Pemanfaatan keanekaragaman dan biologi sintetis untuk produksi biofuel

alga
Kehidupan modern terkait erat dengan ketersediaan bahan bakar fosil , yang terus
memenuhi kebutuhan tumbuh energi dunia meskipun penggunaannya mendorong
perubahan iklim , knalpot cadangan terbatas dan memberikan kontribusi untuk
perselisihan politik global. Biofuel yang terbuat dari sumber daya terbarukan bisa
menjadi alternatif yang lebih berkelanjutan , terutama jika bersumber dari
organisme , seperti ganggang , yang dapat dibudidayakan tanpa menggunakan
lahan yang berharga . Saring dan pengembangan rekayasa proses yang diperlukan
untuk membuat biofuel alga praktis dan ekonomis.
Meskipun persediaan terbatas dan meningkatnya permintaan, bahan bakar fosil
tetap di antara komoditas termurah di dunia. Harga pasti akan naik setelah
permintaan mulai melebihi pasokan, tapi pendek hingga penggantian jangka
menengah dari bahan bakar fosil oleh alternatif jinak terbarukan dan lebih ramah
lingkungan akan terjadi hanya jika pengganti dapat bersaing secara ekonomi. Salah
satu alternatif tersebut didasarkan pada minyak yang diekstrak dari ganggang, dan
fasilitas skala pilot komersial untuk menguji ini dalam operasi. Namun, perbaikan
yang signifikan masih diperlukan untuk membuat biofuel alga ekonomis. Dalam
Review, kami menguraikan keuntungan dari alga sebagai produsen biofuel,
membahas metode budidaya yang berbeda, mempertimbangkan opsi untuk
mencapai alga biomassa dan lipid produksi yang optimal, dan rekayasa proses yang
diperlukan untuk membuat proses efisien dan kompetitif secara ekonomi.
Bahan Bakar dari ganggang
Memproduksi biofuel alga memanfaatkan kemampuan ganggang untuk
menghasilkan minyak hanya menggunakan sinar matahari, karbon dioksida dan air.
Mikroalga menumpuk minyak sebagai lipid penyimpanan nonpolar, seperti
triacylglycerides (TAG) 1. The fotosintetik dan seluler membran ganggang juga
mengandung lipid polar, seperti glikolipid, fosfolipid dan sterol. Minyak dari
ganggang dapat menghasilkan biodiesel melalui transesterification2, dan bensin
(bensin) atau bahan bakar jet melalui distilasi dan cracking3.
Biofuel dapat dihasilkan dari berbagai sumber, tapi perkiraan hasil secara signifikan
lebih tinggi untuk ganggang daripada untuk tanaman lain. Hal ini memiliki implikasi
yang cukup untuk kebutuhan lahan area: ganggang dibudidayakan pada hanya 30
juta hektar dan menghasilkan biofuel pada perkiraan konservatif dari 40.000 liter
per hektar per tahun cukup untuk mengganti 1.200 miliar liter minyak bumi yang
digunakan oleh konsumen terbesar di dunia minyak bumi, Amerika Serikat (Gbr. 1).
Wilayah ini mirip dengan yang digunakan untuk penanaman kedelai di Amerika
Serikat (sekitar 29 juta hektar) dan kira-kira dua kali digunakan untuk produksi AS
etanol jagung (sekitar 14 juta hektar digunakan untuk menghasilkan hampir 64
miliar liter etanol pada tahun 2011) , atau area seukuran New Mexico4-6. Selain itu,
budidaya alga dapat menggunakan sejumlah besar lahan non-pertanian yang
tersedia untuk pembangunan tanpa menggusur produksi pangan, dan permintaan
yang relatif tinggi air dapat dipenuhi dengan menggunakan sumber berkualitas
rendah seperti limbah atau water7 garam.

Algae hampir ideal sebagai organisme untuk mengembangkan strain tanaman yang
sangat produktif dan kuat yang penting untuk produksi biofuel ekonomis. Pencarian
untuk strain dapat memanfaatkan keragaman besar ganggang, mulai dari kelps
multiseluler raksasa mikroalga bersel tunggal. Mikroalga telah menjadi fokus dari
upaya produksi biofuel intens karena kemudahan, skala dan kecepatan di mana
mereka dapat tumbuh dan dimanipulasi, namun strain berbeda secara signifikan
dalam profil lipid, kemampuan fotosintesis, tingkat pertumbuhan, kebutuhan
medium pertumbuhan (dari halofilik ekstrim untuk laut dan air tawar), ketahanan
terhadap patogen dan produktivitas biomassa. Meskipun sebagian besar ganggang
phototrophs, banyak dapat tumbuh heterotrophically.
Produksi pertanian dan industri
Teknologi yang mendasari dan strategi optimasi untuk memproduksi biofuel melalui
komersialisasi pertanian dan industri sangat berbeda.
Dalam produksi pertanian, mikroalga dibudidayakan di kolam terbuka, dengan
pertumbuhan fotosintesis sinar matahari mengemudi. Metode ini menggunakan
lahan non-pertanian, mengkonsumsi sejumlah besar CO2 selama tahap produksi
biomassa dan, pada prinsipnya, adalah luar biasa scalable - hanya dibatasi oleh
ruang dan biaya modal. Tapi alga yang tumbuh secara efisien dan berkelanjutan
dalam sepenuhnya terkena kolam renang sulit, dan sistem budidaya yang sesuai
dan praktek masih dalam pengembangan.
Produksi industri menggunakan proses mirip dengan fermentasi mikroba industri di
mana ragi atau bakteri yang digunakan sebagai agen biorefining untuk
menghasilkan makanan, minuman atau bernilai tinggi produk bioteknologi. Untuk
ganggang, produksi didorong oleh sinar matahari (dalam fotobioreaktor a) atau
dikurangi sumber karbon seperti gula (dalam reaktor fermentasi). Fermentasi terjadi
dalam gelap gulita dan identik dengan bakteri atau jamur, yang, seperti teknologi
industri dewasa, memiliki banyak sistem dan proses yang diperlukan untuk
fermentasi alga sudah di tempat. Namun, fermentasi telah, sejauh ini, telah
digunakan hanya untuk menghasilkan relatif produk bernilai tinggi; apakah itu dapat
dikembangkan untuk skala besar dan produksi bahan bakar ekonomis tidak pasti.
Selain itu, fermentasi alga gula diolah untuk menghasilkan bahan bakar
heterotrophically tidak menghasilkan emisi gas rumah kaca lebih rendah dari
pengolahan fuels8 fosil, dan tidak mungkin menyamai biaya mereka karena harga
gula sangat tinggi (lebih dari US $ 0,66 per kilogram di 2011) 9. Tergantung pada
pengembangan teknologi pengolahan selulosa canggih, menggunakan selulosa
biomassa sebagai sumber gula mungkin solution10 a. Namun, ini Ulasan berfokus
pada photobioreactors, yang, seperti proses pertanian, bergantung pada CO2 dan
sinar matahari untuk produksi fotosintesis.
optimasi sistem
Kedua produksi pertanian dan industri bisa menjadi penting dalam memenuhi
permintaan yang tinggi untuk bahan bakar cair di seluruh dunia. Tapi potensi
mereka akan terwujud, dan kelayakan ekonomi tercapai, hanya jika biaya modal

dan energi dari proses produksi dapat sangat dikurangi dan hasil bahan bakar
ditingkatkan.
Gambar 1.
Gambar 1 | Perbandingan tanaman oleaginous. Amerika Serikat mengkonsumsi 25%
dari minyak dunia. Luas lahan yang dibutuhkan untuk mengganti semua minyak
domestik dan impor yang digunakan di Amerika Serikat ditunjukkan sebagai
persentase relatif terhadap lahan Amerika Serikat. Daerah yang dibutuhkan untuk
ganggang diperkirakan secara signifikan kurang daripada untuk source4,6 biomassa
lainnya.
Keberhasilan sistem produksi biofuel akan tergantung pada biaya ekonomi dan
lingkungan. Analisis siklus hidup (LCA) adalah alat yang berharga untuk menilai
keberhasilan ini, mencoba untuk menganalisis biaya lengkap dari suatu proses
produksi dengan mempertimbangkan masukan energi dan dampak lingkungan dari
setiap langkah. Ketika dikombinasikan dengan analisis ekonomi lainnya, LCA dapat
membantu untuk mengidentifikasi daerah-biaya tinggi, dan menentukan apakah
strategi produksi biofuel menggunakan proses khusus dan regangan alga yang
layak. Juga biasanya dipertimbangkan dalam LCA, proses dasar yang terlibat dalam
produksi biofuel alga, termasuk perlindungan dan pemeliharaan tanaman dan
konversi produk menjadi bahan bakar (Gambar. 2), digunakan untuk menentukan di
mana perbaikan akan memiliki mempengaruhi sangat kuat terhadap hasil , biaya
atau energi lingkungan use11-13.
Tidak semua LCA mengambil proses yang sama ke rekening, yang berarti hasilnya
bisa sangat bervariasi. Misalnya, apakah perubahan penggunaan lahan adalah
considered14 bisa menjadi penting dalam menentukan apakah sumber biofuel
mengurangi atau meningkatkan emisi gas rumah kaca. Tergantung pada proses
dipertimbangkan, perkiraan hasil tahunan untuk pertanian produksi alga biofuel
dapat bervariasi antara 8.000 l-ha 1 dan 140.000 l ha-1 (ref 15, 16). Secara
keseluruhan hasil ini tentu saja penting dalam menentukan kelangsungan hidup
sebuah sistem, tetapi bahkan jika angka mutlak dari output LCA bervariasi, mereka
masih memiliki peran dalam mengidentifikasi proses yang membutuhkan optimasi.
Tidak seperti sistem pertanian yang paling, produksi industri menggunakan
photobioreactors. Photobioreactors ini bervariasi, tetapi biasanya memiliki tubular
atau panel besar, tipis dan datar design17 (Gbr. 3). Banyak faktor yang dapat
disesuaikan untuk meningkatkan produktivitas dan mengurangi biaya, termasuk
budaya media dan sumber nutrisi, laju aliran (jumlah pencampuran) dan paparan
sinar matahari. Sistem budidaya alga amobil dapat digunakan untuk pertumbuhan
pada surface17,18 solid untuk mencegah shading dan meningkatkan fotosintesis,
yang sangat berguna untuk ganggang yang mengeluarkan prekursor bahan bakar
(Kotak 1), namun evaluasi awal dianggap teknologi ini juga expensive19.
Dalam LCA komparatif sistem pertumbuhan yang berbeda,-light emitting diode
(LED) -illuminated photobioreactors diproduksi secara signifikan lebih biomassa
(244.668 kg ha-1) dibandingkan photobioreactors surya-menyala (8.262 kg ha-1)
dan kolam terbuka (4957 kg ha -1). Tapi untuk biaya produksi per kilogram

biomassa, urutan ini terbalik: perkiraan biaya produksi di kolam terbuka adalah
sekitar $ 3 untuk kilogram, lima kali lebih rendah dari yang dicapai dengan
photobioreactors surya-remang dan delapan kali lebih rendah daripada dengan LEDlit photobioreactors20. Jadi meskipun hasil total biomassa yang lebih rendah, biaya
input berkurang dapat mengakibatkan sistem produksi yang lebih efisien.
Terlepas dari organisme yang digunakan, hasil per biaya input faktor penting untuk
kontrol ekonomi secara keseluruhan. Meningkatkan pertumbuhan alga sekaligus
menjaga biaya input konstan dapat menetralisir banyak kerugian efisiensi yang
terkait dengan pemulihan bahan bakar. Yield ditentukan oleh tingkat pertumbuhan,
densitas sel dan lipid isi ganggang, sehingga optimasi dari setiap parameter
mempengaruhi efisiensi ini pengolahan hilir. Tingkat pertumbuhan yang lebih tinggi
mengurangi waktu antara panen, berpotensi mengurangi eksposur ganggang
patogen dan kerugian tanaman yang terkait, dan penurunan konsumsi air selama
siklus panen. Kepadatan sel akhir budaya - yang menentukan jumlah biomassa
pada saat panen - juga penting karena panen adalah salah satu proses yang lebih
mahal. Perbaikan teknik akan membantu untuk mengoptimalkan efisiensi dalam
pengolahan biofuel, tetapi jumlah biomassa pada saat panen dan kualitas (kadar
lemak) yang akan mempengaruhi productivity21.
Hasil biomassa keseluruhan dan lipid terkait yang dapat dikonversi menjadi bahan
bakar dikendalikan oleh satu set kompleks, dan kurang dipahami, lingkungan dan
faktor genetik. Mencapai hasil terbaik melibatkan memilih strain menjanjikan
(genotipe) dan menyesuaikan faktor lingkungan, terutama komposisi pertumbuhanmedia. Meskipun hubungan antara metabolisme dan penyimpanan lipid kompleks,
metabolisme primer dan sekunder pemahaman akan memungkinkan strain yang
akan direkayasa untuk menekan atau menghapus proses yang menciptakan
molekul produk energi menyimpan yang tidak cocok untuk produksi biofuel.
Mutagenesis konvensional dan rekayasa genetika telah digunakan untuk
mengidentifikasi strain produksi yang menjanjikan, dan teknologi DNA rekombinan
digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan alga dalam kedua sistem pertanian
dan industri. Mengembangkan varietas produksi dioptimalkan tidak diragukan lagi
akan memberikan perbaikan hasil yang mendalam. Produksi jagung saat ini,
misalnya, memiliki hampir delapan kali hasil itu delapan dekade lalu, sebelum
varietas komersial yang developed6.
Temukan regangan
Mengidentifikasi alga regangan ideal untuk produksi biofuel menjadi lebih mudah
dengan keanekaragaman besar dari kelompok, yang telah menyimpang lebih dari
miliaran years22. Alga memiliki kolam genetik potensial yang lipat lebih besar dari
hewan atau tanaman darat, namun keragaman ini hanya baru-baru diperiksa.
Potensi ini tercermin dalam keragaman spesies alga sedang dieksplorasi untuk
produksi bahan bakar, yang meliputi ganggang hijau, diatom dan cyanobacteria.
Dalam sistem pertanian, strain alga harus mampu mentolerir variasi suhu, cahaya,
salinitas dan beban patogen. Strain dioptimalkan untuk budidaya di berbagai
wilayah geografis dan di setiap musim akan diperlukan untuk memastikan
penggunaan luas mereka. Namun, strain asli tidak mungkin memiliki semua

karakteristik yang diperlukan baik untuk produksi pertanian atau industri. Tidak ada
tanaman atau hewan yang digunakan dalam skala besar produksi pertanian atau
industri adalah tipe liar regangan - mereka semua telah dijinakkan oleh modifikasi
ekstensif melalui pemuliaan dan seleksi. Proses domestikasi yang sama akan
menjadi penting dalam memperoleh strain alga yang menghasilkan hasil dan
kualitas biomassa yang memadai.
Bioreaktor Industri dapat dikontrol, membuat mereka lingkungan yang lebih stabil
dibandingkan kolam terbuka. Menemukan strain alga yang tumbuh cepat kepadatan
sel tinggi dan menghasilkan tingkat tinggi lipid menggunakan energi sesedikit
mungkin akan penting untuk memastikan operasi yang hemat biaya. Kontaminasi
adalah faktor yang signifikan dalam sistem budidaya dan, karena sterilisasi yang
ketat hampir pasti akan terlalu mahal, strain akan perlu memiliki pertahanan yang
memadai terhadap atau toleransi patogen untuk mencapai hasil yang tinggi.
Suhu-kontrol dan gas pertukaran sistem yang dibutuhkan dalam sistem industri
untuk mencegah kematian alga dari pemanasan matahari yang berlebihan atau
keracunan oksigen components23 mahal. Sebagian besar strain yang digunakan
dalam produksi biofuel tumbuh terbaik pada 20-30 C (ref. 23). Menggunakan
varian termofilik dari cyanobacteria, yang tumbuh dengan baik antara 35 C dan 50
C, bisa menjadi salah satu solusi untuk ini control24 suhu mahal. Surya pemanas
kurang perhatian dengan kolam renang, tapi pertumbuhan yang lebih rendah
selama musim dingin - juga berlaku untuk photobioreactors luar ruangan - secara
signifikan dapat mengurangi hasil. Menemukan kolam dan photobioreactors luar
ruangan di iklim hangat akan mengkompensasi kerugian ini; Namun, idealnya strain
yang menghasilkan hasil yang tinggi dalam berbagai iklim akan diidentifikasi, atau
strain yang dikenal akan dimodifikasi. Banyak ganggang sudah toleran terhadap
suhu dingin dan dapat pulih dari dekat titik beku, tapi mereka tumbuh slowly25.
Beberapa jenis alga yang digunakan untuk budidaya diketahui tumbuh lebih baik
pada suhu tertentu. Misalnya, Nannochloropsis tumbuh terbaik pada suhu 25 C;
Nannochloris tumbuh lebih baik pada suhu 30 C; dan Chlorella vulgaris memiliki
produksi terbaik pada 10 C (ref. 26). Oleh karena itu Rotasi strain alga berdasarkan
musim tanam adalah model produksi kemungkinan, hanya seperti di bidang
pertanian terestrial.
Gambar 2
Gambar 2 | produksi biofuel ganggang. Cahaya, air dan nutrisi (kuning, biru dan
merah panah) yang diperlukan untuk pertumbuhan alga di kolam. Beberapa proses
yang terlibat dalam produksi biofuel alga yang umum untuk sebagian besar sistem
(panah hijau). Setelah ekstraksi molekul bahan bakar ada penggunaan alternatif
untuk biomassa alga (putus-putus panah); banyak dari ini dapat menghasilkan coproduk yang bermanfaat untuk pertimbangan analisis ekonomi dan siklus hidup.
(Potret milik Sapphire Energy, San Diego, California).
Satu set beragam tipe liar strain telah diisolasi dari situs geografis dan lingkungan
yang berbeda, dan dievaluasi untuk tingkat pertumbuhan dan accumulation27-29
penyimpanan lemak. Dari 30 strain mikroalga liar, Nannochloropsis sp. F & M-M26
adalah yang paling produktif, mencapai produksi lipid dari 61 mg l-1 per hari

melalui produktivitas biomassa dari 0,21 g l-1 per hari dan kadar lemak 29,6% dari
biomass30 tersebut. Produktivitas biomassa tertinggi tercatat 0.37 g l-1 per hari di
Porphyridium cruentum (alga merah), dan kadar lemak tertinggi adalah 39,8% di
calcitrans Chaetoceros (diatom a); jika maximas ini adalah dicapai dalam strain
tunggal ini berpotensi menjadi kenaikan 2,5 kali lipat. Memindahkan
Nannochloropsis paling produktif mengisolasi ke photobioreactors besar
peningkatan produktivitas lipid menjadi 84 mg l-1 per hari. Meskipun potensi alami
ini, efisiensi produksi harus lebih tinggi untuk kelangsungan hidup komersial.
Alunan Chlorophyta, Eustigmatophyceae, Haptophyceae dan cyanobacteria
digunakan untuk memproduksi biofuel dan chemicals30 organik industri lainnya,
dan jenis lain dari ganggang telah diuji. Meskipun isolat alami mungkin ada yang
melebihi hasil saat ini, meningkatkan strain melalui pemuliaan atau teknologi DNA
rekombinan lebih mungkin untuk berhasil dalam mencapai efisiensi yang
dibutuhkan untuk produksi ekonomi.
Breeding untuk meningkatkan fenotipe
Komponen utama yang hilang dari perbaikan strain alga adalah program pemuliaan.
Program-program tersebut telah penting untuk manipulasi tanaman tanaman
selama century31 masa lalu, dan terus digunakan untuk peningkatan hasil dan
untuk melindungi tanaman. Sistem peternakan baik dijelaskan untuk model green
alga Chlamydomonas, tetapi tidak untuk orang lain. Alasannya mungkin, sebagian,
kurangnya kawin isolat yang kompatibel - seperti interfertile isolat telah
diidentifikasi hanya untuk Chlamydomonas reinhardtii laboratorium strains32 - atau
dorongan yang kuat di sebagian besar penelitian biofuel terhadap teknologi
molekuler dan transgenik daripada peternakan. Strain alga dapat ditingkatkan
dengan mencari heterogenitas fenotip dalam interfertile tipe liar isolat dan
kemungkinan pelanggaran (fenotipe progeni ekstrim melampaui orang-orang baik
tua). Siklus seksual pendek dan pertumbuhan yang cepat memungkinkan seleksi
cepat mereka dari kolam renang genotipe sangat besar, menciptakan potensi untuk
berkembang biak di mikroalga melebihi dalam beberapa tahun keuntungan yang
diperoleh dari satu abad program pemuliaan pada tanaman tanaman konvensional.
rekayasa genetika
Teknik metabolisme alga memiliki peran penting dalam peningkatan pertumbuhan
dan akumulasi biomassa. Dengan penggunaan teknologi sequencing generasi
berikutnya, pemahaman kita tentang genom alga telah meningkat pesat, terutama
gen yang terlibat dalam metabolisme responses33-35. Analisis kekurangan nitrogen
di ganggang, yang meningkatkan akumulasi TAG, telah mengidentifikasi banyak gen
responsif, termasuk 86 dijelaskan sebagai factors35 transkripsi. Mutagenesis
insersional dari salah satu faktor tersebut dapat mempengaruhi TAG
accumulation36, menunjukkan potensi untuk rekayasa metabolik untuk akumulasi
lipid.
Apakah mutan alga tumbuh lebih cepat dari jenis liar mereka progenitor tidak
diketahui, tetapi meningkatkan tingkat pertumbuhan biofuel memproduksi
mikroalga pasti memiliki potensi. Para peneliti belum mampu mencapai rekombinasi

homolog efisien dalam genom nuklir yang umum berubah laboratorium alga
regangan C. reinhardtii, yang telah membatasi beberapa penelitian, tapi ini tidak
terjadi untuk alga laut dan calon biofuel Nannochloropsis37. Meskipun tidak ada gen
yang dikenal di Nannochloropsis menargetkan untuk meningkatkan pertumbuhan,
contoh dari koleksi penghapusan ragi menunjukkan apa yang dapat dilakukan:
penghapusan gen tunggal menghasilkan peningkatan 7% di rate38 pertumbuhan;
jika pertumbuhan ini terjadi di ganggang, seperti peningkatan akan
melipatgandakan sel dan biomassa yang diperoleh dari waktu ke waktu dibutuhkan
galur wild type untuk membagi 15 kali (sekitar siklus panen normal untuk
ganggang). Penjelasan lebih lanjut dari genom alga akan membantu dalam
mengidentifikasi gen yang potensial untuk menargetkan untuk memanipulasi
tingkat pertumbuhan.
Densitas sel tergantung pada media yang digunakan dan spesies alga yang terlibat,
dan biasanya tertinggi untuk pertumbuhan heterotrofik dalam bioreaktor. The
chlorophyte C. vulgaris memiliki kepadatan sel sangat tinggi selama pertumbuhan
heterotrofik, mencapai 120 g l-1 (ref. 39). Pada kerapatan yang tinggi, sekresi
molekul yang memediasi komunikasi seluler menjadi penting. Kedua C. vulgaris dan
C. reinhardtii telah terbukti menghasilkan molekul yang meniru sistem quorumsensing untuk menghambat growth40,41 bakteri. Banyak proses lain yang
digunakan untuk sinyal ke sel-sel mikroalga lain dari spesies yang sama juga telah
diidentifikasi, termasuk autoinduction dari division42 sel, death43 sel prematur,
allelopathy (produksi dan pelepasan metabolit yang berpengaruh negatif terhadap
kelangsungan hidup species44 lain), dan pemangsaan pencegahan dan sistem
peringatan untuk stress45,46 lingkungan. Memahami komunikasi seluler di
ganggang mungkin mengidentifikasi kimia gen diatur dan memungkinkan
manipulasi jalur sehingga pertumbuhan alga dapat melebihi batas sel-rapat arus.
Misalnya, dalam Escherichia coli, mutasi pada gen SDIA, yang terlibat dalam deteksi
homoserine N-asil untuk quorumsensing regulasi, hasil dalam peningkatan 16%
pada kepadatan sel akhir dibandingkan dengan tipe liar E. coli47. Dan di jamur,
tyrosol molekul dapat meningkatkan pertumbuhan dengan selektif memperpendek
fase lag dalam budaya low-density tanpa mengubah growth48 eksponensial.

Gambar 3 | metode budidaya alga. a, kolam ganggang dari 0,5 ha dan 1 ha

merupakan bagian dari fasilitas alga biofuel skala komersial pertama di Amerika
Serikat di Sapphire Energy Algal Terpadu BioRefinery. Mereka mencakup area yang
luas 400 meter dengan 1.600 meter di lokasi dekat Columbus, New Mexico. b,
Sebuah kolam tunggal 1 juta liter dayung-roda didorong dari fasilitas Columbus. c, A
fotobioreaktor panel datar skala pilot yang dikembangkan di Laboratorium
Penelitian Alga dan Bioteknologi di Arizona State University di Mesa (image courtesy
of Q. Hu). d, A fotobioreaktor tubular skala komersial yang dirancang dan dibangun
oleh IGV dan dioperasikan oleh Salata di Jerman (image courtesy of C. GREWE). e,
Sebuah tangki fermentasi skala industri untuk budidaya heterotrofik dari mikroalga
di Martek Biosciences, bagian dari DSM di Heerlen, Belanda (image courtesy of D.
Dong).

efisiensi fotosintesis
Budidaya ganggang di photobioreactors industri atau kolam pertanian bertujuan
untuk memanen sebanyak energi surya mungkin (Gbr. 3). Upaya untuk
meningkatkan efisiensi fotosintesis belum spesifik untuk ganggang; sebagai
strategi, telah diusulkan untuk meningkatkan hasil tanaman darat untuk
mengimbangi meningkatnya permintaan makanan di mana lahan tanaman yang
dapat digunakan adalah limited49. Genom kloroplas paling mampu tingginya
tingkat rekombinasi homolog, dan menargetkan gen-gen tertentu dalam organel ini
tidak sulit di sebagian besar spesies. Idealnya, karakteristik fotosintesis ganggang
akan dioptimalkan untuk fotoperioda berbeda dan intensitas cahaya. Optimasi ini
dapat dicapai dengan skrining sejumlah besar mutan atau dengan menggunakan
mesin fotosintesis kloroplas dari spesies yang sudah disesuaikan dengan kondisi ini.
Misalnya, dua strain alga Ostreococcus hijau dengan morfologi hampir identik baik
tumbuh di dekat permukaan (strain cahaya tinggi) atau pada kedalaman yang besar
(strain cahaya rendah), ukuran antena fotosistem spesies cahaya rendah lebih
besar dan, lebih mencolok, aliran elektron diubah bawah conditions50 cahaya
rendah. Mengoptimalkan ukuran antena juga sedang dipertimbangkan dalam sistem
produksi sebagai potensi berarti untuk membatasi efek shading dan meningkatkan
keseluruhan efficiency51,52 fotosintesis.
Memanipulasi enzim karbon memperbaiki primer Rubisco juga bisa meningkatkan
efisiensi. Rubisco adalah enzim yang paling melimpah di semua organisme
fotosintesis, tetapi juga salah satu yang paling efisien. Hybrid enzim dari tumbuhan
dan alga spesies telah terbukti berfungsi dengan cara yang berbeda dari
enzymes53 asli. Dalam cyanobacteria, overekspresi Rubisco meningkatkan tingkat
fotosintesis (yang juga berpotensi berguna untuk biofuel non-biomassa yang
berasal dalam Kotak 1) ketika bikarbonat digunakan sebagai source54 karbon. Tapi
Rubisco tidak selalu menilai membatasi, pengurangan nya (up to 50%) pada
tanaman dan ganggang hijau tidak memiliki efek negatif pada growth55,56.
Fotosistem dalam alga telah berevolusi sebagai tanggapan terhadap lingkungan
alami mereka, dan kompleks fotosintesis sering direnovasi sebagai respon terhadap
cahaya, suhu atau nutrisi limitations57. Menghapus ganggang dari lingkungan asli
mereka melindungi mereka dari sesekali, tapi berpotensi mematikan, lingkungan
ekstrim. Insinyur kloroplas mereka untuk menjadi optimal untuk lingkungan yang
ideal, bukan alami satu, dapat meningkatkan efisiensi fotosintesis. Pendekatan
syntheticbiology telah digunakan untuk memperkenalkan kloroplas genom eksogen
C. reinhardtii menjadi ragi cells58. Sebuah genom sintetik dalam ragi
memungkinkan manipulasi urutan kompleks dan cepat untuk membuat genom
kloroplas sintetis; pada kenyataannya, beberapa protein dari fotosistem
Scenedesmus obliquus ditemukan berfungsi di C. reinhardtii58. Sistem ini dapat
memungkinkan penciptaan plastida minimal yang dapat segera dioptimalkan untuk
fungsi fotosintesis.
Memperluas penggunaan lipid
Studi prospeksi Lipid-produktivitas cenderung untuk memeriksa lipid netral (TAG
digunakan untuk asam lemak metil ester). Ini hanya merupakan sebagian kecil dari

kadar lemak total sel alga, yang juga termasuk lipid polar, seperti fosfolipid,
glikolipid dan sulpholipids. Menggunakan kedua jenis lipid untuk produksi bahan
bakar secara signifikan akan meningkatkan total hasil biodiesel yang dapat
diperoleh dari biomassa. Perusahaan Akademik dan komersial telah menyadari
pentingnya penelitian tersebut tentang topik ini, dan metode transesterifikasi
langsung untuk kandungan total lipid mikroalga telah menghasilkan tingkat yang
cukup biodiesel bahkan ketika ada tingkat yang tidak terdeteksi dari lipids59,60
netral. Rekayasa genetika akhirnya bisa memungkinkan ganggang untuk
mengakumulasi tingkat tinggi TAG bahkan di bawah conditions61 pertumbuhan
yang cepat. Tapi mampu menggunakan lipid polar penting, serta yang netral, akan
memastikan bahwa sumber lipid digunakan tersedia, terlepas dari kondisi
pertumbuhan.
Lipid dan kualitas bahan bakar
Kualitas Lipid menentukan banyak sifat-sifat bahan bakar yang dihasilkan, termasuk
cetane number (ukuran kualitas pembakaran di mesin kompresi), stabilitas oksidatif,
viskositas dan flow62 dingin. Sumber yang paling umum dari biodiesel terdiri dari
C16 tak jenuh dan asam lemak C18 metil ester. Algae biasanya menghasilkan lipid
antara C14 dan C20 panjang. Lipid tidak jenuh biasanya menghasilkan bahan bakar
dengan cetane number miskin dan stabilitas oksidatif rendah, sedangkan asam
lemak jenuh menghasilkan bahan bakar di sejumlah cetane yang lebih tinggi dan
dengan stabilitas yang lebih besar tapi dengan mengorbankan kemampuan mereka
untuk digunakan pada suhu dingin. Strategi kimia untuk memperbaiki sifat-sifat
biodiesel, seperti mereaksikan ester fattyacid dengan alkohol selain metanol (etil
dan ester isopropil telah meningkatkan sifat suhu rendah), hidrogenasi lemak untuk
meningkatkan saturasi, catalytic cracking tradisional dan menggunakan aditif untuk
meningkatkan sifat biofuel, bisa used62.
Upaya untuk meningkatkan kuantitas lipid melalui ekspresi konstitutif transgen
dalam alga telah sukses terbatas karena hanya ekspresi kecil transgene63 tersebut.
Hal ini berbeda dengan berlebih dalam tembakau dari gen Arabidopsis DJPU
(terlibat dalam biosintesis TAG) dan LEC2 (gen regulasi pematangan biji dan
minyak-storage), yang meningkatkan asam lemak yield64 diekstraksi. Namun,
produksi lipid adalah kompleks dan mungkin berbeda antara beberapa ganggang
dan tumbuhan tingkat tinggi, misalnya DJPU telah diekspresikan dalam C. reinhardtii
tanpa efek diamati pada accumulation65 lipid.
Kelas lain dari hidrokarbon yang ditemukan dalam tanaman dan ganggang, yang
isoprenoidnya, adalah senyawa organik kompleks yang merupakan prekursor bahan
bakar yang ideal dan bisa meningkatkan fungibility biofuels66. Banyak
isoprenoidnya diproduksi di kloroplas, dan pemahaman yang lebih baik peraturan
mereka dan cara terbaik untuk memodifikasi jalur biosintesis mungkin mengizinkan
lebih prekursor biofuel yang akan produced67. Namun, meningkatkan kadar lemak
dan mengubah jenisnya bisa memiliki efek samping yang tidak diinginkan: the
mikroalga hijau Botryococcus terakumulasi hampir 40% dari biomassa dalam
bentuk botryococcene68 terpenoid hidrokarbon tetapi dengan mengorbankan
rate69 pertumbuhan.

Penggunaan Gizi dan daur ulang

Fotosintesis menghilangkan kebutuhan untuk sumber karbon organik mahal.
Namun, media yang dapat mendukung pertumbuhan alga kaya masih memerlukan
nutrisi berupa nitrogen, fosfor dan kalium, yang expensive70 dan - dalam kasus
fosfor - limited71. Biaya dapat dikelola dengan menempatkan kolam alga atau
bioreaktor dekat kaya nutrisi aliran air limbah, atau dengan menggunakan sumbersumber pakan seperti anaerobic digester effluents72 limbah. Pilihan lain adalah
untuk mendaur ulang nutrisi yang tetap dalam limbah alga setelah ekstraksi lipid,
daripada memproduksi pelet untuk menjual sebagai coproduct untuk pakan ternak.
Bukti untuk pencernaan anaerobik waste73,74 alga menunjukkan bahwa langkah
logis berikutnya adalah untuk mengoptimalkan ganggang tumbuh pada aliran
limbah tersebut. Strategi ini menciptakan aliran limbah proses dan menyediakan
nutrisi, ketika menggunakan energi yang tersimpan dalam biomassa alga limbah
dapat membantu untuk menjalankan proses produksi. Kimia dan rintangan rekayasa
perlu diatasi sebelum proses ini akan layak, dan ganggang harus direkayasa untuk
memproses nutrisi, termasuk kompleks nitrogen dan fosfor, dari limbah alga daur
ulang. Pendekatan-pendekatan lain untuk daur ulang nutrisi ini termasuk ekstraksi
air superkritis untuk menghilangkan asam lemak hampir semua tetapi
meninggalkan amonia bebas dan fosfat dalam fase berair, yang kemudian dapat
digunakan untuk melengkapi media75,76 pertumbuhan segar.
Pemulihan Gliserol juga mungkin. Ini adalah salah satu main-produk dari proses
transesterifikasi yang dapat berfungsi sebagai bahan baku karbon untuk
pertumbuhan alga heterotrofik. Ditanam di gliserol mentah, protothecoides Chlorella
telah disampaikan biomassa dan lipid hasil yang mirip dengan pertumbuhan di
glucose77. Meskipun energi yang tersedia dalam limbah gliserol sebagai sumber
karbon untuk produksi energi tidak akan layak, menggunakan aliran limbah ini
dalam photobioreactors sebagai suplemen bahan baku pasti bisa meningkatkan
hasil biomassa.
Perlindungan dari patogen
Perlindungan tanaman sangat penting untuk sistem kolam outdoor dan bioreaktor
tertutup. Namun, relatif sedikit yang diketahui tentang ancaman terhadap alga
pertanian bahkan dari patogen dikenal dan hama penggembalaan, dan lain-lain
mungkin muncul dengan pertanian lebih intens. Fasilitas outdoor percontohan
jangka panjang akan sangat penting untuk menentukan beban patogen di berbagai
lingkungan. Patogen ganggang sangat beragam dan termasuk virus, bakteri, jamur
dan eukaryotes78 lainnya. Selain infeksi virus Chlorella ditemukan pada awal 1980an (ref. 79), sangat sedikit virus alga telah dipelajari. Merumput oleh zooplankton
juga tekanan, tetapi parasit adalah ancaman yang lebih besar untuk alga mekar di
environments80 alami.
Temukan regangan juga dapat sangat mempengaruhi perlindungan tanaman.
Ganggang laut, seperti Dunaliella, tumbuh dalam media halofilik yang beberapa
organisme dapat bertahan hidup. Spesies Nannochloropsis mentolerir basa pH
fluctuations81, yang mungkin tidak dapat ditoleransi oleh banyak patogen.

Cyanobacteria Alkaliphilic sudah diproduksi di kolam renang besar untuk produksi

nutraceutical dalam budaya yang hampir seluruhnya bebas dari kontaminasi.
Adapun banyak tanaman tanaman tradisional, dimungkinkan untuk mengidentifikasi
atau berkembang biak alga yang tahan terhadap pestisida dan antibiotik yang
digunakan untuk mengendalikan spesies yang tidak diinginkan. Transformasi
genetik ganggang telah didirikan di banyak spesies selain dari model organisme
Chlamydomonas, dan banyak metode yang digunakan harus dialihkan kepada strain
biofuel. Seiring dengan gen resistensi diperlukan, biaya rendah dan tinggi
kemanjuran pestisida atau antibiotik akan perlu diidentifikasi untuk pengobatan
kolam dan bioreaktor. Lain, strategi yang sangat berbeda untuk memerangi
kontaminasi bakteri memanfaatkan sistem quorum-sensing yang menghambat
pertumbuhan bakteri, dan saat ini sedang dieksplorasi dalam budidaya massa
microalgae82.
Peningkatan panen
Pemanenan, terutama dewatering biomassa alga, merupakan salah satu biaya
utama dalam produksi biofuel alga. Kebanyakan kolam terbuka menggunakan
strategi panen semi yang menghilangkan kira-kira setengah dari ganggang,
mengurangi kebutuhan untuk re-inokulasi. Ganggang dipanen setelah setiap dua
kali lipat, sehingga pertumbuhan satu generasi per hari akan sama dengan panen
tunggal per day83. Atau, sistem kontinu untuk menjaga ganggang dengan
kepadatan konstan dan batch atau lengkap sistem yang mengingatkan tanaman
pertanian, menghapus hampir semua ganggang selama panen tunggal.
Pemanenan biasanya melibatkan pemisahan alga oleh sedimentasi atau flokulasi,
diikuti dengan penyaringan atau sentrifugasi untuk menghapus air yang tidak
diinginkan. Pengeringan ganggang merupakan langkah sangat besar energi-intensif,
yang merupakan salah satu kendala pada pembangunan komersial. Surya
pengeringan adalah sebuah pilihan, tapi masih bermasalah dengan teknologi saat
ini, karena waktu dan ruang yang dibutuhkan.
Mengoptimalkan ganggang untuk memudahkan panen dapat mencakup
peningkatan ukuran sel, yang membantu dengan strategi perlindungan tanaman
dan bantu filtrasi. Strain alga juga dapat direkayasa sedemikian rupa sehingga
penambahan polimer atau perubahan variabel lingkungan memicu
flocculation84,85. Dapat dibayangkan, protein yang terlibat dalam flokulasi dapat
diperkenalkan dan dimanipulasi untuk merespon keadaan pertumbuhan tertentu,
seperti yang ditunjukkan dalam strain industri yeast85,86. Ekstraksi lipid dari
ganggang basah mungkin menggunakan ekstraksi air superkritis ganggang dengan
kadar air sekitar 80% (ref. 76). Ekstraksi basah Efisien bisa menghapus kebutuhan
untuk dewatering luas dan pengeringan.
Outlook
Berkurangnya sumber bahan bakar fosil dan kekhawatiran atas penggunaannya
telah membuat kebutuhan untuk strategi produksi biofuel efisien dan berkelanjutan
lebih mendesak. Produksi biofuel skala besar ada, tapi ada kegelisahan tentang

efeknya pada produksi pangan dan perubahan penggunaan lahan. Biofuel alga
dapat mengurangi kekhawatiran ini. Alga dapat tumbuh dengan cepat di lahan nonpertanian untuk menghasilkan jumlah besar lipid yang dapat mudah dikonversi ke
bahan bakar sepadan. Meskipun produksi biofuel dari ganggang masih terlalu mahal
untuk bersaing dengan bahan bakar fosil, itu adalah calon sumber biofuel
berkelanjutan menarik.

BOX 1
Platform untuk produksi
Desain untuk budidaya ganggang untuk menghasilkan biofuel di kolam, bioreaktor
dan photobioreactors semua memiliki karakteristik yang unik, dan bagaimana
mereka memproduksi bahan bakar bervariasi. Dalam model pertanian, strain yang
berbeda telah diuji dengan sumber air yang berbeda dan desain kolam tetapi, di
semua fasilitas skala besar, lipid pertama kali menumpuk di dalam sel alga,
kemudian diekstraksi setelah panen dan diubah menjadi bahan bakar. Model
industri biasanya menggunakan pendekatan yang sama, apakah menggunakan
pertumbuhan heterotrofik dalam fermentor atau pertumbuhan fotosintesis di
photobioreactors.
Photobioreactors mahal untuk skala, sehingga sekresi langsung molekul bahan
bakar dari sel-sel alga telah menarik minat sebagai cara untuk mengurangi biaya
panen. Bahan Bakar dapat lipid yang secara alami disekresikan oleh beberapa
algae68,69 atau ganggang direkayasa untuk mengeluarkan lemak dari
conversion54,87 fotosintesis langsung. Pertumbuhan Photofermentative bukanlah
konsep baru bagi ganggang, dan modifikasi genetik telah ditujukan pada sekresi
lipid dan hidrogen production88. Sebagai ganggang mampu mengumpulkan gula
dan pati dari fotosintesis, konversi karbohidrat ini menjadi etanol, dan sekresi bahan
bakar utama ini juga telah pursued89. Dalam banyak kasus, akumulasi prekursor
bahan bakar dan bahan bakar dalam lingkungan oksigen akan meningkatkan
proliferasi organisme mencemari, membuat strategi perlindungan tanaman penting
untuk mencegah katabolisme produk yang dikeluarkan. Meskipun awalpengembangan teknologi bahan bakar sekresi dapat mengurangi kebutuhan untuk
memanen ganggang, setiap budaya padat digunakan pada akhirnya akan mati,
sehingga perlu untuk menghapus biomassa dari media pertumbuhan tidak
sepenuhnya dihilangkan (kecuali air dan daur ulang nutrisi diabaikan).
Dengan upaya bersama, perbaikan dapat dibuat untuk budidaya pertanian dan
industri ganggang untuk produksi biofuel. Budidaya Industri menghasilkan paling
ganggang per liter, tetapi sangat mahal. Budidaya pertanian pada dasarnya dapat
mencapai efisiensi biaya lebih dekat ke yang diperlukan untuk bersaing dengan
bahan bakar berbasis minyak bumi, dan dengan mengurangi dampak lingkungan
secara keseluruhan, tetapi kelangsungan hidup dengan skala yang cukup besar
hanya saja mulai diuji. Upaya untuk meningkatkan produktivitas tetapi mengurangi
input dan biaya melalui rekayasa proses dan penggunaan metode transgenik, dan
pemuliaan klasik bertujuan untuk mengembangkan dijinakkan strain tanaman alga,

akan menguntungkan kedua strategi. Dengan waktu, dan didorong oleh terus
meningkatnya harga bahan bakar fosil, teknologi dan fenotip alga akan
dikembangkan untuk memungkinkan biofuel alga untuk bersaing dengan komoditas
yang saat ini mendukung kehidupan modern - bahan bakar fosil.