+

FERMENTASI
Proses & Kontrol
Verda Farida, M.Biotech., Apt.

Seed stock

Seed flask

Pre-seed
fermenter

Seed fermenter

Nutrisi

Substrat

sterilisasi

Production fermenter

SKRINING SUMBER ALAM

incubate
inoculate

Pengembangan
Mikroorganisme

Dari Culture Collection

Skrining dari sumber alam

Rekayasa genetika

identification

isolation
inspection

Pengembangan
Mikroorganisme

Dari Culture Collection

Skrining dari sumber alam

Rekayasa genetika

REKAYASA GENETIKA

Pengembangan
Mikroorganisme

Dari Culture Collection

Skrining dari sumber alam

Rekayasa genetika

REKAYASA GENETIKA

Penyimpanan
Mikroorganisme

Agar miring

-20OC, 4OC, suhu ruang

Subkultur tiap 6 bulan

Air suling

Spora

5OC

Minyak

Liofiliasasi (kering-beku)

Dikeringkan pada fase log

Dibekukan (kandungan air )

Tanah

Steril

Fungi & Actinomycetes

Nitrogen cair

Seed stock:

Seed fermenter

Inokulum & Seed

Fermenter
Sehat

2.

Bisa dibiakkan dalam vol

besar

3.

Bentuk morfologi stabil

4.

Bebas kontaminan

5.

Fase log

6.

Mudah adapatasi

Seed stock + media

pertumbuhan

Bejana (fase fase

eksponensial/log)
Jumlah cukup & sehat

Syarat bakteri untuk diinokulasi

1.

Sediaan mikrobia yang disimpan

dalam media tertentu

Fermenter

Waktu

Bakteri 20 120 min

Jamur, alga 2 6 jam

Konsentrasi
organisme

Penyiapan
Inokulum

konsentrasi (%)

Bakteri

0,1 3,0

actinomycetes 5,0 10,0

fungi

suspensi spora 1 50.000/L

5,0 10,0

Tinggi rendahnya konsentrasi

inokulum tergantung dari
viabilitas sel, inhibitor
pertumbuhan atau rendahnya
nutrisi dalam medium
fermentasi

Media

Broth

Semi padat

Padat

SYARAT MEDIA

Mengandung nutrisi yang

dibutuhkan untuk:

Pertumbuhan

Sumber energi

Tidak mengandung zat penghambat

pertumbuhan

Bebas kontaminan

Mengandung elemen yang

dibutuhkan untuk sintesis produk

Produk:

Metabolit primer: pertumbuhan

optimal

Metabolit sekunder: pertumbahan

optimal dikurangi

Media

Broth

Semi padat

Padat

Optimalisasi:

pH

Temperature

Dissolved oxygen (DO)

Substrate choice

Substrate concentration

Udara

Filtrasi melalui membran hidrofob

< 0,1 m (partikel,

mikroorganisme)

Media

Sterilisasi

Udara

Bersamaan dengan
fermenter/terpisah

121OC

20 30 min

Heat-sensitive media: membran

hidrofil

Media
Fermenter

+
Proses Fermentasi

Nutrisi, substrat, inokulum

Pengaturan kecepatan aerasi & agitasi

Aerasi : supply O2, stabil. Fluktuasi kadar DO

tidak stabil metabolisme terganggu/sel rusak

Agitasi: homogenisasi larutan fermentasi

Impeller: pengadukan

Semakin banyak impeller kondisi homogen

semakin terjamin

Agitasi ~ aerasi
Agitasi meratakan kadar O2 di seluruh media

Baffle: mencegah terjadinya pusaran air

Antifoam & foam breaker

GFP
Green Fluorescent Protein

Drag picture to
placeholder or
click icon to add

+
Proses Fermentasi
GFP

GFP: Green fluoroscent protein

Biological marker

Tidak mempengaruhi sel normal

+
Proses Fermentasi
GFP

PREPARASI:

Menyiapkan bahan dasar

Antibiotik (menjaga kemurnian)

E. Coli rekayasa gen produksi GFP

jellyfish Aequorea victoria

Biochemical inducer (IPTG ~ isopropyl-beta-D

thiogalactopyranoside)

Nutrient

Stabilize

Anti foaming

+
Proses Fermentasi
GFP

Alat:

Bioreaktor

Spektro UV vis

optical density ~ konsentrasi sel

Glucose analyser

kandungan glukosa

pH meter

+
Proses Fermentasi
GFP

+
Proses Fermentasi
GFP

Sensor:

DO

pH

Suhu di dalam bioreaktor

Suhu di water jaket

Tekanan dalam vessel

+
Proses Fermentasi
GFP

Bersihkan dan disanitasi

Sterilisasi

+
Proses Fermentasi
GFP

Proses fermentasi

Persiapan seed stock

Diinokulasi ke tabung
erlenmeyer

Siap untuk difermentasi

Cek peralatan kritis

Klep/katup

Penyumbat

Saluran

Cek sensor

Masukkan HPW (high

purified water)

Cek tekanan

Agitator dinyalakan

+
Proses Fermentasi
GFP

Masukkan bahan:

Yeast Extract
Tryptic Soy Broth
Ammonium Chloride
Natrium Bifosfat
Monokalium Fosfat
Anti-foam

HPW tambahan
Klep ditutup
Klep kondensasi dibuka
SIP ~ sterilize in place cycle (121 OC, 30 min)
Klep kondensasi ditutup
Proses sterilisasi dimulai

+
Proses Fermentasi
GFP

Glukosa & antibiotik disterilkan di tempat terpisah

Dimasukkan ke dalam bioreaktor

Cek pH

Masukkan inokulum

Proses Fermentasi

+
Proses Fermentasi
GFP

Monitor:

Suhu batch

Putaran agitator

Level DO

pH

Tekanan bejana

Optical density

Kecepatan alir udara

Konsentrasi glukosa

Grafik

+
Proses Fermentasi
GFP
IPTG

Gen GFP aktif

GFP (5 jam)

Cek kadar
(densitas optik &
glukosa)

Broth

Downstream
process

Fermentasi

Upstream
process

Recovery

Purifikasi

Formulasi

Packaging

Downstream
process

+
Downstream Process

Recovery

Perolehan produk

Purifikasi

Pemurnian produk

Drag picture to
placeholder or
click icon to add

Sekian

Drag picture to
placeholder or
click icon to add

Verda Farida, M.Biotech., Apt