,16 untuk
C22 dan C23. Jika kita membandingkan DEPT 135 & DEPT
90 percobaan selama 2 maka kita mengkonfirmasi bahwa ini
Senyawa ini memiliki enam metil (CH
3
) Kelompok,
sebelas metilen (CH
2
) Kelompok, sembilan methine (CH)
kelompok dan tiga karbon kuaterner (C) kelompok.
Tugas-tugas ini berada dalam perjanjian baik untuk
struktur -sitosterol (Habib et al, 2007;. Pateh
et al, 2009.; Patra et al, 2010.; Ahmed et al, 2010.;
Trivedi dan Choudhrey, 2011).

Kesimpulan
Dari temuan di atas, stigmasterol dan
-sitosterol diisolasi dari ekstrak n-heksana dari
daun S.roxburghii dan struktur kimia
dijelaskan masing-masing. Hal itu dilakukan dengan cara
berbagai fisik (ekstraksi pelarut, TLC, CC)
dan teknik spektral