Anda di halaman 1dari 30

4.

Pemeriksaan Glukosa

Metode
GOD-PAD
Prinsip Metode
Glukosa ditentukan setelah oksidasi enzimatik dengan adanya oksidasi
glukosa. Hidrogen peroksida yang terbentuk bereaksi dalam katalisis peroksidase
dengan fenol dan 4-aminophenazone warna merah-violet quinoneimine sebagai
indikator.
Prinsip Reaksi
Glukosa +

O2

H2

Glukonic acid +

H 2 O2

H 2 O2

+ 4-aminophhenazone + phenol

quinoneimine + 4

H 2 O2

RGT

enzimatik reagent
Buffer posfat (pH 7.5)

100 mmol/I

4-Aminophenazone

0,25mmol/I

Fenol

0,75mmol/I

Oksidase glukosa

.15 KU/I

Peroksida

.15 KU/I

Mutarotase

.2.0 KU/I

Natrium azide

0.095

Stabilizers
STD

standar
Glukosa

100 mg/I

Persiapan Reagen
RGT dan STD siap untuk digunakan
Stabilitas Reagen
Reagen tetap stabil setelah dibuka sampai dengan tanggal kadaluarsa. Bila
disimpan pada suhu 2-8 . Hindari kontaminasi. Pada suhu 15..25

rgt

stabil selama 2 minggu


Spesimen
Serum, Plasma .
Glukosa stabil selama 24 jam pada suhu 2-8
dalam waktu 30 menit. Setelah diperiksa.
Pemeriksaan
Panjang gelombang

Hg 546 nm

Ceelah optik

1 cm

. Pada serum atau plasma

Suhu

2025 atau 37

Pengukuran

terhadap blanko reagen hanya satu blanko

reagen digunakan untuk satu kali seri pemeriksaan.

Skema pemipetan
Pipet kedalam tabung
Makro
serum
STD
RGT

Reagen blanko
2000 ml

Standar
20 ml
2000 ml

Sampel
20 ml
2000 ml

Mikro
serum
STD
RGT

Reagen blanko
1000 ml

Standar
10 ml
1000 ml

Sampel
10 ml
1000 ml

Campur, inkubasi selama 10 menit, pada suhu 20-25

atau 5 menit pada

suhu 37 . Absorben standar dan sampel terhadap blanko reagen dalam waktu
60 menit.
Perhitungan

C=

|Sp|
|St| X C. St (100 mg/dl)

C=

|Sp|
|St| X C. St (5,55 mmol/L)

Linearitas

Tes linear glukosa pada konsentrasi glukosa 400mg / dl atau 22,2 mmol / I.
encerkan sampel 1 + 2 dengan aquadest. konsentrasi sample diatas batas limit
kalikan dengan 3.

Nilai Normal
Serum, plasma

5.

: 75-115 mg/dl atau 4.2 6.4

PEMERIKSAAN UREA

Metode
Enzymatic kolorimetri dengan modifikasi berthelot
Prinsip
Urea dihidrolisis dengan adanya air dan urease untuk menghasilkan amonia dan
karbon dioksida. Dengan modifikasi Berthelot ion amonium direaksikan dengan
hipoklorit dan salisilat untuk yang berwarna hijau. Peningkatan absorbansi pada
panjang gelombang 546 nm atau 578 nm sebanding dengan kadar urea dalam
sampel.
Komposisi Reagen
RGT1 Reagen 1
Fosfat buffer (pH 7.0)
Natrium salisilat

120 mmol/l
60 mmol/l

Natrium nitroprusside

5 mmol/l

EDTA

1 mmol/l

RGT2 Reagen 2

Fosfat buffer (pH < 13)

120 mmol/l

Hipoklorit

0.6 g/l cl

Iritasi mata dan kulit. jauhkan dari jangkauan anak-anak. setelah kontak
dengan mata, bilas dengan air dan berkonsultasi dengan dokter.
ENZ

Enzym
Urease

> 500 KU/l

STD Standar
Urea

80 mg/dl atau 13.3 mmol/l

Setara dengan BUN

37.28 mg/dl atau 6.2 mmol/dl

Natrium azida

0.095 %

Persiapan Reagen
RGT2 dan STD siap pakai.
Enzim reagen 1a campuran dari isi botol ENZ dengan botol RGT1:
Contoh:

1 ml ENZ

100 ml RGT1

atau
1000 l ENZ

100.000 l RGT1

100 l ENZ

10.000 l RGT1

10 l ENZ

1000 l RGT1

Stabilitas Reagen
Reagen stabil sampai pada masa expayer dengan penyimpan pada suhu 2...8oC.
RGT1, RGT2, dan ENZ stabil setelah dibuka selama 6 minggu pada 2...8oC atau 2
minggu di 15...25oC.
STD stabil sampai pada masa expayer.
Enzim reagen 1a stabil setelah dibuka selama 4 minggu pada suhu 2...8oC atau 2
minggu di 15...25oC.
Hindari kontaminasi setelah dibuka.
Spesimen

Serum, plasma, plasma heparin, dan urin. Urin encer 1 + 100 dengan aqua bidest..
Jangan menggunakan serum lipemic.
Serum atau plasma dapat disimpan sampai 3 hari pada suhu 4oC, untuk waktu
yang lama mereka harus terus dibekukan pada suhu -20oC.

Pemeriksaan
Panjang gelombang

Hg 578 nm,

Celah optic

1 cm

Suhu

20-25oC atau 37 oC

Pengukuran

Terhadap blanko reagen. Hanya menggunakan satu

blanko reagen untuk satu seri pemeriksaan.


Skema Pemipetan
Pipet ke dalam tabung reaksi
Blanko

Standar

Sampel

Serum

---

---

10 l

Standar

---

10 l

---

Enzim reagen 1a

1000 l

1000 l

1000 l

Campur dan inkubasi selama 5 menit. pada 20-250C atau selama 3 menit pada
370C
RGT2

1000 l

1000 l

1000 l

Campur, inkubasi selama 10 menit. pada 20-250C atau 5 menit. di 370C.


Mengukur absorbansi sampel dan STD terhadap reagen blanko dalam waktu
60 menit.

Perhitungan Urea Dan Konsentrasi BUN


C=

Asampel
faktor
ASTD

Faktor Konversi Untuk BUN, Urea


C (BUN) = 0.466 C (urea)
C (Urea) = 2.14 C (BUN)

Karakteristik Kinerja
Linearitas
serum/plasma :

sampai 400 mg/dl atau 6.66 mmol/l (urea)

Urin

sampai 400 g/l atau 6600 mmol/l (urea)

Sampel dengan pengenceran tertinggi harus diencerkan 1 + 1 dengan aqua bidest.


Hasil kalikan dengan 2.
Nilai Normal
Serum (urea) :

10 50 mg/dl atau

1.7 8.3 mmol/l

Urin (urea)

20 35 g/l

333 583 mmol/24 h

7.

atau

PEMERIKSAAN ASAM URAT

Metode
PAP
Tes enzim koorimetri asam urat dengan factor pembersih lemak
Prinsip Metode
Penentuan asam urat oleh reaksi dari uricase bereaksi dengan H2O2 bereaksi di
bawah katalis peroksidase dengan 3,5 dikloro 2 hidroxy benzene-sulfat
(DCHBS) dan 4 aminopherazone (PAP) untuk memberikan warnah merah-pink
dengan pewarna quinoneimine sebagai indikator.
Prinsip Reaksi

Asam urat + O2 + 2 H2O uricase allantion + CO2 + H2O2

2 H2O2 + DCHBS + PAP peroksidase quinoneimine + HCL + 4H2O

Komposisi Reagen
RGT : 4 x 30 ml atau 4 x100 reagen enzim
Phosphate buffer

50 mmol/liter

4 aminophenazone

0,3 mmol/liter

DCHBS

4 mmol/liter

Uricase

200 u/liter

Peroxidase

1000 u/liter

STD : 3 ml standar

Asam urat

8 mg/liter atau 476 mmol/liter

Sodium azide

0,095 %

Persiapan Reagen
RGT dan STD siap untuk digunakan.
Stabilitas Reagen

Reagen stabil bahkan setelah dibuka sampai tanggal kadaluarsa dinyatakan bila
disimpan pada suhu 2-80C. Kontaminasi reagen harus benar-benar dihindari.
Disimpan pada suhu 15-25oC. RGT stabil selama 2 minggu.
Spesimen
Serum, plasma EDTA, plasma heparin, urine
Encerkan urine 1:10 dengan aqua bidest.
Catatan : specimen lofomic biasanya menghasilkan kekeruhan campuran
reagen yang mengarah kehasil palsu melalui faktor pembersih lemak tersebut
akan menghasilkan kekeruhan yang disebabkan oleh kekeruhan lipemik.

Pemeriksaan
Panjang gelombang

: Hg 546 nm

Celah optic

: 1 cm

Suhu

: 20-25oC atau 37oC

Pengukuran

: terhadap reagen kosong per seri yang diperlukan.

Skema Pemipetan

Blanko
Standar
Sampel
Serum
20ul
Standar
20ul
RGT
1000ul
1000ul
1000ul
Campurkan, inkubasi 10 menit dengan suhu 20-25oC, dan 5 menit dengan suhu
37oC.
Baca absorben sampel dan standar terhadap blanko reagen dengan panjang
gelomabng 546 nm.
Perhitungan
Kalkulasi dari konsentrasi asam urat, serum, plasma.

C : Abs Sampel x C.Standar (8 mg/dl)


Abs standar
C: Abs sampel x C. standar (476 Mmol/liter)

Urin
C : Abs sampel x C. Standar (88 mg/dl)
Abs standar
C : Abs sampel x C.standar (5235 mg/Mmol/liter
Abs standar
Karakteristik Kinerja
Linearitas: tes linearty ini sampai dengan konsentrasi asam urat 20mg/liter atau
1190 mmol/liter. Encerkan sampel sampai dengan konsentrasi yang lebih tinggi
1:1 dengan garam fisiologis (NaCl 0,9%).
Nilai Rujukan
Laki-laki

3,4-7,0 mg/liter atau 200-400 Mmol/liter

Perempuan

2,4-5,7 mg/liter atau 140-340 Mmol/liter

Urin

250-750 mg/liter atau 1,5-4,5 Mmol/24 jam

8.

Pemeriksaan Bilirubin

Metode
Metode jendrassik
Untuk direct (D) dan total bilirubin
Uji fotometrik untuk langsung dan total bilirubin

Prinsip Metode
Billirubin

bereaksi

dengan

diazotigasi

asam

sulphanilic

untuk

menghasilkan warna merah azo. Absorbansi pewarna ini 546 nm berbanding


lurus dengan konsentrasi billirubin dalam sampel. Reaksi Glucuronies billirubin
larut dalam air bereaksi secara langsung dengan DSA sedangkan albumin
billirubin tidak langsung terkonjugasi hanya akan bereaksi dengan DSA dengan
akselerator :
Total bilirubin = direct + indirect billirubin
Prinsip reaksi
Asam sulphanilic + natrium nitric

Billirubin + DSA

DSA

direct Azobillirubin

Billirubin + DSA + Accelerator

total azobillirubin

Komposisi Reagen
TB

1 X 100 ML (Total Billirubin reagent)


TN
DB

Asam sulphanilic
Asam klorida
Kafcin (Akselerator)
Natrium benzoate

= 14 mmol /L
= 300 mmol/L
= 200 mmol/L
= 420 mmol/L

1 x 9 ml (Total- Nitrit reagent ) = 390 mmol/L ,untuk menentukan total


billirubin natrium nitric (

Xn

, R 22)

1 x 100 ml ( Direct billirubin reagen )

DN

Asam sulphanilic
Asam klorida

= 14 mmol/L
= 300 mmol/L

1 x 9 ml ( Direct-Nitrik reagen )
Untuk penentuan direct bilirubin natrium nitrit.

Persiapan Reagen dan Stabilitas


Kedua reagen dan solusi nitric siap untuk digunakan stabil, bahkan setelah
pembukaan, naik tanggal kadaluwarsa diberikan bila disimpan pada suhu 1525C. Hindari kontaminasi
Spesimen
Serum atau plasma heparin Menghindari hemolitik dan sampel lipemic harus
dilindungi dari cahaya langsung.
Stabilitas : Billirubin stabil selama 3 hari bila disimpan cahaya di proteksi pada
suhu 2-8C
Pemeriksaan
Panjang gelombang

: 546 nm

Celah optic

: 1 cm

Suhu

: 20-25 C

Pengukuran

: terhadap blanko sampel

Prosedur
Total bilirubin
Pipet ke dalam kuvet
TBR

Blanko sampel
1000 l

TNR
---Campur secara menyeruruh , inkubasi selama 5 menit

Sampel
1000 l
1 tetes

sampel
100 l
100 l
Campuran , inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. Mengukur absorbansi
sampel terhadap metode blanko sampel ( A 546 )

1 Tetes = 40 l

Direct bilirubin
Pipet ke tabung
DBR

Sampel kosong
1000 L

Sampel
1000 L

DNR
---1 Tetes
Campuran secara menyeluruh, inkubasi sampel dalam waktu 2 menit
Sampel
100 l
100 l
Campuran , inkubasi pada suhu kamar secara tepat 5 menit . mengukur absorbansi sampel
terhadap blanko sampel .

Perhitungan
Menghitung konsentrasi total dan langsung bilirubin dengan menggunakan factor
13.0 konsentrasi bilirubin (mg/dl)=

A546 X 13.0 (mg/dl) x 17.1 = (mol/L).

Konsentrasi Bilirubin total = absorbansi sampel X F (13,O mg/dl )


Bilirubin direct =absorbansi sampel X F (13.0 mg/dl )
Bilirubin indirect =

absorbansi sampel
absorbansi sampel

X F (13.0 mg/dl)

Linearitas
Linearitas : pengujian kadar logam adalah linear hingga 25 mg/dl. Konsentrasi
bilirubin melebihi 25 mg/dl. Encerkan sampel 1:4 dengan fisiologis (0.9 %) dan
ulangi pengujian tersebut. Kalikan hasilnya dengan 5.

Nilai normal

9.

Total bilirubin
bayi baru lahir

(mg/dl)
5

( mol/I)
85.5

berusia 5 hari

12

205.0

berusia 1 bulan

1.5

25.6

orang dewasa
Bilirubin direct
Dewasa

1.1

18.8

0.25

4.3

PEMERIKSAAN KOLESTEROL

Metode
CHOD-PAP (Kolesterol Oxidase posfat Amino Penazon)
Tes kolometri enzimatik untuk kolesterol dengan faktor kliring lipid
Prinsip Metode
Kolesterol ditentukan setelah hidrolisis enzimatik dan oksidase indikator
quinoneimine terbentuk dari hidrogen peroksida dan 4 eminophenazone dengan
adanya fenol dan peroksidase.
Prinsip Reaksi
CHE (Cholestreol esterase)
Cholesterolester +

H2

cholesterol + fatty Acid

CHO (Cholesterol Oxidase)


Cholesterol +

O2

cholestene-3-one +

H2

O2

POD (Posfat Oxidase)


2

H 2 O2

+ 4-amino

cholesterol + 4

H2

Phenazone + phenol
Komposisi Reagen
RGT

4x30 ml, 3x250 ml atau 4x100, ml reagen enzim


Buffer posfat
4-aminophenazone
Fenol
Peroksidase
Cholesterolesterase
Cholesteroloxidase
Natrium oxida

STD

100 mmol/l
0,3 mmol/l
5 mmol/l
>5 KU/l
>150 U/l
>100 U/l
0,05 %

3 ml standar
Cholesterol

200 mg/dl atau 5,17 mmol/l

Persiapan Reagen
RGT dan STD siap untuk dipakai.
Stabilitas Reagen
Reagen yang stabil setelah dibuka di buka dan sampai dengan masa expayer
o
bahkan setelah pembukaan, disimpan pada 2- 8

C. Reagen yang telah dibuka

o
akan stabil selama 2 minggu disuhu 15- 25 . Hindari kontaminasi.

Spesimen
Serum, plasma heparinist, atau EDTA plasma
Catatan

: serum lipemic jika menghasilkan kekeruhan dari campuran

sampel/larutan reagen yang mengarah ke hasil palsu meningkat. Tes koleterol

liquicolor menghindari peningkatan hasil ketinggian palsu melalui built-in faktor


kliring lipid (LCF) . LCF membersihkan secara total kekruhan yang disebabkan
oleh spesimen lipemic dapat dihindari.

Pemeriksaan
Panjang gelombang

: Hg 546 nm

Celah optik

: 1 cm

Suhu

: 20... 25

Pengukuran

: dengan blanko reagen, hanya satu blanko reagen untuk 1

/ 37

seri pemeriksaan.
Skema Pemipetan
Pipet kedalam tabung reaksi
Pipet ke kuvvets
Sampel
Standar
RGT

Blanko
.......
.....
1000 ml

Standar
......
10 ml
1000 ml

Sampel
10 ml
........
1000 ml

Perhitungan Konsentrasi Kolesterol


Dengan faktor
Panjang Gelombang
Hg 546
500 nm
Dengan standar

C (mg / dl)
840 x A
553 x A

C (mmol/l)
21,7 x A
14,3 x A

Hanya standar yang direkomendasikan oleh manusia (tertutup dalam kit / tersedia
secara terpisah, REF 10015) harus digunakan.
Absorbance sampel
C=

x C ( Standar 200 mg/dl)


Absorbance standar

Absorbance sampel
C=

x C ( Standar 5,17 mmol/l)


Absorbance standar

Karakteristik Kerja
Linearitas
Tes linear sampai dengan konsentrasi kolesteroldari 750 mg/dl (19,3 mmol/l),
sampai diencerkan dengan ketinggian konsentrasi kolesterol 1+2 dengan garam
physiogical (NaCl 0,9 %) dan ulangi determnasi. Hasilnya dikalikan 3.
Interpretasi Hasil (Nilai Normal)
Diduga Kelebihan
Peningkatan Kelebihan

10.

220 mg/dl
260 mg/dl

5,7 mmol/l
6,7 mmol/l

PEMERIKSAAN TRIGLISERIDA

Metode
Trigliserida dutentukan setelah hidrolisis enzimatik dengan lipases. Idikatornya
adalah quinoneimine yang terbentuk dari hydrogen peroksida, 4-amino-antipirin
dan 4-klorophenol dibawah pengaruh katalitas dari peroksidasi.
Prinsip Kerja
Trigliserida

lipases

Gliserol + Jaringan asam lemak

Gliserol + ATP

GK

Gliserol-3-pospat-O2

Gliserol-3-pospat + ADP
GPO

H2O2 + 4-aminoantipirin

dihidroksiaton pospat + H2O2


POD

quinoneimine + HCl + H2O2 + 4-Klorophenol

Komposisi Reagen
RGT

STD

15 ml; 100 ml atau 250 ml monoreagen


PIPES buffer (pH 7,5)

50 mmol/l

4-klorophenol

5 mmol/l

4-aminopenazone

0,25 mmol/l

Ion magnesium

4,5 mmol/l

ATP

2 mmol/l

Lipases

1300 U/l

Peroksidase

500 U/l

Gliserol kinase

400 U/l

Gliserol-3-pospat oksidase

1500 U/l

Sodium azide

0,05%

3 ml standar
Trigliserida

200 mg/dl atau 2,28 mmol/l

Persiapan Reagen dan Stabilitas


RGT dan STD siap untuk digunakan. Reagen tetap stabil setelah dibuka, sampai
penentuan tanggal kedaluarsa bila disimpan pada suhu 2-8C. Pada suhu 20-25C
RGT stabil dalam waktu 4 minggu
Pencemaran Yang Harus Dihindari:
Melindungi dari cahaya.
Spesimen
Serum, Plasma heparin atau Plasma EDTA.
Keseimbangan: 3 hari pada 2-8C
4 bulan pada suhu -20C

Catatan: Lipemic specimen biasanya menghasilkan kekeruhan dari campuran


reagen dan sampel yang memimpin untuk menghasilkan hasil yang
sangat baik. Pemeriksaan trigliserida diuji untuk memastikan bahwa
pemeriksaan ini menghasilkan hasil yag sangat baik sampai selesai, itu
dibentuk didalam Lipid Clearing Factor (LCF). LCF membersihkan total
kekeruhan yang disebabkan dari spesime lipemic.
Pemeriksaan
Panjang gelombang

: 500 nm, Tinggi 546 nm

Garis batas pegelihatan

: 1 cm

Suhu

: 20-25C atau 37C

Ukuran

: Berbeda dengan reagen blanko (RB). Hanya satu


reagen blanko per rankaian yang diperlukan.

Pemipetan
Silahkan gunakan HUMAN standar trigliserida yang tersedia dengan syarat
digunakan per kotak atau terpisah: REF 10163
Dipipet kedalam kuvet
RB
Sampel atau STD
Sampel/STD
--10 ul
RTG
1000 ul
1000 ul
Campur dan inkubasi 10menit pada suhu 20-25C atau 5 menit pada suhu 37C. Ukur
absorban dari sampel (Asampel) dan standar (Astandar) berbeda dengan reagen blanko dalam 60
menit.
Perhitungan Konsentrasi Trigliserida:
C = 200 x

A sampel
A standar

[mg/dl] atau C = 2,28 x

A sampel
A standar

[mmol/l]

Sifat
Linearitas
Uji linearitas adalah uji untuk menguji kenaikan konsentrasi trigliserida dari 1000
mg/dl atau 11,4 mmol/l. Sampel degan kosentrasi tinggi memiliki kelemahan 1+4
dengan garam fisiologi (0,9%) dan retested. Mengalihkan hasil yang mendekati 5.

Interpretasi Klinis Untuk Kemungkinan Atheoscleoritik


Dicurigai

: diatas 100 mg/dl atau 1,71 mmol/l

Meningkat

: diatas 200 mg/dl atau 2,28 mmol/l.

11.

PEMERIKSAAN LDL- CHOLESTEROL

Tujuan
Parameter pemeriksaan LDL Cholesterol adalah pemeriksaan enzymatic
homogeny langsung untuk pengukuran kuantitatif LDL- Cholesterol (LDL). LDL
dianggap sebagai komponen lemak yang menaikkan resiko terhadap jantung
coroner (CHD).
Metode
Test mengkombinasi 2 langkah :
1. Dalam langkah pertama chylomicrons, VLDL, dan HDL cholesterol
dihilangkan secara khusus melalui reaksi enzymatic
2. Dalam langkah kedua LDL- cholesterol yang tertinggal diukur melalui
reaksi enzymatic khusus, juga memakai surfactants specific untuk LDL.
Kombinasi ini membuat pemeriksaan ini lebih spesifik untuk LDL dari
pada metoda lain.
Prinsip Reaksi
Langkah Pertama
CHE + CHO
HDL, VLDL dan chylomicrons ---------------------- > cholestenone + H 2O2
Kondisi Khusus
2 H2O2

---------------------- > 2 H2O + O2

Langkah kedua

CHE + CHO

LDL

------------------------ > cholestenone + H2O2


Surfactant khusus
Peroxidase

2H2O2 + chromogen

------------------------ > zat warna qulnone

Isi, Komposisi reagen dalam test

R1

1 60 ml Enzyme (tutup merah)

50 mmol/l

Buffer Goods, pH 7,0 (250 C)

600 U/l

Cholesterol esteruse

500U/l

Cholesterol oxidase

400 Uml

Katalase
N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-5-

R2

Dimethoxyaniline (HDAOS)

0,56 mmol/l

Deterjen

0,3 % w/v

Pengawet

0,1 % w/v

1 20 ml substrat (tutup biru)


Peroxidase

4000 U/l

4- Aminoantipyrin (4- AA)

4 mmol/l

Buffer goods , pH 7,0 (250C)

50 mmol/l

Natrium azida

0,09%

Deterjen

> 1 % w/v

1 4 ml Calibrator
Cholesterol

Persiapan Reagen dan Stabilitas


R1 dan R2 siap pakai
Stabilitas : setelah reagen dibuka stabil sampai 1 bulan bila disimpan pada
2-80C. Hindari kontaminasi. Jangan dibekukan
Tutup jangan terbuka
Calibrator
Rekonstitusi isi vial dengan 4 ml tempat air suling segar bebas germ,tutup vial dan
putar hati-hati untuk melarutkan semua lyophilisat. Hindari buih. Biarkan selama
30 menit sebelum digunakan.
Stabilitas : 10 hari pada 2-8oC. Bila perlu, calibrator segar yang dibuat dapat
dibagi dalam beberapa bagian dan disimpan beku pada suhu 20 oC selama 30 hari.
Membekukan dan mencairkan hanya sekali, campur dengan hati-hati selalu
mencairkan.
Spesimen
Serum, plasma
Stabilitas : Dianjurkan untuk memeriksa langsung setelah sampling.
Serum dapat disimpan pada suhu 2-8oC sampai 5 hari
Dalam plasma, konsentrasi anti koagulan berikut tidak boleh lebih :
1. EDTA -2 Na < 200 mg/dl;
2. Na- sitrat < 1000 mg/dl;
3. Heparin < 50 mg/dl;
4. NaF < 2000 mg/dl

Tidak dipengaruhi trygliserida sampai 1000 mg/dl, hemoglobin sampai


500 mg/dl, bilirubin sampai 30 mg/dl, asam askorbat sampai 50 mg/dl dan
sampel yang agak keruh. Sampel dengan triglyserida yang melebihi 1000
mg/dl di encerkan dengan garam fisiologis (0,9 %) 1:1 dan kalikan hasil
dengan 2.
Pemeriksaan
Panjang Gelombang

: Hg 578 nm

Celah Optik

: 1 cm

Suhu

: 37oC

Pengukuran

: terhadap blanko reagen (RB) cukup 1 blanko per

seri
Prosedur (manual)
Hangatkan reagen dan cuvet sampai 37oC. Suhu harus dijaga konstan (0,5 oC)
selama test.
Pipet kedalam cuvet

Blanko

Standar

Sampel

Aquabidess

10 l

---

---

---

10 l

---

10 l

---

750 l

750 l

Sampel
Standar
R1

---

Campur dengan hati-hati, inkubasi selama 5 menit tepat pada


R2

250

250

suhu
37oC .
250

Campur dengan hati-hati, inkubasi pada suhu 37oC dan baca absorbans
A calibrator dan sampel terhadap blanko reagen (RB) setelah 5 menit.

Test dapat dijalankan dalam mode kinetic fixed time pada analiser.

Perhitungan
Hitung konsentrasi sampel sebagai berikut :
A
Csampel =

sampel

----------------- C (131,6 mg/dl)


A

standar

Faktor konversi : C (mg/dl) 0,02586 = C (mmol/l)

Linearitas
Sampai LDL-cholesterol 1000 mg/dl (prosedur manual).
Bila digunakan analiser, batas linearitas tergantung pada pemakaian. Jika
konsentrasi LDL melebihi range pengukuran, encerkan sampel 1+1 dengan saline
(0,9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan 2.
Nilai Rujukan
Laki-laki

Wanita

Resiko menurun untuk CHD

< 50 mg/dl

< 63 mg/dl

Resiko meningkat untuk CHD

> 172 mg/dl

>

laboratorium 7 mg/dl

16si,

tiap

Range ini diberikan hanya sebagai orientasi, tiap laboratorium harus membuat
range rujukan sendiri, Sex, diet, umur, lokasi geografi dan factor lain
mempengaruhi nilai yang diharapkan.
Kontrol kualitas
Semua serum manusia berdasarkan serum control dengan kadar LDL-cholesterol
yang diukur dengan metoda ini dapat dipakai.
12.

PEMERIKSAAN HDL Kolesterol

PRINSIP METODE
Kilomikron, VLDL (Veri low density lipoproteins) dan LDL (low density lipoproteins) di
endapkan dengan penambahan asam fostotungstat dan magnesium klorida. Setelah
disentrifuge cairan supernatan mengandung HDL (High density lipoprotein).bagian,
dengan pengujian dengan kolesterol HDL dan tes kit.

PRINSIP REAGEN
Isi, komposisi reagen
PREC
STD

4 x 80ml dasar
Asam fosfotungstat
Magnesium klorida
1 x 3 ml standar
Kolesterol

0,55 mmol/l
25,00 mmol/l
50 mg/dl or 1,29 mmol/l

Preparasi reagen
-

PREC
Dasar untuk uji makro
Gunakan PREC murni
Dasar untuk uji semi mikro
Encerkan 1 botol PREC dengan 20ml aquabides atau encerkan 4 bagian dalam
botol dengan satu bagian aquadest (4 + 1).

STD

STD siap untuk digunakan dan dapat dikerjakan secara langsung dalam tes / uji. Yang
dibutuhkan adalah tidak adanya pengendapan. Factor dari kalkulasi terdiri dari
pengenceran rasio.

Stabilitas Reagen
PREC stabil / tidak berubah, meskipun setelah dibuka, hingga sampai pada tanggal
kadaluwarsa bila disimpan pada suhu 2 25oC. di hindarkan dari kontaminasi
SPESIMEN
Serum, plasma heparin atau plasma EDTA
PENGUKURAN
Lihat kit kolesterol
1. Pengendapan
Pipet ke dalam tabung sentrifuge
Serum
Prec a
Prec b
Campur, inkubasi selama 10 menit pada suhu kamar.

makro
Semi-mikro
500l
200l
1000l
..
..
500l
Di sentrifuge sekurang-kurangnya 2 menit

jika 10000 gram, dan kemungkinan lain 10 menit jika 4000 gram.
Setelah di sentrifuge, pisahkan supernatant dari endapan dan setelah 1 jam dan
gunakan konsentrasi kolesterol untuk pemeriksaan HDL kolesterol dengan reagen
kolesterol.
2. Ukuran Kolesterol
Pipet dalam tabung
Reagen Blanko
Standar
Aquabidest
100l
..
Standar
..
100l
HDL supernatant
..
..
Reagen
1000l
1000l
Campurkan, inkubasi selama 5 menit pada suhu 37 oC atau 10 menit pada

Sampel
..
...
100l
1000l
suhu 20 25oC. ukur

absorbance pada sampel dan standar terhadap reagen blanko sekitar 60 menit (
Kalkulasi pada HDL kolesterol dengan faktor

A)

Panjang Gelombang
Hg 546 nm
500 nm

Makro
C = [mg/dl]
= Ax
274
180

C= [mmol/l]
= Ax
7,09
4,65

Semi mikro
C= [mg/dl]
= Ax
320
210

C= [mmol/l]
= Ax
8,2
5,43

Kalkulasi HDL kolesterol dengan menggunakan STD


1. Metode makro
C = Abs sampel x 150 mg/dl
Abs standar
2. Metode semi mikro
C = Abs sampel x 175 mg/dl
Abs standar

C = Abs sampel x 3,87 mmol/l


Abs standar
C = Abs sampel x 4,52 mmol/l
Abs standar

Kalkulasi pada LDL kolesterol


Massa LDL kolesterol ( LDL C) adalah akumulasi dari jumlah massa kolesterol
(TC). Massa HDL kolesterol (HDL-C) dan massa trigliserida (TG) menurut
Friedwald et al.
LDL C = TC HDL C TG [mg/dl]
5
LDL C = TC HDL C TG [mmol/l]
5
INTERPRETASI KLINIS
1.
HDL Kolesterol
Pria
[ mg/dl]
> 55
35 55
< 35

Perkiraan Terbaik
Tingkat standar resiko
Resiko indikasi

2.
LDL-Kolesterol
Prasangka
:
150
tinggi

13.

[mmol/l]
> 1,42
0,9 1,42
< 0,9
mg/dl

190 mg/dl or 4,9 mmol/l

PEMERIKSAAN BESI

Metode
CAB (Chromazurol B) dengan factor pembersih lipid

or

wanita
[mg/dl]
> 65
45 65
< 45
3,9

[mmol/l]
> 1,68
1,16 1,68
< 1,16
mmol/l

Prinsip
Besi (III) bereaksi dengan Chromazurol B (CAB) dan cetyltrimethylammonium
bromide (CTMA) untuk membentuk warna kompleks dengan absorbance
maksimum 623 nm. Intensitas warna yang diproduksi sebanding dengan
konsentrasi zat besi dalam sampel. Tes ini juga dapat digunakan dalam kombinasi
dengan TIBC kit untuk menentukan TIBC.
Komposisi
RG
T

STD

2x30 ml atau 2x100 ml reagen CAB


CAB

0,18 mmol/l

CTMA

2,2 mmol/l

Guanidinium chloride

2,6 mmol/l

Buffer Sodium Asetat(pH 4,7)

45 mmol/l

5 ml standar
Besi

100 g/dl

Atau

17,9 mol/l

Persiapan Reagen
RG
T

Dan

ST
D

siap untuk digunakan

Stabilitas Reagen
Stabil bahkan setelah dibuka sampai tanggal kadaluarsa bila disimpan
RG
T suhu 225oC. kontaminasi reagen benar-benar harus dihindari.
pada
Spesimen

Serum, plasma heparin


Jangan menggunakan plasma EDTA, plasma sitrat atau serum hemilotik.
Catatan :

Specimen lipemic biasanya menghasilkan kekeruhan campuran

reagen sampel yang mengarah kehasil palsu tinggi.


Tes liquicolor besi menghindarkan dari hasil palsu tinggi dengan lipid factor
kliring (LCF). LCF membersihkan kekeruhan yang disebapkan oleh specimen
liemic selama inkubasi.
Pemeriksaan
Panjang gelombang

: Hg 623 nm

Suhu

: 2025 oC

Pengukuran

: terhadap blanko reagen (Rb). Cukup menggunakan satu

blanko utuk satu seri.

Skema Pemipetan
Blanko

Standar

Sampel

Serum

50 l

Standar

50 l

Aquabidest

50 l

RGT

1000 l

1000 l

1000 l

Campur dengan hati-hati, inkubasi selama 15 menit pada suhu 2025 oC. Ukur
absorbance sampel (Asampel) dan standar (ASTD) terhadap reagen blanko selama
60 menit.

Perhitungan Kosentrasi Besi Dengan Factor


Panjang gelombang

Besi [g/dl]

Besi [mol/l]

Hg 623nm

830 x Asampel

149 x Asampel

Perhitungan Kosentrasi Besi Dengan Standar


Jika panjang gelombang yang berbeda (620-640 nm) akan digunakan untuk
pengukuran standar yang disediakan dengan kit harus digunakan untuk
perhitungan.

C=

A sampel
A STD

x 100 [g/dl]

C=

A sampel
A STD

x 17,9 [mol/l]

Linearitas
Tes linearitas sampai kosentrasi 500 g/dl atau 89,5 mol/l
Nilai Rujukan
Laki-laki

: 59-148 g/dl atau 10,6-28,3 mol/l

Perempuan

: 37-145 g/dl atau 6,6-26 mol/l

14.

PEMERIKSAAN TIBC ( Total Iron-Binding Capacity )