Food Research International Journal 18 (4): 1489-1491 (2011) 1,2 * Sahilah, AM,

1 Norhayati, Y., 1 Norrakiah, AS, 1 Aminah, A. dan 1 Wan Aida, WM 1 Sekolah Ilmu
Kimia dan Teknologi Pangan, Fakultas Sains dan TechnologyUniversiti Kebangsaan
Malaysia, 43600 Bangi UKM, Selangor, Malaysia 2 Institut Studi Asia Barat
(IKRAB), Universiti Kebangsaan Malaysia Otentikasi halal daging mentah dengan
menggunakan PCR amplifikasi DNA mitchondrial Abstrak: Ayam (Gallus gallus),
sapi (Bos taurus), kambing (Capra hircus), babi (Sus scrofa domestica) dan babi
hutan (Sus scrofa Linneus) daging mentah diperiksa menggunakan PCR
amplifikasi DNA mitchondrial. Tiga oligoprimers digunakan untuk mitokondria
DNA diamplifikasi (mtDNA) sitokrom b (dua jenis primer) dan 12s rRNA
mitokondria (mt-12s rDNA) (salah satu jenis primer) gen untuk-vertebrata
tertentu. Amplifikasi Produk PCR dari 359 bp dan 531 bp yang berhasil
diamplifikasi dari gen CYT b babi dan babi hutan daging menggunakan dua jenis
mtDNA. Tak satu pun dari band ini diamati untuk ayam, sapi dan kambing.
Sementara itu, produk amplifikasi semua daging menggunakan gen mt-12S rDNA
berhasil menghasilkan pita tunggal dengan Ukuran molekul 456 bp, yang seperti
yang diharapkan karena semua hewan yang veterbrate spesifik. Dengan
demikian, primer ini tidak dapat digunakan untuk mendeteksi DNA babi dalam
sampel daging mentah. Pada penelitian ini, amplifikasi PCR mtDNA sitokrom b
telah terbukti sebagai alat yang cocok untuk deteksi cepat babi DNA dalam
makanan. Kata kunci: otentikasi Halal, PCR amplifikasi, dan DNA mitokondria
(mtDNA) Pengantar Halal berasal dari kata Arab untuk diizinkan yang mengacu
diterima agama atau halal. Di Islam, hewan dapat dikategorikan menjadi dua
kelompok, Hewan halal dan non-halal (Haram) hewan. Halal hewan dapat dibagi
menjadi dua kelompok: hewan Halal dengan tepat dibantai melalui UU Syariah
seperti sapi, kambing, domba, ayam, bebek, kelinci dan lain-lain yang telah
diizinkan dalam Islam; Di sisi lain tangan, jika semua hewan tersebut yang belum
disembelih menurut hukum Islam, mereka dan mereka deravatives masih akan
dianggap sebagai non-Halal atau Haram, dan hewan Halal tanpa disembelih
seperti ikan dan krustasea. Sedangkan, babi dan warisan yang atau makanan
lain yang berasal, anjing, tikus, dan lain-lain yang dilarang dalam Islam yang
non-Halal atau Haram hewan. Adulterations daging babi dalam makanan atau
olahan makanan yang mungkin karena substitusi berkualitas tinggi daging untuk
bahan murah (Al Jowder et al., 1997). Potensi penggunaan daging babi yang
mungkin sebagai penggantian sapi, ayam dan daging kambing, karena yang
harga murah. Selain penguatan ketat dari lokal otoritas seperti Departemen
Pembangunan Islam Malaysia (JAKIM) untuk aplikasi sertifikasi Halal yang
memenuhi standar halal dan integritas Halal, bukti ilmiah terhadap penipuan
sangat penting dalam mendukung otentikasi Halal. Mitokondria DNA digunakan
(mtDNA) pendekatan untuk identifikasi spesies babi memiliki dilaporkan oleh
beberapa penulis karena mtDNA yang gen yang hadir dalam ribuan eksemplar
per sel, yang variabilitas besar mt-DNA memungkinkan identifikasi DNA babi
yang tepat (Monteil-Sosa dkk, 2000;. Lenstra et al., 2001). Dalam karya ini, kami
menguji 5 daging mentah yaitu ayam (Gallus gallus), sapi (Bos taurus), Kambing
(Capra hircus), babi (Sus scrofa domestica) dan babi hutan (Sus scrofa Linneus)
dengan 3 berbeda oligoprimers mtDNA alat untuk otentikasi halal. Kami
termasuk babi hutan (babi hutan) daging yang diperoleh dari penduduk asli

Malaysia (Orang asli) untuk melihat kemampuan mtDNA primer di deteksi babi
dan spesies terkait. Bahan dan Metode Persiapan sampel Sebanyak 5 (n = 5)
daging mentah yaitu ayam (Gallus gallus), sapi (Bos taurus), kambing (Capra
hircus), babi (Sus scrofa domestica) yang dibeli dari pasar ritel di daerah
Selangor. Sementara, segar daging babi hutan (Sus scrofa Linneus) adalah beku
dan diperoleh dari Perkampungan Orang Asli, Temerloh, Pahang. Semua sampel
disimpan dalam wadah es sementara pengangkutan dan disimpan dalam kulkas
sebelum yang digunakan.
Halaman 2
1490 Sahilah, AM, Norhayati, Y., Norrakiah, AS, Aminah, A. dan Wan Aida, WM
Food Research International Journal 18 (4): 1489-1491 PCR amplifikasi Sebanyak
3 primer pasangan dipergunakan dalam setiap Reaksi PCR. Dua pasang
mitokondria CYT b primer yang digunakan dalam penelitian ini digambarkan oleh
Lenstra et al. (2001) (CYT b1 5'-CCA TCC AAC ATC TCA GCA TGA TGA AA-3 'dan
CYT b2 5'-GCC CCT CAG AAT GAT ATT TGT CCT CA-3 'dan Monteil- Sosa et al.
(2000) (Babi F 5'-AAC CCT ATG TAC GTC GTG CAT-3 '(15.592) dan Babi R 5'-ACC
ATT GAC TGA ATA GCA CCT-3 '(16.124)). Sementara itu, 12s rRNA mitokondria
(mt-12s rDNA) (12SL 5' AAA CTG GGA TTA GAT ACC CCA CTA dan 12SH 5'-GAG
GGT GAC GGG CGG TGT GT-3 ') gen menggunakan universal, primer-vertebrata
spesifik dijelaskan oleh Pandey et al. (2007). Primer yang dipasok dari First Basis
Laboratories (Selangor, Malaysia). Amplifikasi mitokondria CYT b gen dilakukan
dalam volume akhir 50 ml. Masing Masing Campuran reaksi berisi 50 ml
mengandung Volume 10,0 ml 10X PCR penyangga (100 mM Tris-HCl, 500 mM KCl
dan 0,1% TritonTMX-100), 4 ml 25 mM MgCl 2 , 0,5 ml dari 10 mM dNTP
(Promega, Madison, USA), 1,5 ml dari 5 uM setiap primer (Forward dan reverse),
0,5 ml dari 2,0 unit polimerase Taq DNA (Promega, Madison, USA), 29,0 ml
nucleas gratis air (NFW) dan 3 ml 100 Template DNA ng. A kontrol negatif-DNA
dilakukan dengan menambahkan 3 ml dari NFW, kontrol positif dilakukan dengan
menambahkan 3 ml dari sampel DNA. PCR dilakukan pada Eppendorf termalpengendara sepeda (Eppendorf, Jerman) dengan program suhu yang terdiri dari
awal denaturasi pada 94 C selama 2 menit untuk menyelesaikan
mendenaturasi DNAtemplate, diikuti oleh 35 siklus denaturasi pada 94 C
selama 15 detik, annealing selama 1 menit pada 42 C, polimerisasi pada 72 C
selama 1 menit dan perpanjangan akhir pada 72 C selama 2 menit. Kontrol
negatif (air) yang termasuk dalam setiap amplifikasi PCR, untuk memverifikasi
efisiensi PCR dan untuk mendeteksi kontaminasi. Produk amplifikasi dianalisis
oleh elektroforesis menggunakan 1,0% (b / v) agarose gel di 1X TAE penyangga
(40 mM Tris-OH, 20mm asam asetat dan 1mM EDTA; pH 7,6) pada 90 V selama
40 menit dan ternoda oleh etidium bromida. Sebuah tangga DNA 100 bp
(Vivantis, Malaysia) digunakan sebagai acuan ukuran. Gel divisualisasikan
menggunakan transilluminator UV (AlphaImager TM Dokumentasi Gel). Hasil dan
Diskusi Otentikasi halal merujuk kepada produk-produk yang berisi babi atau
turunannya terutama di makanan. The digunakan teknik PCR untuk memperkuat
mtDNA dari CYT b dalam mengidentifikasi DNA babi dalam makanan telah
dilaporkan oleh severals penulis (Monteil- Sosa et al., 2000; Aida et al., 2005;
Kesmen et al., 2007; Chandrika et al., 2009). Deteksi A berdasarkan pada mtDNA

populer karena kekhususan yang berbeda dinyatakan dalam spesies atau genera
melalui studi mtDNA. Ada sekitar 104 salinan mtDNAavailable per sel
dibandingkan dengan hanya satu salinan DNA genomik. Sehingga lebih efisien
untuk mendeteksi spesies-spesifik DNA menggunakan mtDNA dari genom DNA
(Cheng et al., 2003). Dalam studi kehadiran, amplifikasi PCR Analisis dilakukan
pada ayam, sapi, kambing, babi dan daging babi hutan menggunakan 3 jenis
mitokondria primer oligonukleotida. Gambar 1 menunjukkan PCR produk
amplifikasi semua daging dengan DNA mt primer oligonukleotida dari CYT b
seperti yang dijelaskan oleh Lenstra et al. (2001). Menggunakan primer tersebut
yang Produk amplifikasi kedua, babi dan daging babi hutan menghasilkan pita
tunggal, masing-masing dengan molekul ukuran 359 bp. Sementara, tidak ada
band diamati pada ayam, sapi, daging kambing dan kontrol negatif (Lane C) di
setiap percobaan. Telah dilaporkan, menggunakan primer seperti yang dijelaskan
oleh Lenstra et al. (2001), sebuah fragmen dari 359 bp akan muncul untuk babi,
ayam, sapi, kambing, kalkun, air kerbau, domba, kuda dan manusia. Namun,
temuan kami yang berbeda dengan Lenstra et al. (2001), di mana tidak ada
diperkuat fragmen PCR diamati untuk ayam, sapi dan kambing dalam percobaan
berulang (Gambar 1). Spesies-spesifik mt CYT b primer menggunakan primer
seperti yang dijelaskan oleh Monteil-Sosa dkk. (2000), menghasilkan pita tunggal
dengan ukuran molekul 531 bp pada babi dan daging babi hutan seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 2. Temuan kami sepakat dengan Monteil-Sosa et al.
(2000) yang melaporkan bahwa oligoprimers yang digunakan adalah sangat
spesifik untuk babi mtDNA dan produk PCR diamplifikasi akan fragmen dengan
yang berat molekul 531 bp dalam ukuran. Primer memungkinkan Gambar 1. PCR
amplifikasi spesifik daging mentah oleh sitokrom b primer DNA mitokondria
(Lenstra et al., 2001). Lane M, Tangga DNA 100 bp (berat molekul dalam
pasangan basa, bp); Jalur 1, ayam; Jalur 2, ternak; Jalur 3, kambing; Jalur 4, babi
hutan; dan Jalur 5, babi; Lane 6-7, kontrol positif dan kontrol negatif.
Halaman 3
Otentikasi halal daging mentah dengan menggunakan PCR amplifikasi DNA
mitchondrial 1491 Food Research International Journal 18 (4): 1489-1491 deteksi
mudah DNA babi tanpa melakukan apapun restriction fragment length
polymorphism (RFLP) analisis. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 3, produk
amplifikasi dari semua daging menggunakan gen mt-12S rDNA (Pandey et al.,
2007), menghasilkan pita tunggal dengan ukuran molekul dari 456 bp. Karena
semua sampel daging yang veterbrate hewan, seperti yang diharapkan semua
daging menghasilkan single band dari 456 bp. Namun, primer ini tidak berguna
dalam deteksi DNA babi. Kesimpulan Sebagai kesimpulan, penelitian ini
menunjukkan sebuah analisis pendekatan untuk identifikasi babi dan babi hutan
DNA berdasarkan analisis mtDNA integritas Halal. Teknik ini juga berguna untuk
melacak daging babi pemalsuan yang memungkinkan deteksi cepat babi DNA
dalam produk daging. Ucapan Terima Kasih Penelitian ini didukung oleh
Fundamental Penelitian Hibah (UKM-ST-06-FRGS0010- 2008), Departemen
Pendidikan Tinggi (Mohe), Malaysia. Referensi Aida, AA Che Man, YB, Wong,
CMVL, Raha, AR dan Anak, R. 2005. Analisis daging mentah dan lemak babi
dengan menggunakan polymerase chain reaction untuk Halal otentikasi. Ilmu

Daging 69: 47-52. Al-Jowder, O., Kemsley, EK dan Wilson 1997. Mid spektroskopi
inframerah dan keaslian di dipilih daging: studi kelayakan. Food Chemistry 59:
195- 201. Chandrika, M., Zainon, MN, Maimunah, M., Lesley, MB, Jinap, S. dan
Anak, R. spesies 2009. Daging identifikasi dan analisis otentikasi Halal
menggunakan DNA mitokondria. Ilmu Daging 83: 57-61. Cheng, YH, Wen, CH,
Ding, ST, Kao, CC dan Kuo, TY 2003. Mendeteksi daging dan tepung tulang feed
ruminansia oleh spesies-spesifik PCR. Journal of Pakan Sains 12: 851-860.
Kesmen, Z., Yetim, H. dan Sahin, F. 2007. PCR untuk identifikasi spesies hewan di
dimasak sosis. Ilmu Daging 77 (4): 649-653. Lenstra, JA, Buntjer, JB dan Janssen,
FW 2001. Tentang asal-usul teknik daging-DNA untuk spesies identifikasi produk
daging. Jurnal Kedokteran Hewan Ilmu Besok 2: 1. Monteil-Sosa JF, Ruiz-Pesini, E.,
Montoya, J., Roncales, P., Lopez-Perez, MJ dan Perez-Martos, A. 2000. Deteksi
langsung dan spesies-spesifik yang sangat babi daging dan lemak dalam produk
daging dengan PCR amplifikasi DNA mitchondrial. Jurnal Pertanian dan Pangan
Chemistry 48: 2829-2832. Pandey, PK, Dhotre, DP, Dharne, MS, Khadse, A. N.,
Hiremath, UI, Chaudhari, RD, Patole, MS dan Shouche, YS 2007. Evaluasi
mitokondria 12S rRNAgene dalam identifikasi Pantera pardus fusca (Meyer, 1794)
dari sampel kotoran lapangan dikumpulkan di Western Ghats, Maharashtra, India.
Ilmu saat ini 92: 1129-1133. Gambar 2. PCR amplifikasi spesifik daging mentah
oleh sitokrom b primer DNA mitokondria (Montiel et al., 2000). Lane M, Tangga
DNA 100 bp (berat molekul dalam pasangan basa, bp); Jalur 1, ayam; Jalur 2,
ternak; Jalur 3, kambing; Jalur 4, babi hutan; dan Jalur 5, babi; Lane 6-7, kontrol
positif dan kontrol negatif. Gambar 3. PCR amplifikasi spesifik daging mentah
oleh 12s rRNA primer DNA mitokondria (Pandey et al., 2007). Lane M, Tangga
DNA 100 bp (berat molekul dalam pasangan basa, bp); Jalur 1, ayam; Jalur 2,
ternak; Jalur 3, kambing; Jalur 4, babi hutan; dan Jalur 5, babi; Lane 7-8, kontrol
positif dan kontrol negatif.