Review Jurnal

The Cell Physiology of Biphasic Insulin Secretion

(Fisiologi Sel dari Sekresi Bhipasic Insulin)

Disusun dalam rangka memenuhi tugas

Mata Kuliah Fisiologi Hewan

Dosen :
Prof. Dr. Herbert Sipahutar, M.Si, M.Sc

Oleh:

Novelina A. Zega
Remli Nelmian S
PPs Dik Bio Kelas A

PROGRAM STUDI MAGISTER PENDIDIKAN BIOLOGI

PROGRAM PASCASARJANA
UNIVERSITAS NEGERI MEDAN
2014

Fisiologi Sel Sekresi Bhipasic Insulin

Patrik Rorsman, Lena Eliasson, Erik Renstrm, Jesper Gromada, Sebastian
Barg, and Sven Gpel
Sekresi insulin yang dirangsang oleh glukosa terdiri dari tahap sekresi insulin
glukosa dirangsang pertama kemudian diikuti tahap kedua secara berkelanjutan.
Diabetes (tipe II) dikaitkan dengan kelainan pada pola rilis ini. Di sini dapat
dibuktikan bahwa sekresi insulin bifase yang mencerminkan eksositosis dari dua
himpunan bagian fungsional butiran sekresi dan implikasi untuk diabetes.
Insulin berperan sebagai pusat dalam mengendalikan metabolisme tubuh.
Insulin memproses percepatan penyerapan glukosa ke dalam sejumlah jaringan
sekaligus menekan produksi glukosa dan lipolisis. Kurangnya insulin menyebabkan
gangguan metabolisme yang serius yang menjadi ciri diabetes mellitus. Insulin
diproduksi dan disekresikan oleh sel B dari pulau Langerhans, endokrin bagian dari
pankreas, sehingga dinamai berdasarkan nama penemunya, Paul Langerhans. Dalam
tesisnya, yang dia diterbitkan pada usia yang ke-22 pada tahun 1869, Langerhans
menggambarkan sel dalam pankreas sebagai "struktur kecil yang tidak teratur dengan
isi homogen dengan diameter berkisar antara 10 dan 12 mikrometer. "Dia juga
mengatakan bahwa sel-sel mengasosiasikan untuk membentuk kelompok dengan
diameter 0,1-0,24 mm dan mereka didistribusikan di seluruh parenkim kelenjar.
Adapun fungsi dari pulau, Langerhans menulis "... Saya terus terang mengakui bahwa
saya tidak memiliki penjelasan [untuk fungsi struktur ini]." Itu untuk mengambil 20
tahun sampai Oscar Minkowski menemukan hubungan mereka dengan pankreas dan
50 tahun sebelum penemuan insulin dibuat.
Sekresi insulin dikendalikan oleh aktivitas listrik sel
Seperti dalam neuron dan banyak sel endokrin lainnya, sinyal-sinyal listrik
berperan sentral dalam regulasi sekresi. Pada tahun 1968, Dean dan Matthews

menunjukkan bahwa -sel secara elektrik dapat dirangsang (2). Ketika konsentrasi
glukosa ekstraseluler diangkat dari tingkat basal dari 5 mM (di mana sekresi insulin
sedikit yang diamati) dengan konsentrasi pelepasan insulin dari 10 mM, sel B
mengalami depolarisasi lambat dari potensi istirahat (-70 mV) hingga sampai ambang
mana aktivitas listrik regeneratif yang ditimbulkan. Aktivitas listrik ini (Gambar. 1B)
terdiri dari osilasi dalam potensial membran antara dataran tinggi yang didepolarisasi,
yang mana Ca2 + potensial aksi -dependent berasal, yang dipisahkan oleh elektrik
diam (repolarized) interval. Induksi aktivitas listrik merupakan bagian utama dari
kaskade kejadian yang mengarah ke inisiasi sekresi insulin. Baru-baru ini, sangat
mungkin dijelaskan bahwa periode aktivitas listrik bertepatan dengan berdenyut
pelepasan insulin (3). Eksperimen patch-clamp selama 15 tahun terakhir telah
mengungkapkan bahwa dua kelas saluran ion sangat penting dalam generasi aktivitas
listrik sel B: K + saluran ATP-diatur (saluran KATP) dan tegangan-gated L-jenis
(dihydropyridine- sensitif) saluran Ca2 + ch (2). Sebuah model untuk sekresi kopling
perangsang -sel diringkas dalam Gambar. 1A. Dengan tidak adanya glukosa, yang
sitoplasma ATP / ADP rasio rendah dan saluran KATP terbuka. Aliran konstan
bermuatan positif K + melalui saluran terbuka KATP untuk potensial membran
negatif dari sel b tanpa adanya glukosa. Ketika konsentrasi glukosa ekstraseluler
terangkat, penyerapan glukosa cepat (melalui transporter GLUT2) dan degradasi
metabolik berikutnya dari hasil gula dalam sitoplasma ATP / ADP rasio tinggi. Ini
membawa penutupan saluran KATP, membran depolarisasi, pembukaan teganganpintu masuk saluran Ca2 +, peningkatan Ca2 + sitoplasma konsentrasi, dan, akhirnya,
eksositosis dari butiran sekresi yang mengandung insulin. Dari sudut pandang
patofisiologi, hal itu sangat menarik bahwa sulphonylureas hipoglikemik, yang telah
digunakan secara klinis dalam pengobatan diabetes selama lebih dari 40 tahun,
menyebabkan penutupan saluran KATP dengan cara yang independen dari metabolik
sel (2). Efeknya dimediasi oleh pengikat reseptor sulfonilurea (SUR), yang bersamasama dengan saluran K + protein, membentuk saluran KATP fungsional (8). Sehingga

sulfonilurea menghasilkan membran depolarisasi, pembukaan saluran Ca2 + , dan

inisiasi sekresi insulin seperti yang diuraikan di atas.
Diseksi mekanisme seluler dan molekuler sekresi insulin
Tujuan dari aktivitas listrik -sel untuk menghasilkan sinyal yang memulai
sekresi insulin, yaitu, peningkatan konsentrasi Ca2 + intraseluler ([Ca2 +] i).
Perkembangan terbaru teknik yang memungkinkan deteksi sekresi dalam sel tunggal
[pengukuran kapasitansi dan serat karbon amperometry (1, 3)], dikombinasikan
dengan alat-alat biologi molekuler, telah menghasilkan peningkatan dramatis dalam
pengetahuan tentang proses yang terlibat. Banyak protein yang terlibat dalam regulasi
rilis neurotransmitter baru-baru ini telah diidentifikasi juga di -sel pankreas. Ini
termasuk protein perangkap synaptobrevin / VAMP, SNAP-25, syntaxin, -SNAP,
dan diduga Ca2 + -merasakan protein sinaptotagnin I dan II (untuk meninjau, lihat
Ref. 15). Dalam ulasan ini, kami fokus pada karakterisasi sifat fungsional eksositosis
dalam-sel . Kami menjelaskan percobaan yang dilakukan oleh kombinasi
konfigurasi sel seluruh teknik menempeli-mengelem dengan pengukuran kapasitansi
sebagai indikator-sel sekresi insulin (1, 2). Pendekatan eksperimental ini
memungkinkan kita untuk mempelajari sifat-sifat sekresi di -sel tegangan-dijepit
tunggal. Eksositosis dapat ditentukan secara independen dari perubahan spontan
potensial membran, yang akan (melalui modulasi tergantung tegangan Ca2 +
masuknya) mempengaruhi tingkat Ca2 + sekresi -diinduksi. Keuntungan tambahan
dari pengukuran kapasitansi atas pendekatan yang lebih tradisional untuk mendeteksi
sekresi insulin termasuk 1) bahwa pengukuran dapat dilakukan pada sel-sel individual
dan 2) yang tinggi (1-10 ms) resolusi temporal.
Nutrisi menginduksi stimulasi bifase (dua fase) sekresi insulin
Sekresi insulin yang dirangsang oleh glukosa di vivo biasanya mengikuti
kursus waktu biphasic (Gbr. 1 C) (3-5, 10). Tak lama setelah ketinggian konsentrasi

glukosa, stimulasi transien sekresi insulin diamati, disebut sebagai "sekresi pertama
fase," yang di kemudian hari diikuti oleh stimulasi sekunder secara bertahap
berkembang, "sekresi fase kedua." Hanya secretagogues bahan bakar yang mampu
memunculkan tahap kedua, dan, ketika sekresi insulin ditimbulkan oleh rangsangan
non metabolisme, hanya tahap pertama diamati. Hal ini menunjukkan bahwa sekresi
insulin tahap kedua adalah proses yang bergantung kepada energi. Menariknya,
diabetes tipe II [non-insulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM)] dikaitkan dengan
gangguan pola rilis dinyatakan sebagai kerugian selektif sekresi tahap pertama, yang
mendahului

manifestasi

lain

dari

penyakit

(4).

Percobaan

biokimia

dan

elektrofisiologi sel endokrin lainnya (11) telah menyarankan bahwa butiran sekresi
ada di kolam yang berbeda, yang bervariasi berkaitan dengan pembebasan (Gambar.
1D). Sebagian besar butiran (> 95%) milik kolam cadangan dan harus dimodifikasi
secara kimia, atau bahkan secara fisik translokasi, untuk tersedia di rilis. Subset
terakhir dari butiran disebut sebagai kolam mudah (RRP) dan khas mengandung <5%
dari total jumlah granul. Proses di mana butiran dilanjutkan dari kolam cadangan ke
RRP telah disebut mobilisasi dan melibatkan satu atau beberapa reaksi ATPdependent
(11).
Eksositosis dipicu oleh kereta depolarisasi Apitan-Tegangan
Sekresi insulin ditimbulkan oleh semburan Ca2+ potensial aksi -dependent.
Eksperimen, akan lebih mudah untuk memicu eksositosis oleh aplikasi dari apitantegangan depolarisasi. Gambar 2A menunjukkan percobaan di mana kereta dari 14
depolarisasi diaplikasikan ke sel- dalam kondisi kontrol (5 mM glukosa saja).
Depolarisasi pertama kereta membangkitkan kenaikan kapasitansi dari 50 fF.
Selanjutnya, tanggapan exocytotik menjadi semakin kecil. Akhirnya (dalam
percobaan ini setelah depolarisasi keenam), ketika total kenaikan kapasitansi sebesar
125 fF, tidak lebih meningkatkan kapasitansi sel diamati meskipun rangsangan terus.
Mengapa eksositosis berhenti selama kereta? Salah satu kemungkinan adalah bahwa

penghentian

exocytosis

mencerminkan

penipisan

RRP.

Pengukuran

ultra

menunjukkan bahwa sel- tunggal berisi 13.000 butir sekretori (7). Peningkatan
maksimum kapasitansi sel yang ditimbulkan oleh kereta depolarisasi (hingga 125 fF)
sesuai dengan debit 60 butiran menggunakan faktor konversi dari 2 fF / butir (1). Ini
hanya 0,3% dari total jumlah granul. Menariknya, agen yang mengaktifkan protein
kinase A (PKA), seperti forskolin dan glukagon-like peptide-1 (GLP-1),
meningkatkan kapasitas exocytotic dari -sel dengan meningkatkan jumlah butiran
yang tersedia untuk rilis (Gambar. 2B dan Ref. 12). Peningkatan maksimum
kapasitansi sel yang dapat ditimbulkan oleh kereta depolarisasi rata-rata 300 fF (150
butiran) di hadapan aktivator PKA, peningkatan relatif empat kali lipat untuk
mengontrol kondisi (Gambar. 2B). Secara umum, agen yang merangsang tindakan
eksositosis oleh kedua meningkatkan ukuran RRP dan mempercepat mobilisasi
butiran baru dari kolam cadangan (12). Secara kolektif, efek ini menimbulkan
peningkatan> 10 kali lipat tingkat di mana butiran disediakan untuk rilis.
Kenaikan langkah [Ca2+] i memunculkan rangsangan bifase dari eksositosis
Dapat dikatakan bahwa peningkatan [Ca2+] i dihasilkan dari Ca2+ masuk
melalui Ca2 tegangan-gated + saluran hanya mengakses sebagian kecil dari jumlah
total butiran yang segera releasable dan bahwa kereta dari depolarisasi meremehkan
ukuran sebenarnya dari RRP (Gambar. 3D). Sebuah cara untuk menghindari masalah
ini adalah dengan menggunakan photorelease dari sangkar Ca 2+. Dalam eksperimen
ini, Ca2+ disediakan sebagai kompleks dengan onitrophenyl EGTA (NP-EGTA),
bentuk photolabile dari Ca2+ chelator EGTA (7). Setelah pemuatan telah selesai, Ca 2+
yang dibebaskan oleh kilatan cahaya ultraviolet. Ini memotong obligasi fotosensitif di
dalam molekul NP-EGTA dan hasil dalam penurunan 10.000 kali lipat dalam afinitas
untuk Ca2+, yang akibatnya dilepaskan untuk mengerahkan tindakan biologisnya.
Dengan cara ini, peningkatan instan dan seragam [Ca2 +] i diperoleh dan penataan
ruang dalam hal hubungan antara saluran Ca2+, butiran sekresi, dan situs rilis tidak

mengganggu pengukuran (Gambar. 3E). Fitur lain yang penting dari pengukuran ini
adalah bahwa Ca2+ belum hadir pada tingkat exocytotic sebelum dirilis. Ini berarti
bahwa setiap butiran yang tinggal di RRP pada saat konfigurasi sel seluruh didirikan
tetap di sana sampai Ca2+ selanjutnya diangkat ke tingkat exocytotic. Gambar 3B
menunjukkan respon exocytotic diamati ketika [Ca2+] i diangkat menjadi 30 M oleh
photoliberation dari sangkar Ca2+. Jelaslah bahwa respon sekresi adalah biphasic dan
terdiri dari fase cepat diikuti oleh fase berkelanjutan lambat dari kenaikan kapasitansi.
Peningkatan diamati pada kapasitansi sel merupakan penjumlahan dari peristiwa
exocytotic. Untuk memvisualisasikan bagaimana eksositosis bervariasi dengan waktu,
kami didekati seorang eksponensial ganda untuk titik-titik data jejak kapasitansi.
Gambar 3C menunjukkan waktu turunan dari fungsi ini. Dengan manuver ini menjadi
sangat jelas bahwa bahwa respon exocytotic terdiri dari fase awal yang cepat diikuti
oleh berkelanjutan fase lambat. Selama pertama 400 ms, total 40-50 butiran menjalani
eksositosis secara ATP-independent (7). Di kemudian hari (> 500 ms setelah
flashdisk), hasil eksositosis dalam mode ATPdependent (7), tetapi pada tingkat yang
jauh lebih rendah (1-10 fF / s, atau 0,5-5 butiran, tergantung pada kondisi
eksperimental; lih Ref . 11). Tampaknya mungkin bahwa komponen awal yang cepat
disebabkan pelepasan butiran dari RRP, sedangkan komponen lambat mencerminkan
mobilisasi tergantung waktu dari butiran yang keluar dari kolam cadangan. Pola ini
jelas mengingatkan sifat biphasic sekresi insulin-dirangsang glukosa (Gbr. 1), dan
secara alami menggoda untuk berspekulasi bahwa itu merupakan setara-sel tunggal.
Hal ini menimbulkan pertanyaan apakah mungkin untuk membandingkan dua
komponen kenaikan kapasitansi dengan fase yang berbeda dari sekresi insulin secara
kuantitatif. Sekresi insulin fase pertama biasanya berlangsung 10 menit dan mencapai
tingkat puncak sekresi 80 pg min-1 -pulau 1 (Gbr. 1). Jika kita mendekati sekresi
insulin fase pertama segitiga, kita dapat menghitung bahwa sekresi insulin fase
pertama sesuai dengan total 400 pg / pulau. Sebuah granul sekretorik berisi hingga 2
fg insulin (7). Dengan demikian, selama seluruh tahap pertama sekresi insulin, jumlah

butiran dirilis dapat diperkirakan 200.000 per pulau, yang sesuai dengan ~ 100
butiran per sel- dalam pulau yang berisi 2.000 sel. Nilai ini tidak jauh berbeda
dengan ukuran RRP diperkirakan dari percobaan deplesi (60 butiran; Gambar 2A). Ini
berpendapat bahwa sebagian besar sekresi insulin fase pertama adalah disebabkan
oleh pelepasan butiran milik RRP. Namun, harus diakui bahwa dua proses
berlangsung selama periode waktu yang sangat berbeda: beberapa ratus milidetik
dibandingkan dengan beberapa menit. Beberapa penjelasan dapat diajukan ke akun
untuk perbedaan ini. Termasuk kurangnya sinkronisasi eksositosis dalam sel individu
dalam pulau dan intensitas stimulasi. Hal ini juga tampaknya mungkin bahwa
stimulus (beberapa puluh micromoles dari [Ca2 +] i) jauh lebih kuat dari apa yang
dialami oleh sel- in vivo. Dalam skenario ini, tahap kedua mencerminkan mobilisasi
waktu dan ATP-dependent butiran dari kolam cadangan ke RRP. Nilai untuk
mobilisasi kita amati dalam kondisi kontrol (> 0,5 butir s-1 -cell-1) sesuai dengan
120 pg / pulau min. Hal ini tidak terlalu berbeda dengan tingkat sekresi insulin tahap
kedua yang teramati dalam eksperimen [30 pg / pulau min di -sel tikus (Gambar. 1)
dan 140 pg / pulau min tikus -sel (10)]. Dukungan lebih lanjut dari gagasan bahwa
pelepasan subset yang berbeda dari granul sekretorik mendasari pola pelepasan
insulin biphasic berasal dari pengamatan bahwa pertama dan sekresi insulin yang
diinduksi glukosa tahap kedua dirangsang fourand enam kali lipat di hadapan
forskolin, masing-masing (5). Efek ini erat echo peningkatan ukuran RRP butiran
(Gambar. 2) dan percepatan mobilisasi granul diperoleh dalam menanggapi aktivasi
PKA sebagaimana ditentukan dari pengukuran kapasitansi sel (11).
Apa yang dimaksud dengan mobilisasi?
Kemungkinan bahwa fase yang berbeda dari sekresi insulin mencerminkan
pelepasan subset yang berbeda dari butiran sekresi menimbulkan pertanyaan apakah
mungkin untuk membedakan RRP dan kantong cadangan dengan cara ultrastructural.
Mikroskop elektron pada -sel dalam pulau utuh menunjukkan bahwa sebanyak 10%

dari butiran-butiran yang merapat ke membran plasma dan sampai 30% dari butiran
terletak dalam satu diameter granul dari membran plasma (L. Eliasson, pengamatan
tidak dipublikasikan ). Dalam sel dengan 13.000 butiran sekresi, nilai-nilai ini sesuai
dengan 1.300 dan 4.000 butiran, masing-masing. Jika butiran ini menjalani
eksositosis mereka akan menimbulkan kenaikan kapasitansi 2-8 pF. Nilai-nilai ini
dekat dengan kenaikan kapasitansi sel yang dapat ditimbulkan oleh infus Ca2 +
melalui elektroda perekaman (Gambar. 4C), sebuah kondisi yang berhubungan
dengan stimulasi yang kuat mobilisasi granul. Pertimbangan ini menunjukkan bahwa
hanya sebagian kecil dari butiran berlabuh fungsional milik RRP dan mobilisasi
butiran baru untuk rilis tidak memerlukan translokasi fisik yang luas dalam -sel.
Dari pertimbangan tersebut, kami menyimpulkan bahwa RRP tidak sesuai dengan
subset ultrastruktural didefinisikan butiran. Hal ini konsisten dengan pengukuran
optik baru-baru ini di chromaffin sel menggunakan mikroskop gelombang cepat
berlalu dr ingatan, menunjukkan bahwa kolam butiran berlabuh ternyata lebih dengan
perjalanan waktu yang jauh lebih lambat dibandingkan dengan pengisian fungsional
dari RRP (6 min vs 10 s) (13).
Signifikansi diabetes?
Hilangnya selektif sekresi insulin fase pertama adalah fitur awal diabetes tipe
II (Gambar. 4A dan Ref. 4). Kemungkinan hubungan antara sekresi insulin fase
pertama dan kedua berbeda, populasi didefinisikan secara fungsional butiran
sekretorik membuatnya tergoda untuk berspekulasi tentang mekanisme fisiologis sel
yang mendasari cacat sekretorik diabetes tipe II. Studi metabolisme glukosa pada
pasien diabetes dan hewan telah menunjukkan bahwa gangguan sekresi berkembang
secara paralel dengan munculnya siklus substrat metabolisme glukosa (Ref. 9 dan
Gambar. 4B). Dalam sel diabetes, sebagian besar glukosa-6-fosfat memasuki
glikolisis diubah kembali menjadi glukosa bukan melanjutkan melalui glikolisis.
Siklus ini sia-sia karena tidak ada perubahan dari reaktan berpartisipasi kecuali bahwa

satu molekul ADP telah dihasilkan dengan mengorbankan satu molekul ATP. Resultan
menurunkan dari sitoplasma ATP / ADP rasio mengganggu kemampuan glukosa
untuk menghambat saluran KATP (14). Namun, menurunkan ATP / ADP rasio juga
mengganggu pengisian ulang dari RRP, dan ini dapat berkontribusi untuk cacat
sekretorik diabetes tipe II. Dengan demikian masuknya 5 mM ADP dalam larutan
pipet di hadapan terus 3 mM ATP (untuk meniru konsekuensi dari gangguan
metabolik pada diabetes tipe II) mengarah untuk menyelesaikan penekanan mobilisasi
granul (Gambar. 4C dan Ref. 7). Seperti dibahas di atas, manuver yang memodulasi
ukuran dan / atau pengisian ulang dari pengaruh RRP kapasitas sekresi berikutnya.
Sebaliknya, kondisi yang mengganggu dengan pengisian ulang dari RRP (seperti
ADP) dapat diharapkan untuk mengurangi ukuran kolam renang ini dan dengan
demikian besarnya sekresi insulin fase pertama. Cacat metabolisme juga akan
menjelaskan mengapa tahap kedua berkurang. Karena gangguan metabolik,
peningkatan sitoplasma ATP / ADP rasio, yang mempengaruhi mobilisasi butiran,
lebih kecil daripada di-sel nondiabetes (Gambar. 4D). Akibatnya, mobilisasi butiran
dari kolam cadangan ke hasil RRP pada kecepatan yang lebih rendah daripada yang
akan telah terjadi. Oleh karena itu, peneliti harus mempertimbangkan apakah cacat
sekretorik terlihat pada hasil diabetes tipe II dari kedua penutupan lengkap dari
saluran KATP dan gangguan mobilisasi butiran ke dalam RRP. Pengamatan baru-baru
ini bahwa sulphonylureas hipoglikemik yang insulinotropic baik oleh penutupan
saluran KATP dan melalui mekanisme yang lebih distal (6) akan konsisten dengan
konsep ini. Percobaan berikutnya diperlukan untuk menentukan sejauh mana interaksi
sulfonilurea dengan mesin exocytotic dapat dimanfaatkan terapi.

Gambar 1.: stimulus-sekresi kopling -sel pankreas. SUR, reseptor sulfonilurea; KATP,
ATP-diatur K + channel. B: glukosa-dirangsang aktivitas listrik direkam dari sel- dalam
pulau utuh saat konsentrasi glukosa meningkat dari 5 sampai 10 mM seperti ditunjukkan oleh
tangga di atas membran potensial jejak. C: profil sekresi insulin yang diinduksi glukosa.
Glukosa diangkat menjadi 11 mM seperti yang ditunjukkan oleh bar horisontal. Catatan
kehadiran cepat tahap pertama (abadi ~ 10 menit) dan tahap kedua lebih lambat. Data
digambar ulang dari Ref. 10. D: kemungkinan interpretasi pola rilis. Sedangkan tahap
pertama sekresi insulin dapat dipertimbangkan untuk mencerminkan eksositosis dari kolam
mudah releasable butiran (RRP), tahap kedua akan merilis butiran yang mungkin terletak
jauh dari lokasi pelepasan (s) (reserve pool). Mobilisasi butiran dari cadangan kolam renang
dalam RRP melibatkan satu atau beberapa reaksi ATP-dependent (7, 11).

GAMBAR 2. berulang dan stimulasi frekuensi tinggi dapat digunakan untuk memperkirakan
ukuran RRP. Kereta dari depolarisasi yang diterapkan baik dalam kondisi kontrol (A, atas)
dan 6 menit setelah penambahan 2 M forskolin (untuk mengaktifkan PKA, B, atas). Catatan
respon exocytotic lebih besar di hadapan forskolin. Dalam sel tertentu, peningkatan
maksimum kapasitansi sel sebesar 125 fF dalam kondisi kontrol dan 500 fF di hadapan
forskolin. A, bottom: skema representasi situasi sebelum (kiri) dan sesudah (kanan)
menipisnya RRP. Ca2 + channel terus terbuka setelah penipisan RRP, tetapi tidak ada butiran
tetap akan dirilis, sehingga penghentian eksositosis. B, bottom: meningkat empat kali lipat
ukuran RRP di hadapan PKA. Bandingkan dengan A (kiri bawah). Untuk alasan teknis, tidak
mungkin untuk memantau kapasitansi sel selama depolarisasi. Peningkatan langkah dalam
kapasitansi sel mengikuti setiap depolarisasi mencerminkan penyisipan membran granular
yang terjadi selama pulsa tegangan. Dengan faktor konversi dari 2 fF / butir, perubahan
kapasitansi dapat dikonversi menjadi eksositosis granul. Peningkatan kapasitansi sel 50 fF
sesuai sesuai dengan eksositosis dari 25 butiran sekresi.

GAMBAR 3. Photorelease Ca2 + dari dikurung prekursor Ca2 + o-nitrophenyl EGTA (NPEGTA) memunculkan rangsangan biphasic dari eksositosis. A: peningkatan sitoplasma Ca2 +
( [Ca2 +] i) dengan pembebasan Ca2 + dari prekursor dikurung oleh sinar ultraviolet
dilakukan pada waktu yang ditunjukkan oleh garis putus-putus vertikal. B: Perubahan terkait
membran kapasitansi (Cm). Sebuah eksponensial ganda telah didekati untuk titik data dan
ditumpangkan pada kapasitansi jejak (kurva putus-putus abu-abu). C: waktu derivatif (DCM /
dt) fungsi didekati untuk kapasitansi jejak. Catatan respon biphasic. Data dari Ref. 7 tetapi
perubahan [Ca2 +] i telah reestimated menggunakan disosiasi konstan untuk indikator
pewarna BTC 70 M yang ditentukan dari pengukuran paralel fluoresensi dan Ca2 + gratis
konsentrasi menggunakan Ca2 + elektroda -sensitive. D-E: perbandingan perubahan Ca2 +
intraseluler konsentrasi ([Ca2 +] i) diperoleh saat eksositosis yang ditimbulkan oleh
tegangan-clamp depolarisasi (D) atau photorelease dari prekursor sangkar (E). Meskipun ada
peningkatan sesaat dan seragam [Ca2 +] i di E, hanya butiran dalam disekitar Ca2 + channel
yang terkena ditinggikan [Ca2 +] i (D). h, Sinar ultraviolet.

GAMBAR 4. Apakah jenis hasil diabetes II dari mobilisasi granul yang rusak dan isi ulang
lengkap dari RRP? A: sekresi insulin saat kadar glukosa meningkat hingga 18 mM pada
orang sehat dan pada pasien dengan diabetes tipe ringan nyata II. Data digambar ulang dari
Ref. 4. B: contoh siklus substrat metabolisme glukosa, yang menjadi aktif pada diabetes tipe
II. C: peningkatan kapasitansi sel (Cm) ditimbulkan oleh stimulasi berkepanjangan
exocytosis diperoleh elevasi permanen [Ca2 +] i untuk 2 M dengan mencuci-in melalui
rekaman elektroda. Perhatikan bahwa peningkatan kapasitansi sel di bawah kondisi kontrol
berjumlah 6 pF lebih pertama 3,5 menit setelah pembentukan konfigurasi sel utuh. Ini setara
dengan pelepasan> 3.000 butiran sekretori, yaitu 10 kali lebih besar dari RRP bawah kondisi
percobaan (500 fF; daerah yang diarsir), menunjukkan bahwa> 90% dari kenaikan
kapasitansi mencerminkan mobilisasi butiran dari kolam cadangan dalam RRP. Peningkatan
jauh lebih kecil kapasitansi sel diperoleh ketika 5 mM ADP termasuk dalam solusi pipet
mendialisis interior sel. D: penurunan ATP / ADP rasio mengganggu mobilisasi granul dan
pengisian ulang dari RRP. Ketika Ca2 + yang ditinggikan, hanya beberapa butiran yang hadir
dalam RRP, ditandai dengan garis putus-putus mereka, akuntansi untuk tidak adanya sekresi
insulin fase pertama, dan mobilisasi lambat, mungkin menjelaskan penurunan tahap kedua.