Manual de Microbiologia Clínica para O Controle de Infecção Relacionada À Assistência À Saúde

Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria ANVISA
MANUAL DE MICROBIOLOGIA
CLNICA PARA O CONTROLE
DE INFECO RELACIONADA
ASSISTNCIA SADE
Mdulo 1: Biossegurana e Manuteno
de Equipamentos em Laboratrio de
Microbiologia Clnica
Copyright 2012 Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.

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1 edio 2010
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Ficha Catalogrfica
Brasil. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
Manual de Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco Relacionada Assistncia Sade. Mdulo
1: Biossegurana e Manuteno de Equipamentos em Laboratrio de Microbiologia Clnica/Agncia Nacional
de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2013.
46p.: il.9 volumes
ISBN
1. Infeco Hospitalar Controle. 2. Infeco em Servios de Sade. 3. Microbiologia Clnica. 4. Vigilncia
Sanitria em Servios de Sade. 5. Resistncia microbiana. I. Ttulo.
SUMRIO
Apresentao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
Captulo 1: Segurana em laboratrio de Microbiologia Clnica . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . .7
1.1
Biossegurana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.2
Classificao dos laboratrios, segundo Nvel de Biossegurana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.2.1 Nvel 1 de Biossegurana (NB-1) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
1.2.4 Nvel 4 de Biossegurana (NB-4) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
1.3
Classes de agentes de Risco Biolgico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
1.4
Recomendaes de Biossegurana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
1.5
Instalaes laboratoriais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
1.6
Equipamentos de proteo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
1.6.1 Equipamento de Proteo Individual (EPI) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
1.6.2 Equipamento de Proteo Coletiva (EPC) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
1.7
Conduta em laboratrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.7.1 BPLCs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.7.2 Transporte de Amostras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.7.3 Utilizao de Cabines de Segurana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.7.4 Controle da Gerao de Aerossis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
1.8
Limpeza e desinfeco . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
1.8.1 Higienizao das mos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
1.9
Resduos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
1.10 Acidentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
1.10.1 Acidente com derramamento de Material Biolgico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
1.10.2 Quebra de tubos contendo Material Biolgico em Centrfuga . . . . . . . . . . . . . 20
1.10.3 Acidente com derramamento de Produtos Qumicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
1.11 Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
Captulo 2: Garantia da qualidade em Microbiologia

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
Introduo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
Manual de procedimentos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
Recursos humanos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
rea fsica e instalaes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
Fase pr-analtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27
2.5.1 Requisio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27
2.5.2 Coleta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27
2.5.3 Transporte e conservao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.5.4 Critrios de rejeio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.6
2.7
2.8
Fase analtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.6.1 Microbiologia geral . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.6.2 Bacteriologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
2.6.3 Procedimentos analticos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
2.6.4 Micobacteriologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
2.6.5 Micologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
2.6.6 Processos Automatizados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
2.6.7 Testes de Proficincia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Fase ps-analtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
2.7.1 Conferncia. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
2.7.2 Liberao dos laudos e notificao de resultados crticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
Mdulo 1: Biossegurana e Manuteno de Equipamentos em Laboratrio de Microbiologia Clnica
APRESENTAO
A resistncia microbiana um grave problema mundial, estando associada ao aumento
do tempo de internao, dos custos do tratamento e das taxas de morbidade e mortalidade
dos pacientes. O uso indiscriminado e incorreto dos antimicrobianos na comunidade e no
ambiente hospitalar reconhecidamente um importante fator de risco para o
aparecimento e a disseminao da resistncia microbiana.
Nesse contexto, insere-se o Laboratrio de Microbiologia, que tem como objetivo no apenas apontar o responsvel por um determinado estado infeccioso, mas tambm indicar,
atravs do monitoramento de populaes microbianas, qual o perfil dos micro-organismos
que esto interagindo com o organismo humano, possibilitando a indicao de tratamentos mais adequados. Para o desempenho satisfatrio dessa funo, fundamental que os
laboratrios de microbiologia possuam estrutura capaz de estabelecer informaes sobre
a melhor amostra biolgica, reconhecer a microbiota e os contaminantes, identificar micro-organismos associados infeco ou com propsitos epidemiolgicos, obter resultados
rpidos em casos de emergncia, realizar o transporte rpido das amostras e manter uma
educao contnua em relao aos aspectos da infeco relacionada assistncia sade.
Tendo em vista esses aspectos e considerando que a microbiologia um campo muito dinmico, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa, em cooperao com a Organizao Pan-Americana da Sade OPAS, prope a terceira reviso do Manual de
Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco Relacionada
Assistncia Sade, buscando atualizar informaes nos temas considerados essenciais e
contando com um seleto e conceituado corpo editorial. O manual composto por nove
mdulos, a saber: Mdulo 1 Biossegurana e manuteno de equipamentos em
laboratrio de microbiologia clnica; Mdulo 2 Controle externo da qualidade; Mdulo 3
Principais Sndromes In- fecciosas; Mdulo 4 Procedimentos laboratoriais: da requisio
do exame anlise micro- biolgica e laudo final; Mdulo 5 Tecnologias em Servios de
Sade: descrio dos meios de cultura empregados nos exames microbiolgicos; Mdulo
6 Deteco e identificao de bactrias de importncia mdica; Mdulo 7 Deteco e
identificao de micobactrias de importncia mdica; Mdulo 8 Deteco e identificao
de fungos de importncia m- dica e Mdulo 9 Infeces virais.
A Anvisa e a OPAS esperam com essa publicao contribuir para que os laboratrios de
microbiologia possam assimilar e alcanar novos nveis de complexidade laboratorial,
atendendo s exigncias e caractersticas prprias de cada unidade hospitalar, alm de
subsidiar a adoo de procedimentos bsicos padronizados nesses servios.
OPAS/OMS Anvisa/MS 5
Captulo 1:
Segurana em laboratrio de Microbiologia Clnica
Maria Jos Franco Landi Bartelega

Gerente da Qualidade
Diviso de Patologia Clnica do Hospital das Clnicas da
Faculdade de Cincias Mdicas da Unicamp
Captulo 1: Segurana em laboratrio de Microbiologia Clnica
Laboratrios so estabelecimentos que prestam servios especficos populao e apresentam uma diversidade de atuaes em sade que expem seus profissionais a grande variedade de agentes de riscos biolgicos, qumicos e fsicos, associados aos materiais e mtodos
utilizados.
Visando minimizar tais riscos, essencial o estabelecimento de um Programa de Biossegurana especfico, que dever dotar o laboratrio de estrutura fsica, administrativa e tcnica
compatvel com as atividades desenvolvidas, promovendo assim aes preventivas.
1 .1
Biossegurana
Conjunto de medidas destinadas a prevenir riscos inerentes s atividades dos laboratrios de assistncia, ensino, pesquisa e desenvolvimento tecnolgico, que possam
comprometer a sade dos profissionais e o meio ambiente.
A responsabilidade legal pela segurana em ambientes de trabalho cabe aos administradores, no entanto os funcionrios devem incorporar em sua rotina de trabalho
as Boas Tcnicas Microbiolgicas e as Normas de Biossegurana. (NR-32 MTE)
Deve-se designar uma pessoa ou Comisso de Biossegurana que vise:
Implementar as normas preconizadas em Biossegurana a fim de prevenir
riscos para funcionrios, alunos, pacientes e meio ambiente.
Padronizar e normatizar procedimentos que regulamentem as normas de

segurana.
Identificar e classificar reas de

risco.
Estabelecer programas de treinamento para preveno de acidentes e

monitorar acidentes de trabalho.
1 .2
Classificao dos
Biossegurana
laboratrios,
segundo Nvel de
O nvel de Biossegurana de um procedimento ser determinado segundo o agente

biolgico de maior classe de risco envolvido. Quando no se conhece a patogenicidade do agente biolgico deve-se realizar uma avaliao do risco para estimar o nvel
de conteno.
A Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) responsvel pelas atribuies relativas ao estabelecimento de normas, anlise de risco, definio dos Nveis
de Biossegurana e classificao de Organismos Geneticamente Modificados (OGM).
8 OPAS/OMS Anvisa/MS
As caractersticas fsicas, estruturais e de conteno de um laboratrio determinam o

tipo de microrganismo que pode ser manipulado em suas dependncias.
1.2.1
Nvel 1 de Biossegurana (NB-1)

Adequado ao trabalho que envolva agente com menor grau de risco
(Clas- se de Risco I) para profissionais do laboratrio e para o meio
ambiente.
Aplicao das BPLs e utilizao de EPIs.
O trabalho geralmente conduzido em bancadas abertas, no exigindo
equipamentos especiais de conteno.
Os profissionais devero ter treinamento especfico nos procedimentos
realizados e trabalhar sob superviso.
O acesso ao laboratrio ser limitado ou restrito de acordo com definio
do responsvel e no ser permitida a entrada de animais e crianas.
Procedimentos tcnicos e administrativos descritos.
O laboratrio no est separado das demais dependncias do edifcio.
Deve possuir uma pia especfica para lavar as mos.
1.2.2

Adequado ao trabalho que envolve agentes de risco moderado para os
profissionais e para o meio ambiente, em geral agentes causadores de
doenas infecciosas (Classe de Risco II).
As instalaes exigidas devem atender as especificaes estabelecidas
para o NB-1 acrescidas das seguintes exigncias:
1) autoclave disponvel para descontaminao no interior ou prxima ao
laboratrio de modo a permitir a descontaminao de todo o material
antes do seu descarte;
2) cabine de Segurana Biolgica Classe I ou II e centrfuga com caapa
protegida sempre que houver manipulao de materiais em que possa
existir a formao de aerossis.
Os profissionais devero ter treinamento especfico no manejo de agentes patognicos, ser orientados sobre os possveis riscos e trabalhar sob
superviso.
O acesso ao laboratrio ser limitado durante os procedimentos operacionais.
1.2.3

Adequado ao trabalho com microrganismos com elevado risco infeccioso
(Classe de Risco III) podendo causar doenas sistmicas srias e potencialmente letais como Mycobacterium tuberculosis, Coxiella burnetti e
Brucella spp, entre outros.
Barreiras de proteo individual devem ser utilizadas e toda manipulao
realizada em cabine de segurana biolgica classe II ou III, com filtro HEPA.
1.2.4
1 .3
Oferecer treinamento especfico aos funcionrios no manejo de agentes

patognicos e potencialmente letais, orientar sobre os possveis riscos e
trabalhar sob superviso.
Quando no houver condies especficas para o NB-3 e instalaes laboratoriais sem rea de acesso especfica, com ambientes selados ou fluxo
de ar unidirecional, as atividades de rotina e operaes repetitivas podem
ser realizadas em laboratrio com instalao NB-2, acrescidas de equipamentos de conteno e das prticas recomendadas para NB-3. Cabe ao
pesquisador principal a deciso de implementar essas modificaes, comunicando-as a CIBio e CTNBio (Biossegurana em Laboratrio de Sade
Pblica Oda, Leila, vila, Suzana et al. Braslia).
O acesso ao laboratrio ser controlado. Menores de idade no sero permitidos dentro do laboratrio.

Representa o nvel mximo de segurana. Adequado ao manuseio de
agentes infecciosos que possuem alto risco de infeco individual e de
transmisso pelo ar e sempre que o trabalho envolver OGM resultante de
organismo receptor ou parenteral classificado como classe de risco NB-4.
Responsvel tcnico tem a responsabilidade final no controle do acesso
ao laboratrio.
Classes de agentes de Risco Biolgico

Agentes biolgicos humanos e animais so divididos em classes de acordo com critrios de patogenicidade: alterao gentica ou recombinao gnica, estabilidade,
virulncia, modo de transmisso, endemicidade, consequncias epidemiolgicas,
disponibilidade de medidas profilticas e tratamento eficaz (Diretrizes Gerais para o
Trabalho em Conteno com Material Biolgico Ministrio da Sade).
Classe de Risco I
Nenhum ou baixo risco individual e comunitrio. Microrganismo que tenha pouca

probabilidade de causar enfermidades humanas e em animais.
Ex: Bacillus subtilis, Lactobacillus casei
Classe de Risco II
Risco individual moderado e risco comunitrio limitado. A exposio ao agente

patognico pode provocar doena humana ou animal, porm se dispe de
medidas eficazes de tratamento e preveno, sendo o risco de propagao
limitado.
Ex: Clostridium tetani, Staphylococcus aureus, Cndida albicans,
Schistosoma mansoni, Plasmodium etc.
Classe de Risco III
Risco individual elevado e risco comunitrio limitado. A exposio pode causar

doenas graves ao homem podendo propagar-se de uma pessoa infectada para
outra, entretanto existe profilaxia e/ou tratamento.
Ex: Bacillus anthracis, Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Histoplasma,
Toxoplasma gondii, Trypanossoma cruzi, virus da Hepatite, HIV.
Classe de Risco IV
Elevado risco individual e comunitrio. Os agentes patognicos representam

grande ameaa para as pessoas e animais, com fcil propagao de um indivduo
a outro, direta e indiretamente, no existindo profilaxia nem tratamento.
Ex: vrus de febres hemorrgicas, vrus Ebola, certos arbovrus etc.
Classe de Risco V
Elevado risco de causar doena animal e disseminao no meio ambiente.

Aplica-se a agentes de doena animal, no existente no Pas e que, embora no
sejam patgenos de importncia para o homem, podem gerar graves perdas
econmicas. Os agentes devem ter sua importao proibida e manipulados em
laboratrio de conteno mxima NB-4.
12
OP
AS
/O
M
S
An
vis
a/
M
S
1 .4
NB
Recomendaes de Biossegurana
Agentes
Prticas
Barreiras de Conteno e
Equipamentos de segurana
Instalaes
Pouca probabilidade de causar

doenas em adultos sadios
Boas Prticas Microbiolgicas

(BPLs)
Equipamento de Proteo
Individual (EPI) avental e luvas
Bancada aberta e pia para a

lavagem das mos
Agentes associados a doenas

Risco individual moderado e
limitado para comunidade
Vias de transmisso: leso
cutnea, ingesto, exposio de
mucosa
NB-1 acrescido de:

Acesso limitado
Sinalizao de risco
Manual de biossegurana
definindo polticas de vigilncia
mdica e necessidade de
descontaminao dos resduos
Barreiras Primrias: Cabine de

NB-1 acrescido de:
Segurana Classe I ou II, usada
Autoclave disponvel
para manipulao de todos
materiais que possam formar
aerossol ou que haja risco de
respingo.
EPI: avental, luvas e protetor facial
quando necessrio
Agentes que provocam infeces

graves ou potencialmente letais.
Risco individual alto e limitado
para comunidade. Transmisso
potencial por formao de
aerossis
NB-2 acrescido de:

Acesso controlado
Descontaminao de todo
resduo
Descontaminao do avental
antes da lavagem
Banco de soro de funcionrios na
admisso
Barreiras Primrias: Cabine de

Segurana Classe I ou II, usada
para manipulao de todos os
materiais
EPI: avental, luvas, mscaras
quando necessrio
NB-2 acrescido de:

Separao fsica de corredor de
acesso
Porta com fechamento
automtico, dupla porta de
acesso
Ar no recirculado
Presso negativa no laboratrio
Agentes com alto risco de causar

doena letal
Risco individual e para
comunidade elevado
Ocorrncias de infeces
causadas por transmisso por
aerossis ou risco de transmisso
desconhecido
NB-3 acrescido de:

Trocar de roupa antes de entrar
no laboratrio
Tomar banho na sada
Todo material deve ser
descontaminado antes de sair do
laboratrio
Barreiras Primrias: Manipulaes

conduzidas em cabine de
Segurana Classe II B ou Classe III
NB-3 acrescido de:

Construo separada ou rea
isolada
Sistema de exausto
Fornecimento de ar e vcuo
Descontaminao
Ca
pt
ul
o
1:
Se
gu
ra
n
a
em
lab
or
at
rio
de
Mi
cr
ob
iol
og
ia
Cl
nic
1 .5
Instalaes laboratoriais
NB
Instalaes
Fcil limpeza e descontaminao.

Superfcie das bancadas impermevel e resistente a cidos, lcalis, solventes e calor.
Espao entre bancadas e equipamentos que permita a limpeza.
Pia para lavagem das mos.
NB-1 acrescida de:

Autoclave para descontaminao (dentro ou prximo).
NB-2 acrescido de:

Separado de reas de trnsito.
Sistema de dupla porta.
Superfcies internas, pisos e tetos resistentes a gua.
Portas com fechamento automtico.
Sistema de ar independente, ventilao unidirecional, sem recirculao de ar e filtrado
com filtro HEPA para eliminao.
Linhas de vcuo protegidas por sifo contendo desinfetante e filtro HEPA ou semelhantes.
NB-3 acrescido de:

Cmara de entrada e sada de pessoal separada por chuveiro.
Sistema de autoclave de dupla porta, cmara de fumigao.
Paredes, tetos e pisos construdos com sistema de vedao interna.
Sistema coletor de descontaminao de lquidos.
O ar deve ser insuflado atravs de filtros HEPA e eliminado para o exterior atravs de
dutos de exausto.
OBS: As instalaes devero ser verificadas uma vez por ano e filtros substitudos quando necessrio.
1 .6
Equipamentos de proteo
Considera-se Equipamento de Proteo Individual (EPI) todo dispositivo ou produto,
de uso individual utilizado pelo trabalhador, destinado proteo de riscos suscetveis de ameaar a segurana e a sade no trabalho (NR 6 MTE). regulamentado pela
Portaria 485, de 11 de novembro de 2005, que aprova a NR 32 (Segurana e Sade no
Trabalho em Estabelecimentos de Sade) do Ministrio do Trabalho, competindo ao
profissional us-los e conserv-los.
1.6.1
Equipamento de Proteo Individual (EPI)

Avental: uso para todos que trabalham em ambiente laboratorial, confeccionado em algodo, com manga longa e punho sanfonado, na altura dos
joelhos e usado abotoado. No usar fora da rea de trabalho, nem
guardar junto com objetos pessoais. Para laboratrios NB-3, recomendase que o abotoamento do avental seja nas costas. H necessidade de
descontaminao antes da lavagem. Apesar do avental de algodo no
ser conside- rado EPI por no ter n de CA, seu uso deve ser obrigatrio.
Avental Impermevel: evita a contaminao do vesturio.
1.6.2
Luvas: uso para todos que trabalham em ambiente laboratorial, na manipulao de amostras biolgicas, preparo de reagentes, lavagem de materiais, atendimento ao paciente. Descartar sempre que estiverem contaminadas ou quando sua integridade estiver comprometida.
. Nitrilica: usadas em trabalhos gerais, preparo de solues, lavagem de
materiais.
. De latex ou silicone descartvel: usadas em procedimentos que necessitem de proteo contra material biolgico. Devem ser desprezadas aps uso.
Kevlar: usadas para trabalhar em baixas ou altas temperaturas (autoclaves e estufas e freezer a 80).
Mscaras e Respiradores: proteo de boca e nariz contra respingos e
inalao de partculas em aerossol e substncias qumicas volteis e txicas.
. Mscara N-95: composta de 4 camadas de fibras sintticas impermeveis a fludos, com densidade e porosidade capazes de atuar como
bar- reira a microrganismos transportado pelo ar (aerossis) com
eficincia de filtrao maior ou igual a 95%/ partculas de 0,3 m.
. Respirador PFF2 + VO: usado quando da manipulao de reagentes
qumicos volteis.
culos de Proteo: destinado proteo dos olhos contra respingos de
material biolgico, substncias qumicas e partculas.
Protetor Facial: destinado proteo da face contra respingos de material biolgico, substncias qumicas e partculas. Deve ser leve, resistente,
com visor em acrlico.
Sapatos: devem ser fechados, evitando-se assim impactos e respingos.
Equipamento de Proteo Coletiva (EPC)

Cabine de Segurana Biolgica: o principal equipamento de conteno fsica para agentes infecciosos. Protegem o material e o profissional,
na manipulao de materiais biolgicos altamente infectantes, substncias txicas e cultura de clulas. Cumprir os prazos de reviso e troca de
filtros. As cabines devem estar em local de pouco trnsito e distantes de
portas. Existem trs tipos de cabine de segurana biolgica (Classes I, II e
III).
. Classe I: uma cabine em que o fluxo de ar ocorre de fora para dentro,
pela abertura frontal, sem recirculao do ar. O ar da cabine passa por
um filtro HEPA antes de ser liberado para o interior do laboratrio.
Es- sas cabines protegem o operador, mas no o material que est
sendo manipulado e podem ser usadas quando se est trabalhando
com microrganismos de baixo ou moderado risco.
Captulo 1: Segurana em laboratrio

Mdulo de
1: Biossegurana
Microbiologia Clnica
e Manuteno de Equipamentos em Laboratrio de Microbiologia Clnica
Classe II: uma cabine com abertura frontal na qual uma parte do ar
recirculado. Esse tipo de cabine protege o operador, o material a ser
manipulado e o meio ambiente. Existem dois tipos de cabine classe II:
1) Classe II A: 30% de ar ambiente entra pela abertura frontal, 70%
recirculado para o interior da cabine passando por um filtro HEPA
e 30% exaurido para dentro ou fora do laboratrio passando por
filtro HEPA. Usadas na ausncia de substncias qumicas volteis, radioativas ou txicas.
2) Classe II B: 70% de ar ambiente entra pela abertura frontal, 30%
recirculado para o interior da cabine passando por um filtro HEPA e
70% exaurido para fora do laboratrio atravs de outro filtro
HEPA, por um sistema
de exausto. So indicadas para
manipulao de cultura de micobactrias
e com algumas
substncias txicas, volteis e/ou radioativas.
. Classe III: uma cabine hermeticamente fechada, impermevel a gases,
e todo o trabalho realizado com luvas de borracha que esto presas
cmara. O ar que entra passa por um filtro HEPA e o ar que sai pelo
exaustor passa por dois filtros HEPA dispostos sequencialmente.
Todos os equipamentos necessrios (centrfuga, incubadora etc.)
devem estar dentro da cabine. indicada para o trabalho com
microrganismos de alto poder infectante. Oferece o mais alto grau de
proteo ao operador e ao meio ambiente.
Lava-olhos: usado quando ocorrem acidentes onde haja contato de material biolgico ou substncia qumica, com os olhos e/ou a face. Os profissionais devem estar treinados quanto ao seu uso e as orientaes localizadas prximas ao equipamento. Manter o acesso facilitado.
Chuveiro de Segurana: usados quando ocorrem acidentes com derramamento de grande quantidade de material biolgico ou substncia qumica sobre as roupas e pele do profissional, ou quando as roupas estiverem em chamas. Os profissionais devem ser treinados quanto ao seu uso
e as orientaes localizadas prximas ao equipamento. Manter o acesso
facilitado.
Proteo de Linha de Vcuo: evita contaminao do sistema de vcuo
com aerossis e fluidos derramados.
Autoclave: esterilizao por calor eficaz, tornando material infeccioso seguro para ser eliminado ou reutilizado.
Garrafas com Tampa de Rosca: produz confinamento eficaz contra aerossis e derrames.
Microincineradores de ala: gs ou eletricidade tm escudo de vidro
ou cermica que minimizam salpicos ou borrifos quando se esterilizam as
alas.
.
15 OPAS/OMS
Anvisa/MS
1 .7
Conduta em laboratrio
O diretor e/ou coordenador do laboratrio responsvel por assegurar a implementao das Normas de Biossegurana e as Condutas em Laboratrio.
Programa de Preveno de Risco Ambiental (PPRA) avaliado anualmente (NR-
32
Ministrio do Trabalho).
Exame pr-admissional e peridico (Clnico e Laboratorial) Programa de

Controle
Mdico de Sade Ocupacional (PCMSO) anual.
Programa de Vacinao atualizado.
Registro de doenas e acidentes de trabalho.
BPLCs (Boas Prticas em Laboratrio Clnico) implantadas e seguidas.
Acesso limitado ao laboratrio.

1.7.1
BPLCs
Proibido comer, beber, fumar, guardar alimentos e aplicar cosmticos na
rea tcnica.
Prender os cabelos e evitar o uso de bijuterias.
vedado o uso de calados abertos (chinelos e sandlias).
Toda amostra biolgica deve ser considerada potencialmente contaminada.
Obrigatrio o uso de EPIs.
Proibido pipetar com a boca.
Obrigatria a descontaminao das bancadas de trabalho antes e aps o
desenvolvimento das atividades.
Proibido reencapar e entortar agulhas aps o uso.
Nunca manipular materiais no identificados.
Segregar e acondicionar adequadamente resduos biolgicos, qumicos
e ionizantes.
Depositar todo material contaminado em recipientes apropriados para
autoclavao.
Higienizar sempre as mos.
1.7.2
Transporte de Amostras
Utilizar
caixas rgidas preferencialmente providas de tampas
higienizveis, contendo estantes que permitam que os frascos
permaneam na posio vertical, evitando acidente por derramamento.
Devem ser resistentes a desinfetante qumico ou calor. Devem ser
lavadas frequentemente e sempre que ocorrer derramamento.
1.7.3
Utilizao de Cabines de Segurana
Ligar a cabine e a luz 10 a 15 minutos antes do uso.
1.7.4
Controle da Gerao de Aerossis

A manipulao de microrganismos, sangue, fludos orgnicos, p e substncias qumicas poder levar formao de aerossis, podendo contribuir
para ocorrncia de enfermidades ocupacionais. Algumas operaes
contribuem para formao de aerossis.
1 .8
Fechar as portas do laboratrio e evitar circulao de pessoas durante o

uso da cabine.
Colocar os equipamentos, meios de cultura, vidrarias etc. no plano de atividade da rea de trabalho.
Limpar todos os objetos antes de introduzi-los na cabine e organizar os
materiais de modo que no se misturem os itens limpos e contaminados.
Bicos de Bunsen no devem ser utilizados dentro da cabine, pois o calor
pode acarretar danos ao filtro HEPA e interromper o fluxo laminar de ar,
causando turbulncia.
Usar pipetador automtico.
Conduzir as manipulaes no centro da cabine.
Minimizar os movimentos dentro da cabine.
Terminado o trabalho, a superfcie de trabalho da cabine deve ser limpa
com desinfetante apropriado.
Deixar a cabine ligada 10 a 15 minutos antes de deslig-la.
Fazer controle da contagem de tempo do uso das lmpadas UV, e de utilizao da cabine para fim de manuteno e troca do pr-filtro.
Uso de agitadores.
Remoo de tampas de borracha, de rosca ou de algodo de tubos de
ensaio.
Flambagem de alas de maneira inadequada.
Inoculao de culturas com pipeta ou ala de forma inadequada.
Remoo de meio de cultura lquido com seringa e agulha.
Destampar frasco de cultivo ou suspenso de lquidos imediatamente
aps agit-lo.
Romper clulas com ultrassom.
Soprar a ltima gota de cultivo ou substncia qumica de uma pipeta.
No vedar adequadamente frascos de substncias txicas volteis.
Limpeza e desinfeco
As superfcies contaminadas podem servir como reservatrio de agentes patognicos, mas normalmente no so associadas diretamente transmisso de infeces
para Profissionais da rea da Sade ou pacientes. Mesmo diminuindo o impacto desOPAS/OMS Anvisa/MS 17
sa transmisso atravs da higienizao das mos, a realizao da limpeza e desinfeco das superfcies fundamental para a reduo da incidncia de infeces.
Os fatores que influenciam na escolha do procedimento de desinfeco das
superfcies so: a) natureza do item a ser desinfetado; b) nmero de microrganismos
presentes; c) resistncia do microrganismo aos efeitos do germicida; d) quantidade de
matria or- gnica presente; e) tipo e concentrao do germicida usado; f ) durao e
temperatura do contato com o germicida; g) as especificaes e indicaes de uso do
produto pelo fabricante.
Eficincia dos agentes qumicos frente aos tipos comuns de microrganismos
Bactria
gram (+)
Bactria
gram (-)
Bacilo
Tuberculose
Esporo
Vrus
Fungo
Sabo
Detergente
Quaternrio de amnia
Cloro
Comp. Fenlicos
Hexaclorofeno
lcoois
Glutaraldedo
Nveis: 3 = Bom
2 = Satisfatrio
Desinfetante
Fonte:
1.8.1
0 = No ativo
Higienizao das mos

Mos contaminadas podem ser as principais vias de transmisso de infecco. O simples ato de lavar as mos com gua e sabo lquido, visando a remoo de bactrias transitrias e algumas residentes, como tambm clulas
descamativas, pelos, suor, sujidades e oleosidade da pele, contribui para a
diminuio do risco de infeco.
18 OPAS/OMS
Anvisa/MS
1 = Insatisfatrio
Segurana no Ambiente Hospitalar, Ministrio da Sade
Abrir a torneira e molhar as mos sem encostar-se pia.

Ensaboar as mos com sabo lquido. Friccionar as mos por cerca de 30
segundos, realizando todos os movimentos a seguir:
a) friccione circularmente palma com palma;
b) friccione circularmente dorso com palma;
c) lavar os espaos interdigitais deslizando uma mo sobre a outra;
d) friccione as articulaes de uma mo sobre a palma da outra;
e) lave o polegar com auxlio da outra mo;
1 .9
f ) friccione circularmente as unhas (pontas dos dedos) na palma da outra

mo;
g) friccionar os pulsos com a palma da mo.
Enxaguar as mos retirando todo o resduo de sabo.
Enxugar as mos com papel toalha e fechar a torneira utilizando o mesmo papel (se a torneira no for com acionamento automtico). Torneiras
manuais devem ser mantidas abertas at o trmino da lavagem das mos.
Resduos
O laboratrio responsvel pelo correto gerenciamento de todos os resduos gerados, atendendo as normas e exigncias legais, desde o momento de sua gerao at
seu destino final.
Os Resduos de Servios de Sade (RSS), segundo a RDC n 306 de 2004 da Anvisa,
so classificados em cinco grupos, a saber:
Grupo A: resduos com a possvel presena de agentes biolgicos que, por suas
caractersticas, podem apresentar risco de infeco.
Grupo B: resduos contendo substncias qumicas que podem apresentar risco

sade pblica ou ao meio ambiente, dependendo de suas caractersticas de inflamabilidade, corrosividade, reatividade e toxicidade.
Grupo C: quaisquer materiais resultantes de atividades que contenham radionucldeos em quantidades superiores ao nvel de iseno estabelecida pelas normas
da Comisso Nacional de Energia Nuclear (CNEN).
Grupo D: resduos que no apresentam risco biolgico qumico ou radiolgico

podendo ser equiparado a resduo domstico, passvel de segregao para
reciclagem.
Grupo E: materiais perfurocortantes ou

escarificantes.
Num laboratrio de Microbiologia, todos os resduos gerados como culturas e estoques de microrganismo, meios de cultura e instrumentais utilizados para transferncia, inoculao ou mistura de culturas, amostras biolgicas, devem ser acondicionados de maneira compatvel com o processo de tratamento a ser utilizado, que poder
ser um processo fsico ou outro que venha a ser validado para obteno de reduo
ou eliminao da carga microbiana.
Se o processo utilizado no promover a descaracterizao fsica das estruturas, o
mesmo dever ser acondicionado em saco branco leitoso com simbologia de
substncia infectante conforme NBR 7500 da ABNT que ser substitudo sempre que
atingirem
2/3 de sua capacidade ou pelo menos uma vez ao dia.
Havendo descaracterizao fsica das estruturas, podem ser acondicionados como

resduos do Grupo D.
Materiais perfurocortantes devem ser descartados em recipientes rgidos, resistentes
punctura, ruptura e vazamento, devidamente identificados e autoclavados antes
do descarte.
Os instrumentos de trabalho a serem reutilizados devero ser colocados em recipientes preferencialmente plsticos contendo soluo desinfetante e permanecer o tempo estabelecido pelo fabricante para posterior autoclavagem, lavagem e reutilizao.
1 .10 Acidentes
1.10.1
Acidente com derramamento de Material Biolgico

Isolar a rea atingida.
Impedir a manipulao no local por pelo menos 30 minutos.
Usar EPIs.
Colocar papel toalha sobre o material derramado e sobre o mesmo, soluo de hipoclorito de sdio a 2%, ou cloro ativo, aguardar 15 minutos.
Recolher em recipiente com saco para resduo infectante ou saco autoclavvel as toalhas de papel, luvas e todo material usado na descontaminao.
Estilhaos de vidro ou plstico devero ser recolhidos em caixa de
perfurocortante.
Refazer a descontaminao da rea com soluo de hipoclorito de sdio
a 2%.
1.10.2
Quebra de tubos contendo Material Biolgico em Centrfuga

Desligar a centrfuga e manter fechada por 30 minutos para disperso de
aerossis:
Usar EPIs.
Retirar estilhaos com auxlio de pina e descartar em caixa de perfurocortante.
Limpar caapas, pinos e rotor com soluo de hipoclorito de sdio a 2%.
Limpar internamente a centrfuga com gaze embebida com soluo de
hipoclorito de sdio a 2% e aps com pano embebido em gua e sabo.
Descartar todo o material usado na descontaminao em recipiente com
saco para resduo infectante.
1.10.3
Acidente com derramamento de Produtos Qumicos

Utilizar EPIs.
20 OPAS/OMS
Anvisa/MS
Conter o lquido derramado em rea reduzida.

Cobrir o resduo com vermiculina ou areia e aguardar sua absoro.
Recolher todo o resduo e o material utilizado para limpar a rea em saco
plstico preto para posterior descarte.
1 .11 Bibliografia
ISENBERG,H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook. American Society for
Microbiology, Washington, D.C., 1992.
Biossegurana no Laboratrio Clnico (Normas Brasileiras ABNT) CTN Bio.
FLEMING, D., Richardson, J. H., Tulis,J. J., Wesley,D., Laboratory Safety Principles and
Practices. ASM Press, USA 2 ed., 1995.
ODA, L. M. Capacity Building Programer on Biosafety A guide to supervisors, RJ 1998.
ODA, L. M., vila, S.M. Biosssegurana em Laboratrio de Sade Pblica. Ministrio da Sade
1998.
TEIXEIRA, P, VALLE, S. Biossegurana Uma Abordagem Multidisciplinar FIOCRUZ Rio de
Janeiro 1996.
OPLUSTIL,C. P., ZOCCOLI,C. M., TABOUTI, N. R., SINTO, I. S., Procedimentos Bsicos em
Microbiologia Clnica.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th Edition.
Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio 3 edio OMS.
MINISTRIO DA SADE Manual de Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica para o
Controle de Infeco Hospitalar. Secretaria Nacional de Assistncia Sade 1991.
MINISTRIO DO TRABALHO Portaria n 458, de 11 de novembro de 2005 Norma
Regulamentadora n 32 Segurana e Sade no Trabalho em Estabelecimentos de Sade.
MINISTRIO DA SADE RDC n 306, de 07 de dezembro de 2004 Regulamento
Tcnico para Gerenciamento de Resduos de Sade. Anvisa.
MINISTRIO DO MEIO AMBIENTE Resoluo n 358, de 29 de abril de 2005 Tratamento e
Disposio Final dos Resduos dos Servios de Sade CONAMA.
Captulo 2:
Garantia da qualidade em Microbiologia
Profa Dra Ana Lucia Roscani

Calusni
Profa Dra Paula Virginia Bottini
Diviso de Patologia Clnica do Hospital das Clnicas da
Faculdade de Cincias Mdicas da Unicamp
2 .1
Introduo
Um Servio de Microbiologia pode compreender diversos setores, dependendo da
forma de estruturao da rea. De maneira geral podemos subdividir a microbiologia
em Microbiologia Geral, Bacteriologia, Micobacteriologia, Micologia alm de Virologia e Parasitologia, sendo que os dois ltimos habitualmente constituem servios separados na maioria dos laboratrios clnicos.
O laboratrio clnico de Microbiologia responsvel por providenciar informao
precisa e relevante quanto ao diagnstico do paciente. O valor e a preciso clnica
das anlises do material clnico e o respectivo isolamento do(s) microrganismo(s) so
dependentes do programa de qualidade que, por sua vez, avalia a qualidade do material, documenta a validade do mtodo aplicado, monitora a performance dos procedimentos, reagentes, meios, instrumentos e do indivduo que executou a anlise e
verifica os resultados do teste quanto aos erros e relevncia clnica. Um programa de
qualidade efetivo depende de um processo de avaliao contnuo e do seu constante
aprimoramento.
Os principais erros em Microbiologia incluem tipo de amostra inadequada para o
exame a ser realizado, frascos de coleta no estreis, o no uso de meios de transporte adequados, demora no transporte, uso de meios de cultura no apropriados,
informao incorreta dos achados, desconsiderar um achado na anlise, desconhecimento do papel dos interferentes e no analisar todos os achados em conjunto.
2 .2
Manual de procedimentos
Todos os laboratrios devem possuir um manual de procedimentos atualizado e disponvel na rea de trabalho. Esses procedimentos operacionais (POPs) tm o objetivo
de padronizar e minimizar a ocorrncia de desvios na execuo de tarefas fundamentais para a qualidade do exame, independentemente de quem as faa. Assim, garante-se que sejam tomadas as aes na fase pr-analtica, analtica e ps-analtica para
assegurar que a qualidade de seus exames seja a mesma, de uma rodada para a outra,
de um turno para outro, de um dia para outro, aumentando-se a previsibilidade de
seus resultados e minimizando as variaes causadas por impercia e adaptaes aleatrias da metodologia.
Todos os POPs do laboratrio contm, no mnimo, as seguintes informaes:
Nome
do
laboratrio
Ttulo
Identificao, assinatura e data da elaborao, reviso e aprovao do

POP
Nmero da verso
atual
Nmero
do
documento
Abrangncia
distribuio
Nmero de
cpias
Princpio do
teste
Aplicao
clnica
Amostra analisada (tipo de amostra e suas condies

necessrias)
Padres, controles, reativos e outros

insumos
Equipamentos (uso, calibrao e manuteno

preventiva)
Passo a passo do ensaio (fase analtica

detalhada)
Clculos (quando aplicvel: converso de unidades ou aplicao de

fatores)
Controle da Qualidade (externo e interno com periodicidade e faixa de

aceitao de valores)
Interferentes e reaes
cruzadas
Valores de referncia (referentes populao

atendida)
Linearidade, limites de deteco e limitaes do mtodo (que devero estar

con- gruentes com as necessidades do usurio: sensibilidade, robustez contra
fatores externos, incertezas de medio etc.)
Interpretao
dos
resultados
Referncias bibliogrficas (fontes dos dados obtidos no

procedimento)
2 .3
Recursos humanos
O dimensionamento do quadro de pessoal leva em conta algumas caractersticas dos
laboratrios, tais como: nmero de amostras processadas por dia, perfil dos pacientes atendidos, presena ou no de atividade cientfica e/ou didtica concomitante,
necessidade de superviso constante, alm do horrio de funcionamento e prazo determinado para liberao dos laudos.
Em termos de qualificao recomenda-se que os ensaios microbiolgicos sejam realizados e supervisionados por pessoal experiente, qualificado em microbiologia ou
equivalente. A gerncia do laboratrio tem o papel de garantir que todo pessoal te-
nha recebido treinamento adequado para o desempenho competente de ensaios e

operao de equipamentos. Isso inclui treinamento em tcnicas bsicas, tais como
semeadura em placas, contagem de colnias, trabalhos em condio de assepsia etc.,
com o uso de critrios para determinar nveis de aceitao. O pessoal do laboratrio
somente pode realizar os ensaios se for reconhecidamente capacitado para faz-lo
ou se estiver sob superviso adequada. A capacitao contnua deve ser monitorada,
sendo capaz de detectar necessidades de reciclagem, cuja periodicidade necessita
ser estabelecida e documentada. A interpretao dos resultados de ensaio para iden-
tificao e verificao de microrganismos fortemente relacionada com a experincia do analista e deve ser monitorada regularmente.
Vale lembrar que importante que o pessoal que realiza ensaios que exigem avaliao de cores seja testado com relao a possvel dificuldade de discriminao destas.
Isso no significa que pessoas com dificuldade de discriminao de cores no possam
atuar em microbiologia, mas apenas que devem exercer outras funes compatveis
com discromatopsias.
2 .4
rea fsica e instalaes

A rea fsica deve ser suficiente para permitir que as reas de trabalho sejam mantidas
limpas e arrumadas, sendo o espao proporcional ao volume de anlises realizadas
e organizao interna do laboratrio. Dependendo dos tipos de ensaio realizados,
h necessidade de o acesso ao laboratrio microbiolgico ser restrito ao pessoal autorizado.
O planejamento da rea fsica de um laboratrio de microbiologia necessita atender
a alguns requistos bsicos:
Fluxo de trabalho que minimize riscos de contaminao cruzada. Para tanto
pode-se executar as rotinas de maneira sequencial ou separando atividades por tempo
ou espao. So consideradas necessrias reas independentes para preparao
de meios de cultura, pesquisa e cultura de micobatrias e fungos.
Ventilao e temperatura apropriada. Isso pode ser obtido por ventilao

natural ou forada ou pelo uso de um condicionador de ar.
Uso de filtros apropriados quando do uso de condicionadores de ar,

inspeciona- dos, conservados e substitudos de acordo com o tipo de trabalho
realizado. A temperatura deve ser adequada aos procedimentos realizados e ao
fluxo de trabalho da rea, mantendo-se registros dirios de sua variao.
Iluminao adequada. No se recomenda apenas insolao direta, pois esta

muito varivel. Recomenda-se que o controle da iluminao seja setorial para
que possa ser regulada para as diversas atividades que requerem maior ou menor
incidncia de luz.
Programa de limpeza documentado para instalaes, equipamentos e

superfcies
de laboratrio, bem como um procedimento para lidar com derramamentos.
2 .5
Fase pr-analtica
2.5.1
Requisio
Para garantir a qualidade do exame, essencial que as requisies para anlises microbiolgicas contenham algumas informaes adicionais relevantes, tais como origem da amostra, tipo de infeco, microrganismo esperado,
uso de antimicrobianos, presena de imunodeficincia, entre outras.
2.5.2
Coleta
A coleta da amostra depende da anlise a ser realizada. No manual de coleta
constam todas as informaes necessrias para coleta dos diversos materiais
biolgicos (tais como escarro, urina, secrees, feridas, sangue, entre
outros), incluindo o procedimento detalhado para sua obteno, tempo
mximo para entrega ao laboratrio aps a coleta, meios de transporte
utilizados (quando apropriado) e mtodos de preservao da amostra em
caso de demora para processamento. Como frequentemente amostras para
exames microbiolgicos so coletados por pessoal externo ao laboratrio
(ex: mdicos e equipe de enfermagem), necessria a existncia de
orientaes especficas sobre conservao, manuseio seguro e transporte
dos materiais biolgicos para o laboratrio.
No caso de lquido cefalorraquidiano (LCR), este deve ser coletado em frasco
estril, sem gel separador e sem a adio de qualquer tipo de conservante.
O volume a ser coletado varia de acordo com a idade e as condies do paciente.
Da mesma forma, material proveniente de derrames cavitrios tambm so
coletados em frasco estril sem gel separador e sem a adio de qualquer
tipo de conservante. Grandes volumes de amostra podem ser tambm encaminhados em frascos de hemocultura pois a positividade das culturas aumenta quando um volume maior utilizado.
Para realizao de urocultura, deve-se coletar uma amostra isolada de urina,
jato mdio aps assepsia, tendo o paciente mantido de duas a quatro horas
de estase vesical. Essa amostra pode ser randmica (coletada a qualquer momento do dia) ou na primeira urina da manh.
No caso de hemoculturas, geralmente duas coletas so suficientes, com
amostras obtidas antes do pico febril e com um intervalo mnimo de 15 a
20 minutos entre as punes. Havendo solicitao mdica de uma terceira
amostra esta pode obtida aps 15 a 20 minutos da coleta anterior ou prazo
de at 24 horas. O volume de sangue coletado uma das variveis mais crOPAS/OMS Anvisa/MS 27
Captulo 2: Garantia da qualidade

Mdulo
em Microbiologia
1: Biossegurana e Manuteno de Equipamentos em Laboratrio de Microbiologia Clnica
ticas para a positividade do exame. Quanto maior o volume coletado maior

a probabilidade de positividade, respeitando-se sempre o volume padronizado para cada frasco.
No caso de pacientes com dados clnicos e achados radiolgicos sugestivos
de tuberculose, recomenda-se que as amostras de escarro para pesquisa e
cultura para micobactrias sejam coletadas preferencialmente em trs dias
consecutivos ou alternados (3 amostras matinais).
2.5.3
Transporte e conservao
Aps a coleta, as amostras necessitam ser encaminhadas o mais rapidamente possvel ao laboratrio a fim de eliminar possvel crescimento da microbiota normal. O objetivo primrio no transporte de amostras para diagnstico laboratorial consiste em manter a integridade do material biolgico,
evitando-se a deteriorao. Deve-se evitar condies ambientais adversas
como exposio ao frio e calor intensos ou dessecamento excessivo. Para
minimizar os riscos aos transportadores necessria a utilizao de
recipientes adequados, isotrmicos, higienizveis, impermeveis, com
tampa e devidamente sinalizados para material biolgico.
Para pesquisa de BAAR e cultura de BK as amostras devem ser entregues ao
laboratrio prontamente, idealmente dentro de 30 minutos, ou serem refrigeradas dentro da primeira hora aps a coleta e entregues ao laboratrio em
at 48 horas aps a coleta.
2.5.4
2 .6
Critrios de rejeio
Os critrios de rejeio podem variar para cada laboratrio, mas obrigatoriamente incluem: requisio incompleta ou ilegvel, material mal identificado
ou com contaminao visvel a olho nu, material coletado em frascos no
estreis ou com conservantes e amostras insuficientes. Outro critrio de rejeio inclui amostras inadequadas para realizao do teste solicitado (ex:
sonda Foley, material de colostomia, etc.).
Fase analtica
2.6.1
Microbiologia geral
Reagentes
Os reagentes ou insumos preparados ou aliquotados pelo laboratrio devem conter em seus rtulos: nome, concentrao, nmero do lote (se aplicvel), data de preparo, identificao do responsvel pelo preparo (quando
28 OPAS/OMS
Anvisa/MS
aplicvel), data de validade, condies de armazenamento, alm de informaes referentes a riscos potenciais e precaues de segurana. Da mesma
forma, todos os reagentes, kits e meios de cultura comerciais necessitam de
armazenamento segundo as orientaes do fabricante e devem ser utilizados dentro do prazo de validade.
Os laboratrios so responsveis por assegurar que a qualidade dos reagentes utilizados seja apropriada para o ensaio em questo. A verificao da
adequao de cada lote de reagentes crticos para o ensaio, inicialmente e
durante sua validade, realizada atravs do uso de microrganismos-controle
positivos e negativos que sejam rastreveis a colees de culturas nacionais
ou internacionais reconhecidas. Havendo mltiplos componentes em um
conjunto de reagentes (kit), os diferentes componentes sero utilizados apenas com conjuntos de mesmo lote, a no ser que o fabricante permita o uso
interlotes.
O desempenho dos reagentes sempre avaliado antes ou durante a sua colocao em uso. Para as pesquisas diretas, o uso de materiais de referncia
ou o teste em paralelo dos reagentes novos versus antigos so aceitveis e
seus resultados so documentados apropriadamente. No caso de pesquisas
diretas de antgenos em amostras, por meio de conjuntos diagnsticos (kits)
dotados de controles internos, recomenda-se testar tambm controles independentes, um positivo e um negativo (organismo ou extrato antignico)
com resultados documentados para cada novo lote ou para cada nova partida recebida. Os controles internos fornecidos pelo fabricante podem ser
usados da em diante. No havendo controles internos como parte integrante dos kits deve-se testar um controle positivo e um negativo (organismo ou
extrato antignico) a cada dia em que se analisam amostras de pacientes.
Para painis ou baterias, so usados controles para cada antgeno bacteriano
pesquisado. Para testes complexos, que incluem uma fase de extrao, o sistema verificado a cada dia de uso por meio de um organismo sabidamente
positivo.
Equipamentos
Os equipamentos existentes no laboratrio dependem da complexidade
e da demanda dos servios. Os equipamentos, sejam eles nacionais ou importados, devem estar regularizados junto a Anvisa/Ministrio da Sade, de
acordo com a legislao vigente.
obrigatrio que todo laboratrio tenha um programa documentado para
a manuteno, calibrao e verificao de desempenho de seus equipamentos. A manuteno de equipamentos crticos realizada em intervalos espe-
cificados, de acordo com vrios fatores, como, por exemplo, as

especificaes do fabricante e a taxa de uso, com registros detalhados de
sua execuo. Na Tabela 1 encontram-se os equipamentos mais utilizados
em um laboratrio de microbiologia, bem como os procedimentos de
controle de qualidade, periodicidade e limites de tolerncia.
Tabela 1 Procedimentos para o controle de qualidade de alguns equipamentos
EQUIPAMENTO
PROCEDIMENTO
PERIODICIDADE
LIMITES DE TOLERNCIA
Refrigeradores
Freezers
Estufas
Banho-Maria
Aquecedores
Registro de
temperatura*
Dirio ou contnuo
2oC a 8oC
-8oC a 20 oC / -60oC a -75oC
35,5oC 1oC
36oC a 38oC / 55oC a 57oC
1oC do estabelecido
Estufas de CO2
Medida do contedo de
CO2:
Usar analisador de
gases sanguneos ou
dispositivo Fyrite1
Dirio ou duas vezes

ao dia
5 a 10%
Autoclaves
Teste com tiras de

esporos (Bacillus
stearothermophilus)
Semanalmente
O no crescimento de
esporos indica corrida
estril.
Medidor de pH
Testes com solues

para
calibrar pH
A cada uso
0,1 unidade de pH do
pado em uso.
Jarras de
anaerobiose
Tira indicadora com azul

de metileno
A cada uso
A converso da tira de
azul para branco indica
baixa tenso de CO2.
Cmera anaerbia
com
luvas
Cultivo de
Clostridium novyi tipo
B
Soluo indicadora de
azul de metileno
Peridico
O crescimento indica baixa

tenso de O2.
Utilizada apenas quando
preciso uma tenso de O2
extremamente baixa.
A soluo permanece
incolor se a tenso de O2 for
baixa.
Rotador de
sorologia
Contagem de rpm
A cada uso
180 rpm 10 rpm
Centrfugas
Controlar revolues
com tacmetro
Mensalmente
Dentro de 5% do
estabelecido no indicador.
Cabines de
segurana
Medir a velocidade do
ar atravs da abertura
para o rosto2
Semestral ou
trimestralmente
Fluxo de 1,52m de fluxo

de ar/minuto 0,152 m/
minuto.
* cada termmetro de controle deve ser calibrado contra um termmetro padro.

1. Bacharach Instrument Co, Pittsburgh, PA.
2. Velometer Jr., Alnor Instrument Co., Chicago, IL.
obrigatrio que o laboratrio mantenha um programa para calibrao e

verificao de desempenho dos equipamentos que possuem influncia direta sobre os resultados dos ensaios. A frequncia de calibrao e a verificao
de desempenho so determinadas pelo histrico documentado do equipamento e baseadas na necessidade, tipo e desempenho anterior do equipamento (Tabela 2)
Tabela 2 Calibrao e verificaes de calibrao sugesto de periodicidade
EQUIPAMENTO
Termmetros de referncia
(lquido em vidro)
REQUISITO
PERIODICIDADE SUGERIDA
Recalibrao inteiramente
rastrevel
Um nico ponto (p. ex.:
verificao do ponto de
congelamento)
A cada 5 anos
Recalibrao inteiramente
rastrevel
Verificao com termmetro de
referncia
A cada 3 anos
Termmetros de
trabalho e Termopares
de trabalho
Verificao com termmetro

de referncia no ponto de
congelamento e/ou faixa de
temperaturas operacionais
Anualmente
Balanas
Calibrao inteiramente
rastrevel
Anualmente
Pesos de calibrao
Calibrao inteiramente
rastrevel
A cada 5 anos
Peso (s)
aferidor (es)
Verificao com peso calibrado

ou verificao na balana
imediatamente aps a calibrao
rastrevel
Anualmente
Vidrarias volumtricas
Calibrao gravimtrica na
tolerncia exigida
Anualmente
Microscpios
Calibrao rastrevel de
micrmetro de mesa (onde
apropriado)
Aps a instalao, antes do uso

inicial
Higrmetros
Calibrao rastrevel
Anualmente
Centrfugas
Calibrao rastrevel ou
verificao com um tacmetro
Anualmente
Termopares de
referncia
Anualmente
Anualmente
Uso de controles
As amostras de controle da qualidade so testadas da mesma maneira que
as amostras de pacientes e pelo mesmo pessoal que rotineiramente realiza
os testes de pacientes. Os resultados dos controles so sempre avaliados antes da emisso do laudo, havendo aes corretivas documentadas quando
o controle excede os limites de tolerncia. Resultados de controle que se

encontrem fora dos critrios de aceitabilidade especificados devem ser imediatamente reportados ao supervisor responsvel para que aes corretivas
imediatas sejam tomadas.
Resultados de pacientes obtidos em uma rotina analtica cujos controles encontram-se fora dos limites de aceitao ou desde a ltima rotina aceitvel
sero re-analisados para determinar se existe alguma diferena clinicamente
significativa nos resultados obtidos.
Controle de microscopia
A maneira pela qual o exame microscpico realizado tem de ser consistente. Para garantir a reprodutibilidade, uma vez que na maioria dos casos no
se dispe de controles de qualidade comerciais, pode-se adotar a prtica da
dupla observao, e/ou avaliao de um mesmo material por todos os indivduos e/ou uso de slides ou figuras previamente validadas por consenso.
Mensalmente utilizar anlise de replicatas ou duplo-cego.
fundamental que o laboratrio disponha de um arquivo de microrganismos no usuais, como tambm de atlas, figuras ou outras publicaes que
auxiliem na identificao dos elementos presentes nos diversos materiais
biolgicos.
Recomenda-se guardar todas as lminas por pelo menos uma semana para
possvel reviso ou referncia. Lminas com achados raros devem ser conservadas por perodos de tempo mais longos, dependendo do espao disponvel. Nesse caso fixar a preparao atravs de meios de incluso rpida para
microscopia e cobertas com lamnulas.
Vale lembrar que a conservao e manuteno dos microscpios so fundamentais para a qualidade da anlise microscpica. Diariamente realiza-se
a limpeza de partculas de sujeira na ocular, objetivas e condensador com
leno de papel ou lenos prprios para limpeza de lentes. No utilizar gaze
ou papel higinico. Ao final da rotina retirar resduos de leo utilizando um
cotonete umedecido com uma soluo de lcool ter (1:1) ou lcool isoproplico 70% (nunca usar xilol), evitando contato com a regio perifrica
das lentes. Pode-se utilizar ainda solues prprias para limpeza de lentes
disponveis em pticas. Semestralmente procede-se limpeza da parte interna das oculares e objetivas.
2.6.2
Bacteriologia
Meios de cultura
O laboratrio responsvel por garantir que todos os meios de cultura usados, tanto comprados prontos como de preparo prprio, sejam estreis, capazes de permitir o crescimento adequado dos microrganismos e apresentem a reatividade bioqumica apropriada. Em geral, o laboratrio mantm
em estoque cepas de microrganismos para testar os meios antes ou simultaneamente ao uso, mantendo os registros adequados. Os microrganismos
empregados para o controle de qualidade devem ser mantidos no laboratrio por meio de subcultivos de isolados recuperados como parte do trabalho
de rotina ou microrganismo de referncia como os da ATCC.
Meios preparados no laboratrio
O desempenho apropriado dos meios de cultura, diluentes e outras solues preparadas no laboratrio deve ser verificado com relao sobrevivncia ou recuperao do microrganismo-alvo, inibio ou supresso dos
microrganismos no-alvo, s propriedades bioqumicas (diferenciais e diagnsticas) e s propriedades fsicas (por exemplo: pH, volume e esterilidade).
Na Tabela 3, encontram-se listados os microganismos-controle e as reaes
esperadas para o controle de qualidade dos meios de cultura, segundo Winn
2006.
Tabela 3 Microrganismos-controle e reaes para o controle de qualidade dos meios de

cultura
MEIO
MICRORGANISMO
REAO
gar-sangue
Streptococcus do Grupo A
Streptococcus pneumoniae
Bom crescimento, beta-hemlise

Bom crescimento, alfa-hemlise
gar bile-esculina
Espcies de Enterococcus
Streptococcus alfa-hemoltico
no do grupo D
Bom crescimento, cor negra

Nenhum crescimento, sem
colorao do meio
gar chocolate
Haemophilus influenzae
Neisseria gonorrhoeae
Bom crescimento
Bom crescimento
gar uria de Christensen
Proteus mirabilis
Toda a superfcie de cor rosa

(positivo)
Klebsiella pneumoniae
Inclinao do meio rosa (positivo

parcial)
Escherichia coli
Cor amarela (negativo)
Crescimento ou cor azul (positivo)

Sem crescimento, permanece
verde (negativo)
gar citrato de Simmons
Escherichia coli

Mdulo
em Microbiologia
MEIO
gar cistina-tripticase (ACT)
- Dextrose
MICRORGANISMO
REAO
Branhamella catarrhalis
- Cor amarela (positivo)

- No modifica a cor (negativo)
- Sacarose
Escherichia coli

- Maltose
Espcies de Salmonella ou
Neisseria meningitidis

- Lactose
Neisseria lactamicus

Enterobacter sakasakii
- Cor azulada (positivo)

- Cor amarela (negativo)
- Arginina
Enterobacter cloacae
Proteus mirabilis

- Ornitina
Proteu mirabilis

DNAse
Enterobacter cloacae
Zona de clarificao
(adicionar HCl 1 N)
Sem zona de clarificao
Descarboxilases
- Lisina
Serratia marcescens
gar eosina azul-de-metileno
Escherichia coli
Shigella flexneri
Bom crescimento, brilho verde

metlico
Bom crescimento, prpuras, sem
brilho
Bom crescimento, transparentes
(lactosenegativas)
gar de Hecktoen
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Escherichia coli
Verdes com centro negro

Verdes transparentes
Crescimento algo inibido,
alaranjadas
Indol
Escherichia coli
Cor vermelha (positivo)

Ausncia de cor vermelha
(negativo)
gar lisina-ferro
Profundidade e inclinao
prpura + H2S
Inclinao prpura /
profundidade amarela
Inclinao vermelha /
profundidade amarela
Shigella flexneri
Proteus mirabilis
gar MacConkey
Escherichia coli
Proteus mirabilis
Espcies de Enterococcus
Colnias vermelhas (lactosepositivas)

Colnias incolores, sem
disseminao
Sem crescimento

Mdulo
em Microbiologia
MEIO
MICRORGANISMO
REAO
Malonato
Escherichia coli
Sem crescimento
Bom crescimento, cor azul
(positivo)
Motilidade
Proteus mirabilis
Meio turvo (positivo)

Sem borda plumosa em estria
(negativo)
Caldo ou gar nitrato
Escherichia coli
Cor vermelha ao adicionar

reativos
Ausncia de cor vermelha
(negativo)
Acinetobacter lwoffi
gar sangue fenletil lcool
Espcies de Streptococcus
Escherichia coli
Bom crescimento
Sem crescimento
o-Nitrofil-betaDgalactopiranosdeo (ONPG)
Serratia marcescens
Cor amarela (positivo)

Incolor (negativo)
Fenilalanina desaminase
Proteus mirabilis
Escherichia coli
Cor verde (adicionar FeCl3 a 10%)

Ausncia de cor verde (negativo)
gar Salmonella-Shigella
Escherichia coli
Colnias incolores, centro negro

Sem crescimento
Voges-Proskauer
Escherichia coli
Cor vermelha (adicionar reativos)

No desenvolve cor (negativo)
gar xilose-lisina-dextrose
(XLD)
Espcies de Salmonella
Colnias vermelhas (lisinapositivas)

Colnias amarelas (positiva para
acares)
Colnia transparentes (negativo)
Escherichia coli
Espcies de Shigella
Matrias-primas (formulaes comerciais desidratadas e constituintes individuais) devem ser armazenadas sob condies apropriadas, em ambiente
frio, seco, protegido da luz e em recipientes hermeticamente fechados,
espe- cialmente aqueles com meios desidratados. Meios que apresentem
qualquer tipo de alterao de cor ou aspecto no podem ser usados. A gua
utilizada na preparao dos meios pode ser destilada, deionizada, ou
produzida por osmose reversa, livre de substncias bactericidas, inibidoras
ou interferentes.
A validade dos meios preparados, mantidos nas condies definidas de armazenamento, deve ser determinada e controlada.
Meios prontos para uso
Para meios comprados prontos para uso, o laboratrio deve ter registros de
que cada lote tenha sido testado quanto esterilidade, capacidade de favorecer o crescimento dos organismos pretendidos e reatividade bioqumica, antes ou coincidentemente ao incio do uso.
obrigao do fabricante fornecer as especificaes de qualidade do seu

produto, incluindo:
Nome dos meios e lista dos ingredientes, incluindo quaisquer suplementos.
Prazo de validade e critrios de aceitao aplicados.
Condies de armazenamento.
Frequncia de amostragem.
Verificao da esterilidade.
Verificao de crescimento dos microrganismos de controle-alvo e no-alvo (com suas referncias da coleo de cultura) e Critrios de aceitao.
Verificaes fsicas e critrios de aceitao aplicados.
Data de edio da especificao.
Lotes de meios devem ser identificveis, sendo acompanhados pela evidncia de que satisfazem a especificao de qualidade. O laboratrio dever se
certificar de que o fabricante notificar quaisquer alteraes na especificao da qualidade do produto.
Corantes
Todos os procedimentos de colorao so controlados, com seu desempenho registrado pelo menos semanalmente e para cada novo lote ou partida
de corante em uso, com organismos de referncia sabidamente gram-positivos e gram-negativos. Outras coloraes que no a de Gram (coloraes
no-imunofluorescentes e no-imunolgicas) so testadas com o uso de
controles positivos e negativos para a reatividade pretendida a cada dia de
uso e a cada novo lote ou partida recebida.
Controles positivos e negativos so processados em todas as coloraes especiais para bactrias. As coloraes so verificadas a cada dia de uso ou
pelo menos semanalmente (o que for mais adequado) para a reatividade
pretendida de modo a garantir o desempenho consistente da colorao. Da
mesma forma, controles positivos e negativos so processados a cada vez
em que se utilizam coloraes fluorescentes.
Reagentes e controles
Para cada novo lote de reagentes para testes qualitativos, a mnima verificao cruzada inclui a anlise de uma amostra sabidamente positiva e de uma
amostra sabidamente negativa. prefervel que essas validaes sejam realizadas utilizando-se amostras de pacientes que tenham sido testados anteriormente, ou que possam ser testadas simultaneamente com o lote
anterior. Em alguns casos as comparaes entre lotes podem apresentar
dificuldades prticas, como por exemplo para a pesquisa direta de Shigella
nas fezes, uma
vez que amostra instvel e os positivos so raros. Em situaes em que a

maior parte das amostras ou organismos provenientes de pacientes reage
muito intensamente ao teste de interesse pode ser prefervel usar controles bem caracterizados, fracamente positivos, para validar a sensibilidade do
novo lote de reagentes.
Controles positivos e negativos so testados e registrados para cada novo
lote, novo lote ou nova partida recebida dos seguintes testes: reagentes para
catalase, coagulase, oxidase; discos para bacitracina, optoquina, ONPG, X, V
e XV; e sistemas de identificao. Controles positivos e negativos tambm
so testados e registrados para cada novo lote recebido de anti-soros
(exceto Salmonella e Shigella que so testados quando preparados ou
abertos e a partir da uma vez a cada seis meses). Da mesma forma,
controles positivos e negativos para beta-lactamase (que no cefinase) so
testados e registrados a cada dia de uso. Por outro lado, no caso da
cefinase, h necessidade de testar apenas a cada novo lote.
Tiras de azul de metileno, culturas de organismos anaerbicos fastidiosos ou
outros procedimentos adequados so usados para a verificao da anaerobiose nos sistemas como jarras, cmaras e sacos para anaerobiose.
Antibiograma
Falhas na deteco do padro de resistncia podem estar relacionadas a diversos fatores, tais como: m qualidade do meio de cultura, disco com baixa
concentrao de antimicrobiano, problemas no procedimento, inculo com
concentrao de microrganismos fora do preconizado, tempo e temperatura
de incubao inapropriados.
A potncia dos discos para antibiograma verificada por meio de testes
utilizando organismos de referncia cujos padres de susceptibilidade so
conhecidos. Limites de tolerncia para a potncia dos antimicrobianos (intervalo dos halos) so estabelecidos, sempre que possvel de acordo com o
CLSI (Clinical and Laboratory Standard Institute, antigo NCCLS).
As cepas de referncia tm um nmero mximo de geraes ao qual podem
ser submetidos, so cinco passagens a partir da cepa de referncia original.
O nmero indefinido de passagens pode comprometer principalmente a
pureza da cultura e as caractersticas fenotpicas de algumas bactrias. As
cepas de controle da qualidade devem ser testadas usando os mesmos
materiais e mtodos empregados para testes de isolados clnicos.
A frequncia dos testes de controle interno deve ser no mnimo mensal. Entretanto, publicaes recentes da Anvisa, em seu projeto de Monitoramento e Preveno da Resistncia Microbiana em Servios de Sade, e do CLSI
preconizam testes semanais. Essas recomendaes devem ser seguidas se a
estrutura ou a capacidade do laboratrio permitir.
A introduo do programa de controle interno da qualidade inicia-se com
a realizao de testes dirios, passando, em fase posterior, para a realizao
mensal dos testes.
Teste dirio Testar todas as cepas de controle pertinentes durante

cinco dias consecutivos e documentar os resultados. Para passar a
realizao dos testes de diria para mensal, nenhuma das cinco leituras
de halos, para cada combinao de agente/antimicrobiano, pode estar
fora dos limites aceitveis.
Teste mensal Testar todas as cepas de CIQ no mnimo mensalmente e
sempre que qualquer novo reagente do teste for utilizado (ex.: um novo
lote de meio de cultura, um novo lote de discos ou outro fabricante de
insumos).
obrigatrio que a realizao dos testes de controle da qualidade seja documentada, anotando-se os nmeros dos lotes, meios de cultura, reagentes,
discos de antibiticos testados nas respectivas datas. Caso algum resultado
do teste mensal de controle da qualidade encontrar-se fora da faixa aceitvel, faz-se necessrio implantar ao corretiva.
Sempre que um novo agente antimicrobiano for acrescentado ou houver
mudanas importantes no mtodo de leitura dos resultados dos testes, estes
devem ser realizados por cinco dias consecutivos e documentados, antes de
se passar para uma frequncia mensal.
O controle da acurcia dos testes realizados deve ser feito utilizando-se as
cepas de referncia para o gnero ou espcie do microrganismo ou classe
de antimicrobiano que est sendo testado. Sero testados os antimicrobianos que fazem parte do antibiograma utilizado na rotina do laboratrio. Por
exemplo: se o laboratrio testa para Enterococcus spp ampicilina, ciprofloxacina, clorafenicol, teicoplanina, vancomicina, quinupristin/dalfopristin, estes mesmos antimicrobianos sero testados com a cepa referncia S. aureus
ATCC 25923 para avaliar a qualidade da prova realizada, e os halos encontrados sero comparados com os valores de referncia. Os limites aceitveis
para os halos encontrados para as cepas de referncias e os diversos antimicrobianos so descritos no documento M100-S16/CLSI ou norma substituta.
recomendvel que o laboratrio de microbiologia hospitalar estabelea intercmbios com a equipe mdica (CCIH) e a farmcia para desenvolver uma
lista de antibiticos a ser reportada no laudo para os diferentes organismos
isolados de diferentes locais. Essa lista baseada nas diretrizes do CLSI, nas
tabelas de rotina (Grupo A) e seletiva (Grupo B). Limitaes ao nmero de
antimicrobianos reportados, chamada de laudo em cascata, em geral
significa reportar no mais do que 4 agentes potenciais aos quais, pelo
menos em uma instncia, o organismo susceptvel. O laudo seletivo ajuda
a melhorar a relevncia clnica e ajuda a minimizar a seleo de cepas
multirresisten- tes e a evitar o abuso de agentes de amplo espectro. O
laboratrio pode, igualmente, reportar apenas os agentes antimicrobianos
efetivos no local do isolamento, havendo documentao da padronizao
adotada. Os laboratrios hospitalares devem participar da CCIH de forma
a manter e reportar ao corpo clnico relatrios cumulativos do perfil de
susceptibilidade antimicro- biana, pelo menos anualmente.
Resultados aceitveis derivados dos testes das cepas controle no garantem
resultados acurados dos isolados de pacientes. Quando forem observados
resultados incomuns ou inconsistentes de isolados de pacientes, os resultados so analisados criticamente para a garantia da sua acurcia. Recomenda-se inicialmente verificar a pureza da cultura e confirmar a identificao
usando procedimentos alternativos (se disponveis), principalmente quando
observa-se:
2.6.3
Escherichia coli resistente ao imipenem;

Klebsiella spp. suscetvel a ampicilina;
Proteus mirabilis resistante a ampicilina;
Staphylococcus aureus resistante a vancomicina.
Procedimentos analticos
Os itens a seguir definem padres mnimos para a rotina. Isso no impede
o uso de culturas de triagem (estudos limitados) e no implica que todas as
culturas de rotina exijam meios especiais, mas sim que estes estejam disponveis quando necessrios.
Culturas de material proveniente do trato respiratrio
Inicialmente, sugere-se a realizao rotineira de um esfregao corado pelo
Gram em todos os escarros expectorados para determinar a aceitabilidade
da amostra para a cultura e a abrangncia das pesquisas a serem realizadas.
As amostras inaceitveis no devem ser processadas, e/ou o mdico assistente deve ser notificado para que seja providenciada uma amostra adequada de imediato.
Potenciais patgenos podem fazer parte da flora oral dos pacientes e pode
no ser necessria identificao e realizao de antibiogramas, quando houver evidncias de contaminao grosseira do escarro com saliva. Deve-se
tentar estabelecer uma correlao entre os resultados das culturas com os
resultados da colorao de Gram e, quando possvel, com informaes clnicas obtidas junto ao mdico assistente quanto a evidncias de uma possvel
pneumonia.
Os procedimentos de rotina para a cultura de amostras aceitveis de escarro
permitem o isolamento de pneumococos, Staphylococcus aureus,
Pseudomo- nas aeruginosa, e Enterobacteriaceae.
Culturas
de
Urina
O padro mnimo para a avaliao das culturas de urina inclui uma estimativa do nmero de organismos isolados e sua classificao em Gram-positivos
ou Gram-negativos. As culturas quantitativas (contagem de colnias) devem
ser realizadas rotineiramente, utilizando-se meios e procedimentos adequados ao isolamento e identificao tanto de Gram-positivos como de Gram-negativos.
Culturas de Material Ginecolgico
A triagem para Streptococcus Grupo B em mulheres grvidas feita de acordo com as diretrizes atuais, que recomendam a triagem universal para colonizao vaginal e retal por estreptococos do Grupo B para todas as mulheres
gestantes entre a 35-37 semanas.
Coproculturas
Os procedimentos de rotina para o processamento de amostras quanto a
patgenos devem permitir o isolamento e a identificao de patgenos entricos relevantes em pacientes com diarria.
Culturas
de
Lquor
Amostras de lquor para cultura necessitam ser processadas imediatamente
aps seu recebimento no laboratrio. Esfregaos para colorao de Gram
so preparados de rotina, e os resultados positivos so liberados de acordo
com a poltica de comunicao de resultados potencialmente crticos. Os tipos de meios inoculados e os mtodos de incubao devem garantir a recuperao de patgenos comuns e exigentes como a Neisseria meningitidis,
Streptococcus pneumoniae e o Haemophilus influenzae.
Quando se utiliza mtodos de pesquisa de antgenos, culturas de segurana
so realizadas, tanto para amostras positivas como para amostras negativas.
Hemoculturas
O volume de sangue coletado deve obedecer as especificaes do fabricante dos frascos de hemocultura. Os sistemas de uso na rotina para a realizao de hemoculturas permitem o isolamento e a identificao de aerbios e,
quando indicado, de anaerbios. Todas as culturas negativas macroscopicamente so verificadas por meio de colorao de Gram ou de subcultivo aerbico, em algum momento, antes de serem liberadas como negativas, lembrando que hemoculturas automatizadas no necessitam dessa conferncia
adicional desde que tenham sido monitorizadas por pelo menos 5 dias.
As hemoculturas positivas so liberadas de acordo com a poltica de comunicao de resultados potencialmente crticos.
Culturas de material de feridas
Para as feridas profundas, os procedimentos mnimos permitem a recuperao e a identificao de organismos aerbios e moderadamente anaerbios.
Esfregaos diretos corados pelo Gram so preparados e examinados de rotina. Os procedimentos para a coleta e o manejo de amostras de feridas so
capazes de recuperar organismos anaerbios, quando indicado e em material coletado adequadamente
2.6.4
Micobacteriologia
Meios de cultura
Da mesma forma que na bacteriologia uma amostra adequada de cada meio
e aditivo preparados pelo laboratrio verificada com relao a esterilidade (caso sejam adicionados aditivos aps a esterilizao inicial), capacidade
de favorecer o crescimento (quando aplicvel) por meio de cultivo de cepas
controle ou de testes em paralelo com lotes anteriores e reatividade bioqumica (quando adequado). Meios micobacteriolgicos deteriorados so descartados.
Colorao
As coloraes para bactrias lcool cido resistentes so controladas a cada
dia de uso por meio de cepas controle adequadas e os resultados registrados.
As coloraes fluorescentes so verificadas com o uso de controles positivos
e negativos a cada dia e os resultados so registrados. Resultados positivos
na pesquisa para micobacterias so liberados de acordo com a poltica de
comunicao de resultados crticos.
Procedimentos
Concentrao, inoculao e
incubao
Amostras potencialmente contaminadas com outros microrganismos (ex.
escarro, lavado brnquico) quando submetidas cultura para micobactrias so descontaminadas e concentradas. A colorao para B.A.A.R. realizada em lminas preparadas do material antes e aps a concentrao.
Havendo uma quantidade adequada de material, o laboratrio inocula as
amostras (que no sangue) em meio apropriado.
Culturas
e
identificao
Caso o laboratrio oferea a identificao completa necessria uma variedade de testes diferenciais suficientes para a diferenciao acurada dos
diferentes tipos de micobactrias. Controles positivos e negativos so testados rotineiramente e seus resultados registrados.
2.6.5
Micologia
Meios de cultura
Assim como na bacteriologia e na micobacteriologia, todos os meios so verificados quanto esterilidade (se forem adicionados aditivos aps a esterilizao), quanto capacidade de favorecer o crescimento e quanto reatividade bioqumica (quando aplicvel) por meios de cepas controle ou testes
em paralelo contra lotes anteriores.
Coloraes
Todos os procedimentos de colorao so verificados e seus resultados
registrados para cada novo lote de corante preparado, e pelo menos
diariamente, contra cepas controle sabidamente positivas e negativas.
Controle para preparaes de KOH no so necessrios. Controles para o
lactofenol-azul de algodo no precisam ser feitos a cada dia de uso, mas
devem ser feitos a cada novo ou preparado. Para certas coloraes, como
Prata Metenamina de Gomori e Giemsa, a prpria lmina serve de controle
negativo.
Procedimentos e testes
O princpio da garantia da qualidade dos procedimentos analticos em micologia baseia-se no uso de meios e condies de cultura variados o suficiente
para permitir o isolamento de patgenos significativos, com a menor interferncia possvel de contaminantes.
Os procedimentos preliminares, de triagem tais como KOH 10%, tinta da
Chi- na ou Giemsa esto disponveis e so realizados quando indicado. Os
procedimentos de isolamento e identificao incluem a triagem
preliminar pelo
exame de preparaes diretas ou coradas, pelo uso de meios seletivos para

dermatfitos e fungos sistmicos e pelo uso de meios contendo agentes antimicrobianos.
Meios adicionais ou diferentes so usados para a cultura de dermatfitos e/
ou fungos sistmicos. Meios contendo agentes antimicrobianos so usados,
quando indicado, para a supresso do crescimento de bactrias, embora alguns agentes antimicrobianos possam inibir algumas leveduras ou a fase levedurifome de organismos dimrficos. As temperaturas de incubao para
o crescimento e o isolamento de dermatfitos e de fungos sistmicos devem
estar definidas e seguidas rigorosamente. Quando as culturas so deixadas
temperatura ambiente (22-26C), esta deve controlada, verificada e registrada a cada dia.
2.6.6
Processos Automatizados
obrigatrio o controle e registro dos lotes e validade dos insumos em uso.
No caso da utilizao de turbidmetro, deve-se calibrar e registrar a transmitncia diariamente.
Os requisitos mnimos para controle de qualidade em processos automatizados so os que se seguem:
Cepas de referncia recomendadas para testes de
identificao
Recomenda-se testar no mnimo uma cepa de referncia por painel.
Para painis de Gram

negativos:
.
E. coli 25922 (qualidade da prova).
. P. mirabilis 7002 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram
negativo).
.
K. pneumoniae 13883 (qualidade da prova de identificao de bacilos
Gram negativo).
Para painis de Gram

positivos:
S. aureus 29213 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram
positivo).
E. faecalis 29212 (qualidade da prova de identificao de bacilos Gram
positivo).
Para painis de
Leveduras:
C. albicans 14053 (qualidade da prova de identificao de leveduras).
Cepas de referncia recomendadas para testes de sensibilidade
Para painis de Gram

negativos:
E. coli 25922 (qualidade da prova).
E. coli 35218 (para inibidores de lactamase).

E. coli 51446 (ESBL).
P. aeruginosa 27853 (concentrao de ctions e pH com aminoglicosdeos).
E. faecalis 29212 (quantidade de timina-timidina com SXT).
K. pneumoniae 700603 (ESBL).
K. pneumoniae BAA 1705 (Controle positivo para carbapenemase)
K. pneumoniae BAA 1706 (Controle negativo para carbapenemase)
Para painis de Gram

positivos:
S. aureus 29213 (qualidade da prova).
E. faecalis 29212 (quantidade de timina-timidina com SXT).
E. faecalis 51299 (resistncia a vancomicina).
E. coli 35218 (para inibidores de lactamase).
Validao
Protocolo de controle da qualidade

dirio
Prova diria por 5 dias
Sem erro, seguir com o controle peridico.
1 de cada 5 ensaios apresentarem erro, tomar aes corretivas:
erros bvios: testar novamente no mesmo dia e, se o resultado for
o esperado, continuar com as provas dirias.
erros no bvios: testar novamente no mesmo dia e controlar por
cinco dias consecutivos. Se todos os resultados estiverem dentro do
esperado, passar ao controle mensal.
Protocolo de controle da qualidade

peridico
Recomenda-se realizar os controles a cada ms, utilizando as listas de
cepas de referncia acima mencionadas. Tambm deve ser realizado
um controle a cada troca de lote do painel. Se os testes mensais apresentarem erros, tomar aes corretivas e retornar aos testes dirios.
2.6.7
Testes de Proficincia
obrigatria a participao em um programa de proficincia em ensaios laboratoriais. Para as anlises no cobertas por programa de proficincia, o
laboratrio deve dispor de um sistema alternativo documentado para avaliao da confiabilidade dos resultados. A utilizao do controle alternativo
baseia-se em grande parte em documentos do CLSI no caso o GP29-A, que
estabelece que inicialmente o laboratrio tem que identificar os testes no
cobertos pelos programas de proficincia e desenvolver uma alternativa de
controle. Uma vez definido como ser feito esse controle, document-lo, estabelecer limites de aceitao e definir a frequncia de utilizao.
Na prtica, o uso de controles alternativos permitem uma estimativa da exatido dos resultados liberados na rotina e permite que o laboratrio atenda
aos requisitos dos programas de gesto de qualidade. Entretanto, uma prtica difcil de gerenciar e de estabelecer os limites de aceitao dos resultados. Assim, o controle de qualidade alternativo no pode ser encarado como
um substituto dos testes de proficincia, mas sim como uma alternativa possvel na indisponibilidade dos ensaios de proficincia.
2 .7
Fase ps-analtica
2.7.1
Conferncia
Todo laboratrio necessita de um sistema documentado para detectar e
cor- rigir erros significativos de transcrio que poderiam afetar a conduta
clnica. Uma alternativa a reviso e conferncia dos resultados finais por
um indivduo qualificado para tal, antes da liberao final dos resultados,
uma vez que a maioria dos resultados no so interfaceados e sim digitados
manualmente. O sistema de informtica pode dispor de alertas, na etapa de
digitao, para resultados improvveis ou absurdos. Cada laboratrio define
quais os resultados que sero reportados imediatamente ao mdico
responsvel pelo paciente.
2.7.2
Liberao dos laudos e notificao de resultados crticos

O laboratrio deve possuir polticas e instrues escritas para a emisso de
laudos que contemplem as situaes de rotina, os plantes e as urgncias.
Essas instrues incluem quem pode liberar os resultados e para quem, contemplando tambm a liberao de resultados verbais e de laudos provisrios, quando aplicvel e necessrio.
necessrio que os resultados das culturas sejam reportados o mais rapidamente possvel, dispondo-se de critrios documentados para notificao
imediata ao mdico ou responsvel de resultados potencialmente crticos
que possam implicar a necessidade de atuao mdica imediata. As comunicaes verbais e os laudos provisrios so registrados e identificados como
tal, gerando-se laudos definitivos adequados no menor intervalo possvel.
Essa atividade deve ser devidamente registrada, mesmo quando o contato no for conseguido. Esses registros incluem o resultado potencialmente
crtico, a data e horrio da notificao, o responsvel pela comunicao e a
pessoa notificada ou ainda a impossibilidade de comunicao e motivo.
2 .8
Bibliografia
ANVISA. Habilitao para Laboratrio de Microbiologia. Sries Temticas, Laboratrio, volume
3, 2006. Disponvel em http://www.anvisa.gov.br/reblas/eurachem/acreditacao.pdf ltimo
acesso em 12/03/2007
CLSI / NCCLS Assessment of Laboratory Tests When Proficiency Testing is Not
Available; Approved Guideline (GP29-A) 2002
CLSI / NCCLS Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow
Aerobically; Approved Standard Seventh Edition (M7-A7) 2006
CLSI / NCCLS Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved
Standard Ninth Edition (M2-A9) 2006
CLSI / NCCLS Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; 17th
Informational Supplement (M100-S17) 2007
CLSI / NCCLS Performace Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; 22 th
Informational Supplement (M100-S22) 2012
COLLEGE OF AMERICAN PATHOLOGISTS. COMMISSION ON LABORATORY ACCREDITATION
Laboratory Accreditation Program, Microbiology Checklist, 2006. Disponvel em
http://www. cap.org/apps/docs/laboratory_accreditation/checklists/microbiology
october2006.pdf ltimo acesso em 12/03/2007
EURACHEM / EA GUIDE 04/10. Accreditation for Microbiological Laboratories, 2002. Disponvel
em http://www.eurachem.ul.pt/guides/EurachemEA_Micro.pdf ltimo acesso em
12/03/2007.
OPLUSTIL, CP et al. Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica. So Paulo: SARVIER, 2004.
Programa para Acreditao de Laboratrios Clnicos. Regulamento do PALC, Sociedade
Brasileira de Patologia Clnica, verso 2007. Disponvel em http://www.sbpc.org.br/files/pdf/
Norma_palc_2007.pdf. ltimo acesso 12/03/2007
Tecnologia em Servios de Sade: Controle Interno da Qualidade para Testes de
Sensibilidade antimicrobianos. Projeto de Monitoramento e Preveno da Resistncia
Microbiana em Servios de Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria /
Ministrio de Sade e a Organizao Pan-Americana da Sade/Organizao Mundial da
Sade Representao do Brasil, 2006. Disponvel
em:http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/
manuais/manual_testes_antimicrobianos.pdf ltimo acesso em 12/03/2007
Winn Jr, W et al Konemans Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology 6th
ed, Lippincott Williams & Wilkins, 2006

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Nenhum ou baixo risco individual e comunitrio. Microrganismo que tenha pouca

Risco individual moderado e risco comunitrio limitado. A exposio ao agente

Classe de Risco III

Risco individual elevado e risco comunitrio limitado. A exposio pode causar

Elevado risco individual e comunitrio. Os agentes patognicos representam

Elevado risco de causar doena animal e disseminao no meio ambiente.

Pouca probabilidade de causar

Boas Prticas Microbiolgicas

Bancada aberta e pia para a

Agentes associados a doenas

NB-1 acrescido de:

Barreiras Primrias: Cabine de

Agentes que provocam infeces

NB-2 acrescido de:

Barreiras Primrias: Cabine de

NB-2 acrescido de:

Agentes com alto risco de causar

NB-3 acrescido de:

Barreiras Primrias: Manipulaes

NB-3 acrescido de:

Mdulo 1: Biossegurana e Manuteno de Equipamentos em Laboratrio de Microbiologia Clnica

Fcil limpeza e descontaminao.

NB-1 acrescida de:

NB-2 acrescido de:

NB-3 acrescido de:

Equipamento de Proteo Individual (EPI)

Captulo 1: Segurana em laboratrio de Microbiologia Clnica

Equipamento de Proteo Coletiva (EPC)

Captulo 1: Segurana em laboratrio

Programa de Preveno de Risco Ambiental (PPRA) avaliado anualmente (NR-

Exame pr-admissional e peridico (Clnico e Laboratorial) Programa de

Programa de Vacinao atualizado.

Registro de doenas e acidentes de trabalho.

BPLCs (Boas Prticas em Laboratrio Clnico) implantadas e seguidas.

Acesso limitado ao laboratrio.

Utilizao de Cabines de Segurana

Ligar a cabine e a luz 10 a 15 minutos antes do uso.

Mdulo 1: Biossegurana e Manuteno de Equipamentos em Laboratrio de Microbiologia Clnica

Controle da Gerao de Aerossis