Optimization of Solid-Liquid Extraction of Antioxidants

from Black Mulberry Leaves by Response Surface

Methodology
Ekstraksi komponen aktif dari sumber alami tergantung pada faktor-faktor yang berbeda.
Pengetahuan tentang efek dari parameter ekstraksi yang berbeda berguna untuk optimasi proses,
serta untuk kemampuan untuk memprediksi hasil ekstraksi. Tujuan dari penelitian ini adalah
untuk mengetahui pengaruh konsentrasi pelarut (etanol / air 40-80%, berdasarkan volume), suhu
(40-80 C) dan pelarut / baku rasio bahan (10-30 mL / g) pada hasil ekstraksi senyawa fenolik,
flavonoid dan aktivitas antioksidan dari daun murbei hitam (Morus nigra L.). Nilai-nilai
eksperimental total konten fenolik berada di kisaran 18,6-48,7 mg setara asam klorogenat per g
daun kering dan jumlah flavonoid dalam kisaran 6,0-21,4 mg setara rutin per g daun kering.
Aktivitas antioksidan dinyatakan sebagai konsentrasi penghambatan 50% (IC50) berada di
kisaran 0,019-0,078 mg ekstrak murbei per mL. Metodologi respon permukaan (RSM)
digunakan untuk menentukan kondisi ekstraksi optimal dan untuk mengetahui pengaruh variabel
yang berbeda pada sifat diamati dari ekstrak daun murbei. Hasil penelitian menunjukkan cocok
untuk model yang diusulkan (R2> 0,90). Kondisi optimal untuk memperoleh hasil ekstraksi
tertinggi fenolat dan flavonoid berada dalam kisaran eksperimental. Nilai-nilai eksperimental
setuju dengan yang diprediksikan, sehingga menunjukkan kesesuaian model yang digunakan dan
keberhasilan RSM dalam mengoptimalkan kondisi ekstraksi diselidiki.

Pendahuluan
Antioksidan diet merupakan komponen penting karena mereka melindungi terhadap radikal
bebas seperti spesies oksigen reaktif dalam tubuh manusia. Radikal bebas yang diketahui
bertanggung jawab untuk penyakit degeneratif penuaan dan diakui sebagai faktor utama
penyebab kanker, gangguan kardiovaskular dan diabetes (1). Dalam beberapa dekade terakhir,
buah-buahan, daun, buah dan ekstrak daun dan biji-bijian telah menerima banyak perhatian
sebagai sumber zat bioaktif seperti antioksidan, antimutagens dan antikarsinogenik (2-4). Total
aktivitas antioksidan tanaman pangan merupakan hasil kegiatan individu dari masing-masing
senyawa antioksidan hadir seperti vitamin C, tokoferol, flavonoid, antosianin dan asam fenolat,
menjadi fitokimia utama yang bertanggung jawab untuk aktivitas antioksidan dari bahan
tanaman (5,6) .Fenolat tanaman secara struktural diversifikasi kelas fitokimia dengan aktivitas
antioksidan yang tinggi. Naczk dan Shahidi (7) dilaporkan dalam review mereka bahwa fakta ini
mempengaruhi pilihan sulit metode standar ekstraksi.
Efisiensi ekstraksi umumnya fungsi dari kondisi proses. Ekstraksi kuantitatif konstituen aktif
merupakan langkah penting sebelum analisis. Jumlah analit diekstrak dari matriks yang berbeda
tergantung pada jenis matriks, teknik dan kondisi ekstraksi (8). Banyak faktor, seperti
konsentrasi pelarut, waktu ekstraksi, suhu, pH, cairan / rasio solid dan ukuran partikel, secara
signifikan dapat mempengaruhi ekstraksi cair-padat (9-14). Peran positif atau negatif dari
masing-masing faktor dalam transfer massa proses ini tidak selalu jelas, karakteristik kimia
pelarut dan struktur dan komposisi produk alam yang beragam memastikan bahwa setiap materi
atau sistem pelarut menunjukkan perilaku yang berbeda, yang tidak dapat diprediksi (15).
Metodologi respon permukaan (RSM) adalah metode statistik yang menggunakan data
kuantitatif dari desain eksperimental yang tepat untuk menentukan dan sekaligus memecahkan
persamaan multivariat. Persamaan ini dapat grafis direpresentasikan sebagai permukaan respon
yang dapat digunakan dalam tiga cara: (i) untuk menggambarkan bagaimana variabel uji
mempengaruhi respon, (ii) untuk menentukan keterkaitan antara variabel tes, dan (iii) untuk
menggambarkan gabungan pengaruh dari seluruh variabel uji pada respon (16).
Mulberry merupakan tanaman daun yang tumbuh cepat yang tumbuh di bawah kondisi iklim
yang berbeda, yaitu tropis, subtropis dan sedang (17). Hal ini bernilai untuk dedaunan, yang
merupakan pakan utama untuk ulat sutra. Daun bergizi, lezat dan tidak beracun, dan dinyatakan
untuk meningkatkan produksi susu ketika diberikan kepada hewan perah (18). Berbagai

penelitian telah menyelidiki berbagai properti dari buah-buahan utuh murbei, ekstrak buah
murbei, daun murbei dan minyak biji mengkudu. Gecgel et al. (2) melaporkan bahwa benih
murbei hitam terdiri dari 27,5-33,0% dari minyak mentah, 20,2-22,5% protein kasar, 3,5-6,0%
abu, 42,4-46,6% karbohidrat dan 112,2-152,0 mg dari total fenolat per 100 g biji murbei.
Arabshahi-Delouee dan Urooj (19) mempelajari sifat antioksidan dari berbagai ekstrak pelarut
dari daun murbei dan menyatakan bahwa ekstrak metanol, dengan jumlah tertinggi dari total
fenolat, adalah antioksidan yang paling ampuh dalam semua tes yang digunakan. Dalam studi
lain di mana komposisi kimia mulberry putih, merah dan hitam dibandingkan, dinyatakan bahwa
total fenolik dan flavonoid hasil tertinggi diamati pada murbei hitam (20). Namun, untuk
pengetahuan kita, ada beberapa laporan tentang optimalisasi ekstraksi daun murbei (21,22), dan
ini adalah studi pertama pada optimalisasi kondisi ekstraksi senyawa fenolik dan aktivitas
antioksidan tanaman murbei ditanam di Serbia dan tengah Balkan daerah. Informasi ini akan
menjadi nilai yang cukup untuk petani komersial pohon murbei atau industri farmasi untuk
potensi produksi suplemen murbei.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan dampak dari parameter diselidiki (suhu,
cairan / rasio padat dan konsentrasi pelarut) pada aktivitas antioksidan dari ekstrak dan hasil
ekstraksi senyawa fenolik dari daun murbei hitam, dan untuk mendapatkan permukaan respon
model untuk hasil ekstraksi dari total fenolat dan flavonoid total, serta untuk penentuan aktivitas
antioksidan dari ekstrak murbei.
Bahan dan Metode
Kimia dan reagen
The 1,1-difenil-2-Pikril-hydrazylhydrate (DPPH) dan Folin-Ciocalteu reagen yang dibeli dari
Sigma-Aldrich-GmbH, Sternheim, Jerman. Asam klorogenat dan rutin dibeli dari Sigma-Aldrich,
St Louis, MO, USA. Aluminium klorida hexahydrate, anhidrat natrium karbonat dan natrium
asetat trihidrat yang dibeli dari Merck (Darmstadt, Jerman). N2 Komersial (Messer, Novi Sad,
Serbia) digunakan. Semua bahan kimia dan reagen lain dari kelas reagen analitis.
preparasi sampel
Dalam penelitian ini bahan tanaman kering digunakan . Spesimen Voucher ( Morus nigra L. No
2-1753 , Rimski [ an ~ evi , Novi Sad , Serbia , UTM 34TDR2 01 ) dikonfirmasi dan disimpan di

Herbarium Departemen Biologi dan Ekologi ( BUNS Herbarium ), Fakultas Alam Ilmu,
Universitas Novi Sad , Serbia ( 23 ). Sampel daun murbei yang dikeringkan secara alami ( di
tempat teduh dan dalam draft ) selama satu bulan. Segera setelah pengeringan, sampel daun yang
diproses , dan kemudian ditumbuk dalam blender sebelum ekstraksi. Ukuran partikel ditentukan
dengan menggunakan saringan set ( Erweka, Munich, Jerman ), dan rata-rata ukuran partikel
adalah ( 0,31 0,03 ) mm. Sampel tanaman ( 10 g ) diekstraksi menggunakan pelarut komposisi
yang berbeda ( etanol / air 40-80 % , dengan volume), pada suhu 40-80 C , dan pelarut / rasio
bahan baku dari 10-30 mL / g . Proses ekstraksi dilakukan dengan menggunakan termostat mandi
( Laborgertebrse GmbH , Burladingen , Jerman ) . Ekstrak yang diperoleh disimpan dalam
termos , diisi dengan N2 dan disimpan pada suhu 4 C untuk mencegah kerusakan oksidatif
sampai analisis .
Penentuan senyawa antioksidan
Isi dari total fenolat (TP) dalam ekstrak ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteu (24,25), dan
dinyatakan sebagai massa (dalam mg) setara asam klorogenat (CAE) per massa (dalam g) murbei
kering daun. Campuran reaksi dibuat dengan mencampurkan 0,1 mL larutan etanol ekstrak cair
(5 mg daun kering per mL), 7,9 mL air suling, 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteu dan 1,5 mL dari
20% natrium karbonat. Setelah 1 jam, absorbansi pada 750 nm diukur terhadap kosong, yang
telah disiapkan dengan cara yang sama, dengan mengganti ekstrak dengan air suling. Tes
rangkap tiga dilakukan untuk setiap sampel. Isi dari total flavonoid ( TF ) ditentukan dengan
aluminium klorida assay colourimetric ( 26 ) menggunakan rutin sebagai standar , dan itu
dinyatakan sebagai massa ( dalam mg) setara rutin ( RE ) per massa (dalam g ) daun murbei
kering . Flavonoid dari ekstrak mulberry diekstraksi dengan menggunakan prosedur berikut : 1
mL ekstrak cairan etanol murbei diuapkan dan dilarutkan dalam 2 ml media ekstraksi ( 70 % ,
volume , metanol , 5 % , dengan volume, asam asetat dan 25 % , dengan volume, air suling )
pada suhu kamar selama 60 min.168 M. RADOJKOVI ] et al : . Antioksidan Ekstraksi dari daun
mulberi hitam , Food Technol . Biotechnol . 50 ( 2 ) 167-176 ( 2012 ) Larutan yang dihasilkan
disaring melalui kertas Whatman no . 4 dan volume filtrat telah disesuaikan sampai 10 mL .
Probe disiapkan dengan mencampur 5 mL ekstrak , 1 mL air suling dan 2,5 mL larutan AlCl 3
( 26,6 mg AlCl3 6H2O dan 80 mg dari CH3COONa dilarutkan dalam 20 mL air suling ) .
Penyelidikan kosong disiapkan dengan mengganti larutan AlCl3 dengan air suling . Absorbansi

probe dan penyelidikan kosong diukur langsung pada 430 nm. Tes rangkap tiga yang dilakukan
untuk setiap sampel .