Anda di halaman 1dari 19

KROMATOGRAFI

PENUKAR ION

Penukar kation
Penukar anion

Kromatografi penukar ion


Penukar kation
Penukar anion

Matrik penukar kation dan anion

Material penukar ion


Suatu
padatan
yang
mengandung gugus gugus
bermuatan dan terikat secara
kimia, yang dapat mengikat ion
secara reversibel.
Gugus-gugus yang bermuatan
tersebut terikat pada suatu resin

Kromatografi penukar ion


- Penukar kation
- Penukar anion

Mekanisme
Sampel
protein
dengan
bermuatan
yang
berbeda
dimasukkan ke dalam kolom
kromatografi penukar ion, dielusi
dengan bufer awal.
Mol/partikel
sampel
yang
bermuatan
sama
dengan
konterion akan menggantikan
kedudukan konterion tsb, dan
terikat pada matriks.

Mol/part.
sampe1
yang
terikat dilepaskan dengan
cara gradien konsentrasi
atau gradien pH.
Semua
partike1
yang
terikat pada matriks akan
dilepaskan
secara
berurutan
berdasarkan
kekuatan ikatannya.
Regenerasi,
Kolom
siap

Mekanisme
a. Bahan pengisi kolom mempunyai gugus fungsional
bermuatan yang diikatkan secara kovalen pada
suatu matriks polimer yang diam
b. Gugus fungsional terikat secara tetap dan
merupakan gugus-gugus ionik yang mengikat ion
lawan dengan muatan berlawanan
c. Mekanisme reaksinya adalah pertukaran ion-ion
sampel dan ion-ion fasa gerak dengan ion lawan
pada fasa diam
RSO3- Na+

+ K+ --------------- RSO3- K+ + Na+ Cl-

Sifat-sifat penukar ion


1. Bersifat asam kuat misalnya yang memiliki
gugus SO32- dengan konter ionnya Na+, H+.
2. Bersifat basa lemah, misalnya gugus amino
aromatik.
3. Bersifat basa kuat. misalnya yang memiliki
gugus amino kuartener.
4. Bersifat asam lemah. misalnya yang memiliki
gugus -COO- dengan konter ionnya Na+, H+.

Enzim yang
stabil diatas titik
menggunakan penukar anion.
enzim yang stabil dibawah titik.
menggunakan penukar kation.

isoelektriknya,
Isoelektriknya,

Gambar Kurva muatan protein terhadap pH untuk pemilihan penukar ion


(Pharmacia)

Pengembangan Gel Penukar Ion


Karboksimetil selulosa (CMC) disuspensikan dalam NaOH
0,5 N selama 30 menit, setelah itu kemudian dicuci dengan
air aquades sampai pH 8.
Selanjutnya CMC disuspensikan dalam HCI 0,5 N selama
30 menit, kemudian dicuci dengan air aquades sampai pH
netral. CMC yang telah dikembangkan kemudian
disuspensikan dalam buffer dengan pH tertentu.
Pengembangan untuk DEAE-Selulosa
cara pengembangan CMC.

kebalikan dari

Contoh Pemisahaan enzim panisilinasilase


pada koIom DEAE- selulosa
a. Pengembangan
DEAE-SelulosaDEAE-Selulosa
disuspensikan dalam HCI 0,5 N selama 30 menit,
kemudian dicuci dengan air sampai pH netral.
Selanjutnya DEAE-Selulosa disuspensikan dalam
NaOH 0,5 N selama 30 menit Ialu dicuci dengan air
sampai pH netral. DEAE-Selulosa yang telah
dikembangkan kemudian disuspensikan dalam bufer
posfat 0,01M pH 7.

Kolom gel yang telah disiapkan (20 x 2,5 cm)


pada bagian bawahnya ditutup dengan
menggunakan glass wol atau kapas. DEAEselulosa yang telah
disuspensikan
selanjutnya dimasukkkan dengan hati-hati
ke dalam kolom hingga diperoleh panjang
DEAE-Selulosa 20 cm. Elusi terus dengan
bufer yang sama.
Masukkan lewat dinding kolom dengan
bantuan pipet enzim penisilinasilase kirakira 2 ml.
Pada
saat
enzim
telah
memasuki
DEAE~Selulosa
tambahkan
pengelusi
sedikit-sedikit.
Enzim yang terelusi ditampung dalam fraksi-

Matriks

Dextran

Selulosa

Penukar Ion

Gugus Fungsi

Nama

Kation kuat
Kation lemah

Sulfoprofil
Karboksimetil

SP Sephadeks
CM Sephadeks

Anion lemah

Dietilaminoetil

DEAE - Sephadeks

Kation

Karboksimetil

CM Selulosa

Anion

Dietilaminoetil
Dietilaminoetil

DEAE Selulosa
DEAE - Sephacel

Pemilihan Matriks Untuk Penukar Ion


Matriks untuk solute yang bermuatan
polielektrolit
pemilihannya
lebih
sulit
dibandingkan dengan solute yg bermuatan
tunggal.
Protein, enzim perrlu diperhatikan:
Stabilitas molekul yang akan dipisahkan
Spesifisifitas molekul yang akan dipisahkan.
Ukuran molekul yang akan dipisahkan.

Kapasitas Total Pertukaran Ion


Kapasitas total pertukaran ion yaitu
kemampuan
penukar
ion
untuk
mengikat ion-ion yang dapat ditukar,
yang dinyatakan dalam meq/berat
kering (g)
Matriks halus : luas permukaan besar
dan kapasitas total besar
Matriks kasar: luas permukaan kecil
dan kapasista total kecil