Anda di halaman 1dari 4

Abstrak

Streptococcus pneumoniae pilus-1 dikodekan oleh pilus islet 1 (PI-1), yang memiliki
tiga varian klonal (clade I, II dan III). Penelitian In vitro dan in vivo tes telah
menunjukkan bahwa pilus-1 terlibat dalam pelekatan ke sel epitel dan virulensi.
Ekspresi pilus-1 diatur secara ketat dan melibatkan interaksi berbagai regulator
genetik, termasuk PI-1 RlrA regulator positif. Ekspresi pilus pada analisis tingkat sel
tunggal positif strain PI-1 menunjukkan biphasic. Strain ini menunjukkan dua fenotip
yang berbeda dari sub-populasi bakteri, salah satu dari stain mengekspresikan
pilus, sementara yang lainnya tidak. Proporsi dari dua fenotipe ini adalah variabel
antara strain yang diuji dan tidak dipengaruhi oleh genotipe, serotipe, kondisi
pertumbuhan, morfologi koloni atau dengan kehadiran antibodi yang langsung
mengarah pada komponen pilus.
Rangkaian PI-1 pada dua sub-populasi mengungkapkan adanya mutasi, sehingga
menunjukkan bahwa ekspresi biphasic bukan karena modifikasi genetik dalam PI-1.
Pada ekspresi profil Microarray dan analisis western blot secara keseluruhan lysates
bakteri dilakukan dengan membandingkan dua diperkaya sub-populasi,
mengungkapkan bahwa ekspresi pilus diatur pada tingkat transkripsi (on / off
regulasi), dan bahwa tidak ada gen lain, selain yang dikodekan oleh PI-1.
Kesimpulannya, over-ekspresi dari regulator positif RrlA cukup untuk menginduksi
ekspresi pilus di pilus-1 bakteri negatif. Secara keseluruhan, data yang disajikan
menunjukkan bahwa ekspresi fenotipe pilus biphasic bisa menjadi contoh bistability
pada pneumococcus.
Pendahuluan
Beberapa pneumokokus faktor virulensi telah diidentifikasi, namun, sedikit yang
diketahui tentang faktor-faktor penentu penyakit dasar dan bagaimana mereka
diekspresikan selama perkembangan penyakit. Seperti kebanyakan streptococcus,
S. pneumonia menghiasi permukaannya dengan filamen multimerik yang panjang
yang dikenal sebagai pili terdiri dari ikatan kovalen subunit. Pili pneumokokus
dihungkan dengan virulensi dan kemampuan mikroorganisme untuk melekat pada
sel-sel epitel dan kolonisasi di nasofaring. Subunit pilus-1 menunjukkan memberikan
perlindungan pada tikus yang invasif terinfeksi, oleh karena itu dianggap potensial
untuk vaksin generasi baru berbasis protein untuk penyakit yang disebabkan S.
pneumonia. Pilus pneumokokus ini dikodekan oleh pilus islet 1 (PI-1), lokus 12 kb,
mengandung tujuh gen encoding regulator transkripsi (RlrA), yang positif mengatur
ekspresi pilus dan ekspresinya sendiri, tiga subunit struktur pilus (RrgA, RrgB dan
RrgC) dan tiga enzim sortase (SrtC-1, SrtC-2 dan SrtC-3), yang secara kovalen
merakit subunit pilus pada permukaan bakteri. Beberapa laporan epidemiologi
molekul menunjukkan bahwa PI-1 terdapat dalam sekitar 30% dari isolasi
pneumokokus, terlepas dari asal geografis dan hasil penyakit dianalisis. PI-1 klonal
diwariskan oleh strain S. pneumoniae, dan yang kehadirannya dikaitkan dengan
isolasi dari genotipe daripada serotipe. PI-1 ada dalam tiga varian, yaitu clade I, II

dan III. Karena setiap varian dikaitkan dengan klon tertentu, tampilan PI-1
menunjukkan prevalensi regional yang berbeda, tergantung pada distribusi klon.
Sebagian besar variabilitas PI-1 terkonsentrasi pada gen yang mengkode
komponen pilus: RrgB, subunit utama pilus, dan RrgA, yang merupakan adhesin
utama.
Mengingat implikasi serius yang mungkin dimiliki pilus untuk penyakit dan
transmisi, beberapa laporan telah berfokus pada evaluasi regulator genetik yang
mampu memodulasi ekspresi pilus sehingga terjadi virulensi bakteri. Tujuh protein,
selain RlrA regulator PI-1 positif, ditunjukkan oleh kelompok yang berbeda untuk
mempengaruhi secara negatif in vitro pilus tingkat ekspresi (MgrA, HK343, Merr,
CbpS, TCS08, mntE, Psar).
Namun, masih belum jelas apakah semua pneumococci PI-1 positif memiliki pili (in
vitro dan in vivo), dan apakah perbedaan genetik dan kondisi pertumbuhan dapat
mempengaruhi tingkat ekspresi pilus-1. Dalam sebuah penelitian, analisis ekspresi
pilus-1 dalam panel 139 klinis strain S. pneumoniae, membuktikan bahwa semua
strain yang diuji, terlepas dari serotipe, genotipe dan kondisi pertumbuhan, terdapat
dua fenotip berbeda sub-populasi, menunjukkan ekspresi pilus yang tinggi (di sini
didefinisikan sebagai Pil +) dan tingkat tidak terdeteksi (di sini didefinisikan sebagai
Pil-). Selain itu, selama pertumbuhan proporsi Pil + / Pil-tidak dipengaruhi oleh
adanya antibodi anti-RrgB. Untuk lebih menjelaskan ekspresi fenotip pilus, untuk
sejumlah strain dipisahkan menjadi sekitar 95% kemurnian dua bakteri subpopulasi, diperkaya baik dalam mengekspresikan pilus atau tidak-mengekspresikan
pilus pneumococci. Urutan analisis PI-1 dua sub-populasi mengungkapkan adanya
variasi fase genetik dalam pulau itu. Akhirnya, dibandingkan profil ekspresi dari dua
sub-populasi dalam panel strain klinis S. pneumoniae dan menyimpulkan bahwa: 1)
ekspresi pilus diatur di tingkat transkripsi, 2) pengaturan ini melibatkan semua
komponen PI-1 dan 3) tidak ada gen lain selain yang dikodekan oleh PI-1 bersamaan
diatur di isolasi yang diuji.

Diskusi
Setelah identifikasi pertama pada bakteri gram positif lain, pili telah terdeteksi pada
permukaan utama S. pneumoniae dan terbukti imunogenik dan terlibat dalam
patogenisitas pada in vivo dan in vitro. Laporan epidemiologis telah ditetapkan
bahwa PI-1, pengkodean protein terlibat dalam biogenesis pilus-1, terdapat sekitar
30% dari isolasi pneumokokus dan ada dalam tiga varian genetik yang terkait.
Struktur molekul dari pilus-1 dan mekanisme perakitan pilus telah diselidiki, dan
diduga sejumlah regulator genetik PI-1 telah diditemukan. Namun, masih sangat
sedikit yang diketahui tentang pengaturan ekspresi pilusi, kondisi lingkungan
mampu memodulasi dan perlengkapan kompleks makromolekul yang mengatur
biogenesis pili. Selain itu, dalam semua studi yang disebutkan, evaluasi ekspresi

pilus S. pneumoniae selalu tidak pada dasar sel tunggal, tetapi sebagai rata-rata
perilaku populasi yang besar.
Dengan menggunakan metode pendeteksian bisa untuk membedakan sel tunggal.
Berbeda dengan protein lain, komponen pilus-1 menunjukkan ekspresi bifasik.
Kedua sub-populasi fenotip yang berbeda, Pil + dan Pil-, hadir dalam rasio variabel
dalam semua uji strain. Rasio ekspresi pilus diwariskan oleh sel anak dan tidak
dipengaruhi oleh genetik bakteri dan karakteristik epidemiologi, dalam kondisi
pertumbuhan in vitro, atau pertumbuhan dengan pilus antisera. Selain itu, rasio
ekspresi pilus pada isolasi karier dan invasif menunjukkan hasil yang serupa.
Sebagian besar isolasi koloni pada media padat dari jenis yang sama menunjukkan
kemiripan pola ekspresi pilus, sehingga menunjukkan bahwa ini mungkin
dipengaruhi oleh beberapa sifat genetik dari strain, masih tak dikenal. Namun,
beberapa populasi koloni bakteri menunjukkan perbedaan rasio bakteri Pil + / Pil-.
Oleh karena itu, karena isolasi dari isolat klinis host manusia selalu menyiratkan
proses pertumbuhan in vitro dan seleksi koloni stokastik, rasio ekspresi pilus yang
diamati mungkin tidak mewakili ekspresi pili in vivo sehingga perlu penyelidikan
lebih lanjut.
Analisis ekspresi pilus (baik oleh microarray dan western blot ) dilakukan dengan
membandingkan dua sub-populasi, H dan L, maing-masing diperkaya Pil + dan Pilbakteri. Ekspresi profil Microarray profil ekspresi hanya mampu mendeteksi
perubahan yang signifikan dalam ekspresi komponen PI-1, termasuk regulator
positif rlrA, sementara perubahan ekspresi gen di luar PI-1 dalam lima strain yang
diuji (H vs L sub-populasi) tetap tidak terdeteksi. Selain itu, ekspresi RlrA (seperti
RrgB dan SrtC-2) cukup untuk menginduksi polimerisasi dari fungsional pilus pada
Pil-pneumococci, mengakibatkan saklar biosintesis pilus dari ''off'' ke ''on''. RlrA
sebagai regulator positif dari transkripsi gen PI-1, mampu mengaktifkan
transkripsinya sendiri dan untuk membangun umpan balik positif. Selain itu,
fenomena ini didukung oleh perbedaan dalam transkrip rlrA pada H vs L
subpopulasi. Perubahan transkripsi rlrA terdapat dalam kisaran yang diobservasi
untuk tiga PI-1 sortases (dan jauh lebih rendah daripada yang diamati untuk subunit
struktural), sehingga dalam protein regulasi dan enzim (mengerahkan aktivitas
katalitik), perubahan transkripsi kecil bisa cukup untuk menginduksi perbedaan
fenotipik. Data ini menunjukkan dua kemungkinan skenario: i) ekspresi pilus ini
dimodulasi oleh interaksi dari berbagai regulator, tapi transkripsi perubahan di luar
PI-1 tetap tidak terdeteksi dengan alat tes sebagaimana diharapkan karena
perubahan yang sangat sedikit dalam peraturan transkrip bisa bertanggung jawab
untuk perubahan fenotipik penting, terutama bila diuraikan seperti dalam kasus ini
secara tidak langsung melalui regulator lain, ii) ekspresi pilus tidak tergantung pada
regulator terletak di luar PI-1, tetapi perubahan langsung dalam respon terhadap
rangsangan eksternal diketahui atau kebisingan meningkatkan transkripsi dari rlrA
dan dengan demikian beralih'' pada'' biosintesis pilus. Tambahan data yang
diperoleh menganalisis ekspresi pilus pada tingkat sel tunggal dalam knock-out

mutan yang diketahui PI-1 represor, tampaknya untuk mengecualikan kemungkinan


keterlibatan langsung mereka dalam pilus regulasi (data tidak ditampilkan), dan
karena itu mendukung hipotesis kedua.
Meskipun mekanisme molekuler memicu peraturan tersebut kejadian masih belum
jelas, data yang disajikan dalam karya ini menunjukkan bahwa ekspresi pilus S.
pneumoniae bisa menjadi contoh bistability, seperti yang baru-baru ini disarankan
untuk Streptococcus pyogenes FCT3 dikodekan pili [56]. Bahkan, istilah ini biasanya
disebut contoh fenotipik variasi di mana: 1) dua ekspresi yang stabil negara hidup
berdampingan dalam populasi, 2) kebisingan atau faktor yang berbeda beroperasi
di seluruh sel mengemudi populasi untuk beralih ke alternatif negara berekspresi
dan menentukan keseluruhan beralih probabilitas; 3) peraturan tersebut terjadi
melalui kehadiran loop umpan balik, baik positif atau negatif ganda [57-59]. Selain
itu, bistability adalah epigenetik di alam (bukan disebabkan oleh perubahan dalam
urutan DNA). Dalam hal ini, data kami mengecualikan kemungkinan kejadian variasi
fase dalam PI-1, tapi genetic modifikasi hadir di tempat lain dalam genom (masih
diselidiki) secara tidak langsung dapat mempengaruhi ekspresi pilus.
Dasar molekul dan manfaat biologis bistability ini Fenomena saat ini tidak diketahui.
Agaknya, switching tersebut mekanisme telah berevolusi sebagai cara bagi bakteri
untuk menjadi fenotip pra-beradaptasi untuk bertahan hidup hadir atau pending
merugikan kondisi. Kemungkinan besar, heterogenitas ini membantu bakteri untuk
memanfaatkan relung yang berbeda dalam sebuah ekosistem, dan bahkan memiliki
potensi untuk meningkatkan kebugaran secara keseluruhan dari spesies, dan
menyiapkan sub-populasi sel S. pneumoniae untuk segera beradaptasi di respon
terhadap stres atau kondisi lingkungan yang berbeda.
Sebagai kesimpulan, penelitian ini telah menunjukkan bahwa ekspresi pilus berikut
pola biphasic, dan merupakan mekanisme yang diatur on-off terjadi pada tingkat
transkripsi dan melibatkan semua PI-1 komponen, termasuk PI-1 RlrA regulator
positif (ada bisa menjadi beberapa daerah promotor dalam PI-1 menanggapi RlrA
regulasi positif). Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk lebih memperjelas
mekanisme molekuler yang bertanggung jawab untuk pilus biphasic fenotipe.
Temuan ini menunjukkan bahwa pendekatan eksperimental baru harus dirancang
untuk menilai kontribusi pilus-1 sampai virulensi. Selain itu, penemuan ini fenotipe
biphasic mengarah ke kebutuhan untuk mengevaluasi ekspresi pilus pneumokokus
selama infeksi dan untuk memahami jika in vivo kondisi akan memodulasi rasio
ekspresi pilus, atau jika, masih alasan yang tidak diketahui, koeksistensi dari dua
sub-populasi heterogen diperlukan untuk memanfaatkan potensi virulensi pilus.