Anda di halaman 1dari 17

Efek Terapi Inisiasi Analog Insulin pada LDL / HDL Profil Subfraksi dan

HDL Terkait Enzim Dalam Pasien Diabetes Tipe 2


Abstrak
Latar Belakang: Pengobatan Insulin dapat menyebabkan kontrol glikemik yang baik dan
menghasilkan perbaikan parameter lipid pasien diabetes tipe 2. Penelitian ini dirancang
untuk mengevaluasi efek terapi inisiasi analog insulin pada low-density lipoprotein
(LDL) / high-density lipoprotein (HDL) sub-fraksi dan HDL enzim terkait pada pasien
diabetes tipe 2 selama fase awal.
Metode: Dua puluh empat pasien diabetes tipe 2 dengan hemoglobin glikosilasi (HbA1c)
di atas 10% meskipun terapi kombinasi yang sedang berlangsung dengan sulfonilurea dan
metformin. Terapi rejimen dilanjutkan selama hari pertama diikuti dengan substitusi
terapi sulfonilurea dengan analog insulin \yang berbeda (0,4 U / kg / hari) ditambah
metformin. Profil glikemik ditentukan lebih dari 72 jam dengan sistem kontinyu
pemantauan glukosa (CGMS) dan sampel darah diperoleh dari semua pasien pada 24 dan
72 jam. Kadar plasma protein kolesterol Transfer ester (CETP), lesitin-kolesterol
acyltransferase (LCAT), apolipoprotein B (apoB) dan apolipoprotein A-1 (apoA-I)
ditentukan oleh enzim-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Pengukuran CETP dan
LCAT kegiatan dilakukan melalui analisis fluorometric. Paraoxonase (PON1) aktivitas
enzim dinilai dari tingkat hidrolisis enzimatik fenil asetat pembentukan fenol. Analisis
LDL dan HDL subfraksi dilakukan dengan polyacrylamide gel elektroforesis secara terus
menerus.
Hasil: Kadar gula darah, kolesterol total (TC), trigliserida (TG) dan low-density
lipoprotein kolesterol (VLDL-C) turun secara signifikan sementara kadar HDL-C
meningkat secara signifikan setelah terapi insulin. Meskipun LDL-C tidak berbeda secara
signifikan sebelum dan setelah terapi inisiasi insulin, peningkatan yang signifikan terjadi
pada LDL-1 subkelompok dan penurunan yang signifikan dalam aterogenik LDL-3 dan
LDL-4 subkelompok yang diamati. Terapi inisiasi insulin analog menyebabkan
peningkatan yang signifikan dalam HDL-besar, HDL menengah dan penurunan yang
signifikan dalam subfraksi HDL-kecil. Tingkat dan aktivitas CETP protein secara
signifikan meningkat sementara tingkat apoB secara signifikan menurun setelah terapi
inisiasi analog insulin. Tidak ada perbedaan signifikan yang ditemukan dalam massa
LCAT, aktivitas LCAT, apoA-I dan PON-1 arylesterase setelah terapi inisiasi insulin.
Kesimpulan: Temuan ini menunjukkan bahwa terapi inisiasi analog insulin mengaktifkan
metabolisme lipid melalui up-regulating CETP dan menunjukkan efek anti-aterogenik
dengan meningkatkan HDL-besar dan penurunan LDL-3 dan LDL-4 subfraksi dalam
jangka waktu yang singkat.
Kata kunci: Diabetes mellitus, Insulin, CETP, LDL, HDL

Pendahuluan
Pembentukan epidemiologi diabetes sebagai faktor risiko untuk penyakit
kardiovaskular baik ditunjukkan [1]. Bahkan sebelum perkembangan diabetes
jujur, resistensi insulin menyebabkan transportasi lipid terganggu dalam plasma
[2]. Pasien dengan diabetes mellitus tipe 2 (DMT2) sering dikaitkan dengan
rendah kolesterol total high-density lipoprotein (HDL-C) tingkat, tingkat LDL
padat kecil dan trigliserida (TG) tingkat [3]. Tiga serangkai ini disebut sebagai
profil lipid aterogenik yang diamati karena resistensi insulin [4].
Target dan mengobati dislipidemia meningkatkan prognosis jangka
panjang pada diabetes tipe 2 [5]. Namun, meskipun intervensi, pasien ini tetap
pada peningkatan risiko komplikasi vaskular [6], menunjukkan bahwa faktorfaktor lain dapat berkontribusi. Sebuah bagian dari peningkatan risiko penyakit
kardiovaskular pada DMT2 dapat dikaitkan dengan perubahan kualitatif subfraksi
lipoprotein. Meskipun konsentrasi Lowdensity lipoprotein kolesterol (LDL-C)
tidak dapat meningkat pada diabetes tipe 2, dislipidemia yang ditandai dengan
peningkatan proporsi small dense LDL [7] yang mudah menyaring ke dalam
ruang subendothelial, dipertahankan oleh proteoglikan ada dan mudah teroksidasi
[8]. Memang, meningkatkan partikel LDL padat kecil telah terbukti berhubungan
dengan peningkatan risiko infark miokard [9].
Risiko penyakit kardiovaskular pada DMT2 juga dapat ditingkatkan
dengan perubahan kualitatif dalam subfraksi HDL dengan peningkatan proporsi
HDL terjadi sebagai kecil, HDL padat [10]. Studi epidemiologis menunjukkan
dominasi partikel HDL kecil di antara pasien dengan penyakit jantung koroner
dibandingkan dengan subyek kontrol [11]. HDL juga menunjukkan berbagai antiaterogenik, antioksidan, anti-inflamasi dan anti-trombotik sifat [12]. Peran penting
dalam fungsi-fungsi yang bermanfaat dapat dimainkan oleh enzim dan protein
yang berhubungan dengan lipoprotein ini seperti kolesterol ester transfer protein
(CETP), acyltransferase lesitin-kolesterol (LCAT), paraoxonase (PON1) dan
apoA-I [12].
Meski telah menunjukkan bahwa, 2 minggu terus menerus infus insulin
subkutan (CSII) mencapai kontrol glikemik yang baik dan menghasilkan
peningkatan lipidparameters di baru didiagnosis pasien diabetes tipe 2 dengan

kadar glukosa puasa> 200 mg / dl [13], efek insulin terapi inisiasi analog pada
LDL / HDL profil subfraksi dan HDL enzim terkait dalam pasien diabetes tipe 2
belum ditetapkan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh
jangka pendek terapi inisiasi analog insulin pada LDL / HDL sub-fraksi dan HDL
enzim terkait dalam pasien diabetes tipe 2.
Bahan dan metode
Pasien
Kelompok penelitian termasuk 24 pasien yang dirawat di Antalya
Penelitian dan Rumah Sakit Pendidikan, Endokrinologi Klinik dengan diagnosis
DMT2. Karakteristik pasien dan nilai-nilai laboratorium ditunjukkan pada Tabel
1. Indeks massa tubuh (BMI) dari semua pasien yang terdaftar dalam penelitian
ini adalah <30 kg / m2 dan semua non-perokok. Tak satu pun dari pasien
menerima agen antilipidemic dalam 3 bulan terakhir sebelum penelitian. Subyek
dengan sejarah jelas stroke, penyakit jantung koroner, penyakit arteri perifer,
disfungsi ginjal berat, penyakit hati, disfungsi tiroid, penyakit menular, dan
keganasan dikeluarkan. Semua subjek terdaftar dipertahankan pada diet standar
sebelum memulai penelitian. Tingkat HbA1c pada semua pasien berada di atas
10% meskipun terapi berkelanjutan dengan sulfonilurea dan metformin selama
minimal 3 bulan. Mantan rejimen pengobatan dilanjutkan selama hari pertama
diikuti dengan substitusi terapi sulfonilurea dengan analog insulin yang berbeda.
Pasien menerima baik 0,4 U / kg / hari campuran lispro (50% lispro insulin
protamine dan 50% lispro insulin) subkutan (SC) dalam tiga dosis yang sama
ditambah 2.000 mg / hari metformin lisan; 0,4 U aspart / kg / hari insulin (insulin
aspart 30% dan 70% protamine insulin aspart) SC dalam dua dosis yang sama
ditambah 2.000 mg / hari metformin lisan; atau 0,4 U / kg / hari glargine insulin
SC dalam satu dosis ditambah 2.000 mg / hari metformin oral. Perawatan insulin
yang diberikan adalah sesuai dengan American Association of Clinical ahli
endokrin (AACE) Diabetes Mellitus pedoman [14]. Semua pasien memberikan
informed consent tertulis sebelum masuk. Penelitian ini telah disetujui oleh
Institutional Review Board of Antalya Penelitian dan Rumah Sakit Pendidikan
dan dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki.

Pemantauan glukosa terus menerus.


Semua pasien dilengkapi dengan terus menerus sistem pemantauan
glukosa (CGMS, Medtronic Mini-Med, USA) dan dipantau selama 72 jam
berturut-turut setelah masuk. Sebuah sensor CGMS dimasukkan ke dalam
jaringan lemak perut subkutan dan dikalibrasi sesuai dengan pedoman operasi
Medtronic MiniMed standar. Selama pemantauan CGMS, kadar glukosa darah
diperiksa melalui glucometer (Accu-Check Go, Roche Co) 4 kali per hari dan data
telah dimasukkan ke dalam CGMS. Setelah pemantauan selama 72 jam, data yang
tercatat di-download ke komputer pribadi untuk analisis profil glukosa. Setelah
men-download data yang tercatat, berarti kadar glukosa darah dianalisis dari data.

Pengukuran laboratorium
Darah diambil dari semua pasien pada 24 dan 72 jam. Level HbA1c
ditentukan oleh Abbott ARCHITECT c16000 System (Abbott Diaognostic, Abbott
Park Illinois, USA) melalui metode immunoturbidimetric. Kolesterol total (TC),
HDL-C dan TG diukur pada Roche Cobas 8000 Modular Analyser (Basel, Swiss)
melalui metode kolorimetri enzimatik. LDL-C dan sangat low-density lipoprotein
kolesterol (VLDL-C) tingkat dihitung melalui rumus Friedewald [15]. Nitrogen
urea darah (BUN), kreatinin serum, alanin aminotransferase (ALT), dan aspartat
aminotransferase (AST) yang measued di Roche Cobas 8000 Modular Analyser
melalui metode kolorimetri. Serum thyroid stimulating hormone (TSH) dan
microalbumin urin diukur pada Roche Cobas 8000 Modular Analyser melalui
electrochemiluminescence immunoassay dan metode turbidimetri, masingmasing.
Analisis subfraksi LDL
Analisis subfraksi LDL dilakukan elektroforesis dengan menggunakan
resolusi tinggi 3% tabung gel poylacrylamide dan LDL Sistem Lipoprint
[Quantimetrix, Redondo Beach, California (CA), Amerika Serikat] sesuai dengan
instruksi pabrik [16]. Secara singkat, 25 uL sampel dicampur dengan 200 uL
loading gel cair. Pembebanan gel mengandung Sudan Hitam B pewarna untuk
mewarnai lipoprotein. Campuran yang dihasilkan ditambahkan ke bagian atas
pracetak 3% tabung gel poliakrilamid. Setelah photopolymerization pada suhu
kamar selama 35 menit, sampel dielektroforesis selama 1 jam 5 menit (3 mA
tabung / gel). Densitometri dilakukan dengan sistem Microtek ArtixScan M1 dan
data dianalisis dengan software Quantimetrix (versi Lipoware-Research) seperti
yang dijelaskan sebelumnya [16,17]. Dalam metode ini, VLDL tetap di asal
[retensi faktor (Rf) = 0,0], sedangkan HDL bermigrasi di depan (Rf = 1,0). Di
antara, beberapa band dapat dideteksi: Tengah (MID) band C, B, dan A, yang
sesuai terutama untuk menengah-density lipoprotein (IDL), serta band LDL.
LDL1 dan LDL2 band sesuai dengan, partikel LDL apung besar, sedangkan band
LDL3 dan di atas Terkait dengan partikel sdLDL. VLDL dan proporsi (%) dari

massa kolesterol (mg / dl) dari subfraksi LDL atas total massa LDL-C dihitung
oleh perangkat lunak Quantimetrix.
Analisis subfraksi HDL
Analisis subfraksi lipoprotein apoA-I yang mengandung itu dilakukan
dengan menggunakan Lipoprint HDL System (Quantimetrix, Redondo Beach,
CA, USA) seperti yang dijelaskan sebelumnya [18]. Secara singkat, 25 ml sampel
dicampur dengan 300 ml Lipoprint Memuat Gel dan ditempatkan pada bagian atas
resolusi tinggi 3% gel poliakrilamid. Setelah 35 menit dari photopolymerization
pada suhu kamar, elektroforesis dilakukan selama 55 menit dengan 3mA untuk
setiap tabung gel. Setelah elektroforesis, VLDL dan LDL tetap di asal [Rf = 0,0],
sedangkan albumin bermigrasi di depan (Rf = 1,0). Di antara, hingga 10 band dari
HDL dapat dideteksi. HDL1 melalui HDL3 didefinisikan sebagai HDL besar;
HDL4 melalui HDL7 didefinisikan sebagai HDL menengah dan HDL8 melalui
HDL10

terdiri

bagian

HDL

kecil.

konsentrasi

kolesterol

masing-masing subfraksi HDL ditentukan dengan mengalikan luas relatif di


bawah kurva masing-masing subfraksi dengan konsentrasi HDL-C sampel.
Protein CETP dan pengukuran aktivitas
Konsentrasi serum CETP dianalisis oleh komersial enzim-linked
Immunosorbent Assay (ELISA) test kit [47-CETHU-E01; ALPCO, Salem, New
Hampshire (NH), Amerika Serikat] sesuai dengan instruksi pabrik. Uji sumur
dilapisi dengan anti-CETP monoklonal antibodi (Ab). CETP dalam sampel
ditangkap oleh antibodi dalam inkubasi 1. Setelah inkubasi 1 dan mencuci untuk
menghapus semua bahan terikat, horseradish peroxidase (HRP) -labeled antiCETP monoklonal Ab ditambahkan. Setelah inkubasi 2 dan mencuci berikutnya,
larutan substrat ditambahkan. Selanjutnya, berhenti reagen ditambahkan dan
intensitas warna yang berkembang diukur pada 492 nm oleh pembaca lempeng.
Kurva standar nilai absorbansi standar CETP dikenal diplot sebagai fungsi
logaritma dari CETP konsentrasi standar (ug / ml) dengan menggunakan program
GraphPad Prism Software untuk windows versi 5,03. (GraphPad Software Inc).

Konsentrasi CETP dalam sampel dihitung dari nilai absorbansi yang berhubungan
melalui kurva standar.
Kegiatan CETP serum diukur dengan menggunakan kit tes setelah
produsen instruksi (Biovision, Mountain View, CA, USA). Secara singkat, 3 ml
sampel plasma (sebagai sumber CETP) ditambahkan ke dalam campuran reaksi
yang mengandung diri dipadamkan lipid netral neon sebagai molekul donor dan
akseptor molekul. Transfer CETPmediated dari lipid netral neon ke molekul
akseptor mengakibatkan peningkatan fluoresensi, yang dibacakan dalam pembaca
plat fluoresensi pada eksitasi 465 nm dan emisi 535 nm. Kurva standar dibuat
dengan menggunakan konsentrasi dikenal (0-100 pmol) standar lipid netral neon.
Kegiatan CETP dalam sampel dihitung dari nilai-nilai yang sesuai fluoresensi
melalui kurva standar dan dinyatakan sebagai pmol / ml sampel / jam.

Protein LCAT dan pengukuran aktivitas


Konsentrasi LCAT serum dianalisis dengan ELISA test kit komersial (47LCAHU-E01, ALPCO, Salem, NH, USA) sesuai dengan instruksi pabrik. Uji
sumur dilapisi dengan anti-LCAT antibodi monoklonal, yang mengikat dengan
LCAT dalam

sampel.

Setelah

inkubasi

pertama

dan

mencuci

untuk

menghilangkan semua bahan terikat, HRP-label anti-LCAT ditambahkan. Setelah


inkubasi dan selanjutnya mencuci kedua, kompleks antibodi / LCAT / enzim
diinkubasi dengan larutan substrat dan diakhiri dengan berhenti reagen. Intensitas
warna yang berkembang diukur pada 492 nm oleh pembaca lempeng. Kurva
standar nilai absorbansi standar LCAT dikenal diplot sebagai fungsi logaritma dari

konsentrasi standar LCAT (ug / ml) dengan menggunakan program GraphPad


Prism Software untuk windows versi 5,03. (GraphPad Software Inc). Konsentrasi
LCAT dalam sampel dihitung dari nilai absorbansi yang berhubungan melalui
kurva standar.
Kegiatan LCAT plasma diuji dengan menggunakan kit Calbiochem
Fluorometric LCATassay (EMD Bioscience, San Diego, CA, USA) sesuai dengan
manufacturer'sinstructions. Uji ini didasarkan pada hidrolisis substrat LCAT
buatan yang berfluoresensi di 470 nm, menghasilkan produk yang berfluoresensi
di 390 nm. Aliquotes dari 3 ml plasma yang dicampur dengan 1 ml neon LCAT
substrat dan 200 ml uji LCAT Buffer, diikuti dengan inkubasi selama 5 jam pada
37 C. Reaksi dihentikan dengan menambahkan 300 ml BACA reagen
(disediakan dalam kit) untuk 100 ml dari campuran reaksi, diikuti oleh fuorometry
di 390 dan 470 nm. Kegiatan LCAT didefinisikan sebagai perubahan dalam rasio
390/470 nm intensitas emisi fluoresensi.
Apolipoprotein A1 dan B pengukuran
Serum apoAI ditentukan dengan kit Manusia ApoAI ELISA [no. 37101HP-2; Mabtech, Cincinnati, Ohio (OH), Amerika Serikat] sesuai dengan instruksi
pabrik. Sampel (diencerkan 500 000x) ditambahkan ke piring jalur ELISA
precoated dengan apoA1 antibodi monoklonal (mAb). Ditangkap apoA1 dalam
sampel terdeteksi dengan menambahkan mAb terbiotinilasi diikuti oleh
streptavidin-HRP.

Penambahan

3,3

',

5,5'

tetramethylbenzidine

(TMB)

menghasilkan larutan substrat enzim berwarna dan reaksi diakhiri dengan berhenti
reagen. Intensitas warna yang dikembangkan diukur pada 450 nm oleh pembaca
lempeng. Kurva standar nilai absorbansi standar apoA1 dikenal diplot sebagai
fungsi logaritma dari apoA1 konsentrasi standar (ng / ml) dengan menggunakan
program GraphPad Prism Software untuk windows versi 5,03. (GraphPad
Software Inc). Konsentrasi ApoA1 dalam sampel dihitung dari nilai absorbansi
yang berhubungan melalui kurva standar.
Serum apoB ditentukan dengan Human apoB ELISA kit (no. 3715-1HP-2
Mabtech, Cincinnati, OH, USA), menurut instruksi pabrik. Kit ini khusus untuk
mendeteksi apoB100. Sampel (diencerkan 16000 x) ditambahkan ke piring jalur

ELISA precoated dengan apoB100 antibodi monoklonal (mAb). Ditangkap


apoB100 dalam sampel terdeteksi dengan menambahkan mAb terbiotinilasi
diikuti oleh streptavidin-HRP. Penambahan 3,3 ', 5,5' tetramethylbenzidine (TMB)
menghasilkan larutan substrat enzim berwarna dan reaksi diakhiri dengan berhenti
reagen. Intensitas warna yang berkembang diukur pada 450 nm oleh pembaca
lempeng. Kurva standar nilai absorbansi standar apoB100 dikenal diplot sebagai
fungsi logaritma dari apoB100 konsentrasi standar (ng / ml) dengan menggunakan
program GraphPad Prism Software untuk windows versi 5,03. (GraphPad
Software Inc). Konsentrasi ApoB100 dalam sampel dihitung dari nilai absorbansi
yang berhubungan melalui kurva standar.
Pengukuran aktivitas PON1
Kegiatan PON1 serum ditentukan dengan alat tes kit komersial [ZMC
katalog # 0801199; Zeptometrix Corporation, Buffalo, New York (NY), Amerika
Serikat] sesuai dengan instruksi pabrik. Uji ini didasarkan pada prinsip bahwa
PON1 mengkatalisis

pembelahan fenil asetat, sehingga fenol. Tingkat

pembentukan fenol diukur dengan memantau kenaikan absorbansi pada 270 nm,
pada 25 C. Satu unit aktivitas arylesterase sama dengan 1 pM fenol yang
terbentuk per menit. Kegiatan ini dinyatakan dalam kU / L, berdasarkan koefisien
kepunahan fenol 1310 M-1cm-1 pada 270 nm pada pH 8,0 dan pada 25 C.
Sampel kosong berisi air yang digunakan untuk mengoreksi hidrolisis
nonenzimatik.

Analisis Statistik
Data dianalisis dengan menggunakan Sigma Stat (versi 2.03) perangkat lunak
statistik untuk Windows, dan nilai P <0,05 dianggap signifikan secara statistik.
Hasil
Kami melakukan analisis dua arah varians (ANOVA) untuk menentukan apakah
tiga regimen insulin yang berbeda menunjukkan perbedaan antara variabelvariabel yang dilaporkan. Analisis subkelompok tidak menemukan adanya
perbedaan antara rejimen insulin. Oleh karena itu kami mengumpulkan kelompok,
dan melaporkan data sebelum dan sesudah pengobatan insulin.
Glukosa darah dan profil lipid
Berarti glukosa darah, TC, TG dan VLDL-C tingkat secara signifikan
menurun sementara tingkat HDL-C yang meningkat secara signifikan setelah
pengobatan dengan insulin analog ditambah metformin dibandingkan dengan
sebelum tingkat perawatan (Tabel 2). Meskipun tidak signifikan, penurunan juga

diamati pada tingkat LDL-C setelah pengobatan dengan insulin analog ditambah
metformin (Tabel 2). Analisis statistik dilakukan dengan uji-t berpasangan.
Perubahan pola subfraksi LDL
Gambar 1A menunjukkan 6 tabung gel [3 sebelum pengobatan (BT) dan 3
setelah

pengobatan

(AT)

dengan

analog

insulin]

penyelesaian

berikut

elektroforesis. Migrasi elektroforesis adalah dari atas tabung ke bawah. Pemisahan


dicapai melalui ukuran partikel berdasarkan tindakan penyaringan gel. Kilomikron
tetap pemuatan gel, VLDL adalah migrasi Band paling lambat sementara HDL
bermigrasi ke jarak jauh. Partikel LDL dipisahkan di bagian tengah gel. Band
yang sesuai dengan, partikel LDL apung besar menunjukkan peningkatan yang
jelas dalam intensitas setelah pengobatan dengan insulin analog. Gambar 1B dan
1C adalah scan densitometri demonstratif dari sebelum dan setelah pengobatan
dengan insulin analog, masing-masing. Sebuah peningkatan yang signifikan
dalam LDL-1 fraksi dan penurunan yang signifikan dalam LDL-2, fraksi LDL-3
dan LDL-4 terlihat setelah pengobatan dengan insulin analog (Gambar 1B, 1C dan
Tabel 3). Analisis statistik dilakukan dengan uji-t berpasangan.
Perubahan pola HDL subfraksi
Gambar 2A menunjukkan 6 tabung gel [3 sebelum pengobatan (BT) dan 3
setelah

pengobatan

(AT)

dengan

analog

insulin]

penyelesaian

berikut

elektroforesis. Migrasi elektroforesis adalah dari atas tabung ke bawah. Pemisahan


dicapai melalui ukuran partikel berdasarkan tindakan penyaringan gel. LDL /
VLDL adalah migrasi Band paling lambat sementara albumin bermigrasi ke jarak
jauh. Partikel HDL dipisahkan di bagian tengah gel. Band yang sesuai dengan
besar-dan partikel menengah-HDL menunjukkan peningkatan yang jelas dalam
intensitas setelah pengobatan dengan insulin analog. Gambar 2B dan 2C adalah
scan densitometri demonstratif dari sebelum pengobatan dan setelah pengobatan
dengan insulin analog, masing-masing. Sebuah peningkatan yang signifikan
dalam HDL-besar (-HDL 1, -2 dan-3); HDL-menengah (HDL-4 dan -5) dan
penurunan yang signifikan dalam HDL-kecil (HDL-10) fraksi terlihat setelah

pengobatan dengan insulin analog (Gambar 2B, 2C dan Tabel 4). Analisis statistik
dilakukan dengan uji-t berpasangan.

CETP dan tingkat LCAT dan aktivitas


Data box plot grafik CETP dan konten dan aktivitas protein LCAT
ditunjukkan pada Gambar 3. Batas kotak paling dekat dengan nol menunjukkan
persentil ke-25, garis dalam kotak menandai median, dan batas kotak terjauh dari
nol menunjukkan persentil ke-75. Kumis di atas dan di bawah kotak menunjukkan
ke-90 dan ke-10 persentil.
Protein CETP (rata-rata SD) diukur setelah pengobatan dengan insulin
analog (2.32 0.51 mg / ml) meningkat secara signifikan (p <0,001)
dibandingkan dengan sebelum tingkat pengobatan (2.10 0.39 mg / ml) (Gambar
3A). Analisis statistik dilakukan dengan Wilcoxon Signed Rank Test. Demikian
pula, aktivitas CETP (rata-rata SD) diukur setelah pengobatan dengan insulin
analog (33,53 6.90 pmol / ml / hr) secara signifikan meningkat (p = 0,025)
dibandingkan dengan sebelum pengobatan (30,05 7.15 pmol / ml / hr) (Gambar
3B ). Analisis statistik dilakukan dengan uji-t berpasangan.
Tidak ada perbedaan signifikan yang diamati pada tingkat protein LCAT
(rata-rata SD) sebelum dan setelah pengobatan dengan insulin analog dengan
tingkat diukur dari 11,93 2,93 dan 12,94 3,05 mg / ml, masing-masing
(Gambar 3C). Demikian pula, tidak ada perbedaan signifikan yang diamati dalam
aktivitas LCAT (rata-rata SD) sebelum dan setelah pengobatan dengan
insulinanalogs dengan rasio diukur dari 390/470 nm intensitas emisi fluoresensi
dari 1,36 0,14 dan 1,30 0,22, masing-masing (Gambar 3D).
Apolipoprotein A1 dan B tingkat
Tingkat apolipoprotein B (rata-rata SD) diukur setelah pengobatan
dengan insulin analog (1,25 0,49 g / L) secara signifikan menurun (p = 0,006)
dibandingkan dengan sebelum pengobatan (1,63 0,37 g / L) (Gambar 4A).
Analisis statistik dilakukan dengan uji-t berpasangan.
Tidak ada perbedaan signifikan yang diamati pada tingkat protein apoA
(rata-rata SD) sebelum dan setelah pengobatan dengan insulin analog dengan
mengukur kadar 1,53 0,35 dan 1,43 0,49 g / L, masing-masing (Gambar 4B).

Kegiatan PON1
Tidak ada perbedaan signifikan yang diamati pada PON-1 aktivitas
arylesterase (rata-rata SD) sebelum dan setelah pengobatan dengan insulin
analog dengan mengukur kadar 91,43 19,33 kU / L dan 94,77 18,05 kU / L,
masing-masing (Gambar 4C).
Pembahasan
Mencapai dan mempertahankan kontrol glikemik pada pasien diabetes tipe
2 adalah menantang karena hilangnya bertahap sekresi insulin endogen dan
adanya resistensi insulin. Sebagian besar pasien tidak mampu mempertahankan
target HbA1c pada rejimen pengobatan obat antidiabetik oral [19]. Dengan
demikian, penambahan terapi insulin merupakan langkah penting untuk mencapai
kontrol glikemik jangka panjang dan mengurangi risiko komplikasi mikro dan
makrovaskular [20]. Oleh karena itu kami diganti terapi sulfonilurea dengan
analog insulin yang berbeda pada pasien yang terdaftar dalam penelitian ini.
Modifikasi dari molekul insulin telah mengakibatkan kedua analog insulin
long-acting seperti glargine [21] dan analog insulin kerja-cepat seperti aspart [22]
dan lispro [23]. Analog insulin ini dilaporkan memiliki profil farmakokinetik /
farmakodinamik ditingkatkan [24]. Pasien yang terdaftar dalam penelitian kami
menerima baik campuran lispro (50% lispro insulin protamine dan 50% lispro
insulin) dalam tiga dosis yang sama; aspart insulin (30% aspart insulin dan 70%
aspart insulin protamine) dalam dua dosis yang sama atau glargine insulin dalam
satu dosis. Telah dilaporkan bahwa analog insulin kerja-cepat memiliki durasi
yang lebih cepat dan lebih pendek onset aksi dari insulin manusia biasa,
memberikan kontrol yang lebih baik dari konsentrasi glukosa plasma postprandial
[25]. Demikian pula, glargine telah terbukti memberikan hingga kontrol glukosa
24 jam dari protamine netral Hagedorn (NPH) insulin pada penderita diabetes tipe
2 [26]. Sebuah pedoman terbaru dari AACE dan American College of
Endocrinology mencatat bahwa analog insulin menghasilkan reproduktifitas yang
lebih baik dan konsistensi antara dan di dalam pasien [27]. Dalam perjanjian
dengan studi yang dilaporkan, kami telah mengamati bahwa pengobatan dengan
insulin analog ditambah metformin mengakibatkan penurunan yang signifikan

dalam kadar glukosa darah rata-rata, seperti yang ditentukan oleh data yang
CGMS.
Penelitian ini menunjukkan untuk pertama kalinya bahwa sangat pendek
durasi terapi insulin (3 hari) secara signifikan dapat mengubah konsentrasi
lipoprotein dalam sangat buruk dikontrol tipe 2 pasien diabetes yang tidak
menerima terapi lipid. Perubahan ini mirip dengan penelitian sebelumnya insulin
tetapi studi menyelidiki masa pengobatan dari minggu ke bulan dan mata
pelajaran mereka tidak terkontrol [13,28]. Sebuah analisis lipoprotein komposisi
yang lebih rinci dilakukan dalam studi ini dibandingkan uji coba sebelumnya.
Faktor-faktor yang diukur dalam penelitian ini diharapkan dapat memberikan
kontribusi terhadap perubahan komposisi lipoprotein.
Kami telah mengamati bahwa TC, TG dan tingkat VLDL secara signifikan
menurun sementara tingkat HDL-C yang meningkat secara signifikan setelah
pengobatan dengan insulin analog ditambah metformin dibandingkan dengan
sebelum tingkat pengobatan. Temuan ini sesuai dengan penelitian sebelumnya
yang telah menunjukkan bahwa, 2 minggu CSII mencapai kontrol glikemik yang
baik dan menghasilkan perbaikan dalam parameter lipid dalam yang baru
didiagnosis pasien diabetes tipe 2 dengan kadar glukosa puasa> 200 mg / dl [13].
Penurunan TC, LDL-C dan TG tingkat dan meningkatkan HDL-C diamati setelah
CSII jangka pendek dalam melaporkan studi [13]. Hasil yang sama ditemukan
dalam penelitian lain mengevaluasi jangka panjang (30 minggu) efek CSII pada
dislipidemia tipe 2 diabetes tanpa riwayat penyakit kardiovaskular [28].
Kami telah mengamati penurunan yang signifikan sekitar 17% kadar
glukosa darah rata-rata 48 jam setelah mulai terapi insulin analog. Menurut
AACE, terapi insulin harus menargetkan tingkat HbA1c 6,5% atau kurang untuk
kebanyakan orang dewasa [29]. Tingkat diperkirakan rata-rata glukosa (mg / dl)
yang sesuai dengan tingkat HbA1c 7% dilaporkan 154 mg / dl (123-185) [30].
Meskipun pengurangan dicapai dalam kadar glukosa darah rata-rata dalam
penelitian kami (177,29 54.48 mg / dl) di atas target yang dilaporkan [29,30],
kami masih mengamati peningkatan parameter lipid seperti yang ditunjukkan
pada Tabel 2. Dengan demikian, inisiasi analog insulin Terapi telah menunjukkan
efek menguntungkan pada profil lipoprotein dalam waktu yang sangat singkat.

Kami telah melihat peningkatan yang signifikan dalam LDL-1 fraksi dan
penurunan yang signifikan dalam LDL-2, LDL-3 dan LDL-4 fraksi setelah
pengobatan dengan insulin analog. Temuan kami berada dalam perjanjian dengan
penelitian sebelumnya yang telah menunjukkan bahwa terapi insulin secara
independen dari variasi dalam kontrol glukosa darah menginduksi peningkatan
distribusi subfraksi LDL dengan pergeseran ke arah penurunan dalam LDL padat
kecil pasien diabetes tipe 2 [31].
Kami telah mengamati bahwa terapi inisiasi analog insulin menyebabkan
peningkatan yang signifikan dalam HDL-besar, HDLintermediate dan penurunan
yang signifikan dalam subfraksi HDL-kecil. Data kami ini sesuai dengan
penelitian sebelumnya yang telah melaporkan bahwa terapi insulin intensif
berhubungan dengan peningkatan subspesies HDL apung besar pasien diabetes
tipe 2 [32]. Peningkatan diamati di kedua terapi insulin-LDL 1 dan fraksi HDL
besar berikut dapat dikaitkan dengan penurunan sirkulasi trigliserida. CETP
menengahi transfer TG dari VLDL terhadap HDL dan / atau LDL dalam
pertukaran untuk kolesterol ester (CE) [33]. Penting untuk dicatat bahwa CETP
tidak mendorong trigliserida atau ester kolesterol dalam satu arah atau lainnya,
tetapi hanya protein shuttle untuk apa pun lipid tersedia [33]. Sangat mungkin
bahwa penurunan sirkulasi trigliserida mengurangi pertukaran trigliserida di
VLDL untuk ester kolesterol HDL dan LDL, dengan demikian, kembali mereka
untuk komposisi normal partikel yang lebih besar dan partikel kecil yang lebih
sedikit. Temuan kami peningkatan aktivitas CETP adalah sesuai dengan penelitian
sebelumnya yang juga telah menunjukkan bahwa pengobatan insulin peningkatan
aktivitas CETP dan ditingkatkan lipemia postprandial [34,35].
Kami telah mengamati bahwa pengobatan insulin menurun secara
signifikan tingkat apoB. ApoB dapat terdegradasi dalam menanggapi penurunan
sekresi VLDL setelah terapi insulin [36]. Ketika insulin mengikat reseptor,
reseptor diaktifkan oleh fosforilasi pada residu tirosin, yang memfosforilasi
substrat reseptor insulin 1 (IRS1) dan IRS2. Residu phosphotyrosine bertindak
sebagai situs docking untuk subunit regulasi P85 dari phosphatidylinositide 3
'kinase (PI3K) [36]. Insulin menekan produksi VLDL hati melalui aktivasi PI3K
[37]. Activated PI3K dapat diterjemahkan ke membran yang memungkinkan

pembentukan

phosphatidylinositide

(3,4,5)

trifosfat

(PIP3)

dari

phosphatidylinositide (4,5) bifosfat (PIP2). PIP3 adalah sangat bermuatan negatif


fosfolipid yang dapat mengganggu Selain TG ke VLDLm prekursor, sehingga
mengurangi pembentukan VLDL. VLDL prekursor tidak dapat menerima tetesan
lipid ditargetkan untuk degradasi dalam lisosom [38]. ApoB dapat terdegradasi
dalam menanggapi penurunan sekresi VLDL. VLDL kelebihan dan hilangnya
penekanan sekresi insulin apoB terjadi pada pasien dengan diabetes tipe 2 [38].
Kami mengamati tidak ada perbedaan yang signifikan dalam PON-1
aktivitas arylesterase setelah pengobatan dengan insulin analog. Dimurnikan
PON-1 manusia adalah salah satu komponen penting dari HDL [39]. PON-1
menghidrolisis beberapa substrat termasuk organofosfat, ester asam karboksilat,
lakton dan fosfolipid teroksidasi [40]. Sementara lebih theyears aktivitas
enzimatik dinobatkan berkaitan dengan substrat yang dibutuhkan, enzim yang
sama telah ditunjukkan untuk mengkatalisasi hampir semua arylesterase dan
paraoxonase kegiatan [41]. PON-1 kegiatan yang telah banyak diteliti adalah
mereka terhadap paraoxon (aktivitas paraoxonase) dan fenil asetat (aktivitas
arylesterase) [42]. PON-1 assay dilakukan dalam penelitian kami didasarkan pada
pembelahan fenil asetat menghasilkan pembentukan fenol.
Kesimpulan
Singkatnya, kami telah mengamati bahwa terapi inisiasi analog insulin upmengatur CETP, meningkatkan LDL-1 dan HDL-besar, menurunkan LDL-3,
subfraksi LDL-4 dan HDL kecil dalam waktu singkat. Perubahan yang diamati
dalam profil lipoprotein dan CETP terjadi meskipun penurunan kadar glukosa
darah rata-rata masih di atas nilai target yang diinginkan. Penelitian lebih lanjut
diperlukan untuk mengevaluasi mekanisme molekuler dimana analog insulin
mengubah distribusi lipoprotein dan enzim yang terkait dalam transportasi
kolesterol terbalik.