Test Katalase Uji ini dapat menunjukkan adanya respirasi aerob. Katalase adalah salah satu enzim yang digunakan mikroorganisme untuk menguraikan hidrogen peroksida yang bersifat toksik dalam sel karena menginaktifkan enzim dalam sel. Uji katalase berguna untuk mengidentifikasi kelompok bakteri tertentu. Pada bakteri bentuk coccus uji katalase digunakan untuk membedakan staphylococcus dan streptococcus. Kelompok staphylococcus bersifat katalase positif sedangkan streptococcus bersifat katalase negatif. Penentuan adanya katalase diuji dengan larutan 3% H2O2 pada koloni terpisah (Bibiana, 1994). 2. Pengecatan gram Termasuk pengecatan differensial karena zat warna yang digunakan adalah pewarna differensial, karena dapat membagi bakteri sejati menjadi 2 kelompok fisiologi yang memudahkan identifikasi jenisnya. 3. Fermentasi karbohidrat Kemampuan memfermentasikan karbohidrat dan produk fermentasi yang dihasilkan merupakan ciri yang sangat berguna dalam identifikasi bakteri. Hasil akhir fermentasi karbohidrat ditentukan oleh sifat mikroba, media yang digunakan, serta faktor lingkungan. Untuk menentukan adanya fermentasi, di laboratorium digunakan media MR-VP. Pembentukan asam dapat diketahui dengan menambahkan indikator ke dalam media. Kaldu karbohidrat digunakan untuk uji pembentukan asam (Bibiana, 1994). 4. Uji oksidase Uji ini berguna untuk identifikasi mikroorganisme pathogen. Bakteri yang bersifat oksidase positif diberi reagen oksidase (dimetil-p-fenilendriamin oksalat), maka warna koloni berubah menjadi hitam dalam waktu 30 menit. Perubahan warna ini disebabkan oksidase sitokrom mengoksidasikan larutan reagens. Reagen yang dioksidasi bewarna hitam namun bila terjadi reduksi tidak terjadi perubahan warna (Bibiana, 1994). 5. Uji indol Penumpukan indol dalam media biakan dapat diketahui dengan penambahan berbagai reagen seperti : Kovacs, Ehrlich, dan Ehrlich bihme. Semua reagen tersebut mengandung para-dimetil-aminobenzaldehida. Reagen akan bereaksi dengan indol dan akan menghasilkan senyawa yang tidak larut dalam air dan berwarna merah pada permukaan medium. Untuk uji ini digunakan media semi padat yang kaya akan triptofan. Penggunaan media semi padat ini sekaligus untuk melihat pergerakan bakteri. Jika bakteri bergerak akan terlihat pertumbuhan di sekotar tusukan dan permukaan media (Bibiana, 1994).
6. Uji VP (Voges-Poskauler) Uji ini digunakan untuk
mengidentifikasikan
mikroorganisme
yang
melaksanakan fermentasi 2,3 butanadiol. Bila bakteri mengidentifikasikan
karbohidrat menjadi 2,3 butadional sebagai produk utama akan terjadi penumpukan bahan tersebut dalam media pertumbuhan. Penambahan 40% KOH dan 5 % larutan alfanaphtol dalam etanol dapat menentukan adanya aseoin (asetil metal karbinol), suatu senyawa permukaan dalam sintesi 2,3 butadional. Pada penambahan KOH adanya asetoin oleh perubahan warna kaldu menjadi merah muda. Yang kemudian diperjelas dengan penambahan larutan alfanaphtol (Bibiana, 1994). 7. Uji Hidrogen sulfide Pembentukan asam sulfida oleh mikroorganisme menunjukkan adanya penguraian asam amino yang mengandung sulfur. Mikroorganisme yang menghasilkan desulfurase sewaktu dibiakkan dalam media yang kaya akan asam amino yang mengandung sulfur akan menghasilkan H2S dan senyawa FeS yang berwarna hitam dan tidak larut dalam air. Pembentukan H 2S dapat terlihat dengan menggunakan media yang mengandung polipeptida dan kaya akan asam amino yang mengandung sulfur dan ion Fe2+. Jika digunakan lead acetate agar, maka H2S beraksi dengan PG dan PG5 yang berwarna hitam (Bibiana, 1994). 8. Uji dekarboksilase lisin Proses dekarboksilase lisin dapat diketahui dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam biakan yang mengandung lisin. Karbohidrat yang dapat difermentasikan (glukosa) dan indikator pH untuk melihat perubahan pH (lazimnya BCP). Uji ini digunakan dalam pencirian mikroorganisme terutama yang menempati saluran pencernaan (Bibiana, 1994). 9. Uji sitrat Digunakan untuk menguji kemampuan mikroorganisme menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi. Untuk menguji ini dpaat digunakan medium sitrat korer yang berupa cairan dan tidak mengandung indikator pH bromthymol blue (Bibiana, 1994). 10. Hidrolisis urea Beberapa mikroorganisme mampu menghasilkan enzim urease yang menguraikan urea menjadi ammonium dan CO2. Aktifitas enzim urease ini dapat diamati dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam media biakan yang mengandung urea dan indikator pH. Bila urea dihidrolisis NH4+ terakumulasi dalam media biakan dan menyebabkan pH menjadi basa. Perubahan warna dari merah jingga menjadi merah ungu menunjukkan terjadi hidrolisis. Urea bersifat
labil sehingga media urea tidak dapat disterilkan dengan autoklaf tetapi dengan filtrasi (Bibiana, 1994).
