Pengaruh Pemberian Timbal (PB) Terhadap Kadar Malondialdehyde (Mda) Plasma Mencit

PENGARUH PEMBERIAN TIMBAL (Pb)
TERHADAP KADAR MALONDIALDEHYDE

(MDA) PLASMA MENCIT
TESIS
Untuk Memperoleh Gelar Magister Kesehatan

Dalam Program Studi Ilmu Biomedik
Pada Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara
Oleh
T. HELVI MARDIANI
057008004/BM
SEKOLAH PASCASARJANA
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2008
T.Helvi Mardiani : Pengaruh Pemberian Timbal (Pb) Terhadap Kadar Malondialdehyde (MDA) Plasma Dan Jumlah Eritrosit Mencit,
2008.
USU Repository 2008
Judul Tesis
Nama Mahasiswa
Nomor Pokok
Program Studi
: PENGARUH PEMBERIAN TIMBAL (Pb) TERHADAP

KADAR MALONDIALDEHYDE (MDA) PLASMA
MENCIT
: T. Helvi Mardiani
: 057008004
: Ilmu Biomedik
Menyetujui,
Komisi Pembimbing:
( dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D. )

Ketua
Ketua Program Studi,
( dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D. )
( Dr. Ramlan Silaban, M.Si )

Anggota
Direktur,
( Prof . Dr. Ir. T. Chairun Nisa B., MSc )
Tanggal lulus:
2008.
USU Repository 2008
Telah diuji pada

Tanggal :
PANITIA PENGUJI TESIS

Ketua Komisi
: dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D.
Anggota Komisi
: Dr.Ramlan Silaban, M.Si

Dr. Dwi Suryanto, M.Si
dr. Datten Bangun, M.Sc
2008.
USU Repository 2008
ABSTRAK
Pb dijumpai tersebar di lingkungan kita. Manusia terpapar logam ini dari
berbagai sumber seperti udara, air, tanah dan makanan yang terkontaminasi. Terdapat
banyak penelitian menunjukkan bahwa Pb menyebabkan stres oksidatif dengan
meningkatkan pembentukan reactive oxygen species dan menurunkan sistem antioksidan. Peroksidasi lipid meningkat karena terganggunya keseimbangan oksidan dan
anti-oksidan, yang diukur dengan kadar malondialdehyde. Penelitian ini bertujuan
mengetahui pengaruh pemberian berbagai konsentrasi Pb terhadap peroksidasi lipid.
Dua puluh empat mencit jantan dengan berat 30-40 g dibagi dalam enam
kelompok. Kelompok I sebagai kontrol, kelompok II sampai VI berturut-turut
mendapat Pb asetat dosis 5, 10, 20, 40 and 80 mg/kg berat badan. Setelah empat
minggu, dilakukan pengukuran kadar malondialdehyde plasma dan hitung jumlah
eritrosit.
Peningkatan kadar malondialdehyde pada kelompok II sampai VI bila
dibandingkan dengan kontrol, secara statistik tidak bermakna (p=0,6). Peningkatan
tersebut sejalan dengan peningkatan konsentrasi Pb yang diberikan, kecuali kelompok
VI. Hitung jumlah eritrosit menunjukkan penurunan jumlah eritrosit pada kelompok
II sampai VI bila dibandingkan dengan kontrol, tidak bermakna secara statistik
(p=0,1). Peningkatan kadar malondialdehyde plasma berkorelasi negatif dengan
jumlah eritrosit (p=0,04).
Pb menyebabkan gangguan fungsi fisiologis dan metabolisme melalui efek
stres oksidatif. Hal tersebut terlihat dari adanya kecendrungan peninggian kadar
malondialdehyde plasma yang diikuti dengan penurunan jumlah eritrosit oleh
peningkatan dosis Pb.
Kata kunci: Pb, peroksidasi lipid, malondialdehyde, stres oksidatif.
2008.
USU Repository 2008
ABSTRACT
Lead is widely found in our environment. Human are exposed to this metal
from numerous sources, including contaminated air, water, soil and food. There are
many studies that have shown that lead causes oxidative stress by inducing the
generation of reactive oxygen species and reducing the anti-oxidant defense system.
Lipid peroxidation increases because of impaired oxidant and anti-oxidant balance,
measured by malondialdehyde levels. The current study investigates the effect of lead
administration in various concentrations against lipid peroxidation.
Twenty four male mice, 30-40 g body weight were divided into six groups.
Group I served as control, group II to VI were given lead acetate at doses of 5, 10, 20,
40 and 80 mg/kg body weight respectively. After four weeks, plasma
malondialdehyde levels and the number of erythrocytes were measured.
An increase in plasma malondialdehyde levels observed in groups II to VI as
compared with control, was not statistically significant (p=0,6). The increased plasma
malondialdehyde levels in accordance to the increased concentration of lead
administered, with the exception of group VI. The decrease in erythrocyte count
observed in groups II to VI as compared with control, was not significant (p=0,1).
Increased plasma malondialdehyde levels were negatively correlated with erythrocyte
count (p=0,04).
Lead interferes with physiological and biochemical functions related to
oxidative stress. The trend to increased plasma malondialdehyde levels along with the
decreased erythrocyte count as the dose of lead increased supports this statement.
Key words: lead, lipid peroxidation, malondialdehyde, oxidative stress
2008.
USU Repository 2008
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT berkat rahmat dan
karuniaNya sehingga Penulis dapat menyelesaikan penelitian dengan judul Pengaruh
pemberian timbal (Pb) terhadap kadar malondialdehyde (MDA) plasma mencit.
Tesis ini merupakan salah satu syarat yang harus dikerjakan Penulis dalam
rangka memenuhi persyaratan untuk meraih gelar Magister pada Sekolah
Pascasarjana Universitas Sumatera Utara.
Dengan
selesainya
tesis
ini,
perkenankanlah
Penulis
mengucapkan
terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:

Rektor Universitas Sumatera Utara, Prof.dr.H.Chairuddin P.Lubis, SpA(K)
dan sejumlah jajarannya, yang telah memberikan kesempatan pada Penulis untuk
mengikuti pendidikan di Sekolah Pascasarjana USU Medan.
Direktur Pascasarjana USU Medan, Prof. Dr. Ir. T. Chairun Nisa B. MSc., dan
Ketua Program Studi Biomedik dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D., atas kesempatan dan
fasilitas yang diberikan kepada Penulis untuk mengikuti dan menyelesaikan
pendidikan program magister di Sekolah Pascasarjana USU Medan.
Terima kasih yang tidak terhingga dan penghargaan setinggi-tingginya
Penulis sampaikan kepada para pembimbing dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D dan Dr.
Ramlan Silaban, M.Si serta dr. Arlinda Sari Wahyuni, M.Kes, yang dengan penuh
perhatian dan kesabaran telah mengorbankan waktu untuk memberikan dorongan,
bimbingan semangat, bantuan serta saran-saran yang bermanfaat kepada Penulis
mulai dari persiapan penelitian sampai pada penyelesaian tesis ini.
2008.
USU Repository 2008
Komisi penguji, dr. Datten Bangun, MSc., SpFK dan Dr. Dwi Suryanto MSc,
yang telah bersedia dengan sabar membantu Penulis dalam menyempurnakan,
menguji dan menilai tesis ini. Tidak lupa terima kasih juga saya sampaikan kepada
semua dosen yang telah membimbing saya selama mengikuti program magister ini.
Persembahan terima kasih yang tulus, rasa hormat dan sembah sujud kepada
ayahanda dan ibunda tercinta (H. T. Amarullah Hafiz, SH dan almh. Hj. Saddiah),
yang telah membesarkan dengan susah payah dengan penuh kasih sayang dan dengan
jasa mereka inilah Penulis dapat menjalani pendidikan hingga pascasarjana ini.
Semoga Allah SWT mengampuni dan selalu merahmati ayahanda dan ibunda ini.
Kepada suamiku tercinta dr. Abdi Gunawan, Sp.B, anak-anakku tersayang
Amelia Utami dan Arya Adiyatma, tiada kata yang setara untuk mengutarakan terima
kasih atas cinta, kasih sayang, pengertian, pengorbanan, kesabaran dan dorongan
serta doa yang diberikan kepada penulis.
Akhirnya, Penulis menyadari bahwa isi hasil penelitian ini masih perlu
mendapat koreksi dan masukan untuk kesempurnaanya. Oleh karena itu Penulis
berharap adanya kritik serta saran untuk penyempurnaan tulisan ini. Semoga
penelitian ini membawa manfaat untuk kita semua. Amin.
Medan, 5 September 2008

Penulis,
(T. Helvi Mardiani)

NIM: 057008004
2008.
USU Repository 2008
RIWAYAT HIDUP
1. Nama
: T. Helvi Mardiani
2. Tempat/Tanggal Lahir
: Batu Bara, 07 Januari 1972
3. Agama
: Islam
4. Status
: Menikah
5. Alamat
: Jl. Sentosa Baru No. 29 Medan
6. Telp/HP
: 061-4562617/08125651029
7. Pendidikan
SD Negeri III, Lubuk Pakam
: 1978-1984
SMP Negeri II, Lubuk Pakam
: 1984-1987
SMA Negeri I, Medan
: 1987-1990
Sarjana (S1) Fakultas Kedokteran USU
: 1990-1994
Profesi Dokter, Fakultas Kedokteran USU
: 1994-1996
Sekolah Pascasarjana, Program Biomedik, USU : 2005-2008

8. Riwayat Pekerjaan
Dokter PTT Puskesmas Lima Puluh Asahan
: 1997-1998
Kepala Puskesmas Pematang Panjang Asahan
: 1998-2000
Staf Pengajar Kontrak di Departemen Biokimia FK USU:2000-2001

Staf Pengajar Tetap di Departemen Biokimia FK USU :2001-sekarang
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK ......................................................................................
iv
ABSTRACT .....................................................................................
KATA PENGANTAR .....................................................................
vi
RIWAYAT HIDUP ..........................................................................
viii
DAFTAR ISI .....
ix
DAFTAR TABEL .....
xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................
xii
DAFTAR GRAFIK ...........................................................................
xiii
DAFTAR LAMPIRAN......................................................................
xiv
DAFTAR SINGKATAN ..................................................................
xv
BAB I PENDAHULUAN ................................................................
1.1 Latar Belakang .................................................................
1.2 Perumusan Masalah .........................................................
1.3 Kerangka Teori.. ..............................................................
1.4 Tujuan Penelitian .............................................................
1.5 Hipotesis ..........................................................................
1.6 Manfaat Penelitian ...........................................................
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................
2.1 Timbal (Pb) ......................................................................
2.2 Toksisitas Pb ....................................................................
2.3 Molekul Oksigen Reaktif .................................................
11
2.4 Efek Pb terhadap Keseimbangan Oksidan-Antioksidan ..
12
2.5 Peroksidasi Lipid .............................................................
16
2.6 MDA dan Pengukurannya ...............................................
17
2008.
USU Repository 2008
BAB III METODOLOGI PENELITIAN .........................................
19
3.1 Desain Penelitian .............................................................
19
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian...........................................
19
3.3 Populasi Penelitian ...........................................................
19
3.4 Sampel Penelitian .............................................................
19
3.5 Rancangan Penelitian .......................................................
20
3.6 Prosedur Pemeriksaan ......................................................
22
3.6.1 Pengambilan Sampel Darah ..............................
22
3.6.2 Pengukuran Kadar MDA Plasma ......................
23
3.6.3 Penghitungan Jumlah Eritrosit ..........................
25
3.7 Variabel Penelitian ...........................................................
26
3.8 Analisa Data .....................................................................
26
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...........................................
28
4.1 Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit
28
4.2 Rerata Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit .............
29
4.3 Uji Normalitas menurut Shapiro-Wilk Test ......................
32
4.4 Uji Statistik Perbedaan Kadar MDA ................................
33
4.5 Uji Statistik Perbedaan Jumlah Eritrosit ...........................
34
4.6 Korelasi Kadar MDA dan Jumlah Eritrosit ......................
36
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................
38
5.1 Kesimpulan
38
5.2 Saran ..
38
DAFTAR PUSTAKA .
40
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR TABEL
No
Judul
Halaman
1. Dosis Pb Asetat pada Kelompok Perlakuan ..............................
21
2. Persiapan MDA Standar untuk Spektrofotometer......................
24
3. Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit Hewan Uji ...............
29
4. Uji Normalitas Data Kadar MDA Plasma .................................
32
5. Uji Normalitas Data Jumlah Eritrosit ........................................
33
6. Uji Kruskal Wallis Data Kadar MDA .......................................
33
7. Uji Anova Jumlah Eritrosit .......................................................
35
8. Uji Korelasi Kadar MDA dan Jumlah Eritrosit ........................
36
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR GAMBAR
No
Judul
Halaman
1. Kerangka Teori ..............................................................................
2. Pemberian Perlakuan pada Mencit.................................................
22
3. MDA Standar untuk Spektrofotometer .........................................
24
4. Pemanasan Larutan Sampel dalam Waterbath ..............................
25
5. Kerangka Kerja ..............................................................................
27
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR GRAFIK
No
Judul
Halaman
1. Rerata Kadar MDA Plasma ...........................................................
30
2. Rerata Jumlah Eritrosit ...................................................................
31
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR LAMPIRAN
No
Judul
Halaman
1. Data Penelitian ...............................................................................
43
2. Uji Statistik ....................................................................................
45
3. Persetujuan Komite Etik ................................................................
49
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR SINGKATAN
ALA: amino levulinic acid

ANOVA: analysis of variances
BPPV: balai penyidikan dan pengujian veteriner
DALAD: delta amino levulinic acid dehydrogenase
DDW: double ditsch webster
DHBA: dihydroxy benzoic acid
DNA: deoxyribonucleotide adenine
EDTA: ethylene diamine tetra acetic acid
GPx: gluthation peroxidase
GR: gluthation reductase
GSH: gluthation tereduksi
GSSG: gluthation teroksidasi
G6PD: glucose 6 phosphat dehydrogenase
IgE: immunoglobulin E
MDA: malondialdehyde
MSDS: material safety data sheet
NADPH: nicotinic adenine dinucleotide phosphat hydrogen
Pb: plumbum
PKC: protein kinase C
ROS: reactive oxygen species
-SH: sulfhydril
SOD: superoxyde dismutase
TBA: thiobarbituric acid
TEL: tetra ethyl lead
TEMEL: tetra methyl lead
2008.
USU Repository 2008
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Timbal (Pb) dapat ditemukan di berbagai media lingkungan seperti udara, air,
debu dan tanah. Logam Pb atau bentuk persenyawaannya berasal dari pembakaran
bahan bakar kendaraan bermotor, emisi industri dan dari penggunaan cat bangunan
yang mengandung Pb. Di alam Pb terdapat dalam dua bentuk yaitu gas dan partikel.
Pb yang terbanyak di udara adalah Pb anorganik dan terutama berasal dari
pembakaran tetraethyl Pb (TEL) dan tetramethyl Pb (TEMEL) yang terdapat dalam
bahan bakar kendaraan bermotor. Selain sumber-sumber di atas, logam berat ini juga
terdapat pada gelas, pewarna, keramik, pipa, pelapis kaleng tempat makanan,
beberapa obat tradisional dan kosmetik (Tong et al, 2000). Pakar lingkungan
sependapat bahwa Pb merupakan kontaminan terbesar dari seluruh debu logam di
udara (Winarno, 1993).
Polusi Pb telah menjadi persoalan kesehatan masyarakat di dunia, terutama di
negara-negara berkembang, seperti di Asia, Afrika dan Amerika Latin. Pembakaran
bahan bakar minyak kendaraan bermotor menjadi sumber terbesar Pb yang
mengkontaminasi atmosfer. Hampir seratus negara, terutama negara berkembang
masih menggunakan Pb dalam bahan bakar kendaraannya. Eropa, Jepang, Mexico
dan Amerika Serikat telah membuktikan bahwa penghapusan Pb dari bahan bakar
2008.
USU Repository 2008
kendaraan merupakan cara paling efektif mengurangi polusi logam ini (Tong et al,
2000).
Terdapat banyak data epidemiologi yang menunjukkan bahwa pemaparan Pb
pada masa tumbuh kembang anak menyebabkan gangguan nyata dari perkembangan
kognitifnya. Gejala neuro-psikologi tersebut dulu diperkirakan dapat hilang atau
berkurang bila pemaparan dihentikan, tetapi saat ini ada banyak data yang
menunjukkan bahwa efek tersebut sebahagian besar bersifat irreversible. Kadar Pb
dalam darah 10-20 g/dL menyebabkan gangguan pertumbuhan dan sistem syaraf
pusat, gangguan sintesis vitamin D dan heme. Kadar 20-40 g/dL menyebabkan
gangguan hantaran syaraf dan meningkatnya ALA (amino levulinic acid) dalam urin.
Kadar yang lebih tinggi dari 40 g/dL dapat menyebabkan anemia berat, gangguan
sistem syaraf pusat yang berat sampai menimbulkan kematian (Tong et al, 2000).
Sifat toksikologi Pb saat ini banyak diteliti terutama efek karsinogeniknya.
Telah diketahui bahwa Pb dapat menyebabkan stres oksidatif dengan meningkatkan
pembentukan radikal bebas dan menurunkan sistem antioksidan di jaringan. Stres
oksidatif ini dapat menyebabkan kerusakan molekul-molekul dalam sel. Molekul
lipid yang mengalami stres oksidatif akan mengalami auto-oksidasi atau yang lebih
dikenal dengan peroksidasi lipid. Protein yang mengalami oksidasi menjadi tidak
berfungsi dan DNA yang teroksidasi menjadi mutagen, karsinogen atau menyebabkan
kematian sel (Ercal et al, 2001).
2008.
USU Repository 2008
Sistem hematologi adalah sasaran penting dari toksisitas Pb. Efek Pb pada
sistem ini mengakibatkan menurunnya proses sintesis heme dan anemia. Sel darah
merah memiliki affinitas yang tinggi terhadap Pb. Setelah diresorbsi dari saluran
cerna, Pb masuk ke sirkulasi darah dan lebih dari 99% akan berikatan dengan
eritrosit. Pada eritrosit 80% Pb terdapat di sitoplasma sel dan 20% sisanya terdapat
pada membran (Zhao et al, 2004). Beberapa faktor seperti konsentrasi oksigen yang
tinggi, autooksidasi Hb dan kepekaan komponen membrannya terhadap peroksidasi
lipid menyebabkan eritrosit peka terhadap stres oksidatif oleh karena Pb (GurerOrhan et al, 2003).
Asam lemak tak jenuh pada membran sel adalah target dari peroksidasi lipid
yang mengakibatkan hilangnya fungsi organela sel. Lebih jauh, produk pemecahan
dari peroksida-peroksida lipid ini, seperti aldehid, bermigrasi jauh dari lokasi
pembentukannya dan menyebabkan kerusakan di tempat lain. Penelitian lain juga
menunjukkan bahwa Pb dapat memperkuat efek besi dalam menimbulkan peroksidasi
lipid in vitro, yang menyebabkan kematian sel (Gurer & Ercal, 2000). Ada banyak
data penelitian yang menunjukkan bahwa Pb merubah komposisi lipid membran yang
mengakibatkan perubahan integritas, permeabilitas dan fungsinya. Semua hal ini
berakibat pada meningkatnya kepekaan lipid membran terhadap peroksidasi lipid
(Patrick, 2006; Lim et al, 2005).
Reactive oxygen species (ROS) dapat bereaksi dan menyebabkan kerusakan
pada banyak molekul di dalam sel. Fosfolipid yang menjadi unsur utama dalam
membran plasma dan membran organela sel seringkali menjadi subjek dari
2008.
USU Repository 2008
peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid adalah suatu reaksi rantai radikal bebas yang
diawali dengan terbebasnya hidrogen dari suatu asam lemak tak jenuh ganda oleh
radikal bebas. Radikal lipid yang terbentuk akan bereaksi dengan oksigen membentuk
radikal peroksi-lipid dan lipid peroksida serta malondialdehyde (MDA) yang larut
dalam air dan dapat dideteksi dalam darah. Konsekuensi penting dari peroksidasi
lipid adalah meningkatnya permeabilitas membran dan menganggu distribusi ion-ion
yang mengakibatkan kerusakan fungsi sel dan organela (Devlin, 2002).
Berdasar pada uraian di atas, perlu diteliti lebih lanjut apakah perbedaan
konsentrasi Pb yang masuk ke tubuh melalui saluran cerna dapat menimbulkan efek
stres oksidatif dengan tingkat yang berbeda jaringan.
1.2 Perumusan Masalah

Telah dijelaskan bahwa Pb adalah kontaminan logam terbesar di udara, tanah
dan air. Senyawa Pb merupakan racun bagi banyak sistem di tubuh. Banyak
penelitian yang mengaitkan toksisitas senyawa Pb dengan stres oksidatif.
Berdasarkan hal-hal tersebut, maka masalah yang ingin dijelaskan dalam penelitian
ini adalah apakah perbedaan konsentrasi Pb yang masuk ke tubuh melalui saluran
cerna, dapat menimbulkan perbedaan tingkat peroksidasi lipid dalam darah mencit,
yang diukur dengan kadar malondialdehyde plasma.
2008.
USU Repository 2008
1.3 Kerangka Teori

Polutan Pb di udara secara kronis akan masuk ke tubuh melalui inhalasi, kontak
kulit dan mukosa yang kemudian berakumulasi dalam darah. Pemaparan kronis ini
akan memberi gejala yang sama dengan senyawa Pb yang termakan dan terminum
atau masuk melalui saluran cerna. Toksisitas yang ditimbulkan Pb akan menyebabkan
kerusakan jaringan dari tingkat yang ringan seperti perubahan proses biokimia normal
sampai pada kematian sel. Kerusakan jaringan oleh karena stres oksidatif tersebut
akan lebih dulu terjadi di darah, sebagai jaringan yang lebih dulu terpapar.
Timbal (Pb) sebagai logam transisi mempunyai kecenderungan membentuk
suatu senyawa radikal bebas. Efek Pb yang menghambat enzim antioksidan dan
meningkatkan ALA secara langsung ataupun tidak langsung juga mempunyai
kecenderungan meningkatkan radikal oksigen atau molekul oksigen reaktif. Molekul
oksigen reaktif dan radikal oksigen adalah molekul yang sangat mudah mengoksidasi
lipid membran dan memulai proses auto-oksidasi lipid atau peroksidasi lipid.
Perubahan komposisi membran sel yang dipicu Pb akan menyebabkan membran
menjadi lebih peka terhadap peroksidasi lipid. Hal-hal tersebut di atas secara
bersama-sama menunjukkan bahwa Pb dapat meningkatkan kadar MDA yang
menjadi parameter peroksidasi lipid. Proses yang kemudian akan menyebabkan
kerusakan sel oleh karena perubahan lipid pada membran sel.
2008.
USU Repository 2008
KERANGKA TEORI
Pb
Logam Menghambat enzym Akumulasi Merubah komposisi
transisi
Anti oksidan
ALA
Membran sel
ROS
Peroksidasi
Lipid
-MDA
-Eritrosit lisis
Gambar 1. Kerangka Teori

1.4. Tujuan Penelitian
Tujuan umum penelitian ini adalah untuk mengetahui efek pemberian Pb
dengan berbagai konsentrasi melalui saluran cerna terhadap terjadinya peroksidasi
lipid dalam darah mencit.
Tujuan khusus penelitian ini adalah untuk:

1. Mengetahui perubahan kadar MDA plasma mencit oleh peningkatan
konsentrasi Pb yang diberikan.
2. Mengetahui perubahan jumlah eritrosit darah mencit oleh peningkatan
konsentrasi Pb yang diberikan.
2008.
USU Repository 2008
1.5 Hipotesis
1. Kadar MDA plasma mencit, meningkat oleh peningkatan konsentrasi senyawa
Pb yang diberikan.
2. Peroksidasi lipid menyebabkan menurunnya jumlah eritrosit oleh karena lisis.
1.6 Manfaat Penelitian

Hasil penelitian diharapkan bermanfaat untuk:
1. Sumber informasi bagi masyarakat mengenai pengaruh toksik polutan Pb
terhadap darah mencit, melalui stres oksidatif.
2. Sumber informasi bagi masyarakat bahwa polutan Pb dapat mempengaruhi
darah mencit, meskipun dalam konsentrasi kecil dan waktu yang singkat.
2008.
USU Repository 2008
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Timbal (Pb)

Timbal atau plumbum dapat ditemukan di lingkungan dalam bentuk senyawa
terutama sebagai mineral seperti galena, serusit, mimetit dan piromorpit. Sejumlah
besar senyawa Pb anorganik ada dalam bentuk Pb asetat, Pb emtimonate, Pb azida,
Pb bromit, Pb nitrat dan sebagainya. Pb mempunyai berat molekul 207,2 dengan titik
didih 17400C dan titik lebur 327,40C. Pb asetat, Pb nitrat dan Pb klorat larut di dalam
air, tapi bentuk garam lainnya sangat tidak larut kecuali ada beberapa yang larut pada
asam (WHO, 1977 ).
Polusi lingkungan oleh Pb berlangsung pada peleburan dan penyulingan Pb,
pembakaran bahan bakar yang mengandung Pb dan peleburan logam lainnya serta
pembakaran batubara dan minyak bumi. Pb digunakan dalam bentuk murni dan
kombinasi dengan elemen lain, membentuk berbagai senyawa organik dan anorganik.
Logam Pb digunakan pada baterai, solder, amunisi, sistem pelindung pada
penggunaan x ray, pelapis tangki-tangki pengangkut minyak dan berbagai pipa.
Garam an-organik Pb digunakan pada insektisida, pewarna, cat, enamel, gelas, plastik
dan senyawa-senyawa dari karet (WHO, 1977).
Menurut material safety data sheet (MSDS) tahun 2006, Pb diidentifikasi
sebagai racun berat dan oksidan kuat. Zat ini berakibat fatal bila termakan atau
2008.
USU Repository 2008
terinhalasi, karena dapat menyebabkan iritasi kulit, mata dan saluran napas, merusak
gusi, sistem saraf pusat, ginjal dan sistem reproduksi.
2.2 Toksisitas Pb
Mekanisme toksisitas Pb masih kontroversial, Pb dipercaya berinteraksi secara
kovalen dengan ion fosfat tertier pada asam-asam nukleat. Pb juga dilaporkan
menghambat sintesis DNA dan pertumbuhan sel in vitro (Domingrez et al, 2002
dalam El-Ashmawy et al, 2006). Penelitian in vitro lainnya menjelaskan bahwa Pb
asetat menginduksi pemecahan DNA utas tunggal dan ganda (Wozniak & Blasiak,
2003). In vivo, Pb menginduksi pemecahan DNA melalui perubahan sistem redoks
seluler dan penekanan pembentukan protein kinase c (PKC ), yang mengesankan
logam ini berperan sebagai penyebab tumor (Fracasso et al, 2002).
Telah pernah dilaporkan bahwa Pb membentuk senyawa merkaptida dengan
gugus tiol (-SH) sistein dan menurunkan kestabilan kompleks ini dengan asam amino
lain. Hal ini menjadi alasan dari perubahan komponen protein sel. Senyawa-senyawa
dengan gugus tiol bebas adalah pelindung sel terhadap kerusakan oleh radikal bebas,
sehingga bila gugus ini diikat oleh Pb, maka mekanisme perlindungan tersebut
menjadi tidak cukup tersedia di dalam sel. Glutation sebagai suatu tripeptida
(glutamat-sistein-glisin) pelindung dari radikal bebas, mereduksi peroksida-peroksida
dan mempertahankan gugus-gugus tiol protein dalam keadaan tereduksi, didapati
menurun pada darah dan hati dan menjadi salah satu penyebab toksisitas Pb di hati
(Gajawat et al, 2006).
2008.
USU Repository 2008
Mencit-mencit betina yang selama masa hamil dan menyusui diberi Pb,
melahirkan mencit-mencit neonatus dengan kadar IgE plasma meningkat bermakna
dan menjadi pertanda suatu atopi. Hal ini bila terjadi pada manusia, mungkin
menunjukkan peran toksikan lingkungan dalam prevalensi atopi dan asma pada anakanak (Snyder et al, 2000).
Pemberian senyawa Pb konsentrasi tinggi melalui makanan menyebabkan
kerusakan hati yang hebat, dengan melibatkan radikal-radikal bebas. Pemberian
dengan dosis rendah menimbulkan gangguan dalam proses biokimia normal sistem
hepatobilier dan Pb dapat mengalami presipitasi membentuk batu kandung empedu
(Sipos et al, 2003).
Ding Y et al (2000) menemukan bahwa terdapat bukti tak langsung bahwa
radikal hidroksil menjadi molekul yang paling merusak pada hewan yang dipapar Pb.
Peroksidasi lipid yang diukur sebagai malondialdehid (MDA) dan radikal hidroksil
yang diukur sebagai 2,3 asam dihidroksi benzoat (2,3 DHBA) pada sel endotel
pembuluh darah, meningkat secara bermakna setelah pemaparan Pb selama 48 jam.
Hal serupa juga terjadi pada hewan-hewan percobaan yang dipapar Pb.
Pada percobaan in vivo pada tikus, pemberian Pb(NO3)2, injeksi intra vena
menurunkan kadar glutation tereduksi (GSH) hepar, dan mungkin berhubungan
dengan terjadinya apoptosis hati. Pada percobaan in vitro, Pb(NO3)2 menunjukkan
efek nekrotik langsung dan bukan apoptotik pada hepar. Inkubasi sel hepar bersama
sel-sel kupffer yang dikultur dengan Pb(NO3)2 selama 24 jam, menyebabkan
apoptosis sel-sel hepar. Hal ini menunjukkan bahwa Pb(NO3)2 mempunyai efek
2008.
USU Repository 2008
nekrosis langsung pada sel hepar dan bukan apoptotik, sekaligus menunjukkan
adanya peran sel kupffer dalam menginduksi apoptosis sel hati setelah pemberian
Pb(NO3)2, melalui stress oksidatif (Pagliara et al, 2003).
2.3 Molekul Oksigen Reaktif
Ada banyak penelitian yang mengungkapkan bahwa Pb adalah racun yang
menyebabkan berbagai gangguan tubuh seperti gangguan neurologis, hematologi,
gastrointestinal, reproduksi, sirkulasi dan imunologi. Aktivitas senyawa Pb dalam
tubuh seringkali dikaitkan dengan stres oksidatif, melalui pembentukan molekul
reactive oxygen species (Aykin-Burns et al, 2003; Ding Y et al, 2000; Ercal et al,
2001).
Oksigen dapat menerima elektron tunggal dan membentuk molekul tak stabil
yang dikenal dengan molekul reactive oxygen species. Beberapa contoh reactive
oxygen species antara lain radikal superoksid (O2-), radikal hidroksil (HO.) dan singlet
oksigen (O-). Pada organisme hidup, normalnya pembentukan reactive oxygen species
umumnya dijaga seminimal mungkin oleh mekanisme pertahanan antioksidan.
Beberapa kondisi tertentu dimana mekanisme antioksidan tertutupi atau menjadi tak
seimbang, akan menyebabkan beberapa kerusakan dalam jaringan, yang dikenal
secara kolektif sebagai stres oksidatif (Mc Kee, 2003).
Pembentukan ROS dapat berlangsung dalam rantai pernapasan di mitokondria
sel, ketika transfer elektron ke oksigen membentuk air. Sejumlah kecil radikal
oksigen yang terbentuk sebagai senyawa antara secara tak terelakkan dapat keluar
dari rantai pernapasan di mitokondria. Spesies oksigen toksis juga dapat terbentuk
2008.
USU Repository 2008
dalam peroksisom dan sistem sitokrom P 450 yang ada pada retikulum endoplasmik
(Mc Kee, 2003).
Selain hal di atas pembentukan radikal oksigen berlangsung selama proses
inflamasi oleh infeksi bakteri. Sel-sel fagosit membentuk dan membebaskan radikal
oksigen toksis tersebut untuk membunuh bakteri yang masuk, proses yang dikenal
dengan respiratory burst. Namun pada infeksi yang berkepanjangan, fagosit cendrung
dapat mati dan membebaskan radikal toksik tersebut dan mempengaruhi sel di
sekitarnya. Hal-hal lain yang dapat mendorong pembentukan ROS adalah radiasi
kosmik, termakan bahan-bahan kimia dan obat seperti juga halnya inhalasi asap dari
udara (Devlin, 2002).
2.4 Efek Pb terhadap Keseimbangan Oksidan-Antioksidan

Toksisitas Pb dalam pembentukan radikal bebas terdiri dari 2 cara berbeda
yang berhubungan, yakni (1) pembentukan ROS termasuk hidroperoksida, oksigen
tunggal dan hidrogen peroksida dan (2) penekanan langsung cadangan antioksidan
(Ercal et al, 2001). Mekanisme Pb menginduksi stress oksidatif tidak secara
sempurna diketahui, meskipun banyak sekali penelitian menunjukkan bukti-bukti
tersebut. Mekanisme tersebut setidaknya dapat dijelaskan oleh beberapa hal di bawah
ini:
2.4.1 Pb mempunyai efek langsung terhadap membran sel
Pengaruh Pb terhadap eritrosit banyak diamati oleh karena affinitas eritrosit
terhadap Pb sangat tinggi. Eritrosit mengikat 99% Pb dalam darah. Pb ini
2008.
USU Repository 2008
menimbulkan destabilitas membran sel, menurunkan fluiditas membran dan

meningkatkan kecepatan hemolisis. Pb dianggap sebagai agen hemolitik seperti juga
tembaga dan air raksa, menyebabkan penghancuran eritrosit melalui pembentukan
peroksida-peroksida lipid dalam membran sel.
Beberapa penelitian menunjukkan terjadi peninggian asam arakidonat (20:4)
dan rasio asam arakidonat-asam linoleat (18:2) pada membran sel liver, serum dan
eritrosit. Dianggap bahwa peninggian asam arakidonat yang diinduksi Pb
bertanggung jawab terhadap terjadinya peroksidasi lipid membran. Disisi lain Pb
berikatan kuat dengan phosphatidilkholin membran sel secara invitro pada
pengamatan shafiq-Ur Rahman dan Abdulla (1993) dalam Gurer & Ercal (2000),
sehingga kadar phosphatidilkholin membran sel menurun.
2.4.2 Interaksi Pb dan hemoglobin
Interaksi logam-logam berat pada oksihemoglobin dikemukakan sebagai
sumber pembentukan radikal bebas superoksid (O2-) pada eritrosit. Penelitian Ribarov
(1981) dalam Gurer & Ercal (2000) invitro, menunjukkan bahwa Pb secara bermakna
memperbesar autooksidasi hemoglobin pada liposom.
2.4.3 ALA menginduksi pembentukan ROS
Penghambatan terhadap delta aminolevulinic acid dehidrogenase (DALAD),
enzym utama dalam biosintesis heme, menyebabkan peninggian kadar substrat ALA
(aminolevulinic acid) baik dalam darah ataupun urin individu yang terkena.
Peningkatan kadar ALA menyebabkan pembentukan hidrogen peroksida, radikal
superoksida dan juga interaksi keduanya menghasilkan radikal hidroksil, suatu
2008.
USU Repository 2008
radikal bebas yang paling reaktif. ALA yang kemudian teroksidasi akan menjadi
asam
4,5-dioxovalerat,
suatu
senyawa
yang
berpotensi
genotoksik
dan
memungkinkan Pb sebagai karsinogenik (Gurer-Orhan et al, 2004).

ALA mengalami enolisasi dan autooksidasi pada pH 7-8. Enol ALA (ALA
terenolisasi) menjadi donor elektron ke oksigen molekuler bersama dengan transfer
elektron dari oksihemoglobin ke oksigen. H2O2 dan O2- yang terbentuk berinteraksi
membentuk
radikal HO
yang
sangat
reaktif.
Disamping
oksihemoglobin,
methemoglobin dan logam besi atau kompleks besi juga memicu oksidasi ALA
(Monteiro et al, 1986 dalam Gurer & Ercal, 2000).
2.4.4 Pb mempengaruhi pertahanan antioksidan sel
Beberapa penelitian melaporkan terjadinya perubahan pada enzim-enzim
antioksidan seperti superoksida dismutase (SOD), katalase, glutation peroksidase
(GPx) dan juga molekul antioksidan seperti glutation (GSH) pada pemaparan Pb. Pb
pada dosis rendah, meningkatkan kadar enzim-enzim anti-oksidan dalam darah
seperti SOD, katalase dan GPx tetapi pemaparan pada dosis lebih tinggi (lebih dari 40
g/dL darah) dan jangka waktu lama justru akan menekan enzim-enzim tersebut
(Kasperczyk et al, 2004). Pb dan logam lain seperti Hg dan Cd mempunyai affinitas
tinggi terhadap gugus sulfhidril (SH). Pb menghambat beberapa enzim dengan gugus
fungsional SH seperti delta aminolevulinic acid dehidrogenase (DALAD) dan
glucose 6-phosphat dehidrogenase (G6PD). G6PD adalah enzim yang bertanggung
jawab untuk menyediakan NADPH di luar mitokondria. Molekul pereduksi NADPH
2008.
USU Repository 2008
ini penting dalam menjaga tersedianya GSH yang dibentuk kembali dari glutation
teroksidasi (GSSG) oleh enzim glutation reduktase (GR) (Devlin, 2002).
GSH mempunyai gugus SH yang berpotensi reduktif, menjadikan molekul ini
pelindung sel dari stres oksidatif. Peran GSH sebagai molekul anti-oksidan dapat
secara non-enzimatik atau enzimatik sebagai ko-faktor/ko-enzim dalam detoksifikasi
ROS. Pb yang berikatan dengan gugus SH dari GSH, menyebabkan kadar GSH
menurun dan mempengaruhi aktivitas antioksidannya.
Enzim GR menyokong sistem pertahanan antioksidan secara tak langsung.
Enzim ini memiliki disulfida pada tempat katalitiknya, yang merupakan target Pb.
Dengan demikian Pb yang terikat pada enzim ini menghambat aktivitasnya.
GPx, katalase dan SOD adalah metaloprotein yang mendetoksifikasi secara
enzimatik berbagai peroksida, H2O2 dan O2- . Enzim-enzim ini sangat tergantung
pada berbagai mikromineral untuk struktur molekulnya ataupun fungsi enzimatiknya,
sehingga potensial menjadi target dari efek Pb.
Pb diketahui sebagai antagonis selenium (Se), menurunkan pengambilan Se
oleh jaringan dan berakibat menurunkan aktivitas GPx yang memerlukan Se sebagai
ko-faktornya. Pb menurunkan absorbsi besi di saluran cerna dan menghambat
biosintesis heme, menyebabkan gagalnya pembentukan hemoglobin darah dan juga
menurunkan aktifitas katalase yang memerlukan heme sebagai gugus prostetiknya.
SOD adalah enzim yang memerlukan Cu dan Zn untuk aktifitasnya. Terdapat
korelasi yang tinggi antara penurunan SOD dengan penurunan kadar Cu darah pada
hewan. Selain itu juga didapatkan bahwa pada kadar Pb darah meninggi, tidak
2008.
USU Repository 2008
terdapat efek pada SOD bila kadar Cu darah normal. Pengamatan ini mengesankan
adanya penghambatan oleh Pb terhadap aktifitas SOD secara tak langsung melalui
penurunan kadar Cu (Gurer & Ercal, 2000).
2.5 Peroksidasi Lipid

Asam lemak tidak jenuh ganda mudah sekali teroksidasi oleh radikal bebas atau
senyawa-senyawa reaktif lainnya seperti H2O2. Reaksi lipid peroksidasi dimulai
dengan keluarnya atom hidrogen dari asam lemak tidak jenuh ganda. Radikal lipid
yang terbentuk kemudian bereaksi dengan oksigen membentuk radikal peroksil. Akan
terjadi reaksi rantai radikal, ketika radikal peroksil ini menarik atau mengeluarkan
atom hidrogen dari molekul asam lemak yang lain. Terdapatnya logam transisi seperti
Fe akan memulai pembentukan radikal lebih lanjut. Salah satu akibat penting
peroksidasi lipid adalah pembentukan senyawa-senyawa aldehida. Rantai reaksi ini
terus berlanjut bilamana radikal-radikal bebas yang terbentuk bereaksi dengan
molekul-molekul lain disekitarnya.
Peroksidasi lipid adalah mekanisme dari trauma sel, baik pada tumbuhan
ataupun hewan, dengan demikian peroksidasi lipid digunakan sebagai indikator dari
stres oksidatif pada sel dan jaringan. Endoperoksida lipid yang berasal dari asam
lemak tak jenuh ganda, bersifat tak stabil dan terurai membentuk beberapa senyawa
komplek, termasuk senyawa karbonil reaktif, terutama malondialdehyde (MDA).
Sehingga pengukuran MDA sering digunakan sebagai indikator peroksidasi lipid
jaringan (Mc Kee, 2003).
2008.
USU Repository 2008
Lipid membran sel mengandung asam-asam lemak tak jenuh yang hidrofob.
Tahap awal peristiwa peroksidasi pada asam-asam lemak tak jenuh ganda yang
terdapat pada membran disebut first chain initiation. Tahapan ini menunjukkan
serangan molekul-molekul yang reaktif terhadap atom hidrogen, sehingga terlepas
dari gugus metilen asam-asam lemak tak jenuh tersebut. Terdapatnya ikatan rangkap
pada asam lemak, melemahkan ikatan C-H pada atom carbon yang ada pada ikatan
rangkap dan menyebabkan atom H dapat dilepas dengan mudah. Asam-asam lemak
tanpa ikatan rangkap dan dengan 1 atau 2 ikatan rangkap akan lebih tahan terhadap
serangan oksidatif daripada asam-asam lemak tak jenuh ganda. Pengamatan Yiin dan
Lin (dalam Patrick, 2006) terhadap inkubasi asam linoleat, linolenat dan arachidonat
bersama Pb, menunjukkan peningkatan kadar MDA yang sebanding dengan jumlah
ikatan rangkap dari asam-asam lemak tersebut.
2.6 MDA dan Pengukurannya

Asam lemak tak jenuh ganda yang mengandung dua atau lebih ikatan rangkap
sangat rentan terhadap oksidasi oleh radikal bebas atau molekul-molekul reaktif
lainnya. Molekul reaktif seperti radikal hidroksil menarik atom hidrogen dari ikatan
rangkap asam lemak tak jenuh dan membentuk radikal peroksil lipid. Radikal ini
kemudian bereaksi dengan asam lemak tak jenuh lainnya membentuk hidroperoksida
lipid dan radikal peroksil lipid yang baru, yang kemudian meneruskan reaksi oksidasi
terhadap lipid lainnya, hal mana yang dikenal dengan auto-oksidasi lipid atau
2008.
USU Repository 2008
peroksidasi lipid. Proses tersebut juga akan membentuk endoperoksida siklik yang
akan terurai menjadi malondialdehida.
Malondialdehyde (MDA) yang mempunyai berat molekul rendah ini adalah satu
dari beberapa molekul hasil penguraian endoperoksida lipid yang terbentuk selama
proses peroksidasi lipid. MDA menjadi alat ukur yang paling banyak digunakan
sebagai indikator peroksidasi lipid. Pengukuran kadar MDA dilakukan dengan dasar
reaksi MDA dengan asam tiobarbiturat (TBA) yang membentuk senyawa berwarna
MDA-TBA2 dan mengabsorbsi sinar dengan panjang gelombang 532-534 nm.
Senyawa berwarna tersebut dapat diukur konsentrasinya berdasarkan absorbansi
warna yang terbentuk, dengan membandingkannya pada absorbansi warna larutan
standar yang telah diketahui konsentrasinya menggunakan spektrofotometer
(NWLSSTM Malondialdehyde Assay).
2008.
USU Repository 2008
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian

Desain yang digunakan pada penelitian ini adalah eksperimental terhadap mencit,
dengan 5 (lima) kelompok perlakuan dan 1 (satu) kelompok kontrol.
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Terpadu Fakultas Kedokteran
Universitas Sumatera Utara dan Laboratorium Biokimia Balai Penyidikan dan
Pengujian Veteriner (BPPV), Medan. Waktu penelitian delapan minggu, dimulai 6
Agustus sampai dengan 30 September, tahun 2007.
3.3 Populasi Penelitian
Adapun populasi penelitian ini adalah mencit putih jantan (Mus musculus L),
strain BALBC, berumur 10 - 12 minggu dengan berat badan 30 - 40 g. Hewan uji
diperoleh dari Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV), Medan.
3.4 Sampel Penelitian
Sampel penelitian adalah 24 ekor mencit jantan yang dipilih dengan tehnik
acak sederhana. Sampel dikelompokkan atas 6 kelompok, yakni kelompok I sebagai
kontrol, sedangkan kelompok II sampai VI adalah kelompok perlakuan.
Besar sampel yang digunakan dalam penelitian ini berdasarkan rumus Federer:
{(t 1) (n - 1) } 15
2008.
USU Repository 2008
Dimana:
n = besar sampel dalam kelompok perlakuan
t = banyaknya kelompok perlakuan (6 kelompok)
Banyak sampel yang dibutuhkan dalam kelompok:
{ (6 1) (n 1) } 15
5 (n 1) 15
5n 5 15
5n 20
n4
Besar sampel untuk 6 kelompok: 24
3.5 Rancangan Penelitian
Mencit dipelihara dalam kandang plastik dengan anyaman kawat sebagai
penutup. Kandang ditempatkan dalam ruangan yang memiliki ventilasi dan mendapat
cahaya matahari secara tak langsung. Kandang, tempat makan dan minum
dibersihkan sedikitnya tiga kali dalam seminggu. Sebelum perlakuan, mencit
diaklimatisasi selama seminggu. Pemberian makan dan minum dilakukan setiap hari
secara ad libitum. Pakan yang diberikan berupa pellet c-05, produksi PT. Charoen
Pokphan Medan dan aquades. Sampel yang terdiri dari 24 ekor mencit dibagi secara
acak dalam 6 kelompok masing-masing 4 ekor. Tiap kelompok diberi kode kelompok
I, II, III, IV, V dan VI.
2008.
USU Repository 2008
Perlakuan diberikan sesuai dengan kelompoknya. Sebelum perlakuan, lebih

dulu dilakukan penimbangan berat badan mencit. Bahan uji diberikan secara oral
dengan menggunakan sonde yaitu alat suntik dengan jarum yang ujungnya
ditumpulkan. Sonde dimasukkan dengan hati-hati, kira-kira mencapai lambung.
Waktu pemberian bahan uji diusahakan tetap diantara jam 09.00 sampai dengan jam
10.00 WIB.Volume pemberian bahan adalah 0,1 mL/10 g BB, diberikan setiap hari
selama 28 hari (Ngatidjan, 1991). Dosis Pb yang diberikan pada masing-masing
kelompok dapat dilihat pada tabel berikut ini:
Tabel 1. Dosis Pb Asetat pada Kelompok Perlakuan
Kelompok
Dosis Pb Asetat (mg/kg BB)
I
0 (Kontrol)
II
5
III
10
IV
20
V
40
VI
80
__________________________________________________________________
Setelah 4 minggu, perlakuan dihentikan. Satu hari setelah perlakuan dihentikan,

berat badan mencit ditimbang dan dibunuh secara dislokasi leher, kemudian
dilakukan pengambilan darah melalui punksi jantung sebanyak lebih kurang 0,5 1
mL dan dipersiapkan untuk pengukuran kadar malondialdehida plasma dan jumlah
eritrosit. Konsentrasi Pb yang dipakai dalam penelitian ini dan lamanya waktu
pemberian dimodifikasi dari penelitian yang dilakukan oleh Aykin-Burns dan kawankawan yang meneliti efek oksidatif terhadap darah tikus yang diberi Pb asetat dengan
2008.
USU Repository 2008
konsentrasi 2 ppm pada air minum selama 4 minggu dan penelitian El-Ashmawy dan
kawan-kawan yang memberi Pb asetat 0,5% pada mencit setiap hari selama 8 minggu
untuk menilai peroksidasi lipid pada hati mencit.
Gambar 2. Pemberian Perlakuan pada Mencit

3.6 Prosedur Pemeriksaan
3.6.1 Pengambilan Sampel Darah
Pengambilan sampel darah dilakukan dari jantung. Adapun alat dan bahan
yang digunakan adalah: spuit 1 ml, tabung mikrosentrifugasi berisi EDTA sebagai
antikoagulan, tabung mikrosentrifugasi kosong dan mikrosentrifugasi.
Cara kerja: darah diambil sebanyak 0,5 1 ml dengan menggunakan spuit,
dimasukkan ke tabung yang telah berisi EDTA. Setelah diambil untuk pemeriksaan
hitung eritrosit, sisa darah disentrifugasi pada kecepatan 3500 rpm selama 5 menit.
2008.
USU Repository 2008
Cairan plasma darah yang telah terpisah dari bagian padat darah segera dipindahkan
ke tabung mikrosentrifuge kosong (NWLSSTM Malondialdehyde Assay).
3.6.2 Pengukuran Kadar MDA Plasma
Pengukuran kadar MDA plasma dilakukan menurut metode yang digunakan
Rao dan kawan-kawan dalam Hsieh dan kawan-kawan dan metode NWLSSTM
Malondialdehyde Assay yang telah dimodifikasi. Alat dan bahan yang diperlukan:
pipet 10, 200 L, pipet tip, stir bar, tabung mikrosentrifugasi polipropilena, semimikro
kuvet,
spektrofotometer,
vorteks,
magnetic
stirrer,
water
bath,
mikrosentrifugasi, 2-thiobarbituric acid, asam asetat glasial, natrium hidroksida,

malondialdehida bis dan aquabides.
Persiapan reagensia dimulai dengan membuat reagensia TBA (thiobarbituric
acid) dengan melarutkan 0,67 g 2 thiobarbituric acid dalam 100 ml aquabidest,
kemudian ditambahkan 0,5 g natrium hidroksida dan 100 ml asam asetat glasial.
Selanjutnya membuat larutan serial standar dari larutan stok MDA 125 M yang
dilarutkan dalam aquabides, seperti dapat dilihat pada tabel di bawah ini:
2008.
USU Repository 2008
Tabel 2. Persiapan MDA Standar untuk Spektrofotometer

Nomor Standar
Konsentrasi MDA
Volume MDA
Volume
Standar (M)
125 M (l)
aquabides (l)
8
50
400
600
7
25
200
800
6
10
80
920
5
5
40
960
4
2,5
20
980
3
1,25
10
990
2
0,625
5
995
1
0
0
1000
__________________________________________________________________
Setelah diperoleh delapan larutan serial standar MDA dengan konsentrasi

yang berbeda, semua standar ini kemudian diproses sebagaimana prosedur pembuatan
sampel untuk pengukuran kadar malondialdehyde pada spektrofotometer, untuk
mendapatkan kurve standar MDA yang akan menjadi faktor kali pengukuran kadar
MDA sampel.
Gambar 3. MDA Standar untuk Spektrofotometer

Keterangan: dari kiri ke kanan, tabung 1: larutan standar 0 M, tabung 2: larutan
standar 0,625 M, tabung 3: larutan standar 1,25 M, tabung 4: larutan standar 2,5
M, tabung 5: larutan standar 5 M, tabung 6: larutan standar 10 M, tabung 7:
larutan standar 25 M, tabung 8: larutan standar 50 M.
2008.
USU Repository 2008
Prosedur kerja: sebanyak 100 l sampel (plasma darah) atau standar

dimasukkan dalam tabung mikrosetrifuge yang telah dilabel. Pada masing-masing
tabung ditambahkan aquabidest 0,9 ml. Pada sampel atau standar tersebut,
selanjutnya ditambahkan TBA reagent 0,5 ml. Tabung berisi larutan kemudian
dipanaskan di dalam waterbath pada suhu 950C selama 1 jam, selanjutnya
disentrifugasi pada kecepatan 7000 rpm selama 10 menit. Supernatan yang diperoleh
diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 534
nm.
Gambar 4. Pemanasan Larutan Sampel dalam Waterbath

3.6.3 Penghitungan Jumlah Eritrosit
Pada pemeriksaan ini digunakan beberapa alat dan bahan yaitu pipet eritrosit,
kamar hitung Improved Neubauer, kaca penutup, reagensia Hayem dan darah (whole
2008.
USU Repository 2008
blood). Pipet eritrosit diisi dengan darah sampai 0,5, kemudian sambil menahan darah
pada ujung pipet isikan dengan larutan Hayem sampai garis 101. Ujung pipet
diletakkan pada posisi horizontal agar cairan tidak keluar dan kedua ujung pipet
ditekan, kemudian digoyang-goyang selama 3-5 menit. Sebanyak 3 tetes cairan
dibuang dan dengan posisi 300 masukkan cairan ke dalam kamar hitung yang telah
ditutup dengan kaca penutup. Setelah 2 menit, eritrosit dihitung di bawah mikroskop
dengan pembesaran 40 kali.
Jumlah eritrosit dihitung dengan cara, bidang yang dihitung adalah 5 bidang
kecil E1+E2+E3+E4+E5. Dengan pengenceran eritrosit 200 kali, dan tinggi kamar
hitung 1/10 mm, seluruh permukaan kamar hitung adalah 1/5 mm, maka faktor
perkaliannya adalah 5 * 10 * 200 = 10000 / mm3. Jumlah eritrosit adalah: (E1 + E2 +
E3 + E4 + E5 ) * 10000 / mm3 (Aman et al, 2007).
3.7 Variabel Penelitian
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah Pb asetat dalam konsentrasi 0%,
0,05%, 0,1%, 0,2%, 0,4%, dan 0,8%. Variabel terikat dalam penelitian ini adalah
konsentrasi MDA plasma dan jumlah eritrosit.
3.8 Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis dengan program komputer SPSS 11. Dicari
apakah terdapat perbedaan kadar MDA dan jumlah eritrosit antara kelompok
perlakuan, menggunakan uji Analisis Varian (Anova) satu arah atau uji Kruskal
Wallis. Jika terdapat perbedaan yang bermakna maka dilanjutkan dengan uji Tukey
2008.
USU Repository 2008
pada tingkat kemaknaan p < 0,05. Hubungan antara kadar MDA dan jumlah eritrosit
dianalisis dengan korelasi Pearson.
KERANGKA KERJA
24 mencit
30-40gr
I(Pb0
mg/kg)
II(Pb5
mg/kg)
III(Pb10
mg/kg)
IV(Pb20
mg/kg)
V(Pb40
mg/kg)
VI(Pb80
mg/kg)
Setelah 4 minggu:
-Kadar MDA plasma
-Jumlah eritrosit
Gambar 5. Kerangka Kerja
2008.
USU Repository 2008
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Plumbum telah diketahui sebagai bahan toksik dalam hampir semua bentuk
kimianya. Zat ini masuk ke dalam tubuh dengan cara terinhalasi, termakan dan
terminum. Tingkat pemaparan ringan, sedang dan tinggi baik di lingkungan umum
ataupun di tempat kerja, akan menimbulkan gangguan dalam fungsi fisiologis dan
metabolisme tubuh.
Penelitian ini dilakukan untuk melihat efek pemberian beberapa konsentrasi
Pb terhadap terjadinya peroksidasi lipid yang diukur sebagai kadar MDA plasma dan
akibatnya
terhadap
kerusakan
atau
lisisnya
eritrosit.
Beberapa
penelitian
menunjukkan bahwa patogenesa kerusakan jaringan oleh pemaparan Pb adalah efek

stres oksidatif yang ditimbulkannya. Secara keseluruhan efek Pb terhadap tubuh
adalah menyebabkan gangguan keseimbangan pro-oksidan dan anti-oksidan (GurerOrhan et al, 2004). Peroksidasi lipid sebagai dampak dari meningkatnya pro-oksidan
dan diukur sebagai kadar MDA didapati meningkat pada hati dan otak setelah
pemberian Pb dan peningkatan tersebut lebih dominan terjadi pada eritrosit (AykinBurns et al, 2002).
4.1 Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit

Perlakuan diberikan selama 28 hari, dimulai dari kelompok V dan VI,
kemudian kelompok III dan IV, setelah itu kelompok I dan II. Data penelitian
2008.
USU Repository 2008
diperoleh berupa kadar MDA plasma dan jumlah eritrosit, yang didapatkan satu hari
setelah perlakuan selesai, dapat dilihat pada tabel di bawah ini.
Tabel 3. Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit Hewan Uji
Kelompok
Hewan Uji
Kadar MDA (M)
Jumlah Eritrosit(*10 6)
I
1
38,60
2,30
I
2
17,37
2,51
I
3
16,78
2,40
I
4
38,01
2,32
II
5
27,10
1,38
II
6
38,21
1,26
II
7
39,96
2,53
II
8
30,42
2,01
III
9
39,96
1,60
III
10
36,06
2,24
III
11
32,36
2,00
III
12
38,79
2,63
IV
13
40,74
1,93
IV
14
38,40
2,60
IV
15
57,68
2,09
IV
16
27,49
2,21
V
17
75,01
1,47
V
18
22,43
2,56
V
19
33,14
1,36
V
20
55,54
1,68
VI
21
39,57
1,40
VI
22
34,51
1,85
VI
23
31,97
1,96
VI
24
52,42
0,69
_______________________________________________________________
4.2 Rerata Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit

Kadar rerata MDA plasma hewan uji pada masing-masing kelompok
perlakuan, didapati adanya peningkatan dari kelompok yang mendapat Pb dengan
konsentrasi terkecil sampai yang mendapat konsentrasi Pb lebih besar, kecuali untuk
2008.
USU Repository 2008
kelompok VI (mendapat Pb 0,8%). Nilai tersebut dapat dilihat pada grafik di bawah
ini.
46.53
50
40
30
33.92
36.79
41.08
39.62
27.69
[MDA]
20
10
0
I
II
III
IV
VI
Kelompok
Grafik 1. Rerata Kadar MDA Plasma

Kelompok dengan pemberian Pb 0,8% diperoleh kadar MDA 39,62 M,
justru lebih rendah dari kelompok yang mendapat Pb 0,2% (41,08 M) dan kelompok
yang mendapat Pb 0,4% (46,53 M). Hal ini tampaknya sejalan dengan penelitian
Sipos terhadap cairan empedu ayam ternak yang diberi Pb dengan dosis berbeda (400
dan 600 mg/Kg). Dalam penelitian tersebut hasil pengukuran dua parameter
peroksidasi lipid yaitu TBA-reactive products (dalam hal ini MDA) dan Dieneconjugates menunjukkan nilai yang lebih rendah pada ayam ternak yang mendapat Pb
dengan dosis lebih tinggi (Sipos et al, 2003).
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa Pb menganggu proses metabolisme
tubuh pada rentang konsentrasi terkecil yang diberikan. Pemberian Pb dengan rentang
konsentrasi terkecil (0,05%) ternyata meningkatkan peroksidasi lipid pada darah
mencit bila dibandingkan dengan mencit-mencit yang tidak dipapar Pb. Kadar MDA
2008.
USU Repository 2008
tersebut terus meningkat pada kelompok-kelompok yang mendapat Pb dengan

konsentrasi lebih tinggi sampai rentang konsentrasi 0,4%. Hal ini menunjukkan
bahwa peroksidasi lipid meningkat sejalan dengan peningkatan konsentrasi Pb yang
diberikan dalam rentang tertentu. Kadar MDA yang lebih rendah pada kelompok
yang mendapat Pb dengan rentang konsentrasi tertinggi (0,8%) bila dibandingkan
dengan kelompok yang mendapat Pb konsentrasi 0,2% dan 0,4%, belum dapat
dijelaskan. Stres oksidatif mungkin bukan satu-satunya pato-mekanisme kerusakan
jaringan oleh karena Pb. Hal ini dikuatkan dengan menurunnya parameter peroksidasi
lipid pada pemberian Pb dosis tinggi, sementara kerusakan jaringan yang
ditimbulkannya secara histologis lebih berat (Sipos et al, 2003).
Rerata jumlah eritrosit pada semua kelompok yang mendapat Pb didapati
lebih kecil bila dibandingkan dengan kelompok kontrol. Nilai tersebut dapat dilihat
pada grafik di bawah ini.
2.5
2.38
2.2
2.11
2
Jumlah Eritrosit
(juta)
1.79
1.76
1.47
1.5
1
0.5
0
I
II
III
IV
VI
Kelompok
Grafik 2. Rerata Jumlah Eritrosit
2008.
USU Repository 2008
Dari enam kelompok hewan uji, rerata jumlah eritrosit yang terkecil terdapat pada
kelompok VI, kelompok yang mendapat Pb dengan konsentrasi paling besar.
Nilai rerata jumlah eritrosit pada kelompok mencit yang mendapat Pb 0,05%
lebih rendah dari kelompok yang mendapat Pb 0,1% dan 0,2%, hal ini dimungkinkan
oleh karena adanya variasi individu atau oleh karena bias pengambilan darah sampel.
Jika nilai ekstrim rendah yang diperoleh pada pengumpulan data dari kelompok
0,05% dikeluarkan, maka rerata jumlah eritrosit pada kelompok 0,05% tersebut akan
meningkat di atas kelompok mencit yang mendapat Pb 0,1% dan 0,2%.
4.3 Uji Normalitas menurut Shapiro-Wilk Test

Sebelum data diolah lebih jauh secara statistik, dilakukan uji normalitas
terlebih dahulu untuk kemudian menentukan uji analisis statistik yang sesuai.
Tabel 4. Uji Normalitas Data Kadar MDA Plasma
Data Kadar MDA
N
Rerata
Shapiro-Wilk
Sig.
__________________________________________________________________
I
4
27.69
.753
.041
II
4
33.92
.904
.449
III
4
36.79
.942
.668
IV
4
41.08
.956
.751
V
4
46,53
.962
.789
VI
4
39.62
.893
.396
__________________________________________________________________
Jika p >0,05, data berdistribusi normal
Jika p <0,05, data berdistribusi tidak normal
2008.
USU Repository 2008
Uji normalitas data di atas menunjukkan bahwa semua data MDA plasma
berdistribusi normal, kecuali untuk kelompok I.
Tabel 5. Uji Normalitas Data Jumlah Eritrosit
Data Jumlah Eritrosit
I
II
III
IV
V
VI
N
4
4
4
4
4
4
Rerata
2.38
1.79
2.11
2.20
1.76
1.47
Shapiro-Wilk
.911
.915
1.000
.943
.830
.900
Jika p >0,05, data berdistribusi normal.
Jika p <0,05, data berdistribusi tidak normal.
Sig.
.488
.507
1.000
.670
.168
.432
Semua data jumlah eritrosit, berdasarkan uji normalitas di atas adalah berdistribusi
normal.
4.4 Uji Statistik Perbedaan Kadar MDA

Analisis statistik yang digunakan untuk mencari perbedaan rerata kadar MDA
dari beberapa kelompok perlakuan dalam penelitian ini, berdasarkan distribusi
datanya adalah uji Kruskal Wallis.
Tabel 6. Uji Kruskal Wallis Data Kadar MDA
N
Rerata
Chi-Square df
Sig.
MDA
24
37.60
3.589
5
.610
__________________________________________________________________
2008.
USU Repository 2008
Jika p < 0,05, berbeda bermakna.
Jika p > 0,05, tidak berbeda bermakna.
Kadar MDA plasma mencit dari kelompok-kelompok yang mendapat Pb dengan

konsentrasi berbeda, berdasar uji statistik di atas tidak berbeda secara bermakna.
Pada penelitian ini diperoleh kadar MDA plasma dari mencit-mencit
perlakuan yang cendrung meningkat mulai dari rentang konsentrasi terendah sampai
yang paling tinggi bila dibandingkan dengan mencit-mencit yang bebas dari Pb,
meskipun secara statistik nilainya tidak berbeda secara bermakna. Kelompok yang
bebas Pb dengan kadar MDA 27,69 M, kelompok yang mendapat Pb 0,05% dengan
kadar MDA 33,92 M, kelompok yang mendapat Pb 0,1% mempunyai kadar MDA
36,79 M, kelompok yang mendapat Pb 0,2% mempunyai kadar MDA 41,08 M dan
kelompok yang mendapat Pb 0,4% mempunyai kadar MDA tertinggi yaitu 46,53 M.
4.5 Uji Statistik Perbedaan Jumlah Eritrosit

Analisis statistik untuk mencari perbedaan rerata jumlah eritrosit diantara
kelompok-kelompok dalam penelitian ini, berdasar distribusi datanya adalah uji
Anova satu arah. Data lebih dahulu diuji homogenitas variannya. Data jumlah
eritrosit berdasar uji di atas mempunyai varian yang sama, dengan demikian data
tersebut memenuhi syarat dianalisis menggunakan uji Anova. Uji statistik ini dapat
dilihat pada tabel berikut.
2008.
USU Repository 2008
Tabel 7. Uji Anova Jumlah Eritrosit

df
F
Sig.
Antar kelompok
5
2.158
.105
Dalam kelompok
18
.
.
__________________________________________________________________
Jika p < 0,05, berbeda bermakna.
Jika p > 0,05, tidak berbeda bermakna.
Rerata jumlah eritrosit mencit dalam kelompok-kelompok yang mendapat Pb dengan

berbagai konsentrasi, berdasar analisis statistik di atas tidak menunjukkan perbedaan
yang bermakna.
Jumlah eritrosit pada mencit-mencit perlakuan dalam penelitian ini secara
statistik tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna, tetapi rerata jumlah eritrosit
kelompok yang bebas dari Pb nyata lebih tinggi dibanding kelompok-kelompok yang
mendapat Pb. Jumlah eritrosit paling rendah didapati berturut-turut pada kelompok
yang mendapat Pb dengan konsentrasi 0,4% dan 0,8%. Hal ini tampaknya sejalan
dengan beberapa literatur yang menjelaskan bahwa hemolisis dan anemia adalah
tanda klinis yang dijumpai pada keracunan Pb (Pagliuca et al, 1990).
4.6 Korelasi Kadar MDA dan Jumlah Eritrosit

Peningkatan kadar MDA plasma dengan terjadinya penurunan jumlah eritrosit
dalam darah mencit yang mendapat pemberian Pb, diuji dengan menggunakan uji
2008.
USU Repository 2008
korelasi Product Moment Pearson. Uji statistik tersebut dapat dilihat pada tabel
berikut.
Tabel 8. Uji Korelasi Kadar MDA dan Jumlah Eritrosit
MDA
1
MDA
Eritrosit
- .415
.044
24
1
Korelasi Pearson
Sig. (2 tailed)
N
24
Eritrosit
Korelasi Pearson
- .415
Sig. (2 tailed)
.044
N
24
24
__________________________________________________________________
Jika p < 0,05, bermakna.
Jika p > 0,05, tidak bermakna
Uji statistik antara kadar MDA dan jumlah eritrosit dalam penelitian ini
menunjukkan adanya korelasi negatif (r = -.415) dan korelasi tersebut bermakna (p =
0,044). Hal ini menunjukkan bahwa peroksidasi lipid yang berlangsung dalam darah
mencit menyebabkan terjadinya lisis eritrosit atau hemolisis yang menyebabkan pula
penurunan jumlah eritrosit. Peroksidasi pada fosfolipid
membran eritrosit
menyebabkan destabilitas membran dan menurunkan fluiditasnya, yang kemudian

meningkatkan kecepatan hemolisis. Hemolisis menjadi dampak akhir dari peroksidasi
lipid oleh karena reactive oxygen species di membran eritrosit. Pb juga berikatan
langsung dengan fosfatidil kolin membran eritrosit yang menyebabkan kadar
fosfolipid membran menurun. Selain hal tersebut, Pb juga menyebabkan hemolisis
oleh karena memicu oksidasi hemoglobin dalam eritrosit. Anemia yang timbul akibat
2008.
USU Repository 2008
hemolisis pada keracunan Pb secara mikroskopis adalah anemia normokrom atau

hipokrom.
Peningkatan kadar molekul ALA oleh karena dihambatnya kerja enzim
DALAD, dapat memicu terbentuknya hidrogen peroksida, radikal superoksid dan
radikal hidroksil. Molekul-molekul reactive oxygen species yang meninggi oleh
karena Pb ini diikuti pula dengan menurunnya hampir semua enzim dan molekul
pertahanan anti oksidan seperti glutation, glutation peroksidase, katalase, superoksid
dismutase, glutation reduktase dan glukosa 6 fosfat dehidrogenase. Enzim terakhir ini
membentuk molekul pereduksi NADPH di luar mitokondria, sehingga menjadi satusatunya sumber NADPH pada eritrosit (Gurer & Ercal, 2000).
Anemia pada keracunan Pb juga disebabkan oleh terhambatnya sintesis heme
yang membentuk hemoglobin, dikarenakan Pb mengikat DALAD, enzym kunci
dalam biosintesa heme. Hal ini tampaknya dapat menjelaskan hasil hitung jumlah
eritrosit dalam penelitian ini, khususnya pada kelompok mencit yang mendapat Pb
0,8%. Pada kelompok mencit yang mendapat Pb 0,8%, tingkat peroksidasi lipid atau
stres oksidatif lebih ringan dibandingkan kelompok mencit yang mendapat Pb 0,2%
dan 0,4%, akan tetapi jumlah eritrosit pada kelompok 0,8% adalah yang paling
rendah. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa menurunnya jumlah eritrosit pada
kelompok 0,8% tersebut tidak hanya disebabkan oleh stres oksidastif tetapi dapat juga
oleh karena gangguan sintesis hemoglobin. Peroksidasi lipid yang berlangsung di
eritrosit dan pemeriksaan mikroskopis eritrosit sangat disayangkan tidak dilakukan
dalam penelitian ini.
2008.
USU Repository 2008
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
1. Plumbum yang masuk ke dalam tubuh, menimbulkan gangguan fungsi fisiologis
dan metabolisme melalui efek stres oksidatif, yang terlihat dari meningginya
parameter peroksidasi lipid jaringan.
2. Pemberian Pb dengan rentang konsentrasi terendah (0,05%) ternyata sudah dapat
meningkatkan peroksidasi lipid yang diukur dengan kadar MDA plasma.
3. Keracunan Pb menyebabkan menurunnya jumlah sel darah merah (eritrosit).
4. Penurunan jumlah eritrosit oleh keracunan Pb berhubungan dengan meningkatnya
peroksidasi lipid dalam darah.
5.2 Saran
1. Perbedaan data hasil pengukuran dalam penelitian ini secara statistik tidak
bermakna, hal ini dimungkinkan oleh karena jumlah sampel yang kecil, untuk itu
perlu dilakukan penelitian yang sama dengan jumlah sampel lebih besar.
2. Perlu diteliti lebih jauh parameter lain dari stres oksidatif seperti kadar atau
aktivitas molekul-molekul pro-oksidan dan anti-oksidan pada keracunan Pb, untuk
mengetahui molekul apa saja yang dipengaruhi Pb sehingga menimbulkan ketidak
seimbangan pro-oksidan dan anti-oksidan yang berefek pada meningkatnya
peroksidasi lipid.
2008.
USU Repository 2008
3. Perlu diteliti lebih lanjut efek Pb yang masuk ke tubuh melalui inhalasi (saluran
nafas) dibandingkan melalui saluran cerna, mengingat inhalasi adalah jalan masuk
utama.
4. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh variasi konsentrasi Pb
terhadap kadar MDA plasma, dalam jangka waktu yang sama, perlu diteliti lebih
lanjut pengaruh tersebut berdasar perbedaan waktu / lama pemaparan.
5. Perlu diteliti lebih jauh pato-mekanisme lain dari efek merusak Pb selain stres
oksidatif.
2008.
USU Repository 2008
DAFTAR PUSTAKA
Aman, A.K., Ganie, R.A., Kar, A.S., Siregar, Y., Lubis, B., Arifin, Z., et al. 2007.
Buku rancangan pengajaran: Hematologic & immunologic system. Medical
Education Unit, Fak. Kedokteran. USU.
Aykin-Burns, N., Laegeler, A., Kellogg, G., Ercal, N. 2003. Oxidative effects of lead
in young and adult fisher 344 rats. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 44: 417420.
Devlin, M.T. 2002. Bioenergetics and oxidative metabolism In: Biochemistry with
clinical correlations. 5th ed. Wiley-liss, Canada. 590-592.
Ding, Y., Gonick, H.C., Vaziri, N.D. 2000. Lead promotes hydroxyl radical
generation and lipid peroxidation in cultured aortic endothelial cells. Am J
Hypertens. 13: 552-555.
El-Ashmawy, I.M., Ashry, K.M., El-Nahas, A.F., Salama, O.M. 2006. Protection by
turmeric and myrrh against liver oxidative damage and genotoxicity induced
by lead acetate in mice. Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology. 98:3237.
Ercal, N., Gurer, H., Aykin-Burns, N. 2001. Toxic metals and oxidative stress. Part 1.
Mechanisms involved in metal induced oxidative damage. Curr Top Med
Chem. 1:529-539
Federer, W.Y. 1963. Experimental design theory and application. New York, Mac
Millan. 544.
Fracasso, M.E., Perbellini, L., Solda, S., Talamini, G., Franceschetti, P. 2002. Lead
induced DNA strand breaks in lymphocytes of exposed workers: role of ROS
and protein kinase C. Mutation Research. 515: 159-169.
Gajawat, S., Sancheti, G., Goyal, P.K. 2006. Protection against lead-induced hepatic
lesions in swiss albino mice by ascorbic acid. Pharmacologyonline. 1: 140149
Gurer, H., Ercal, N. 2000. Can antioxidants be beneficial in the treatment of lead
poisoning? Free Radic Biol Med. 29 (10): 927-945.
2008.
USU Repository 2008
Gurer-Orhan, H., Sabir, H.U., Ozgunez, H. 2004. Correlation between clinical

indicators of lead poisoning and oxidative stress parameters in controls and
lead exposed workers. Toxicology. 195:147-154.
Kasperczyk, S., Birkner, E., Kasperczyk, A., Zalejska-Fiolka, J. 2004. Activity of

superoxide dismutase and catalase in people protractedly exposed to lead
compounds. Ann Agric Environ Med. 11: 291-296.
Lim, S., Doherty, J.D., Salem, N,Jr. 2005. Lead exposure and (n-3) fatty acid
deficiency during rat neonatal development alter liver, plasma, and brain
polyunsaturated fatty acid composition. J. Nutr. 135:1027-1033.
Mc Kee, T., Mc Kee, J.R. 2003. Aerobic metabolism II: electron transport and
oxidative phosphorylation In: Biochemistry the molecular basis of life. 3rd ed.
McGraw-Hill, NY 10020. 319-326.
MSDS-Material Safety Data Sheet. 2006. Lead nitrate. MSDS no L3130. p 1-8
Ngatidjan. 1991. Metode laboratorium dalam toksikologi. UGM, Yogyakarta.
Pagliara, P., Carla, C.E., Caforio, S., Chionna, A., Massa, S., Abbro, L., Dini, L.
2003. Kupffer cells promote lead nitrate-induced hepatocyte apoptosis via
oxidative stress. Comparative Hepatology. 2 (8): 1-13.
Pagliuca, A., Mufti, G.J., Baldwin, D., Lestas, A.N., Wallis, R.M., Bellingham, A.J.
1990. Lead poisoning: clinical, biochemical and haematological aspects of a
recent outbreak. J Clin Pathol. 43: 277-281.
Patrick, L. 2006. The role of free radical damage and the use of antioxidants in the
pathology and treatment of lead toxicity. Altern Med Rev 11(2): 114-127
Quinlan, G.J., Halliwell, B., Moorehouse, C.P., Gutteridge, J.M.C. 1988. Action of
lead and aluminium on iron stimulated lipid peroxidation in liposomes,
erythrocytes and rat liver microsomal fractions. Biochemica et Biophysica
Acta. 962: 196-200.
Sipos, P., Szentmihalyi, K., Feher, E., Abaza, M., Szilagyi, M., Blazovics, A. 2003.
Some effects of lead contamination on liver and gallbladder bile. Acta
Biologica Szegediensis. 47(1-4): 139-142
2008.
USU Repository 2008
Snyder, J.E., Filipov, N.M., Parsons, P.J., Lawrence, D.A. 2000. The efficiency of
maternal transfer of lead and its influence on plasma IgE and splenic
cellularity of mice. Toxicological Sciences. 57: 87-94.
Tong, S., Von-schimding, Y.E., Prapamontol, T. 2000. Environmental lead exposure:
a public health problem of global dimensions. Bull WHO 78: 1068-1077.
WHO-World Health Organization. 1977. Lead. Environmental health criteria no. 3,
Geneva, WHO.
Winarno, F.G. 1993. Pangan, Gizi, Teknologi dan Konsumen. Penerbit PT Gramedia
Pustaka Utama, Jakarta.
Wozniak, K., Blasiak, J. 2003. In vitro genotoxicity of lead acetate: induction of
single and double DNA strand breaks and DNA-protein cross-links.
Mutat.Res. 535: 127-139.
Zhao, Z., Li, R., Sun, L., Li, Z., Yang, R. 2004. Effect of lead exposure on the
immune function of lymphocytes and erythrocytes in preschool children. J.
Zhejiang Univ SCI. 5 (8): 1001-1004.
2008.
USU Repository 2008
Lampiran 1
Data kadar MDA, Senin, 10 september 2007
NO
CONC
1
75,018
2
22,435
3
33,147
4
55,543
5
39,573
6
34,510
7
31,978
8
52,427
9
39,963
Ket: no 1 s/d 4 kelompok 0,4%; no 5 s/d 8 kelompok 0,8%; no 9 kelompok 0,1%.
Data kadar MDA, Rabu, 12 September 2007
NO
CONC
1
40,742
2
38,405
3
57,685
4
36,068
5
32,368
Ket: no 1 s/d 3 kelompok 0,2%; no 4 s/d 5 kelompok 0,1%.
Data kadar MDA, Selasa, 18 September 2007
NO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
CONC
38,794
27,499
38,600
17,372
16,787
38,015
27,109
38,210
39,963
30,420
Ket: no 1 kelompok 0,1%; no 2 kelompok 0,2%; no 3 s/d 6 kelompok K; no 7 s/d 10

kelompok 0,05%.
2008.
USU Repository 2008
Data jumlah eritrosit, senin 10 September 2007

NO
KODE
ERIT ( * 106 ) / mm3
SAMPEL
1
6
1,85
2
4
1,68
3
7
1,96
4
8
0,69
5
1
1,47
6
2
2,56
7
3
1,36
8
5
1,40
9
9
1,60
Ket: kode 1 s/d 4 kelompok 0,4%; kode 5 s/d 8 kelompok 0,8%; kode 9 kelompok
0,1%.
Data jumlah eritrosit, Rabu 12 September 2007
NO
KODE
ERIT ( * 106 ) / mm3
SAMPEL
1
1
1,93
2
2
2,60
3
3
2,09
4
4
2,24
5
5
2,00
Ket: kode 1 s/d 3 kelompok 0,2%; kode 4 s/d 5 kelompok 0,1%.
Data jumlah eritrosit, Selasa 18 September 2007
NO
KODE
ERIT ( * 106 ) / mm3
SAMPEL
1
1
2,63
2
2
2,21
3
3
1,38
4
4
1,26
5
5
2,53
6
6
2,01
7
7
2,30
8
8
2,51
9
9
2,40
10
10
2,32
Ket: kode 1 kelompok 0,1%; kode 2 kelompok 0,2%; kode 3 s/d 6 kelompok 0,05%;
kode 7 s/d 10 kelompok K.
2008.
USU Repository 2008
Lampiran 2
Tests of Normality
a
kelompok perlakuan
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
konsentrasi
MDA(mikroMolar)
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
df
Sig.
.300
4
.257
4
.223
4
.261
4
.216
4
.252
4
.
.
.
.
.
.
Statistic
.753
.904
.942
.956
.962
.893
Shapiro-Wilk
df
4
4
4
4
4
4
Sig.
.041
.449
.668
.751
.789
.396
a. Lilliefors Significance Correction
Descriptives
konsentrasi MDA(mikroMolar)
N
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
Total
4
4
4
4
4
4
24
Mean
27.6935
33.9255
36.7982
41.0828
46.5358
39.6220
37.6096
Std. Deviation
12.26064
6.15255
3.37437
12.48251
23.46965
9.10190
12.85459
Std. Error
6.13032
3.07627
1.68718
6.24126
11.73483
4.55095
2.62393
95% Confidence Interval for

Mean
Lower Bound Upper Bound
8.1841
47.2029
24.1354
43.7156
31.4289
42.1676
21.2203
60.9452
9.1903
83.8812
25.1388
54.1052
32.1816
43.0376
Minimum
16.79
27.11
32.37
27.50
22.44
31.98
16.79
Maximum
38.60
39.96
39.96
57.69
75.02
52.43
75.02
Test of Homogeneity of Variances

MDA
Levene
Statistic
4.279
df1
df2
5
18
Sig.
.010
Ranks
konsentrasi
MDA(mikroMolar)
kelompok perlakuan
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
Total
N
4
4
4
4
4
4
24
Mean Rank
7.50
10.38
13.38
15.50
14.50
13.75
2008.
USU Repository 2008
Test Statisticsa,b
Chi-Square
df
Asymp. Sig.
MDA
3.589
5
.610
a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: KELOMPOK
Means plot
Mean konsentrasi MDA(mikroMolar)
50
40
30
20
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
kelompok perlakuan
Analisis eritrosit
Tests of Normality
a
jml erit(juta)
kelompok perlakuan
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
df
Sig.
.244
4
.259
4
.143
4
.247
4
.314
4
.242
4
.
.
.
.
.
.
Statistic
.911
.915
1.000
.943
.830
.900
Shapiro-Wilk
df
4
4
4
4
4
4
Sig.
.488
.507
1.000
.670
.168
.432
a. Lilliefors Significance Correction
2008.
USU Repository 2008
Descriptives
jml erit(juta)
N
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
Total
Mean
2.3825
1.7950
2.1175
2.2075
1.7675
1.4750
1.9575
4
4
4
4
4
4
24
Std. Deviation
.09535
.59017
.43177
.28570
.54476
.57669
.51162
Std. Error
.04768
.29508
.21588
.14285
.27238
.28834
.10443
95% Confidence Interval for

Mean
Lower Bound Upper Bound
2.2308
2.5342
.8559
2.7341
1.4305
2.8045
1.7529
2.6621
.9007
2.6343
.5574
2.3926
1.7415
2.1735
Minimum
2.30
1.26
1.60
1.93
1.36
.69
.69
Maximum
2.51
2.53
2.63
2.60
2.56
1.96
2.63
Test of Homogeneity of Variances

ERIT
Levene
Statistic
1.860
df1
df2
5
Sig.
.152
18
ANOVA
ERIT
Between Groups
Within Groups
Total
Sum of
Squares
2.26E+12
3.76E+12
6.02E+12
df
5
18
23
Mean Square
4.512E+11
2.091E+11
F
2.158
Sig.
.105
Means Plots
2.6
2.4
2.2
2.0
Mean jml erit(juta)
1.8
1.6
1.4
1.2
Pbk
Pb0,05
Pb0,1
Pb0,2
Pb0,4
Pb0,8
kelompok perlakuan
2008.
USU Repository 2008
Korelasi
Correlations
MDA
MDA
ERIT
Pearson Correlation
Sig. (2-tailed)
N
Pearson Correlation
Sig. (2-tailed)
N
1
.
24
-.415*
.044
24
ERIT
-.415*
.044
24
1
.
24
*. Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed).
Lampiran 3
2008.
USU Repository 2008
2008.
USU Repository 2008

Pengaruh Pemberian Timbal (PB) Terhadap Kadar Malondialdehyde (Mda) Plasma Mencit

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Pengaruh Pemberian Timbal (PB) Terhadap Kadar Malondialdehyde (Mda) Plasma Mencit

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGARUH PEMBERIAN TIMBAL (Pb)

TERHADAP KADAR MALONDIALDEHYDE

Untuk Memperoleh Gelar Magister Kesehatan

: PENGARUH PEMBERIAN TIMBAL (Pb) TERHADAP

( dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D. )

Ketua Program Studi,

( dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D. )

( Dr. Ramlan Silaban, M.Si )

( Prof . Dr. Ir. T. Chairun Nisa B., MSc )

Telah diuji pada

PANITIA PENGUJI TESIS

: dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D.

: Dr.Ramlan Silaban, M.Si

Kata kunci: Pb, peroksidasi lipid, malondialdehyde, stres oksidatif.

Key words: lead, lipid peroxidation, malondialdehyde, oxidative stress

terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:

Medan, 5 September 2008

(T. Helvi Mardiani)

: Batu Bara, 07 Januari 1972

: Jl. Sentosa Baru No. 29 Medan

SMP Negeri II, Lubuk Pakam

SMA Negeri I, Medan

Sarjana (S1) Fakultas Kedokteran USU

Profesi Dokter, Fakultas Kedokteran USU

Sekolah Pascasarjana, Program Biomedik, USU : 2005-2008

Kepala Puskesmas Pematang Panjang Asahan

Staf Pengajar Kontrak di Departemen Biokimia FK USU:2000-2001

KATA PENGANTAR .....................................................................

RIWAYAT HIDUP ..........................................................................

DAFTAR ISI .....

DAFTAR TABEL .....

DAFTAR GAMBAR ........................................................................

DAFTAR GRAFIK ...........................................................................

DAFTAR SINGKATAN ..................................................................

BAB I PENDAHULUAN ................................................................

1.1 Latar Belakang .................................................................

1.2 Perumusan Masalah .........................................................

1.3 Kerangka Teori.. ..............................................................

1.4 Tujuan Penelitian .............................................................

1.5 Hipotesis ..........................................................................

1.6 Manfaat Penelitian ...........................................................

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................

2.1 Timbal (Pb) ......................................................................

2.2 Toksisitas Pb ....................................................................

2.3 Molekul Oksigen Reaktif .................................................

2.4 Efek Pb terhadap Keseimbangan Oksidan-Antioksidan ..

2.5 Peroksidasi Lipid .............................................................

2.6 MDA dan Pengukurannya ...............................................

BAB III METODOLOGI PENELITIAN .........................................

3.1 Desain Penelitian .............................................................

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian...........................................

3.3 Populasi Penelitian ...........................................................

3.4 Sampel Penelitian .............................................................

3.5 Rancangan Penelitian .......................................................

3.6 Prosedur Pemeriksaan ......................................................

3.6.1 Pengambilan Sampel Darah ..............................

3.6.2 Pengukuran Kadar MDA Plasma ......................

3.6.3 Penghitungan Jumlah Eritrosit ..........................

3.7 Variabel Penelitian ...........................................................

3.8 Analisa Data .....................................................................

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...........................................

4.1 Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit

4.2 Rerata Kadar MDA Plasma dan Jumlah Eritrosit .............