Dr. F. Y. Widodo, M.

Kes
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS WIJAYA KUSUMA
SURABAYA

PENDAHULUAN
PROTEIN: - Biokatalisator
- Mempercepat tercapainya
keseimbangan tanpa merubah Keq
- Jumlah katalisator tdk
berhub. dg reaktan/produk
A P [A - - - transisi - - - P]

Peningkatan Reaksi Kimia:

Peningkatan suhu energi kinetik
meningkat
Katalisator:
- energi aktivasi turun
- tdk merubah G

Kekhususan Enzim
Spesifik: 1 E 1 S (kekhususan absolut)
Mg2+

-D-glukosa + ATP

ADP + glukosa-6-P

glukokinase

Kekhususan relatif: 1 enzim memiliki

beberapa Substrat
contoh: enzim D-Asam amino oksidase

Kekhususan tergantung:
- sifat ikatan E-S
- sifat gugus katalitik : - stereospecificity
- regioselectivity
- chemoselectivity

- kofaktor organik
- ion logam
- bentuk komplementer
- muatan listrik
- sifat hidrofilik/hdrofobik dari E/S

Eduard Buchner
He found that sugar
was fermented even
when there were no
living yeast cell in
the mixture

 Aspek Khusus:
1. Kekhususan optik: absolut

2. Kekhususan gugus:
- Beberapa enzim hanya bekerja pd gugus kimia tertentu
Contoh: Dehidrogenase alkohol pada alkohol

Lock & Key Model

Emil Fischer (1894):
- enzim dan substrat memiliki bentuk yang saling
komplementer satu dg yg lain
- tdk bisa menjelaskan stabilitas dari fase transisi

Induced Fit Model

Daniel Koshland (1958):
- active-site dpt menyesuaikan dg bentuk substrat

Tata Nama Enzim

ase: - S + ase urease, lipase
- jenis reaksi + ase transferase
- S + jenis reaksi + ase aminooksidase, laktat dehidrogenase
IUB: - memakai sistem nomor
- kompleks dan membingungkan

KLASIFIKASI ENZIM
1. OKSIDOREDUKTASE
Stered + Steroks
Steroks + Stered
2. TRANSFERASE
SG + S
SG + S
3. HIDROLASE
Mengkatalisis pemecahan hidrolitik dari
CC,
CN, CO, PO

4. LIASE
- Pemecahan tidak dengan cara hidrolisis
- Menghasilkan senyawa berikatan rangkap

5. ISOMERASE
Mengkatalisis perubahan geometrik/struktural pada
suatu molekul

6. LIGASE
Pengikatan 2 substrat dengan menggunakan energi

PROSTHETIC GROUPS
- Memiliki ikatan yg erat & stabil dg struktur protein
(kovalen/nonkovalen)
- Contoh: piridoksal fosfat, FMN, FAD, thiamin, biotin
& ion-ion logam (metaloenzim)

KOFAKTOR
- Ikatan bersifat sementara, tdk sekuat prostetic group
- Bisa berikatan dg enzim atau substrat (ATP)
- Terbanyak berupa ion-ion logam (metal-activated
enzyme)

KOENZIM
Recyclable shuttle service atau group
transfer.
Mentransport substrat dari tempat
produksi ke tempat utilisasi.
Menstabilisir substrat pada lingkungan
sel.
Banyak koenzim, kofaktor dan prostetic
group merupakan derivat vitamin B.
NAD/P

ISOZIM
Sekelompok enzim yg dpt mengkatalisis reaksi yg sama
Sifat fisik, kimia atau imunologis beda
Banyak ditemukan pada sera & jaringan vertebrata, insekta,
tanaman, dan organisme uniseluler.
Contoh: Laktat dehidrogenase
- dlm hati tikus >< E. coli.
- pada manusia ada beberapa isozim, perubahan
kadar PATOLOGIK

FUNGSI DIAGNOSTIK
Enzim Plasma Fungsional:
- LPL, Kholinesterase, proenzim
hemostasis.
Enzim Plasma Non Fungsional:
- AST=SGOT infark myokard, viral hepatitis
- ALT=SGPT infark myokard, viral hepatitis
- Amilase & Lipase pankreatitis
- -Glutamil Transpeptidase liver diseases
- Laktat dehidrogenase penyakit jantung
- Acid Fosfatase kanker prostat
- Alkali Fosfatase penyakit obstruksi pd hepar,
kelainan tulang

KINETIKA ENZIM
Jumlah enzim sangat kecil: g atau unit.
Cara mengukur membandingkan kecepatan
reaksi dengan kecepatan enzim murni.
Unit aktivitas enzim:
mikromol substrat yg bereaksi, atau produk yg
terbentuk per satuan waktu.
- IUB 1u = enzim yg mengkatalisis pembentukan
1 mikromol produk per menit
- Aktivitas enzim perubahan kadar substrat
dalam waktu tertentu untuk volume tertentu
(unit/volume).

KECEPATAN REAKSI
S atau P

Grafik berbelok krn:

- substrat makin berkurang
- product inhibition

S
0

Kecepatan Reaksi

S/P

Kecepatan sesaat A = B = C

- S

Kec. Sesaat: V = Limit

B

t0

Atau V = Limit
A
d [S]

V=

t0

d [P]

atau V =

dt dt

Kecepatan rata-rata: Vrata-rata =

t

KECEPATAN AWAL
Kecepatan reaksi enzimatik
kecepatan awal
Kadar substrat, kadar enzim, suhu, pH dll. hanya dapat
diketahui pada awal reaksi.
S/P

Kecepatan awal: Vo = tg =
a

A
b

[C][D]

G = Go + RT ln

[A][B]

Bila A = B = C = D = 1.0 m
Go: - perubahan energi bebas dalam keadaan standar (A = B = C = D = 1.0 m)
- tergantung suhu, macam reaksi, sifat reaktan, kadar reaktan.

PENGARUH KADAR ENZIM

S

V rata-rata
4 unit
(mg S/
mnt)
I
2 unit
II
t1

to

1 unit
III
to

t2
t1

t2

unit E

PENGARUH KADAR SUBSTRAT

Vmax

Vmax
tidak akan meB

[S]

C : Enzim Jenuh,
Vmax

peningkatan
ningkatkan kecepatan.

jumlah [S]

A: Kadar substrat rendah

B: Kadar substrat sedang
C: kadar substrat tinggi

HIPOTESIS MICHAELIS-MENTEN
E harus berikatan dulu ES sebelum P terbentuk
E + S
ES E + P
Kecepatan reaksi ditentukan oleh ES E + P
Bila [E] tetap, maka kecepatan pembentukan P tergantung pada kadar
S grafik linier. Kenyataan grafik tidak linier.
Awal reaksi [P] = 0.
Kadar [S] selalu lebih besar daripada [E]
1 E hanya punya 1 S.
K1

K3

+
K2

ES

K4

K1[E][S] + K4[E][P] = K2[ES] + K3[ES] (Awal reaksi [P] = 0, jadi [E][P] = 0)

K1[E][S] = K2[ES] + K3[ES]
[E][S]
K2 + K3 Kecepatan awal reaksi tgt [ES]
=
= Km
[ES]
K1

PERHITUNGAN V
Vo
Vo = K3[ES] [ES] =

Vo
dan

K3

K3 =
[ES]

Vmax : V dimana semua E sudah mengikat S

[E]t = [ES]
[E]t : kadar enzim total
Vmax
Vmax = K3[ES] = K3 [E]t [E]t =
K3
[E]t = [E] + [ES] [E] = [E]t - [ES]
Vmax
V
(Vmax V)
[E] =
=
K3
K3
K3
[E][S]
K2 + K3
Vmax V
=
= Km
X
[ES]
K1
K3

[S]
= Km
[ES]

Lanjutan

Vmax dan Km keduanya konstan, maka

Vmax
adalah konstan
Km
Bila [S] << Km, maka V berbanding lurus
dg [S]

V = K3[ES] K3 =
[ES]
Vmax V

[S]
X

= Km

V/[ES]
[ES]
(Vmax V)[S]
= Km

Bila [S] = Km
Vmax[S]
Vmax[S]
V=
=
= Vmax
Km + [S]
[S] + [S]

V
(Vmax V)[S] = Km . V
Km . V = Vmax[S] V[S]
Km . V + V[S] = Vmax[S]
V{Km + [S]} = Vmax[S]
Vmax[S]

Persamaan M.M.
V dlm hal ini

V=
Km + S

Bila [S] << Km, penambahan [S] pd Km

Diabaikan, maka:
Vmax[S]
V=

Vmax[S]
=

Km + [S]

Vmax
=

Km

[S]
Km

Bila [S] >> Km

Vmax[S]
Vmax[S]
V=
=
Km + [S]
[S]
Kecepatan reaksi = Vmax
V = Vmax

= Vmax

Lanjutan

Km dapat dipengaruhi: - struktur substrat

- suhu
- pH
Km menunjukkan afinitas E thd S
Bila E bekerja thd > 1 S, maka utk masing-masing S
punya harga Km sendiri-sendiri
Misalnya, Heksokinase glukosa: 0.15
fruktosa: 1.15
Heksokinase memiliki afinitas thd glukosa > fruktosa

MENENTUKAN Km
1. Double Resiprocal/Lineweaver-Burk Plot:
Vmax[S]
V=

Km + [S]
Km
=

1
=
V
1

X
Vmax

Km + [S]
= +
Vmax[S]

Km [S]
Vmax[S]

Vmax[S]

1
+
[S]

Vmax

1/V
Km

Bila 1/[S] = 0, maka 1/V = 1/Vmax

slope =

Bila 1/V = 0, maka 1/[S] = - 1/Km

Vmax

- 1/Km

1/[S]

1/Vmax

2. Hanes-Woolf Plot

3. Woolf-Augustinson-Hofstee Plot

[S]

slope = - Km

slope = - Km

Km
Vmax

Vmax
Km

- Km

Leonor Michaelis

[S]

Maud Menten

V
[S]

PENGARUH pH PADA REAKSI ENZIMATIK

R

COOH

NH3+ + H+

COO-

NH3+ + OH-

pH < pH isoelektrik

COO-

NH2
pH > pH isoelektrik
S

pH dimana

pH I

pd tiap-tiap
t

saat selalu > pH lain

pH optimum (misalnya pH I)

pH II
pH III
pH IV
t

LANJUTAN

SH+

- pH > atau < : enzim denaturasi

- pengaruh muatan listrik S & E

100%

pH <<:

pH< pH opt. pH>pH opt.

SH+
E

H+

ESH

EH

pH >>: SH+ S + H+
Perubahan pH KONFORMASI

PENGARUH SUHU PADA REAKSI ENZIMATIK

100%

0O

Diatas suhu opt. DENATURASI

Suhu opt. adalah sesuai suhu sel

Dibawah suhu optimum, reaksi

akan meningkat karena kenaikan
energi kinetik molekul-molekul
yang bereaksi.

Suhu opt berubah-ubah terantung

waktu (t1 & t2)

Stabilitas enzim terhadap suhu

dipengaruhi:
- pH
- Kekuatan ionik medium
- Ada tidaknya ligan

70O

50o
60o
70o
40o
80o

t1

t2

PENGARUH INHIBITOR
SIFAT IKATAN:
1. Inhibitor Reversibel: E
2. Inhibitor Irreversibel: E

+
+

I
I

EI
EI

SIFAT KINETIK:
1. Inhibitor Kompetitif
Efek Inhibitor hilang bila [S] ditingkatkan
2. Inhibitor Non Kompetitif
Efek Inhibitor tidak hilang bila [S] ditingkatkan
Inhibitor Reversibel
Inhibitor Irreversibel

Kompetitif
Non Kompetitif
Non Kompetitif

INHIBITOR KOMPETITIF
Selalu Reversibel
Hanya dpt berikatan dg E saja atau S saja, tdk dg ES
EI
K5

K6

[E][I]

Ki =
K1

=
[EI]

ES

K2

E + P

V
Vmax

K6
K5

Ki : Konst. Disosiasi Kompleks EI

Tanpa Inhibitor
[I]
Dg Inhibitor

Vmax

Km = (1 +

) Km
Ki

Km

Km

[S]

lanjutan

1
V

Dg Inhibitor

1
A=Tanpa Inhibitor

Km
1
B=-

Km
INHIBITOR KOMPETITIF MERUBAH
() Km TAPI TIDAK MERUBAH HARGA Vmax

Vmax

1
[S]

Efek Inhibitor selain tergantung [I] juga tergantung Ki

Bila jumlah [S] diperbesar
[I]
[S]>> Km (1 +

[I]
) sehingga Km (1 +

Ki

) + [S]

[S]

Ki

Vmax [S]
V=
[S]

= Vmax JADI, EFEK INHIBITOR DAPAT DIHILANGKAN

DENGAN MENINGKATKAN JUMLAH [S]

CARA KERJA
1. INHIBITOR MEMILIKI STRUKTUR MOLEKUL MIRIP SUBSTRAT
INHIBITOR ANALOG SUBSTRAT
I S
Contoh:
Suksinat + FAD Fumarat + FADH2
ENZIM
Glutarat

Active Site

Penghambat: Malonat, Oksalat, Propionat dan

2. INHIBITOR TIDAK TERIKAT PADA ACTIVE-SITE, TAPI MENGHALANGI

IKATAN S DENGAN E (STERIC HIDRANCE INHIBITOR)
Contoh:
I
S - Sulfanilamida mirip PABA, shg menghambat
sintesis as. Folat dalam bakteri.
ENZIM
- Fisostigmin mirip asetil kholin (myotikum)
- Asetazolamid (Diamox) mirip dg anhidrase
as. Karbonat.
H2CO3 CO2 + H2O

INHIBITOR NON KOMPETITIF

INHIBITOR NON KOMPETITIF REVERSIBEL

Dapat berikatan dengan E maupun ES

E + I
EI
ES + I
ESI
Berikatan dengan E pada tempat berbeda dg S
Struktur tidak mirip S
K1

K3

ES

K2

K5

K6

K4

K5

K6

K1

EI

ESI
K2

K6
Ki =

[E] [I]
=

K5

[ES] [I]
=

[EI]

[ESI]

lanjutan

V
Vmax

Tanpa Inh.

Vmax

Dg Inh.

1
V

Vmax

Dg Inh.

1
Vmax

Tanpa Inh.

Vmax
1
Vmax
0

Km

[S]

1
Km

1
[S]

INHIBITOR NON KOMPETITIF REVERSIBEL TIDAK MERUBAH KM,

TAPI MERUBAH/MENURUNKAN Vmax
Karena Vmax = K3 [Et], maka Inhibitor Non Kompetitif Reversibel
seakan-akan menurunkan [E] yang aktif.
35

INHIBITOR NON KOMPETITIF IRREVERSIBEL

Merubah konformasi seluruh enzim (Hg, Ag, Ba), atau merubah

konfigurasi active site (derivat fosfofluoridat), sehingga enzim
menjadi inaktif.

Sulit dibedakan dengan Inhibitor non Kompetitif Reversibel.

Menurunkan harga Vmax, tetapi tidak merubah harga Km

36

REAKSI DG LEBIH DARI 2 SUBSTRAT

Merupakan sebagian besar reaksi Biokimia.
1. Reaksi Bi-Bi yang teratur
A

EA

EAB EPQ

EQ

2. Reaksi Bi-Bi acak

A
E

B
EA

P
EAB - EPQ

EQ

EB
B

Q
E

EP
A

3. Reaksi Ping-Pong
A

EA EP

EB EQ

ENZIM ALLOSTERIK
Tidak mengikuti kinetika Michaelis-Menten.
Umumnya Oligomerik (lebih dari 2 sub-unit), tdd protomer2
Menunjukkan Kooperativitas, dapat mengikat > 1 molekul
Substrat.
Memiliki tempat ikatan lain, yg disebut tempat ikatan
Allosterik
Tidak semua Enzim Oligomerik adalah Allosterik (laktat
dehidrogenase).
Beberapa Enzim punya sub-unit Katalitik dan sub-unit
Regulatorik.
Enzim Allosterik Multi Ligan (S, I, Aktivator dll.)
Kooperativitas: pengikatan 1 Substrat mempermudah
pengikatan Substrat berikutnya.

ENZIM ALLOSTERIK

Sub-Unit Katalitik

Allosterik
M.M

Sub-Unit
Regulatorik

[S]

Misalnya, 1 E dapat mengikat 4 molekul S:

[ES]
E +

ES +

ES

ES2

K1 =

[ES3]
ES2 + S

ES3

K3 =

[E] [S]

[E] [S]

[ES2]

[ES4]

K2 =

ES3 +
[ES] [S]

ES4

K4 =
[E] [S]

ENZIM ALLOSTERIK

1
V

Koop. pos.
Tdk ada koop.

Rumus Koop. Pos. tercapai bila

K4 >>> K3 >> K2 > K1

Koop. neg.

1
[S]

Koop. neg.: pengikatan 1 molekul S akan menghambat pengikatan molekul S

berikutnya (K4 < K3 < K2 < K1)
Vmax [S]n

n: Jumlah tempat ikatan S per molekul E

V=
K + [S]n
41

GARIS HILL
V (K + [S]n) = Vmax [S]n
V.K + V[S]n = Vmax [S]n
V.K = Vmax [S]n - V[S]n
V.K = (VmX V) [S]n
V.K
= [S] n
(Vmax V)
V
[S] n
(Vmax V)
K
V
Log
= n Log [S] Log K
(Vmax V

V
Log
Vmax
n = tg

Log [S]

Garis Hill

KESIMPULAN
Enzim Allosterik punya tempat ikatan dg substrat (activesite) dan tempat ikatan Allosterik
Pengikatan pada tempat Allosterik perubahan konformasi
tempat ikatan S (tempat ikatan isosterik) laju reaksi akan
naik/turun (aktivasi/inhibisi)
Pengaruh tersebut dpt tertuju pd pengikatan S (thd K), pd
proses katalisis (thd Vmax) atau thd keduanya
Tempat Allosterik hanya dpt mengikat senyawa dg konfigurasi yg cocok (kekhususan sterik)

ASPARTAT TRANSKARBAMILASE (ATC-ASE)

L Aspartat + Karbamoilfosfat KarbamoilLAspartat +
As. Fosfat
Inh. Komp. = Sistidintrifosfat (CTP); Aktivator = ATP
ATC-Ase bersifat kooperativitas + kurva sigmoid
Hg2+ = - Efek kooperativitas ATC-Ase, efek CTP dan efek ATP
hilang.
- Enzim tetap aktif kurva hiperbola
- Enzim terdisosiasi jadi 2 sub-unit, besar dan kecil:
Besar = efek enzimatik
Kecil = mengikat CTP/ATP
Ternyata, ATC-Ase tdd 12 sub-unit, 6 sub-unit katalitik
tergabung menjadi 2 trimer, 6 subunit regulatorik tergabung
menjadi 3 dimer

ASPARTAT TRANSKARBAMOILASE

Peristiwa Allosterik adalah salah satu mekanisme

pengendalian utk homeiostasis
V
Sub-Unit Katalitik

E+A

E+I

Sub-Unit Regulatorik
[S]

45

LAJU REAKSI ENZIMATIK

A

B
E1

E2

D
E3

E
E4

F
E5

Pengendalian:
a. Pengendalian sintesis/degradasi enzim
b. Pengendalian aktivitas katalitik enzim

Pengendalian Sintesis Enzim

Berjalan secara genetis, pada Prokariota

1. Represi:
a. typhimurium:
- penambahan His akan enzim biosintesis His.
- penambahan Leu akan enzim biosintesis Leu.
- represi umpan balik produk.

REPRESI

b. E. coli yg tumbuh pd sumber C selain glukosa

(X) glukosa menekan enzim katabolisme X
represi katabolit

2. Induksi:
- E. coli + laktosa mula-mula tdk bisa berbiak krn
enzim (-). Tapi kmd E. coli dpt memproduksi enzim
pemecah laktosa.
- Laktosa = induktor
Enzim = enzim induksibel (inducible enzyme)
Enzim konstitutif selalu ada dlm setiap keadaan.

Pengendalian Degradasi Enzim

Pada eukariota
Enzim adalah protein dpt dihidrolisis oleh enzim
proteolitik
Triptofan oksigenase bila triptofan peningkatan
jumlah enzim karena degradasi enzim

Pengendalian Aktivitas Katalitik

a.

Pengendalian melalui modulasi Allosterik

(inhibisi/aktivasi Allosterik)

b.

Pengendalian melalui perubahan kovalen

Fosfo Enzim Defosfo Enzim
Salah satu mungkin aktif, mungkin
inaktif.
Fosfo Enzim : glikogen fosforilase
Defosfo Enzim: glikogen sintetase
Donor fosfat:
Eukariota : E + ATP
Prokariota: E + ATP

E + ADP (NDP)
E-AMP (E-NMP) + PPi

ATP

ADP

e1= protein kinase

e2= prot. fosfatase

e1

EP
e2

Pi

H 2O

Prot. Kinase & prot.

fosfatase di kontrol
oleh hormon atau
jar. Saraf.

C. Pengendalian Mel. Mek. Proenzim-Enzim

Pepsinogen Pepsin

Tripsinogen Tripsin

Pre E1 E1

Kaskade, mis. pd sistem

pembekuan darah.

Pre E2
Pre E3

E2
E3

PENGENDALIAN ALUR METABOLIK

A

E1

E2

D
E3

E
E4

E5

Hukum Aksi Massa: Reaksi berhenti bila tercapai keseimbangan.

[F]

K=

K = K1 . K2 . K3 . K4 . K5
Harga K tetap pada P dan T yang yang tetap.

[A]

Pengendalian laju reaksi tidak merubah K, hanya

mempercepat/memperlambat tercapainya
keseimbangan.
A

Reaksi berjalan terus A akan habis.

MEKANISME DASAR
X
(-)

B
(+)

X dan Y: Senyawa diluar jalur

metabolisme

(+)

(-)

Y
Pengendalian umpan balik (-) : E

Allosterik

Pengendalian umpan maju (+): A

Mekanisme: - Pengendalian Sintesis Enzim
- Pengendalian Allosterik
Represor: senyawa akhir
Induktor: senyawa awal

PENGENDALIAN ALUR METABOLIK

E1

E2

E3

E4

Represi terkoordinasi, E adalah represor utk Enzim E1, E2, E3, E4.
E1

E2

E3

E4

+
+

+
Induksi terkoordinasi, P adalah induktor dari E1, E2, E3, E4
Represi Alur Biosintetik/Anabolik, Induksi Alur Degradasi/Katabolik

PENGENDALIAN ALUR METABOLIK DIVERGEN

(-)
e5

D1
e1

e2

e3

e6

E1

F1

(-)

C
(-)
e4

e7

D2

e8

E2

(-)

F1 & F2 menghambat e3 & e4 C menumpuk

F1 & F2 menghambat e1 reaksi berhenti
F1 cukup menghambat e1 reaksi berhenti
F1 cukup tapi F2 belum cukup F1 menghambat D1

F2

PENGENDALIAN UMPAN BALIK GANDA

a.
b.

Represi Multivalen: e1 akan berhenti bila F1 & F2 berlebih. Salah satu

berlebih e1 belum berhenti
Multiple Feedback Inhibition:
1. Hambatan umpan balik multivalen
2. Hambatan umpan balik kumulatif
F1 dan F2 dapat menghambat e1
Hambatan total: Hambatan F1 + Hambatan F2
3. Hambatan umpan balik kooperatif
Hambatan total lebih besar daripada F1 + F2
4. Mekanisme enzim ganda
e1
e1: dihambat F1
A
B
e2: dihambat F2
e1
Hambatan maximal tercapai bila F1 maupun F2 telah berlebih.

PENGENDALIAN ALUR METABOLIK

KONVERGEN
(-)
e1

(-)

e2

(+)

e3

G
(+)
e4

e7
e5

e6

(-)

(-)

I
e8

PENGENDALIAN ALUR METABOLIK 2 ARAH

Glukosa

Glukosa - 6 P

Kekanan: Glukosa + ATP

Glukosa 6 P + ADP

Heksokinase

Kekiri

: Glukosa 6 P + H2O

Glukosa + Pi

Glukosa - 6 Phosphatase

ATP

ADP
Heksokinase

Glukosa

Glukosa - 6 P
Glukosa - 6 - Phosphatase

Pi

H2O

e1

e2

e3

C
e5

==+

e4

Terima Kasih
Selamat Belajar