i

LAPORAN AKHIR

COCO-BLOOD: MODIFIKASI MEDIA KULTUR CEPAT, SPESIFIK, DAN SENSITIF

UNTUK DETEKSI CEPAT BAKTERI MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
BIDANG KEGIATAN:
PKM-PENELITIAN

Diusulkan oleh:
Dina Fauziah (105070100111006/Angkatan2010)
Durrotul Ikrimah (0910710007/Angkatan2009)
Anisful Lailil Munawaroh (105070201131005/Angkatan2010)
Kaorie Bunga Saviestya (115070100111051/Angkatan2011)
Putri Shafarina (115070100111086/Angkatan2011)

UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2013
i

ii
HALAMAN PENGESAHAN
USULAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA
1. Judul Kegiatan
:
Coco-Blood: Modifikasi Media Kultur Cepat, Spesifik, dan Sensitif untuk deteksi cepat bakteri
Mycobacterium tuberculosis
2. BidangKegiatan : () PKM-P
( ) PKM-K ( ) PKM-KC
( ) PKM-T
( ) PKM-M
3. Ketua Pelaksana Kegiatan
a. Nama Lengkap
: Dina Fauziah
b. NIM
: 105070100111006
c Jurusan
: Pendidikan Dokter
d. Universitas
: Universitas Brawijaya
e. AlamatRumah dan No Tel./HP
: JalanTirtomulyo V/2, Malang
f. Alamat email
: dinafauziah_andien@yahoo.com
4. Anggota Pelaksana Kegiatan/Penulis : 4 (empat) orang
5. Dosen Pendamping
a. Nama Lengkap dan Gelar
: dr. Yuanita Mulyastuti
b. NIDN
: 0009088205
c. AlamatRumah dan No Tel./HP
: Jl Tata Surya III no 12 A, Dinoyo
Malang/08125257578
6. Biaya Kegiatan Total Dikti
: Rp 9.280.000,00
7. Jangka Waktu Pelaksanaan
: 4 bulan
Menyetujui, Malang, 20 Agustus 2013
Ketua Pelaksana Kegiatan

Dina Fauziah
NIM. 105070100111006
Dosen Pembimbing

dr. Yuanita Mulyastuti

NIDN.0009088205

ii

iii
ABSTRAK
Tuberkulosis (TB) masih menjadi masalah kesehatan utama di Indonesia. Bahkan, Indonesia merupakan
salah satu dari 10 negara dengan kasus TB tertinggi di dunia. Tuberkulosis merupakan penyakit yang
disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Selama ini yang menjadi baku emas diagnosis TB adalah
media Lowenstein Jensen (LJ) namun pada praktiknya penggunaan media kultur LJ membutuhkan waktu yang
lama untuk menumbuhkan Mtb yaitu sekitar 2 sampai dengan 8 minggu. Penelitian ini bertujuan untuk
mengembangkan media Coco-Blood sebagai media kultur baru untuk penegakan diagnosis TB yang lebih cepat,
spesifik, dan sensitif. Media Coco-Blood terdiri dari air kelapa muda, agar darah, darah domba dan Malachite
Green. Penelitian ini membandingkan sampel sputum pasien tuberkulosis dan sampel bakteri kontrol standar
WHO H37RV. Sampel ditanam pada media LJ sebagai media kultur yang menjadi baku emasdan media
modifikasi Coco-Blood. Pengamatan secara makroskopis dilakukan selama 8 minggu dan koloni yang muncul
dikonfirmasi dengan pewarnaanZiehl Nielsen. .Dari hasil analisis didapatkan pertumbuhan Mtb lebih cepat dan
bermakna secara statistik (p < 0,001), serta tingkat spesifisitas media lebih tinggi (p < 0,05) sedangkan
sensitivitas media tidak bermakna secarra statistik. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa media CocoBlood dapat menumbuhkan bakteri mtb lebih cepat dan spesifik dibandingkan media LJ, serta memiliki
sensitifitas yang sama baiknya dengan media LJ sehingga perlu diperhitungkan sebagai media alternatif untuk
menumbuhkan Mtb. Komposisi yang sederhana merupakan salah satu keunggulan media Coco-Blood sehingga
mudah diaplikasikan pada laboratorium dengan fasilitas yang terbatas di Indonesia. Penelitian lebih lanjut
masih diperlukan untuk meningkatkan sensitivitas medium ini.
Kata Kunci : Coco-Blood, Lowenstein Jensen, Mycobacterium tuberculosis

iii

iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur ke hadirat Allah SWT atas berkat dan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan proposal
penelitian dengan judul Coco-Blood: Modifikasi Media Kultur Cepat, Spesifik, dan Sensitif untuk deteksi cepat
bakteri Mycobacterium tuberculosis.
Ketertarikan penulis akan topik ini didasari fakta tuberkulosis merupakan suatu penyakit menular yang menjadi
perhatian utana di dunia dalam hal peningkatan prevalensi dan eradikasinya sehingga dibutuhkan metode deteksi yang
cepat dan tepat.
Melalui tulisan ini, penulis mengucapkan terima kasih dan penghargaan kepada :
1. Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya, Malang
2. Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Dr.dr. Karyono Mintaroem, SpPA
3. Pembantu Dekan III dr. Bambang Prijadi, MS
4. dr. Yuanita Mulyastuti selaku dosen pembimbing yang sangat membantu dalam member arahan dan koreksi
yang sistematis.
5. Orang tua kami yang selalu memberi dukungan baik lahir maupun batin.
6. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu atas segala bantuannya dalam penyelesaian
pelaksanaan penelitian ini.
Penulis telah mengerahkan segala kemampuan untuk melaksanakan penelitian ini dengan melakukan yang

terbaik, dengan harapan adanya media kultur bakteri modifikasi Coco-Blood yang dapat menjadi salah satu
strategi sarana diagnostik tuberkulosis yang cepat, spesifik dan sensitif, serta praktis dalam pelaksanaannya,
sehingga dapat bermanfaat di masyarakat, namun penulis menyadari bahwa karya tulis ini masih jauh dari sempurna.
Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun agar penelitian ini dapat bermanfaat bagi
semua orang.

Malang, 20 Agustus 2013

Penulis

iv

v
DAFTAR ISI
HALAMAN KULIT MUKA..................................................................................................................................
i
HALAMAN IDENTITAS DAN PENGESAHAN.................................................................................................
ii
ABSTRAK................................................................................................................................................................
iii
KATA PENGANTAR..............................................................................................................................................
iv
DAFTAR ISI............................................................................................................................................................
v
DAFTAR GAMBAR...............................................................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL.....................................................................................................................................................
vii
I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Masalah
............................................................................................................................................................................
1
1.2 Perumusan Masalah
............................................................................................................................................................................
1
1.3 Tujuan
............................................................................................................................................................................
1
1.4 Luaran yang Diharapkan
............................................................................................................................................................................
2
1.5 Kegunaan Program
............................................................................................................................................................................
2
II. TINJAUAN PUSTAKA......................................................................................................................................
2
2.1 Definisi, Etiologi, danPatofisiologi
............................................................................................................................................................................
2
2.2 Mycobacterium tuberculosis.........................................................................................................................
2
2.3 Pemeriksaan Bakteriologik...........................................................................................................................
2
2.4 Media Lowenstein Jensen (LJ).....................................................................................................................
3
2.5 Coco-Blood
............................................................................................................................................................................
3
III. METODE PENELITIAN.................................................................................................................................
4
3.1 Rancangan Penelitian
............................................................................................................................................................................
4
3.2 Variabel Penelitian
v

vi
............................................................................................................................................................................
4
3.3 Objek dan Sampel
............................................................................................................................................................................
5
3.4 Metode Penelitian
............................................................................................................................................................................
5
3.5 Prosedur Pengumpulan dan Analisis Data
............................................................................................................................................................................
5
IV. PELAKSANAAN PROGRAM.........................................................................................................................
5
4.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan
............................................................................................................................................................................
5
4.2 Tahapan Pelaksanaan / Jadwal Faktual Pelaksanaan
............................................................................................................................................................................
6
4.3 Instrumen Pelaksanaan
............................................................................................................................................................................
6
4.4 Rekapitulasi Rancangan dan Realisasi Biaya
............................................................................................................................................................................
6
V. HASIL DAN PEMBAHASAN...........................................................................................................................
7
5.1 Kecepatan Pertumbuhan
............................................................................................................................................................................
7
5.2 Sensitivitas
............................................................................................................................................................................
7
5.3 Spesifisitas
............................................................................................................................................................................
8
VI. KESIMPULAN DAN SARAN.........................................................................................................................
8
6.1 Kesimpulan
............................................................................................................................................................................
8
6.2 Saran
............................................................................................................................................................................
9
VII. DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................................................................
9
LAMPIRAN
............................................................................................................................................................................
9

vi

vii

DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.Mycobacterium tuberculosis dengan pewarnaan Ziehl-Nieelsen.............................................................
3
Gambar 2.Koloni Mycobacterium Tuberculosis pada
Media Lowenstein Jensen.......................................................................................................................................................
3
Gambar 3.Alur Penelitian.......................................................................................................................................................
5
Gambar 4.Kecepatan Pertumbuhan Mtb.................................................................................................................................
7

vii

viii

DAFTAR TABEL

Tabel 1.Pembacaan hasil pewarnaan Ziehl Neelsen..................................................................................................

3
Tabel 2.Jadwal Faktual..............................................................................................................................................
6
Tabel 3.Anggaran Dana.............................................................................................................................................
6
Tabel 4.Tingkat Sensitivitas.......................................................................................................................................
6
Tabel 5.Tingkat Spesifisitas.......................................................................................................................................
8

viii

ix

ix

1
I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Tuberkulosis (TB) adalah penyakit menular yang disebabkan oleh bakteri Mycobacterium tuberculosis
(Price dan Wilson 2006).Hingga saat ini TB masih menjadi masalah kesehatan dunia yang belum dapat
terselesaikan. Bahkan, WHO memperkirakan antara tahun 2002 sampai 2020 secara total sepertiga populasi di
dunia pernah terinfeksi TB dan 8,7 juta merupakan kasus baru (penderita TB aktif) dan tiap tahunnya terdapat
1,7 juta meninggal karena TB (Muhammad, 2010). Indonesia memiliki prevalensi TB tinggi dan masih menjadi
permasalahan kesehatan utama. Indonesia termasuk dalam 10 negara dengan beban TB terbanyak di dunia.
Seperti dilaporkan oleh Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) dalam Global Report tahun 2011menyatakan
bahwa Indonesia memiliki total kasus tuberkulosis baru sebanyak 450 ribu per tahun dan prevalensi sekitar 690
ribu per tahun (Ditjen PPPL, 2012).
Sampai saat ini diagnosis laboratorium penyakit tuberkulosis masih merupakan masalah yang penting di
Indonesia. Padahal diagnosis kasus tuberkulosis sangat penting untuk mematahkan rantai penularan penyakit
dan menurunkan angka kesakitan dan kematian akibat tuberkulosis. Hal ini disebabkan oleh karena penularan
tuberkulosis yang sangat cepat pada orang-orang di sekitar penderita dan progresivitas lanjut yang dapat
mengakibatkan kondisi pasien yang lebih berat.Kultur basil tahan asam atau Mycobacterium tuberculosis dari
dahak penderita merupakan baku emas untuk penegakan diagnosa TB saat ini. Media yang umum digunakan
adalah media Lowenstein Jensen (LJ) yaitu media berbasis telur yang digabungkan dengan penggunaan
elektrolit dan malachite green direkomendasikan sebagai isolasi, kultur dan studi kerentanan terhadap obat
(Coban et al, 2006).Kemunculan koloni makroskopis Mycobacterium tuberculosis pada media LJ timbul antara
minggu ke 2 sampai minggu ke 6 dan hasil kultur negatif baru bisa dinyatakan setelah 8 minggu waktu kultur.
Media modifikasi Coco-Blood berbahan dasar coconut atau air kelapa muda, darah domba, agar darah
(blood agar), dan malachite green. Darah domba mengandung hematin yang merupakan sumber nutrisi yang
sangat kaya dan biasa digunakan untuk mempercepat pertumbuhan dari beberapa jenis bakteri (Drancourt et al,
2003). Studi yang dilakukan Michael Drancourt dan Didier Raoult menunjukkan bahwa penggunaan agar darah
sebagai media kultur Mycobacterium tuberculosis ini dapat menghemat waktu dan biaya, lebih sensitif,
sehingga media agar darah ini berpotensi untuk menggantikan telur sebagai sumber nutrisi bagi bakteri
(Drancourt et al, 2007). Air kelapa muda merupakan cairan steril yang dihasilkan oleh endosperma kelapa dan
memiliki kandungan nutrisi yang kaya (Kapoor, 2001). Air kelapa mengandung karbohidrat yang mudah
terasimilasi dalam jumlah cukup, banyak asam amino esensial, sedikit lemak, elektrolit dan vitamin dalam
jumlah yang memadai, sehingga dapat berperan sebagai komponen media kultur bakteria yang sangat baik
(Adolf et al, 2001). Penelitian oleh Basaca et al. (2001) berhasil mengisolasi Mycobacterium tuberculosis pada
media Coconut water egg malachite green medium. Pada penelitian ini pada media kultur darah ditambahkan
Malachite green yang memiliki sifat bakteriostatik terhadap bakteri lain dapat diinkorporasikan ke dalam media
tanpa menghambat pertumbuhan basil tuberkel (Basaca, 2001).
Oleh karena itu, dengan adanya media kultur bakteri modifikasi Coco-Blood diharapkan dapat menjadi
salah satu strategi sarana diagnostik tuberculosis yang cepat, spesifik dan sensitifm serta praktis dalam
pelaksanaannya, sehingga dapat bermanfaat di masyarakat.
1.2 Rumusan Masalah
Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah :
1. Apakah media kultur Coco-Blood dapat digunakan untuk menumbuhkan bakteri Mycobacterium
tuberculosis?
2. Apakah media kultur Coco-Blood efektif untuk memperpendek durasi waktu yang dibutuhkan untuk
kultur bakteri Mycobacterium tuberculosis dibandingkan dengan medium LJ yang lazim digunakan?
3. Bagaimanakah komposisi media kultur alternatif yang ideal untuk penegakan diagnosis tuberkulosis
yang lebih cepat, sensitif dan spesifik?
1.3 Tujuan
Umum: Membuktikan kegunaan media kultur Coco-Blood kombinasi air kelapa, agar darah, darah domba dan
malachite green dalam menumbuhkan bakteri Mycobacterium tuberculosis
Khusus: Membuktikan bahwa media kultur Coco-Blood dapat digunakan untuk menumbuhkan bakteri
Mycobacterium tuberculosis
1

2
1.

Membuktikan efektifitas media kultur Coco-Blood dalam memperpendek durasi waktu yang
dibutuhkan untuk kultur bakteri Mycobacterium tuberculosis dari sampel sputum pasien.
2. Menemukan komposisi media kultur alternatif yang ideal untuk penegakan diagnosis tuberkulosis yang
lebih cepat, spesifik dan sensitif
1.4 Luaran yang Diharapkan
Luaran yang diharapkan berupa paten dan publikasi jurnal ilmiah
1.5 Kegunaan
Manfaat Keilmuan:
Dapat dijadikan sebagai dasar teori untuk menambah wawasan ilmu pengetahuan sekaligus sebagai dasar untuk
pengembangan penelitian selanjutnya dalam bidang kesehatan, khususnya tentang media kultur untuk
pertumbuhan bakteri Mycobacterium.
Manfaat Aplikatif:
Dapat dijadikan sebagai alternatif media kultur bakteri Mycobacterium yang lebih cepat, spesifik, dan sensitif
yang mudah diaplikasikan pada masyarakat.
II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Definisi, Etiologi, dan Patofisiologi
Tuberkulosis merupakan penyakit menular langsung yang disebabkan oleh bakteri Mycobacterium
tuberculosis (Aris, 2011). Bakteri tersebut masuk melalui saluran napas akan bersarang di jaringan paru
sehingga terbentuk suatu sarang pneumonik (sarang primer atau afek primer). Sarang primer ini mungkin
timbul di bagian mana saja dalam paru, berbeda dengan sarang reaktivasi. Dari sarang primer akan kelihatan
peradangan saluran getah bening menuju hilus (limfangitis lokal). Peradangan tersebut diikuti oleh pembesaran
kelenjar getah bening di hilus (limfadenitis regional).Afek primer bersama-sama dengan limfangitis regional
dikenal sebagai kompleks primer.Kompleks primer ini bisa sembuh atau menyebar dan berlanjut ke fase lanjut
dari tuberkulosis. Jika dibiarkan bahkan bisa berujung kematian (Price dan Wilson, 2006).
2.2 Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium Tuberculosis (Mtb) merupakan bakteri berbentuk batang langsing berukuran 0,4x3 m,
yang tahan asam dan bersifat aerobik. Bakteri ini mendapatkan energi dari oksidasi senyawa karbon sederhana
sehingga dengan meningkatnya PCO2 dapat memacu pertumbuhan. Pembelahan biner basil ini adalah 18 jam
dan cenderung lebih lambat dibandingkan bakteri lainnya. Perbedaan dengan bakteri lainnya yaitu Mtb resisten
terhadap agen antibakterial seperti penisilin dan mampu bertahan dalam kondisi kekeringan dalam waktu yang
lama (PDPI, 2006).
Media kultur Mtb yang umum digunakan saat ini adalah Mtb Middlebrook's medium dan media
Lowenstein-Jensen medium yang merupakan mediaberbahan dasar telur. Koloni Mtb akan tumbuh pada media
kultur sebagai koloni kecil dan berwarna kekuning- kuningan setelah inkubasi selama 4-6 minggu
(Esteban,2005).
2.3 Pemeriksaan Bakteriologik
Pemeriksaan bakteriologik sangat penting dalam menegakkan diagnosis. Pemeriksaan bakteriologik
yang digunakan untuk menegakkan diagnosis tuberkulosis pada umumnya menggunakan spesimen dahak.
Pemeriksaan bakteriologik yang dilakukan dengan cara mikroskopik dan biakan. Pemeriksaan dengan
mikroskopik menggunakan pewarnaan Ziehl-Nielsen dan auramin-rhodamin. Syarat pengambilan spesimen
dahak antara lain bukan cairan ludah atau nasal mukus, harus bebas dari partikel makanan atau kotoran lain.
Pengambilan spesimen dilakukan 3 kali SPS (sewaktu,pagi,sewaktu). Sewaktu/spot (dahak klien saat
kunjungan), pagi (keesokan harinya), sewaktu/spot (pada saat mengantarkan dahak pagi) atau tiga hari berturutturut. Jumlah bakteri yang dibutuhkan cukup besar, yaitu minimal 10 4 per ml dahak untuk dapat teridentifikasi
positif sehingga umumnya hanya efektif terhadap pasien yang sudah memiliki manifestasi klinis. Padahal
diketahui bahwa manifestasi klinis tuberkulosis perlu waktu hampir satu bulan atau bahkan lebih sebelum dapat
menimbulkan respon imunitas selular dan bakteri dapat ditemukan dalam jumlah cukup dalam dahak.
Kendala Interpretasi yang sering ditemukan pada biakan Mycobacterium tuberculosis adalah waktu
yang lama sekitar 6 s.d 8 minggu karena memang aktivitas metabolik Mycobacterium tuberculosis yang rendah.
Oleh karena karakteristik Mycobacterium tuberculosis merupakan basil tahan asam yang sulit didekolorisasi
dengan alkohol dan Mycobacterium tuberculosis tidak dapat di klasifikasikan gram positif atau
negatif.Sehingga teknik pewarnaan yang digunakan adalah teknik Ziehl Neelsen.
2

3
Ada beberapa kriteria pembacaan hasil pewarnaan Ziehl Neelsen, American Lung Association
sebagaimana yang tercantum dalam Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology edisi 9 membuat kriteria
seperti berikut :
Jumlah BTA Terlihat
Pelaporan
1-2 per hapusan spesimen
Negatif
3-9 per hapusan
Jarang (+1)
10 atau lebih per hapusan
Sedikit (+2)
1 atau lebih per lapang pandang dengan Banyak (+3)
minyak imersi
Tabel 1.Pembacaan hasil pewarnaan Ziehl Neelsen (Jawetz dan Adelberg,2007).

Gambar 1.Mycobacterium tuberculosis dengan pewarnaan Ziehl-Nieelsen (Drancourt et al, 2003)

2.4 Media Lowenstein Jensen (LJ)
Selain pemeriksaan mikroskopik, terdapat pemeriksaan biakan yang bertujuan untuk mendapatkan
diagnosis pasti dan dapat mendeteksi Mycobacterium tuberculosis dan juga Mycobacterium other than
tuberculosis (MOTT).Pemeriksaan biakan yang menjadi standard saat ini adalah Media Lowenstein Jensen
(Kapor, 2001).
Media Lowenstein Jensen merupakan media yang berbahan dasar telur bebek atau ayam kampung segar
dan gliserol untuk isolasi dan diferensiasi bakteri Mycobacterium spp. Media LowensteinJensen merupakan
media modifikasi dari Lowenstein Medium, yang dimodifikasi oleh Jensen. Jensen memodifikasi media
tersebut dengan merubah kandungan citrate dan fosfat, serta menghilangkan congo red dye dan menambahkan
konsentrasi malachite green (Neogen,2010).

Gambar 2. Koloni Mycobacterium Tuberculosis pada Media Lowenstein Jensen (Kapoor,2001)

2.5 Coco-Blood
Melihat fenomena prevalensi tuberculosis masih banyak dan diagnosis menggunakan baku emas
membutuhkan waktu yang lama, padahal media kultur juga berfungsi sebagai uji sensitivitas antibiotik untuk
pemberian terapi yang tepat kepada pasien, maka pada penelitian ini memodifikasi media kultur yaitu Coco
Blood yang terdiri dari komponen air kelapa muda, agar darah, darah domba, dan malachite green. Berikut
penjelasan komponen dari media kultur Coco-Blood :
1. Air Kelapa
Cocos nucifera merupakan tumbuhan asli dari daerah pantai Asia tropika dan Pasifik.Kemampuan buah
yang bersabut tebal dan untuk berkecambah yang lambat dan tetap dapat hidup setelah terapung jauh di laut
memastikan penyebaran alami yang luas di Indo-Pasifik jauh.Kelapa adalah tanaman daerah tropis yang
lembab.Cukup mudah beradaptasi dengan perbedaan suhu dan persediaan air dan masih umum ditemui di
daerah dekat batasan zona ekologinya.Kelapa merupakan tanaman tropis yang telah lama dikenal masyarakat
Indonesia.Hal ini terlihat dari penyebaran tanaman kelapa di hampir seluruh wilayah Nusantara.Air kelapa
(Cocos nucifera L), merupakan air yang biasa dikonsumsi orang-orang di daerah tropis. Air kelapa bening,
manis, dan merupakan minuman yang sedikit asam dengan rentang pH 4.2 and 6.0. Hasil penelitian selama 60
3

4
tahun menunjukkan bahwa air kelapa mengandung protein, lemak dan kaya akan karbohidrat. Selain itu air
kelapa juga mengandung banyak elemen nutrisi penting (yang paling menonjol adalah kandungan kaliumnya)
(Supadi dan Nurmanaf, 2006).
2. Blood Agar/Agar Darah
Agar darah merupakan media yang seringkali digunakan di laboratorium mikrobiologi klinik karena
biaya pembuatannya yang tidak mahal, mudah dibuat, dan mayoritas bakteri bisa tumbuh di media ini (Mathur,
et al., 2009). Darah merupakan sumber nutrisi yang sangat kaya dan biasa digunakan untuk mempercepat
pertumbuhan dari beberapa jenis bakteri (Mathur, et al., 2008).
Studi yang dilakukan Michel Drancourt dan Didier Raoult menunjukkan bahwa penggunaan agar darah
sebagai media kulturMycobacterium tuberculosis ini dapat menghemat waktu dan biaya, lebih sensitif dan
setidaknya secepat metode otomatis. Hal ini sangat penting terutama untuk negara dengan sumber daya yang
terbatas dimana prevalensi tuberkulosis cukup tinggi.
Hasil studi Drancourt, et al., (2003) menunjukkan bahwa agar darah dapat menjadi media kultur
tuberkulosis yang konfirmatif untuk pasien HIV di Portugal. Pada studi ini pula dinyatakan bahwa agar darah
dapat menunjang pertumbuhan Mycobacterium tuberculosis yang berlimpah.Studi yang lain dari Mathur, et al.,
(2009) juga menunjukkan bahwa agar darah miring dapat menjadi pengganti yang baik dari media LJ untuk
deteksi cepat Mycobacterium tuberculosis pada sputum di daerah terpencil dimana teknologi semacam
BACTEC tidak tersedia. Media ini mampu menghemat waktu kultur hingga sepertiga waktu yang dibutuhkan
untuk kultur di media LJ.
3. Darah domba
Jenis-jenis domba yang banyak dikenal di Indonesia adalah domba asli Indonesia yang disebut domba
lokal. Memiliki ciri-ciri antara lain ukuran tubuh kecil sehingga dagingnya tidak terlalu banyak, memiliki warna
bulu yang bermacam-macam, domba jantan memiliki tanduk sedangkan yang betina tidak memiliki tanduk, dan
bobot domba jantan 30-50 kg sedangkan bobot domba betina 20-25 kg.
Darah merupakan sumber nutrisi yang sangat kaya dan biasa digunakan untuk mempercepat
pertumbuhan dari beberapa jenis bakteri. Adanya nutrisi berupa protein hematin pada darah domba sehingga
media ini berpotensi untuk menggantikan telur sebagai sumber nutrisi bagi bakteri (Drancourt et al,
2003).Media darah merupakan media yang sangat subur dan rawan terkontaminasi sehingga dibutuhkan
perlakuan khusus untuk mengatasinya. Pada penelitian ini pada media kultur darah ditambahkan Malachite
green yang memiliki sifat bakteriostatik terhadap bakteri lain dapat diinkorporasikan ke dalam media tanpa
menghambat pertumbuhan basil tuberkel (Sevilla,2001).
4. Malachite Green
Mycobacterium tuberculosis cenderung lebih resisten terhadap agen kimia daripada bakter lain karena
sifat hidropobik dari permukaan sel dan pertumbuhan yang berkelompok. Bakteri Mycobacterium tuberculosis
pada medium perbenihan menghasilkan pertumbuhan seperti korda. Malachite green memiliki sifat
bakteriostatik terhadap bakteri lain dapat diinkorporasikan ke dalam media tanpa menghambat pertumbuhan
basil tuberkel. Basil tuberkel masih dapat hidup dalam asam dan alkali sehingga dapat membantu
mengeliminasi/menghilangkan organisme terkontaminasi (Sevilla,2001).
Penambahan malachite green pada suatu media dapat meningkatkan visibilitas kasar dari koloni
bakteri.Selain itu pemberiaan Malachite green pada media kultur menghasilkan warna hijau yang timbul pada
media kultur. Warna hijau ini dapat memunculkan karakteristik koloni bakteri dengan lebih jelas. Penelitian
Sebelumnya oleh McBride, et al yang menggunakan media blood agar yang dikombinasikan dengan malachite
green pada Mycobacterium haemophilum menunjukkan hasil positif. Malachite green terbukti dapat
menghambat pertumbuhan bakteri kontaminan tanpa mempengaruhi pertumbuhan dari M.haemophilum.
III. METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan desain true experimental laboratory dengan metode yang digunakan yaitu
Randomized Posttest Only Controlled Group Design.
3.2 Variabel Penelitian
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah penyusunan media kultur Coco-Blooddengan menggunakan
kombinasi coconut water, darah domba, agar darah, dan malachite green dibandingkan dengan media
4

5
LJ.Variabel tergantung terdiri dari hasil pertumbuhan makroskopis Mycobacterium tuberculosis, kecepatan
tumbuh, dan tingkat kontaminasi pada media kultur.
3.3 Objek dan Sampel
Sampel penelitian adalah sampel bakteri dari kultur sputum pasien sebanyak 14 sampel dan kuman kontrol
positif Mycobacterium tubercuosis standar WHO H37RV sebanyak 8 sampel. Kuman H37RV merupakan
kuman standar WHO yang digunakan untuk penelitian dan jika dapat tumbuh pada media kultur, maka media
kultur tersebut termasuk baik digunakan. Berikut kode sampel yang diamati pada media kultur dan
penjelasannya:
a. 1A: Subkultur Bakteri Mtb A dari Lab Mikro FKUB
b. 1B: Subkultur Bakteri Mtb B dari Lab Mikro FKUB
c. 1D: Subkultur Bakteri Mtb D dari Lab Mikro FKUB
d. 2816: Subkultur Bakteri dari Kultur Sputum Pasien kode 2816
e. 3320: Subkultur Bakteri dari Kultur Sputum Pasien kode 3320
f. H37RV: Bakteri kontrol positif yang langsung ditanam pada media kultur
g. H37RVAq: Bakteri kontrol positif yang diencerkan terlebih dahulu dengan aquades baru ditanam pada
media kultur
3.4 Metode Penelitian
Pembuatan Media Kultur
LJ, CB(sheep)

Subkultur
bakteri Mtb

Persiapan
inokulasi

Media CB
(sheep)

Kontrol +:
Media LJ

Observasi hasil pertumbuhan makroskopis koloni Mycobacterium pada

masing-masing media kultur setiap hari selama 8 minggu
Membuat hapusan dari koloni yang tumbuh di media
kulturdengan menggunakan pewarnaan Ziehl-Neelsen
dan dilakukan pembacaan mikroskopis

Gambar 3. Alur Penelitian

3.5 Prosedur Pengumpulan dan Analisis Data
Data yang diambil adalah kemampuan media kultur dalam menumbuhkan bakteri Mycobacterium
tuberculosis, kecepatan menumbuhkan bakteri Mycobacterium tuberculosis, dan tingkat kontaminasi media
kultur. Analisis yang dilakukan adalah uji normalitas dan uji varian sebagai dasar menentukan hipotesis untuk
mengetahui kecepatan pertumbuhan Mycobacterium tuberculosis pada media kultur pada masing-masing
perlakuan dan kelompok kontrol. Jika sebaran data normal dan varian sama (p > 0,05) maka digunakan uji
hipotesis one way anova. Namun jika tidak sama (p < 0,05) digunakan uji KruskalWallis. Selanjutnya,
dilakukan uji Mann Whitney sebagai uji lanjutan. Karena data pada penelitian ini data normal dan varian tidak
sama, maka data kecepatan, tingkat sensitifitas, dan tingkat spesifitas diuji dengan menggunakan uji MannWhitney U pada software Genstat 14.
IV. PELAKSANAAN PROGRAM
4.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya dan
Laboratorium Mikrobiologi Rumah Sakit Umum dokter Saiful Anwar Malang.Penelitian ini dilaksanakan
selama 4 bulan.
5

6
4.2 Jadwal Faktual Pelaksanaan
Tabel 2. Jadwal Faktual
Kegiatan

Bulan keI
II
III
IV
Minggu ke1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

I. Persiapan
1.1 Persiapan laboratorium Mikrobiologi
1.2 Penyediaan bahan-bahan media kultur
II. Pelaksanaan
2.1 Pembuatan media kultur
2.2 Inokulasi bakteri Mycobacterium tuberculosis pada media
kultur
2.3 Pengamatan pertumbuhan makroskopis bakteri pada media
kultur
2.4 Pembacaan mikroskopis hapusan Ziehl-Nielseen
III Pengumpulan Data dan Hasil
3.1 Pengumpulan data
3.2 Analisis dan pengolahan data
3.3Penyusunan laporan kegiatan

4.3 Instrumen Pelaksanaan

Pembuatan Media Coco-Blood
Bahan: Air Kelapa 300 ml, 2% malachite green 0.4 gram,blood agar base, deionized water, sodium citrate, botol
kultur.
Alat: Autoklaf, Alat Vortexing,
Pembuatan Media Lowenstein Jensen
Bahan:L-Asparagine 3.6 g , Glycerol, 12 mL, Monopotassium Phosphate2.5 g, Egg Suspension, 1000 mL,
Magnesium Sulfate 0.24 g, Sodium Citrate 0.6 g, Malachite Green 0.4 g , Potato Flour 30 g, Screw-cap test
tubes.
Metode: Pada penelitian ini Media Lowenstein Jensen digunakan sebagai kontrol positif. Media didapatkan dari
Oxoid penyedia media kultur online.
Observasi Hasil Pertumbuhan Makroskopis Koloni
Proses pengamatan dilakukan setiap hari selama 8 minggu. Pengamatan meliputi karakteristik umum
(diameter,warna,tepi, morfologi permukaan) koloni bakteri yang tumbuh, dan kecepatan pertumbuhan koloni
tersebut.
Pembuatan Hapusan Ziehl-Neelsen
Alat:
Mikroskop,
Ose,
Lampu
spritus,
kaca
Objek
Bahan: Sputum, Carbol Fuchsin, Alkohol
asam, Methylene blue 0,3%, Minyak Immersi
Metode: Pewarnan Ziehl Nielsen digunakan untuk mengkofirmasi pertumbuhan Mycobacterium tuberculosis
pada koloni yang tumbuh di media kultur.
IV.4Rancangan dan Realisasi Biaya
Tabel 3. Anggaran Dana
Pemasukan Jumlah (Rp) Pengeluaran
Jumlah (Rp)
Keterangan
Dana
3.590.000 Operasional di
2.905.000 Inokulasi bakteri, pembuatan
DIKTI
lab.mikro
media kultur, tes niasin &ziehlneelsen
Kuman kontrol
350.000 Kontrol (+) H37RV
Transportasi
130.000 Travel
Barang habis
440.500 APD, mask N95, kelapa,
pakai
Lain lain
278.500 Admin, statistik
6

7
Total
3.590.000
4.043.000
V. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini terdiri dari dua macam perlakuan, yaitu Media Coco-Blood (CB) dan Media LowensteinJenseen (LJ) sebagai kontrol, dari hasil penelitian didapatkan data sebagai berikut :
5.1 Kecepatan Pertumbuhan

Keterangan
Ordinat : sampel
Axis
: Jumlah hari yang dibutuhkan
untuk menumbuhkan bakteri Mtb
Gambar 4. Kecepatan Pertumbuhan Mtb
Data perbandingan kecepatan pertumbuhan bakteri pada media kultur diatas menunjukkan bahwa pada
sebagian besar sampel pertumbuhan di media Coco-Blood lebih cepat dibandingkan pada media LJ. Hal ini juga
telah dipertegas dengan hasil uji statistika menggunakan uji Mann-Whitney U pada software Genstat 14 yang
menunjukkan nilai p-value dari data kecepatan pertumbuhan Mtb adalah sebesar <0.001 yang berarti bahwa
nilai tersebut signifikan pada = 5%. Sehingga dapat disimpulkan bahwa rata-rata kecepatan tumbuh bakteri
media CB lebih cepat daripada media LJ.

Mann-Whitney U (Wilcoxon rank-sum) test

Variate: Kecepatan
Group factor: Media
Value of U: 1.0 (first sample has highest rank score).
Exact probability (adjusted for ties) < 0.001
(under null hypothesis that group LJ is not less than group CB).
Sample sizes: 8, 11.

H0 : Rata-rata kecepatan tumbuh bakteri media CB tidak lebih cepat daripada media LJ (1 2)
H1 : Rata-rata kecepatan tumbuh bakteri media CB lebih cepat daripada media LJ (1< 2)
Berdasarkan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Murli L. Mathur et al menunjukkan bahwa
blood agar based dapat menjadi pengganti media LJ yang lebih cepat dan dapat diaplikasikan pada laboratorium
dengan fasilitas terbatas (Murly et al, 2009). Salah satu komponen utama coco blood adalah darah domba
memiliki kandungan nutrisi berupa protein hematin yang sangat baik untuk pertumbuhan bakteri(Drancourt,
2003). Sehingga darah yang digunakan dalam medium Coco-Blood berpotensi untuk menggantikan telur pada
medium LJ sebagai sumber nutrisi bagi bakteri Mycobacterium tuberculosis.
5.2 Sensitivitas
Tabel 4. Tingkat Sensitivitas
Sensitivitas
1D
1A
1B
2816 3320 4015 4196 H37 H37 H37RV
H37RV
RV
RV Aquades Aquades
LowensteinV
V
V
V
V
V
V
V
Jenseen
Coco-Blood
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
Keterangan: V
= Tumbuh - = tidak tumbuh
Data pengamatan kami selanjutnya adalah perbandingan kemampuan media Coco-Blood dan media
Lowenstein jensen dalam menumbuhkan bakteri Mycobacterium tuberculosis hasil subkultur. Tabel diatas
menujukkan bahwa tingkat kemunculan koloni pada media Coco-Blood lebih tinggi dari pada media lowenstein
jenseen. Akan tetapi dengan menggunakan Uji Statistika Mann-Whitney U pada software Genstat 14
7

8
didapatkan nilai p-value sebesar 0.893 yang menunjukkan bahwa tingkat sensitivitas pada kedua media adalah
sama.

Mann-Whitney U (Wilcoxon rank-sum) test

Variate: Sensitivitas
Group factor: Media
Value of U: 44.0 (second sample has highest rank score).
Exact probability (adjusted for ties): 0.893
(under null hypothesis that group LJ is not less than group CB).
Sample sizes: 11, 11.

H0 : Tingkat sensitivitas media CB dan LJ sama

H1 : Tingkat sensitivitas media CB cenderung lebih besar daripada media LJ
Dengan hasil tersebut, kita bisa mengasumsikan bahwa media Coco-Blood memiliki potensi deteksi mtb
yang sama sensitifnya dengan media gold standar yang biasa digunakan saat ini yaitu media lowenstein
jenseen.Hasil penelitian ini masih perlu penyempurnaan dengan uji sensitivitas di komunitas dengan variasi
jenis sputum yang digunakan.
5.3 Spesifisitas
Tabel 5. Tingkat Spesifitas
Spesifisitas

1D

1A

1B

2816 3320 4015 4196 H37

RV
K
TK
K
K
TK

H37
RV
TK

H37RV
Aquades
TK

H37RV
Aquades
TK

Lowenstein- TK
K
TK
Jenseen
Coco-Blood
TK
TK
TK
TK
TK
TK
TK
TK TK
TK
TK
Keterangan :
TK = Tidak Kontaminasi
K = Kontaminasi
Dari tabel diatas jelas didapatkan hasil bahwa media Lowenstein Jenseen lebih mudah terkontaminasi
dibandingkan media Coco-Blood. Demikian juga dengan hasil uji statistik Mann-Whitney U pada software
Genstat 14 yang menghasilkan nilai p-value sebesar 0.045.

Mann-Whitney U (Wilcoxon rank-sum) test

Variate: Spesifisitas
Group factor: Media
Value of U: 38.5 (first sample has highest rank score).
Exact probability (adjusted for ties): 0.045
(under null hypothesis that group LJ is not less than group CB). Sample sizes: 11, 11.

H0 : Tingkat spesifisitas media CB dan LJ sama

H1 : Tingkat spesifisitas media CB cenderung lebih tinggi daripada media LJ
Hal ini menunjukkan bahwa tingkat spesifisitas media Coco-Blood cenderung lebih tinggi daripada
media LJ. Beberapa hal yang menyebabkan media Coco-Blood lebih tahan dari kontaminasi adalah:
1. Komponen utama yang digunakan yakni darah domba dan air kelapa muda pada dasarnya sudah steril
sehingga lebih mudah untuk mengolahnya secara asepsis.
2. Adanya tambahan Malachite green pada media Coco-Blood sebagai bakteriosid / bakteriostatik dari
bakteri non mtb namun tidak mengganggu pertumbuhan bakteri mtb (Sabry, 2011).
3. pH asam yang dihasilkan oleh air kelapa muda dapat memungkinkan basil tuberkulosis bertahan hidup
dan untuk mengeliminasi organisme kontaminan (Sabry, 2011).
VI. KESIMPULAN DAN SARAN
6.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat diambil dari penelitian ini adalah :
1. Media Coco-Blood merupakan media kultur Mycobacterium tuberculosis yang sensitif, lebih cepat,
lebih spesifik dan memperpendek durasi kultur daripada media Lowenstein Jensen.
2. Media Coco-Blood dapat diaplikasikan di laboratorium dengan fasilitas terbatas di Indonesia.
6.2 Saran
Saran yang dapat diambil dari penelitian ini adalah :
8

9
1.

Adanya penelitian lebih lanjut mengenai uji sensitivitas dan spesifisitas pada sampel dari
komunitas dengan jumlah sampel yang lebih banyak,
2.
Adanya penelitian lebih lanjut mengenai komposisi ideal media Coco-Blood.
VII. DAFTAR PUSTAKA
Adolf K., Edna D Doe, Rebecca Agyare.2011.Exploring Coconut Water: Awua, the influence of
sterilisation and storage on some physicochemical properties of coconut (Cocos nucifera L.) water. BMC
Research Notes (4) :451.
Coban AY, Cihan CC, Bilgin K, Uzum M, Akgunes A, et al. (2006) Blood agar for susceptibility testing of
Mycobacterium tuberculosis against first-line drugs. Int J Tuberc Lung Dis 10: 450453.
Drancourt M, Carrieri P, Gvaudan MJ, Raoult D. 2003. Blood agar and Mycobacterium tuberculosis: the end
of a dogma. J Clin Microbiol 41: 17101711.
Drancourt M, Raoult D. 2007.Cost-Effectiveness of Blood Agar for Isolation of Mycobacteria. PLoS Negl Trop
Dis 1(2): e83. doi:10.1371/journal.pntd.0000083
Esteban, J., M. de Gorgolas, F. Santos OVonnor, I. Gadea, R. Fernandez-Roblas, and F.
Sorlano.2001.Mycobacterium tuberculosis bacteremia in a university hospital. Int. J. Tuberc. Lung Dis.
5:63768.
Mathur ,Murli L, Aruna Solanki.2007. Study of rapid culture of Mycobacterium tuberculosis from sputum
samples.Annual report 2007-2008: 20-24.
Mathur ,Murli L, Jyoti Gaur, Ruchika Sharma.2009.Rapid culture of Mycobacteriumtuberculosis on blood agar
in resource limited setting. Dan Med Bull 2009(56):208-10.
Mathur ,Murli L, Aruna Solanki. 2008.Study of rapid culture of Mycobacterium tuberculosis from sputum
samples- Murli L. Mathur and Aruna Solanki. Annual report 2008-2009: 13-16.
Sevilla VB. 2001. The utilization of the coconut water egg malachite green medium (CEM) for the isolation of
Mycobacterium tuberculosis andCorynebacterium diphtheriae. Phil J Microbiol Infect Dis.
2001;10(2):937)
LAMPIRAN
1. Dokumentasi kegiatan

Darah kambing

Media LJ

2.

Pengambilan air kelapa

Pembuatan media CBM

Kuman H37RV

Inokulasi Bakteri

H37RV lebih subur pada

media CB

Media Coco-blood

Bukti Pembayaran
Tgl
No
Deskripsi
(13)
1
4/3
Pendaftaran Lab
2
8/3
Pembelian APD
(Handscoon +

Total
No
Harga (Rp)
100.000
11
74.000
12

Tgl
(13)
24/4
29/4

Total
Harga (Rp)
Pembelian Air Kelapa
20.000
Pembuatan Media CBM 550.000
Part 2
Deskripsi

10
3

15/3

15/3

5
6

15/3
18/3

17/3

Masker)
Pembelian Mask
N95

30.000

13

30/4

Pembelian Air
Kelapa

10.000

14

Buku Logbook
Pembelian Mask
N95
Pembuatan Media
CBM Part 1

11.000
7.500

15
16

08,
31/5,
24/6
26/6
21/5

200.000

17

22/5

14/3

Pembelian Media 180.000

LJ

18

30/5

12/4

10

17/4

Inokulasi RSSA1: 475.000

Media LJ
Pengolahan
Subkultur
Biaya Travel PP 130.000
Malang-Surabaya

Keterangan scan bukti pembayaran :

Inokulasi RSSA2:
Media LJ
Pengolahan Subkultur
Biaya Ziehl-Nielseen

250.000

120.000
350.000

19

30/6

Biaya tes Niasin

Pembelian kuman
kontrol H37RV
Inokulasi ulang: Media
LJ
Pengolahan Subkultur
Inokulasi H37RV:
Media LJ
Pengolahan Subkultur
Pelatihan penggunaan
statistik

20

1, 10, Transportasi
26,
27/4;
5/5;
25/6
Selama Kesekretariatan (print,
pembua cetak, jilid, dll)
tan
proposa
l
&
monev
Rp 4.043.000,00

223.000

21

Nomor scan bukti pembayaran di sesuaikan

dengan nomor tabel keuangan
TOTAL KESELURUHAN
1

20

7, 8, 9, 12,
13, 14, 15,
16, 17, 18

10

11

660.000

230.000
Rp
155.000,00
Rp
150.000,00

117.500

19

21

10