Anda di halaman 1dari 15

Food Research International Journal 20 (6): 3013-3020 (2013)

Homepage jurnal: http://www.ifrj.upm.edu.my

Ekstraksi dan karakterisasi pepsin-dilarutkan kolagen


dari dinding tubuh mahkota-of-duri
Starfish (Acanthaster planci)
1,2 *

Tan, CC, 1 Karim, AA, 2 Latiff, AA, 2 Gan, CY dan 3 Ghazali, FC

Makanan Biopolimer Research Group, Food Divisi Teknologi, Sekolah Teknologi


Industri,
Universiti Sains Malaysia, 11800 USM, Penang, Malaysia
2
Pusat for Advanced Analytical Toxicology Services, Universiti
Sains Malaysia, 11800 USM, Penang,
Malaysia
3
Sekolah Ilmu Kesehatan, Kampus Universiti Sains Malaysia Kesehatan, 16150
Kubang Kerian,
Kelantan Darul Naim, Malaysia
Artikel sejarah
Diterima: 17 Juni 2013 Diterima dalam bentuk direvisi: 23 Juni 2013
Diterima: 26 Juni 2013

Kata kunci
Kolagen
Pencabutan
Karakterisasi
Mahkota-of-duri
Bintang laut
Pepsin
Abstrak
Pepsin-dilarutkan kolagen (PSC) diekstraksi dari dinding tubuh bintang laut mahkota duri-of(COTS) (Acanthaster planci) menggunakan pepsin pencernaan dalam asam asetat 0,5 M. Pola elektroforesis PSC
menunjukkan bahwa terdiri dari dua rantai (1 dan 2 rantai).Selain itu, pemetaan peptida menunjukkan bahwa
ada beberapa perbedaan dalam pola peptida antara PSC, betis kolagen kulit dan kolagen kulit salmon. Hal ini
menunjukkan bahwa struktur utama PSC berbeda dari kolagen kulit betis dan kolagen kulit
salmon. Selanjutnya, Transformasi Fourier spektroskopi inframerah (FTIR) investigasi menunjukkan
adanya struktur heliks tiga di PSC, menunjukkan bahwa struktur heliks tiga baik diawetkan selama ekstraksi
kolagen dari COTS. Suhu denaturasi PSC adalah 33,0 C, yang sebanding dengan kolagen mamalia. Selain
itu, analisis asam amino komposisi menunjukkan bahwa kandungan asam imino dari PSC mirip dengan kolagen
mamalia tapi itu lebih tinggi dari kolagen laut lainnya. Hal ini menunjukkan bahwa kekuatan kandungan asam imino
kontribusi suhu denaturasi kolagen. Hasil dalam penelitian ini menunjukkan bahwa PSC dari COTS kurang
dimanfaatkan memiliki potensi untuk dimanfaatkan dalam berbagai aplikasi komersial.
All Rights Reserved

Pengantar
Kolagen adalah matriks ekstraselular yang paling banyak ditemukan pada hewan, akuntansi
untuk 30% dari total protein dalam tubuh hewan (Muyonga et al., 2004). Ini adalah molekul
protein besar yang terdiri dari tiga rantai polipeptida terjalin untuk membentuk struktur heliks
tiga tangan kanan. Setiap rantai polipeptida (rantai ) terdiri dari urutan asam amino
berulang Gly-XY, di mana sebagian besar X dan Y adalah prolin dan hidroksiprolin, masingmasing (Ricard-Blum et al., 2005). Kolagen adalah elemen struktural untuk kulit, tulang rawan,
tulang dan organ lain dalam vertebrata sedangkan di invertebrata, kolagen terutama ditemukan
pada dinding tubuh dan kutikula (Conand, Ain dan Sloan, 1989).

Kolagen telah banyak dimanfaatkan sebagai bahan dalam makanan, kosmetik dan industri biomedis
karena imunogenisitas rendah dan biokompatibilitas tinggi (Zhang et al., 2007). Saat ini, kolagen untuk
tujuan industri terutama diambil dari sapi dan babi asal (Jongjareonrak et al., 2005).Namun, wabah
penyakit sapi dan kaki-dan-mulut penyakit gila telah mengakibatkan meningkatnya kekhawatiran
mengenai
sapi dan kolagen babi sebagai potensi transmisi vektor patogen penyakit ini (Zhang et al., 2007). Oleh
karena itu, kecemasan meningkat tentang konsumsi kolagen atau produk kolagen yang berasal dari hewan
domestik darat seperti sapi dan babi telah menyebabkan studi ekstensif pada kolagen laut sebagai
alternatif kolagen mamalia. Namun, sebagian besar penelitian hadir pada kolagen laut terbatas pada
ekstraksi kolagen dari ikan
(Rigby, 1968;. Muyongaet al, 2004; Jongjareonrak et al., 2005; Zhang et al., 2007; Wang et al., 2008;
Kittiphattanabawon et al., 2010). Sedikit yang diketahui kolagen dari sumber lain organisme laut
terutama bintang laut (Nagai dan Suzuki, 2000; Nagai et al, 2000;.
Saito et al., 2002; Cui et al., 2007).
Mahkota-of-duri bintang laut (COTS) (Acanthaster planci) adalah bintang laut terbesar kedua, yang
memakan karang hidup. Hal ini dapat ditemukan di seluruh Samudera Pasifik dan Samudera Hindia. Wabah populasi

COTS telah mengakibatkan banyak karang telah dimakan dan hancur. Hal ini memberikan dampak
negatif pada ekosistem wilayah pesisir serta kerugian besar bagi industri pariwisata
(Brodie et al., 2005). Di
* Sesuai penulis.
Email: chekchuan@h
otmail.com
Telp: +604659
5605; Fax: +604656
9869

3014

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

Pulau Tioman dan Pulau Redang (di pantai timur Semenanjung Malaysia), yang Cots dikeluarkan dari
laut dan darat terkubur dalam rangka untukmengendalikan wabah populasi bintang laut (Mstar
Online,
2011). Namun, pendekatan ini dapat menyebabkan bau tak sedap di daerah di mana starfishes ini
dikuburkan.
Berdasarkan literatur, dinding tubuh COTS terutama terdiri dari kolagen (O'Neill, 1989). Oleh karena
itu, adalah mungkin untuk mengekstrak sejumlah besar kolagen dari COTS kurang dimanfaatkan. Hal ini
akan memberikan lagi sumber alternatif yang potensial kolagen. Sebagai tahap pertama untuk
menjelaskan ide ini, penelitian ini bertujuan untuk mengekstrak dan mengkarakterisasi kolagen dari
COTS. Hal ini diantisipasi bahwa data yang dikumpulkan dalam penelitian ini dapat memberikan
beberapa wawasan tentang sifat fisiko-kimia kolagen dari COTS.

Bahan dan Metode


Bahan kimia
Tipe I kolagen dari kulit salmon dan lysyl endopeptidase (EC 3.4.21.50) yang dibeli dari
Wako Pure Chemical Industries, Ltd (Osaka, Jepang). Tipe I kolagen dari kulit sapi, pepsin (EC 3.4.23.1;

656 unit / mg protein), dan 2-mercaptoethanol yang dibeli dari Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO,
USA). Standar pra-bernoda SDS-PAGE (204 kDa-6,6 kDa), Laemmli penyangga sampel dan Coomassie
biru R-250 yang dibeli dari Bio-Rad Laboratories,

Inc (Hercules, CA, USA). Semua bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini adalah
kelas analitis.
Bahan
Mahkota-of-duri bintang laut (COTS) (Acanthaster planci) dikumpulkan di Pasir Akar dan Pulau
Lang (Di pantai timur Semenanjung Malaysia).Sebuah spesimen voucher untuk COTS (terdaftar sebagai
nomor PPSK /

USM / CTI-0-07-2009-APLC) diendapkan di


Pusat Sea Cucumber Penelitian, Sekolah Ilmu Kesehatan, Universiti Sains Malaysia, Kubang Kerian,
Kelantan, Malaysia. The dipan didinginkan dalam es dan dibawa ke laboratorium. Punggung
COTS pertama kali dihapus. Selanjutnya, dinding tubuhnya dibedah dan dicuci dengan air suling
untuk menghilangkan jaringan penganut sebelum dipotong-potong kecil. Dinding tubuh COTS kemudian
disimpan pada -80 C sebelum ekstraksi.

Penentuan kadar air


Kadar air dari dinding tubuh COTS ditentukan dengan membekukan pengeringan dinding
tubuh. Kadar air dihitung menurut persamaan berikut:
Moisture content = [(w 1 - 2 w) / w1] x 100%,
dimana w 1 adalah berat dinding tubuh sebelum pengeringan beku dan w 2 adalah berat dinding
tubuh setelah pengeringan beku.
Ekstraksi pepsin-terlarut kolagen (PSC)
Ekstraksi PSC dilakukan menurut metode Nagai dan Suzuki (2000) dengan sedikit
modifikasi. Ekstraksi dilakukan pada

4 C. Dinding tubuh COTS direndam dalam 0,1 M


NaOH pada rasio sampel-to-solusi 1:10 (w / v) selama tiga hari untuk menghilangkan bahan nonkolagen. The larut jaringan dinding tubuh dikumpulkan dan dicuci dengan air suling. Dinding tubuh
kemudian demineral dengan 0,05 M Tris-HCl (pH 7,5) yang mengandung 0,5 M asam
ethylenediaminetetraacetic garam disodium
(EDTA-2Na) selama 2 hari dan terpilah dengan 0,1 M Tris-HCl (pH 8,0) yang mengandung 0,05 M
EDTA-2Na, 0,5 M NaCl dan 0,2 M 2-mercaptoethanol selama 3 hari.

Campuran disentrifugasi pada 3200 g selama 30 menit untuk mengumpulkan fibril


kolagen. Kolagen fibril kemudian dicuci dengan air suling selama 2 hari dengan
mengubah air suling setiap 24 jam.
Kolagen fibril dihentikan pada 0,5 M asam asetat dengan perbandingan 01:10 sampel-to-solusi
(w / v) selama 2 hari. Campuran kemudian disentrifugasi pada 20000x g selama 1 jam. Residu larut
dikumpulkan. Residu kemudian kembali ditangguhkan dalam 0,5 M asam asetat lagi dan dicerna dengan
pepsin di urat saraf rasio pepsin-to-kolagen dari 1:15 (w / w) selama 48 jam. Solusi kental yang
dihasilkan disentrifugasi pada 20000x g selama 1 jam. Yang dihasilkan supernatan kemudian
didialisis 0,02 M Na

HPO

(PH 7,2) selama 3 hari dengan mengubah solusi setiap hari. The dialisat

yang diperoleh disentrifugasi pada 20000x g selama 1 jam. Endapan yang diperoleh dilarutkan dalam 0,5
M asam asetat. Salting out kemudiandilakukan dengan menambahkan NaCl pada campuran
tersebut sampai konsentrasi NaCl mencapai 0,9 M. dihasilkan endapan dikumpulkan oleh
sentrifugasi campuran pada 20000x g selama 1 jam. Residu lanjut diendapkan dengan menambahkan
NaCl sampai konsentrasi NaCl mencapai 2,5 juta pada 0,05 M Tris-HCl (pH 7,5).

Campuran kemudian disentrifugasi pada 20000x g selama 1 jam dan endapan yang dihasilkan
kembali dilarutkan dalam 0,5 M asam asetat sebelum didialisis 0,1 M asam asetat dan air suling,
masing-masing. Dialisat kemudian mengalami liofilisasi. Kolagen yang diperoleh disebut
sebagai pepsin-dilarutkan kolagen (PSC).
Sodium dodesil elektroforesis gel poliakrilamida sulfat (SDS-PAGE)
SDS-PAGE dilakukan sesuai dengan metode Laemmli (1970) untuk menyelidiki pola
elektroforesis PSC. SDS-PAGE dilakukan dengan terputus-putus Tris-glisin

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

3015

penyangga dengan 4% stacking gel dan 4% menyelesaikan gel.


PSC, kolagen tipe I dari kulit anak sapi dan kolagen tipe I dari kulit salmon dilarutkan
dalam 0,02 M natrium fosfat (pH 7,2) yang mengandung 1% SDS dan 3,5 M urea. Selanjutnya,
sampel kolagen terlarut dicampur dengan Laemmli buffer sampel yang mengandung 5% dari 2mercaptoethanol di rasio
1: 1 sebelum mengalami SDS-PAGE. Sebanyak 30 ug setiap sampel kolagen dimuat pada
gel. Sampel dijalankan pada 80V untuk pertama 10 menit dan kemudian dijalankan pada 120 V
sampai pelarut mencapai sekitar 0,5 cm dari ujung gel. Setelah SDS-PAGE, gel diwarnai dengan 0,1%
(b / v) Coomassie biru R-250 di 40% (v / v) metanol dan 10% (v / v) asam asetat selama 2 jam. Gel
kemudian destained dengan larutan destaining mengandung 40% (v / v) metanol dan 10% (v / v) asam
asetat. Standar pra-patri SDS-PAGE (berbagai) digunakan untuk memperkirakan berat
molekul kolagen. Tipe I kolagen dari kulit sapi dan kulit salmon yang digunakan sebagai kolagen
standar. Gambar dari gel SDS-PAGE ditangkap menggunakan FUJIFILM bercahaya Image
Analyzer LAS-3000 (Fujifilm,

Tokyo, Jepang). Versi multi Gauge 3,0 software


(Fujifilm, Tokyo, Jepang) digunakan untuk menganalisis pola electrophorestic PSC.
Komposisi asam amino dari PSC
Sebanyak 100 mg PSC kering dicampur dengan 5 ml HCl 6M. Campuran dibersihkan dengan gas
nitrogen dan vakum-disegel sebelum pemanasan pada suhu 110 C selama 24 jam. Setelah hidrolisis,
hidrolisat ditambahkan ke 400 ml 50 mole / ml-L--amino-butirat n asam (AABA) (standar
internal). Campuran itu kemudian atasnya-sampai 100 ml dengan air deionisasi. Sampel kemudian
disaring oleh 0,22 m membran filter.

Selanjutnya, sampel diderivatisasi dengan menambahkan


10 ml sampel 20 ml AccQ fluor

TM

reagen (AQC: 6-aminoquinolyl-N-

hydroxysuccinimidyl karbamat). Campuran diinkubasi pada suhu kamar selama 1 menit untuk
memungkinkan reaksi berlangsung. Sampel kemudian dipanaskan pada 55 C selama 10 menit sebelum
analisis asam amino. Sebanyak 10 ml sampel disuntikkan ke dalam kolom dan elusi yang dimulai
dengan laju alir 1 ml / menit.

Analisis asam amino dari PSC dilakukan dengan menggunakan Waters-High Performance
Liquid Chromatography (HPLC) sistem (Milford, MA,
USA) dengan detektor fluoresensi. Kolom yang digunakan dalam analisis adalah Waters AccQ
Tag

TM

Asam amino Analisis Kolom (silika berbasis terikat dengan C18) (3,9 mm 150 mm). Kolom

dipertahankan pada 37 C selama analisis. Fluoresensi diukur pada 250 nm untuk eksitasi dan 395 nm
untuk emisi. Identifikasi dan kuantifikasi amino
asam dilakukan dengan membandingkan waktu retensi dan luas dengan standar asam amino. Analisis
asam amino dilakukan dalam tiga ulangan. Isi glutamin diperkirakan dari konten glutamat. Metionin dan
sistein tidak ditentukan dalam analisis komposisi asam amino.

Pemetaan peptida dari PSC


Pemetaan peptida dari PSC dilakukan sesuai dengan metode Jongjareonrak et al.
(2005). Sebanyak 2 mg PSC, kolagen tipe I dari kulit anak sapi dan kolagen tipe I dari kulit
salmon dilarutkan dalam 500 ml 0,1 M natrium fosfat (pH 7,2) yang mengandung 0,5% SDS, masingmasing. Pencernaan dilakukan dengan menambahkan 0,05 ug lysyl endopeptidase 100 ml larutan kolagen
yang mengandung 400 mg dari PSC. Campuran diinkubasi pada 37 C selama 5 menit. Campuran itu
kemudian dikenakan 100 C selama 5 menit untuk menghentikan pencernaan. Pola elektroforesis peptida

dicerna diselidiki dengan melakukan SDS-PAGE menggunakan 7,5% menyelesaikan gel. Pemetaan
peptida dari sampel kolagen diulang dalam protokol yang sama seperti dijelaskan di atas tanpa
menambahkan lysyl endopeptidase.
Peptida peta PSC, tipe I betis kolagen kulit dan tipe I kolagen kulit salmon dibandingkan.

Transformasi Fourier inframerah (FTIR) spektroskopi


Spektrum FTIR dari PSC tercatat 4000-650 cm
spektrofotometer (Agilent Cary 640;

-1

pada resolusi 4 cm

-1

menggunakan FTIR

Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA).


Dilemahkan Jumlah Refleksi (ATR) modus yang digunakan dalam penelitian ini. Spektrum FTIR
diperoleh dianalisis menggunakan Resolusi software Pro FTIR

(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA).


Penentuan suhu denaturasi
Suhu denaturasi PSC ditentukan dari perubahan viskositas intrinsik kolagen. Penyelidikan
dilakukan sesuai dengan metode yang dijelaskan oleh Wang et al.
(2008) dengan sedikit modifikasi. Sebanyak 20 ml
0,03% (b / v) PSC di 0,1 M asam asetat dimasukkan ke Ubbelohde viskometer dan diinkubasi pada 10 C
selama 30 menit. Suhu meningkat dari 10 C hingga 50 C bertahap dengan interval 2,5 C. Suhu
dipertahankan pada setiap temperatur yang ditunjuk selama 30 menit. Waktu penghabisan larutan
PSC diukur pada setiap suhu yang ditunjuk. Waktu penghabisan dari pelarut kosong (0,1 M asam
asetat) juga diukur dengan menggunakan protokol yang sama seperti dijelaskan di atas. Viskositas
pecahan PSC pada suhu yang ditunjuk dihitung sesuai dengan persamaan berikut:

3016

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

Viskositas pecahan = [ sp (TC) - sp

(50C)]

/ [ sp (10C) - sp (50C)],

dimana viskositas spesifik ( dihitung sebagai berikut:


sp = (T - t / t
sp)

0)

0,

di mana t adalah waktu penghabisan dari PSC dan t

adalah waktu penghabisan dari pelarut

kosong. Kurva denaturasi termal diperoleh dengan memplot viskositas pecahan terhadap suhu. Suhu
denaturasi (T d) dari PSC ditentukan sebagai suhu dimana viskositas pecahan adalah 0,5.

Hasil dan Diskusi


Ekstraksi PSC dari dinding tubuh mahkota-of-duri bintang laut (COTS)
Kadar air dari dinding tubuh COTS adalah 79,43%. Hasil dari PSC adalah
2,29% (dasar berat kering). Setelah pengobatan NaOH, demineralisasi dan pemilahan, kolagen
COTS pertama kali diekstraksi menggunakan 0,5 M asam asetat tetapi fibril kolagen tidak dilarutkan
dalam 0,5 M asam asetat.

Oleh karena itu, tidak ada kolagen dapat dikumpulkan pada langkah ini.
Namun, pada langkah berikutnya, fibril kolagen dari COTS yang mudah dilarutkan oleh pepsin
pencernaan. Selain itu, Saito et al. (2002) dan Cui etal. (2007) juga melaporkan hasil yang sama
untuk kolagen fibril dari teripang Stichopus japonicas. The tdk dpt dari fibril kolagen dalam asam
asetat menunjukkan bahwa link silang di daerah telopeptide (non-heliks wilayah) molekul kolagen
dan antarmolekul cross-link molekul kolagen yang tidak rusak selama ekstraksi dengan hanya asam asetat
(Jongjareonrak et al., 2005). Oleh karena itu, ini lintas-link penurunan kelarutan kolagen dalam asam
asetat (Jongjareonrak et al., 2005). Namun, kolagen adalah mudah dilarutkan oleh pepsin
pencernaan. Hal ini disebabkan silang keterkaitan di wilayah telopeptide yang dibelah oleh pepsin tanpa
mengganggu struktur heliks tiga molekul kolagen (Jongjareonrak et al., 2005). Oleh karena itu, pepsin
digunakan dalam ekstraksi kolagen dari COTS.

Pola elektroforesis PSC


Pola elektroforesis PSC dari dinding tubuh COTS ditunjukkan pada Gambar 1.
SDS-PAGE menunjukkan bahwa PSC terdiri dari dua rantai , (dimer) rantai, (trimer) rantai
dan berat molekul tinggi cross-linked komponen (intra dan antar molekul cross-link). Rantai
adalah komponen utama dari PSC. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 1 dan 2 rantai
memilikimobilitas elektroforesis yang berbeda, menunjukkan bahwa berat molekul mereka
berbeda. Selain itu, -komponen PSC terdiri dari

11

adalah homodimer rantai 1 sedangkan

12

11

dan

12

rantai. The

rantai adalahheterodimer dari 1 dan 2

rantai. Pola SDS-PAGE dan komposisi subunit dari PSC menyarankan bahwa PSC mungkin tipe I
kolagen yang terdiri dari dua rantai 1 dan 2 satu rantai sebagai komponen utama. Selain
itu, pola elektroforesis PSC mirip dengan yang dilaporkan untuk kolagen dari landak laut ungu
(Nagai dan Suzuki, 2000), redfish laut dalam (Wang et al., 2008) dan ikan
mas (Duan et al., 2009). Namun, mobilitas elektroforesisdan berat molekul dari dua rantai dari
PSC secara signifikan berbeda dari betis kolagen kulit dan kulit salmon kolagen. Rantai 1 dan
2 dari PSC ternyata memiliki berat molekul yang lebih tinggi dibandingkan dengan sapi kolagen
kulit dan kolagen kulit salmon. Selain itu, pola SDS-PAGE berat molekul tinggi cross-linked komponen,
dan rantai dari PSC yang berbeda dari betis dan salmon kolagen. Hal ini menunjukkan bahwa
struktur utama PSC berbeda dari orang-orang dari betis kolagen kulit dan kolagen kulit
salmon. Perbedaan ini juga menunjukkan bahwa ada perbedaan antara struktur utama kolagen dari
binatang yang berbeda.

Komposisi asam amino dari PSC

Tabel 1 menunjukkan komposisi asam amino dari PSC. Glycine adalah asam amino utama
yang ditemukan di PSC, akuntansi untuk 232 residu per 1.000 residu dari total residu asam
amino. Hal ini bisa disebabkan oleh urutan asam amino yang unik dari kolagen mana glisin
muncul di setiap ketiga residu asam amino (Jongjareonrak et al., 2005). Namun, isi glisin di
PSC lebih rendah daripada konten glisin secara teoritis diharapkan, yang kira-kira
333 residu per 1.000 residu. Selain itu, hasil ini sesuai dengan isi glisin kolagen dari Nil bertengger
(Muyonga et al., 2004) dan Brownstripe kakap merah (Jongjareonrak et al., 2005). Swatschek et
al. (2002) melaporkan bahwa kandungan glisin rendah kolagen bisa disebabkan kotoran dari glikoprotein
yang terikat erat dengan molekul kolagen. Selain itu, tingginya kandungan hydroxproline (111 residu per
1.000 residu), prolin (108 residu per 1.000 residu) dan alanin (105 residu per 1.000 residu) terdeteksi
dalam PSC. Namun, analisis asam amino menunjukkan PSC memiliki kandungan rendah fenilalanin (4
residu per 1.000 residu) dan tirosin (7 residu per 1.000 residu). Histidin tidak terdeteksi di PSC. Isi relatif
tinggi glisin, prolin dan hidroksiprolin, yang merupakan asam amino karakteristik kolagen, menyarankan
bahwa kolagen adalah komponen utama

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

3017

Tabel 1. Komposisi asam amino dari pepsinterlarut collag en (PSC) dari mahkota-ofduri bintang laut (C OTS)
Asam amino
Alanin (Ala)

Komposisi (residu / 1000 residu)


105

Arginine (Arg)
Asam aspartat (Asp)

94
78

Asam glutamat (Glu)


Glycine (Gly)

106
232
a

Histidin (Nya)

ND

Isoleusin (Ile)
Leusin (Leu)

19
16

Lysine (Lys)
Fenilalanin (Phe)

18
4

Prolin (Pro)
Serin (Ser)

108
40

Treonin (THR)
Tirosin (Tyr)

34
7

Valin (Val)
Hydroxproline (Hyp)

28
111

Total

1000

Tidak terdeteksi

PSC. Selain itu, komposisi asam amino dari PSC mirip dengan komposisi asam amino yang
dilaporkan untuk kolagen dari Nil bertengger (Muyongaet al., 2004), Kakap merah Brownstripe
(Jongjareonrak et al., 2005) dan redfish laut dalam (Wang et al., 2008).
Total kandungan asam imino (prolin dan hidroksiprolin) di PSC adalah 219 residu per 1000 residu,
yang mirip dengan kolagen dari betis dan babi (215 dan 220 residu per 1000 residu)
(Zhang et al., 2007). Selain itu, kandungan asam imino dari PSC ditemukan sedikit lebih tinggi
dibandingkan dengan kolagen dari organisme laut tropis (seperti Nil bertengger dan hiu bambu) yang
mengandung 180207 residu asam imino per 1.000 dari residu asam amino yang jumlah (Muyonga et al, 2004;..
Kittiphattanabawon et al, 2010). Namun, itu jauh lebih tinggi dari kandungan asam imino kolagen
dari organisme air dingin (seperti laut dalam merah ikan dan cod) yang mengandung 140-160
residu asam imino per 1000 dari residu asam amino Total (Rigby, 1968; Wang et al, 2008). . Pengamatan
ini menunjukkan bahwa kandungan asam imino kolagen dari suatu organisme berhubungan dengan
lingkungan hidup yang (Rigby, 1968). Selain itu, Jongjareonrak et al. (2005) menunjukkan bahwa
kandungan asam imino (prolin dan hidroksiprolin) memberikan kontribusi untuk suhu denaturasi
kolagen. Cincin pyrrolidine prolin dan hidroksiprolin menstabilkan struktur sekunder rantai polipeptida
molekul kolagen. Oleh karena itu, hal ini membantu untuk menjaga integritas struktur heliks tiga kolagen
(Jongjareonrak et al., 2005). Hal ini juga menunjukkan bahwa stabilitas struktur kolagen adalah
sebanding dengan kandungan total asam imino, yaitu, prolin dan hidroksiprolin. Selain
itu, kandungan imino dari PSC relatif tinggi dibandingkan dengan kolagen dari organisme laut lainnya
terutama organisme laut yang dingin-air, menunjukkan bahwa suhu denaturasi PSC lebih tinggi
dibandingkan kolagen laut lainnya.
Gambar 1. Pola SDS-PAGE pepsin-terlarut kolagen (PSC) dari dinding tubuh mahkota-of-duri bintang laut
(COTS). Lane 1: berbagai penanda berat molekul; jalur 2: kolagen tipe I dari kulit sapi; jalur 3: kolagen
tipe I dari kulit salmon; jalur 4: PSC

Gambar 2. Peptida peta pepsin-terlarut kolagen


(PSC) dari mahkota-of-duri bintang laut (COTS) dicerna oleh lysyl endopeptidase. Lane 1: kolagen tipe
I dari kulit sapi; jalur 2: kolagen tipe I dari kulit salmon; jalur 3: PSC; jalur 4-6: fragmen peptida tipe
dicerna I betis kolagen kulit, kolagen tipe I dari kulit salmon dan

PSC, masing-masing; Jalur 7: berbagai penanda berat molekul

Peptida peta PSC


Peptida peta PSC dicerna oleh lysyl endopeptidase, dibandingkan dengan kolagen kulit betis dan
kolagen kulit salmon ditunjukkan pada Gambar 2. Setelah pencernaan dengan lysyl endopeptidase,
intensitas band berat molekul tinggi cross-linked komponen, , dan rantai PSC
yang sedikitmenurun dibandingkan dengan sapi kolagen kulit dan kolagen kulit salmon. Hal ini
menunjukkan bahwa PSC adalah lebih tahan terhadap lysyl endopeptidase pencernaan dibandingkan
dengan dua kolagen lainnya. Selain itu, perbedaan yang signifikan dalam pola elektroforesis peptida
dicerna antara PSC, kolagen kulit betis dan kolagen kulit salmon diamati. Pengamatan ini menunjukkan
bahwa ketersediaan ikatan peptida rentan untuk lysyl endopeptidse pencernaan mungkin berbeda di setiap
sampel kolagen. Oleh karena itu, hal ini memberikan kontribusi terhadap tingkat yang berbeda

3018

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

Gambar 3. Spektrum FTIR dari pepsin-terlarut kolagen (PSC) dari mahkota-of-duri bintang laut
dan posisi puncak utama dalam spektrum
Gambar 4. Kurva denaturasi termal pepsin-terlarut kolagen (PSC). Suhu denaturasi (T d) dari PSC adalah
33 C.
hidrolisis antara sampel kolagen. Lysyl endopeptidase adalah protease yang memotong ikatan peptida di
lokasi karboksil dari residu lisin. Kandungan residu lisin (18 residu per 1.000 residu) (Tabel 1) di PSC
lebih rendah dibandingkan kolagen kulit anak sapi (26 residu per 1.000 residu) (Zhang et al.,2007) dan
kolagen kulit salmon (26 residu per 1000 residu) (Saito et al., 2001). Hal ini mungkin berkontribusi
terhadap PSC menjadi lebih tahan terhadap pencernaan dengan lysyl endopeptidase dibandingkan dengan
betis kolagen kulit dan kolagen kulit salmon. Oleh karena itu, kolagen kulit sapi dan kulit salmon yang
dicerna ke tingkat yang lebih besar dibandingkan dengan PSC. Ada perbedaan yang
signifikan antara peta peptida dari PSC, betis kolagen kulit dan kolagen kulit salmon yang dihasilkan
oleh lysyl endopeptidase. Hal ini menunjukkan bahwa struktur utama PSC berbeda dari kolagen kulit
betis dan kolagen kulit salmon.

Transformasi Fourier inframerah (FTIR) spektrum untuk PSC


Spektrum FTIR dari PSC dan posisi puncak utama ditunjukkan pada Gambar 3. amida
A dikaitkan dengan NH frekuensi peregangan (Wang etal., 2008). Free NH peregangan getaran
terjadi di kisaran 3400 - (. Wang et al, 2008) 3440 cm -1.
Namun, ketika NH kelompok peptida yang terlibat dalam ikatan hidrogen, posisi digeser ke frekuensi
yang lebih rendah (Duan et al., 2009). Amida A band PSC terletak di 3.314,57 cm -1. Ini berarti bahwa
Kelompok NH sampel kolagen terlibat dalam ikatan hidrogen, yang membantu untuk menstabilkan
tiga
struktur heliks kolagen. Amida I band PSC ditemukan di wavenumbers dari 1.647,63 cm
penyerapan untuk amida I Band, yaitu 1600 - 1700 cm

-1.

-1.

Itu dalam rentang

Amida I band ini terkait dengan getaran peregangan

kelompok karbonil (C = O bond) sepanjang polipeptida kolagen dan juga indikator untuk struktur sekunder peptida
(Wang et al., 2008). Band amida II dari PSC telah muncul di 1.554,97 cm

-1.

Itu pas baik dalam

karakteristik rentang serapan untuk posisi pita amida II - (.Duan et al, 2009) (1550 1600 cm -1). Amida III
dari sampel kolagen ditemukan di 1.242,46 cm -1, yang dalam kisaran penyerapan amida III (1200-1400 cm 1)

(Woo etal, 2008.). Amida III terkait ke NH tikungan dan CH stretching (Woo et al., 2008). Hal ini juga

terkait dengan struktur heliks tiga kolagen (Woo et al., 2008). Oleh karena itu, ini menyarankan struktur heliks tiga
dari PSC baik diawetkan selama ekstraksi. Hasil ini mirip dengan

Spektrum FTIR dari kolagen dari redfish laut dalam

(Wang et al., 2008), ikan mas (Duan et al., 2009) dan hiu bambu brownbanded
(Kittiphattanabawon et al., 2010).
Perilaku termal
Ikatan hidrogen yang menstabilkan struktur heliks tiga kolagen secara bertahap rusak sebagai
kenaikan suhu. Hal ini memberikan kontribusi terhadap disintegrasi struktur heliks tiga dalam struktur
kumparan acak melalui depolimerisasi termal (Wang et al., 2008). Oleh karena itu, perubahan viskositas
diamati (Wang et al., 2008). Gambar 4 menunjukkan perubahan viskositas pecahan PSC karena suhu
meningkat. Suhu denaturasi PSC bertekad untuk menjadi 33,0 C.
Itu 3,3 C dan 4 C lebih rendah dari suhu denaturasi kolagen sapi dan kolagen babi, masing-masing
(Ogawa et al, 2004;.. Zhang et al, 2007). Suhu denaturasi kolagen dari COTS, yang menghuni di air laut

tropis, mirip dengan kolagen dari organisme laut beriklim sedang dan tropis lainnya seperti landak laut
ungu
(28 C), ubur-ubur rhizostomous (28,8 C) dan rumput ikan mas (28,4 C) (Nagai dan
Suzuki, 2000;. Nagai et al, 2000; Zhang et al., 2007).Namun, suhu denaturasi PSC dari COTS jauh
lebih tinggi dibandingkan dengan organisme air dingin seperti deep- redfish laut (16,1 C), Alaska
Pollack (16,8 C) dan cod
(15 C) (Wang et al., 2008). Hasil ini menunjukkan bahwa stabilitas termal kolagen dikaitkan dengan suhu fisiologis
dan lingkungan organisme (Rigby, 1968). Selain itu,suhu denaturasi PSC lebih tinggi dari suhu denaturasi
kolagen dari organisme laut lainnya

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

3019

mungkin juga berkaitan dengan kadar asam imino tinggi (219 residu per 1.000 residu)
(Muyonga et al., 2004). Struktur kolagen terutama distabilkan oleh cincin pyrrolidine prolin dan
hidroksiprolin yang mempertahankan struktur sekunder dari rantai polipeptida
(Jongjareonrak etal., 2005). Selanjutnya, ikatan hidrogen dari gugus hidroksil dari
hidroksiprolin juga membantu untuk menstabilkan struktur kolagen (Zhang etal., 2007).
Kesimpulan
Ada sejumlah besar mahkota-of-duri bintang laut (COTS) telah dihapus dari laut dan
diperlakukan sebagai limbah. Dalam penelitian ini, kolagen berhasil diekstrak dari
bintang laut. Suhu denaturasi kolagen dari dipan adalah sebanding dengan sapi dan kolagen
babi. Hal ini menunjukkan bahwa dipan bisa menjadi sumber alternatif yang potensial
kolagen. Selain itu, ini merupakan pendekatan yang ramah lingkungan untuk mengelola laut
kurang dimanfaatkan.
Pengakuan
Ini Karya ini didukung oleh Dunia Pertama
Dana Inovasi Penemuan (WFDI-1002 / PDOPING / 910.203) dari Universiti Sains Malaysia.

Referensi
Brodie, J., Fabricius, K., De'ath, G. dan Okaji K. 2005. Apakah peningkatan masukan nutrisi yang bertanggung jawab
atas wabah lebih mahkota-of-duri bintang laut?Sebuah penilaian bukti. Laut Polusi Bulletin 51: 266-278.
Conand, Ain, C dan Sloan, NA 1989. Dunia Perikanan untuk Echinodermata. Di Caddy, JF (Eds). Kelautan Invertebrata

Perikanan: Penilaian mereka dan Manajemen, hlm. 647-

663. New York: Wiley and Sons.


Cui, F.-X., Xue, C.-H., Li, Z.-J., Zhang, Y.-Q., Dong, P., Fu, X.-Y. dan Gao, X. 2007. Karakterisasi dan
subunit komposisi kolagen dari dinding tubuh teripang Stichopus japonicas. Food Chemistry 100:
1120-1125.
Duan, R., Zhang, J., Du, X., Yao, X. dan Konno, K. 2009. Sifat kolagen dari kulit, skala dan tulang ikan
mas (Cyprinus carpio). Food Chemistry 112: 702-706.
Internet: Mstar online 2011. Papan Tanda
Amaran UNTUK Penyelama Di Pulau Redang. Download dari: http://mstar.com.my/cerita. asp? sec
= mstar_berita & file = / 2011/9/25 / mstar_ berita / 20110925151849.
Jongjareonrak, A., Benjakul, S., Visessanguan, W., Nagai, T. dan Tanaka, M. 2005. Isolasi dan karakterisasi kolagen asam
dan pepsin-solubilised dari kulit Brownstripe kakap merah(Lutjanus Vitta). Makanan

Chemistry 93: 475-484.


Kittiphattanabawon, P., Benjakul, S., Visessanguan,
W., Kishimura, H. dan Shahidi, F. 2010. Isolasi dan karakterisasi kolagen dari kulit hiu bambu
brownbanded (Chiloscyllium punctatum). Food Chemistry 119: 1519-1526.
Laemmli, UK 1970. Pembelahan protein struktural saat perakitan kepala T4 bakteriofag.
Nature 227: 680-685.
Muyonga, JH, Cole, CGB dan Duodu, KG 2004. Karakterisasi kolagen larut asam dari kulit muda dan
dewasa bertengger Nil (Lates niloticus).Makanan Chemistry 85: 81-89.
Nagai, T. dan Suzuki, N. 2000. karakterisasi parsial kolagen dari landak laut
ungu (Anthocidaris crassispina) tes. International Journal of Food Science dan Teknologi 35: 497-501.

Nagai, T., Worawattanamateekul, W., Suzuki, N., Nakamura, T., Ito, T., Fujiki, K., Nakao, M. dan
Yano, T. 2000. Isolasi dan karakterisasi kolagen dari ubur-ubur rhizostomous ( Rhopilema
Asamushi ). Food Chemistry 70: 205-208.
O'Neill, P. 1989. Struktur dan mekanika tubuh bintang laut di dinding. Journal of Experimental Biology 147: 5389.

Ogawa, M., Portier, RJ, Moody, MW, Bell, J.,

Schexnayder, MA dan Losso, JN 2004. Biokimia sifat tulang dan skala kolagen terisolasi dari drum hitam
ikan subtropis ( Pogonia cromis ) dan sheepshead seabream ( Archosargus probatocephalus ). Food Chemistry
88: 495-501.

Ricard-Blum, S., Ruggiero, F. dan Istirahat, MVD 2005. kolagen superfamili. Topik dalam Kimia
sekarang 247: 35-84.
Rigby, BJ 1968. Komposisi Amino-Asam dan termal stabilitas kolagen kulit Antartika es ikan. Nature
219: 166-167.
Saito, M., Kunisaki, N., Urano, N. dan Kimura, S. 2002.

Kolagen sebagai komponen dimakan utama teripang ( Stichopus japonicus ). Journal of Food Science
67: 1319-1322.
Saito, M., Takenouchi, Y., Kunisaki, N. dan Kimura, S.
2001. Struktur utama Lengkap rainbow trout jenis
Saya kolagen yang terdiri dari 1 (I) 2 (I) 3 (I) heterotrimers.

European Journal of Biochemistry 268: 2817-2827. Swatschek, D., Schatton, W., Kellermann, J.,
Muller, W.
EG dan Kreuter, J. 2002. Kelautan spons kolagen: isolasi, karakterisasi dan efek pada parameter
permukaan kulit-pH, kelembaban dan sebum.European Journal of farmasi dan Biopharmaceutics 53:
107-113.
Wang, L., An, X., Yang, F., Xin, Z., Zhao, L. dan Hu, Q.
2008. Isolasi dan karakterisasi kolagen dari kulit, skala dan tulang redfish laut dalam
( Sebastes mentella ). Food Chemistry 108: 616-623.

Woo, J.-W., Yu, S.-J., Cho, S.-M., Lee, Y.-B. dan Kim, S.-B. 2008. Ekstraksi optimasi dan sifat kolagen
dari ikan tuna yellowfin ( Thunnus albacares ) kulit punggung. Makanan Hydrocolloids 22: 879887.
Zhang, Y., Liu, W., Li, G., Shi, B., Miao, Y. dan Wu,
X. 2007. Isolasi dan karakterisasi parsial

3020

Tan et al / IFRJ 20 (6):. 3013-3020

pepsin larut kolagen dari kulit rumput


ikan mas ( Ctenopharyngodon
idella ). Food Chemistry 103: 906-912.