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BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO

El nom bre m icroscopio deriva del griego: mikrs=pequeo,


skopo=observar. Este trm ino designa, en sentido am plio, a todo instrum ento
utilizado para am plificar la im agen de objetos que, por su tam ao, no son
observables a sim ple vista. En la prctica, se refiere a un aparato form ado por
un sistem a de, al m enos, dos lentes: un objetivo y un ocular, con el m ism o fin.
El descubrim iento del m icroscopio
com puesto tuvo un precedente atribuido a
Galileo (1564-1642).
El verdadero im pulsor de la Microscopa
fue, sin duda, el holands Anton Van
Leeuw enhoek, (1632-1723). Construy
m icroscopios sim ples, con lentes m uy
convexas que l m ism o pula y con los
cuales realiz ob serva ciones m uy
diversas: estudi la com posicin de la
sangre, fue el prim ero en observar y
dibujar los protozoos, descubri las
bacterias, etc.
Sus trabajos fueron
publicados por la Real Sociedad de
Londres (1683).

Leeuwenhoek. Su microscopio

Hoy da, hay unanim idad en considerar a


los holandeses Hans y Zacarias Janssen,
padre e hijo, com o constructores del
prim er m icroscopio com puesto en 1590.

Desde entonces y hasta nuestros das, el m icroscopio com puesto no ha cesado


de perfeccionarse, incorporndole m ejoras, revolver portaobjetivos, visin
binocular, ilum inacin halgena de gran rendim iento, filtros polarizadores, equipo
de contraste de fase, m icroscopio de contraste interferencial, m icroscopio de luz
ultravioleta, etc.
Pese a todo, el m icroscopio ptico presenta una serie de lim itaciones que le
im pone la naturaleza de la propia LUZ. Por encim a de los 1500-2000 aum entos,
las aberraciones que origina la luz im piden hacer observaciones con nitidez.
Es por ello que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de electrones
en lugar de rayos lum inosos y potentes electroim anes, en lugar de lentes. Con
ello naci el microscopio electrnico.
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PARTES

del

MICROSCOPIO

11- Pie o base: Sostiene todo el conjunto del m icroscopio y puede soportar un
espejo plano-cncavo, un ilum inador de subplatina acoplable o un equipo de
ilum inacin halgena, com o es el caso que describim os aqu.

Se relacionan en orden, segn la num eracin establecida en la figura adjunta.


1- Ocular: Sistem a de lentes que queda prxim o al ojo.
2- Anillo de correccin diptrica: Corrige las diferencias de visin entre am bos
ojos. Slo se presenta en los m icroscopios binoculares y trinoculares.
3- Revolver porta-objetivos: Accesorio que soporta de tres a seis objetivos,
segn los m odelos, perm itiendo cam biar de uno a otro, rpidam ente. Posee un
"clic" que nos avisa cundo est el objetivo en la posicin correcta.

12- Corrector de la distancia interpupilar: Im prescindible en los m odelos


binoculares, ya que la distancia entre nuestros ojos vara de una persona a otra.
13- Cabezal binocular: Equivale al tubo de los m odelos con diseo antiguo.
Es la estructura que soporta al ocular u oculares. En este caso contiene un
sistem a de prism as que inclinan el rayo lum inoso a 45 a la vez que lo dividen en
dos, uno para cada ocular.
Existen tam bin cabezales m onoculares y
trinoculares, estos ltim os con tubo adicional para cm ara fotogrfica o de vdeo.
14- Estativo: Colum na que soporta al cabezal y sirve com o asa de transporte.

4- Objetivos: Com ponentes pticos que quedan prxim os al objeto, de ah su


nom bre. Cada uno contiene un delicado sistem a de lentes.
Norm alm ente, se sum inistran cuatro objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Los tres
prim eros trabajan en seco, el cuarto, que lleva la inscripcin "OIL", y
generalm ente se distingue por un anillo negro en su parte baja, requiere
im prescindiblem ente el em pleo de un aceite especial, disponible en el com ercio,
"aceite de inmersin" o aceite de cedro cuyo ndice de refraccin es m uy
sim ilar al vidrio de las lentes (n = 1,515). Su funcin se explicar m s adelante.
El 40x y el 100x suelen estar provistos de m ontura retrctil.
5- Platina: Plataform a que sostiene la preparacin. En casi todos los diseos
actuales, presenta m ovim iento de elevacin-descenso para el enfoque.

15- Tornillo fijador del cabezal: Al aflojarlo, perm ite el giro de ste, para un
segundo observador, y su desm onte, en caso necesario.
16- Carro mvil porta-preparados: Accesorio que sujeta la preparacin y
perm ite m overla en direccin frontal y lateral, para su exploracin. Presenta una
pieza fija y otra m vil entre las cuales se ancla el porta. Suele ir provisto de dos
escalas con nonius, perpendiculares entre s para tom ar las coordenadas de
zonas interesantes de la preparacin.
17- Enfoque macrom trico: Este m ando realiza un enfoque rpido pero con
poca precisin, sobre todo cuando trabajam os con objetivos de gran aum ento.
Acta subiendo y bajando la platina, en m odelos antiguos m ueve el tubo.

6- Condensador: Conjunto de lentes que concentra la luz sobre la m uestra.


7- Diafragma iris: Es un sistem a m ecnico form ado por varias lam inillas
dispuestas en form a radial delim itando un orificio de abertura variable, que regula
la cantidad de luz que entra al condensador. Se acciona m ediante una palanca
de fcil acceso (en la figura aparece con ~). Su correcto uso es de vital
im portancia en la observacin, slo la prctica nos perm itir com probarlo.
8- Portafiltros: Contiene, norm alm ente, un filtro de vidrio azul, dado que la luz de
longitud de onda corta m ejora el poder de resolucin del m icroscopio.
Por otra parte, si el foco de luz no es plano o uniform e (bom billa blanca-m ate o
luz da) colocarem os en el anillo un filtro de vidrio esm erilado, blanco o azul.
9- Tornillo elevador del condensador: Perm ite bajar el condensador para
cam bio o lim pieza del m ism o y, a veces, para trabajar con aum entos dbiles.

18- Enfoque microm trico: Tornillo de enfoque con precisin, m ueve la platina
con extrem a lentitud. Es im prescindible para afinar el enfoque de los objetivos
con aum entos fuertes. En este m odelo es coaxial con el m acrom trico.
19- M ando de movimiento frontal del carro.
20- M ando de movimiento lateral del carro.
21- Regulador de intensidad lum inosa.
22- Interruptor de iluminacin.
NOTA 1: Los elem entos con n 1, 4, 6, 10 y 13 constituyen la parte ptica del
m icroscopio, todos los dem s form an la parte mecnica.

10- Iluminador: Este m odelo presenta a un eficaz equipam iento de ilum inacin,
alojado en la base, con lm para halgena y regulacin de la intensidad lum inosa.

NOTA 2: El aum ento total de trabajo se calcula m ultiplicando el aum ento indicado
en el objetivo por el indicado en el ocular (Ej.- objetivo 40x, ocular 10x, aum ento
total = 400x). Esto debe constar en los dibujos que se hagan sobre nuestras
observaciones.

M A N E J O del M I C R O S C O P I O

Es muy importante respetar todos los pasos que se detallan a


continuacin.
1- Quitar la funda de plstico (con cuidado de no coger el ocular, al m ism o
tiempo), doblarla y guardarla donde no estorbe.
2- Conectar el foco de luz.
3- Separar objetivo y platina, colocar la preparacin en sta y centrar la zona
teida sobre la lente superior del condensador.
4- Abrir poco el diafragm a y colocar el condensador en posicin alta.
5- Colocar el objetivo de m enor aum ento (4x o 10x, segn m odelos). Observando
lateralm ente el m icroscopio, aproxim ar el objetivo a la preparacin (bajando el
tubo o subiendo platina, segn m odelos) hasta que queden lo m s juntos posible,
sin llegar a tocarla.
6- Observando a travs del ocular, levantar lentam ente el objetivo (o bajar platina)
con el m acrom trico, hasta que aparezca un im agen ntida.
Dado el bajo aum ento del objetivo, es posible que la ilum inacin resulte excesiva.
El deslum bram iento nos im pedir obtener una visin satisfactoria, en tal caso,
cerrar el diafragm a, o bajar el condensador.
NOTA: Tngase en cuenta que antes de enfocar la preparacin, observarem os
la posible suciedad que haya sobre la lente superior del condensador y sobre la
cara inferior del porta. Saldrem os de dudas m oviendo el condensador o el carro.
Tam bin se puede dar el caso de que veam os puntos o m anchas que no
desaparecen al m over los elem entos antes citados. Sin duda, se trata de
suciedad depositada en el ocular, lo que com probarem os haciendo girar ste.
Una vez enfocada la preparacin, rara vez necesitarem os volver a tocar el tornillo
m acrom trico, incluso al cam biar de objetivos.

Dependiendo del m aterial que se estudie, el aum ento puede ser insuficiente para
obtener una im agen significativa (el profesor debe dar indicaciones al respecto),
en cuyo caso pasarem os al objetivo siguiente, 10x, El "clic" nos avisar la
correcta colocacin del objetivo.
Si el anterior estaba bien enfocado, podem os cam biar de objetivo directam ente,
sin m odificar el enfoque, aunque luego habr que afinar con el m icrom trico.
Continuar la exploracin.
8- Puede ser conveniente tom ar las coordenadas de las zonas m s interesantes.
Para ello, nos ayudarem os de los nonius, que estn dispuestos
perpendicularm ente entre s, sobre la platina. Pedir indicaciones al profesor.
9- Pasar al objetivo siguiente (40x), reenfocar con el m icrom trico, ser
conveniente m odificar la altura del condensador hasta su posicin m s alta as
com o la abertura del diafragm a.
NOTA: Es muy importante que los objetivos no toquen la preparacin, el
10x y 40x tienen ese riesgo, al igual que el 100x.
10- Slo si est previsto en el guin de prcticas, pasarem os al objetivo de 100xinm ersin. En tal caso, depositarem os una gota de aceite, que nos proporcionar
el profesor, sobre la preparacin.
Bajar el objetivo de 100x, m irando lateralm ente el
m icroscopio, hasta tocar la gota de aceite,
observarem os la form acin de un m enisco.
El aceite im pide la dispersin de los rayos de luz,
m ejorando notablem ente la nitidez de la im agen y la
lum inosidad del objetivo.
Mirando a travs del ocular, enfocarem os con el
m icrom trico. Debem os explorar la preparacin m uy
lentam ente.
11- Term inada la observacin, levantar el objetivo (o bajar platina). Retirar la
preparacin y apagar el foco. No olvidar lim piar el objetivo 100x, si se ha usado
aceite de inm ersin (ver MANTENIMIENTO).

7- Explorar la preparacin, utilizando los


m andos del carro, lentam ente de izquierda
a derecha y de arriba a abajo, procurando
no pasar varias veces por la m ism a zona.

RECOMENDACIONES

OBSERVACIN DE PREPARACIONES M ONTADAS

* Aunque los objetivos de 40x y 100x, en los m icroscopios m odernos, suelen ser
retrctiles, es decir, retroceden parcialm ente al tocar la preparacin para no
daarla, correm os el riesgo de rayar y ensuciar el objetivo, es preferible evitar el
contacto entre ste y el preparado, salvo en el caso de objetivo inm ersin.
* Con cada objetivo deberem os ajustar la abertura del diafragm a y, a veces, la
posicin del condensador, hasta obtener una visin satisfactoria.
En teora, el condensador debe estar siem pre en su posicin m s alta.
* Los m icroscopios m odernos, suelen venir equipados con oculares de punto focal
alto, es decir, si nos acercam os dem asiado a l, la visin ser defectuosa.
Debem os, por tanto, buscar la altura adecuada.
* En los m icroscopios de form ato antiguo, sin inclinacin en el cabezal, se pueden
inclinar estativo y platina, para m ayor com odidad. Esto no se podr hacer si
estam os utilizando inm ersin o preparaciones con lquido entre porta y cubre.
* En los m icroscopios binoculares, debem os tener en cuenta que la distancia
entre los ojos vara de una persona a otra. Habr que ajustar la separacin entre
los oculares.

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MANTENIMIENTO
1- El m icroscopio es un instrum ento de precisin, debe ser m anipulado con
suavidad, despacio, nunca intentar forzar ningn m ecanism o.
2- Term inada la prctica, separar objetivo y platina, retirar la preparacin y apagar
el foco.
3- Si se ha em pleado aceite de inm ersin, debe lim piarse el objetivo 100x con un
pauelo suave de celulosa, y papel siliconado para lim pieza de lentes. Si esto
resulta insuficiente, se utilizar xilol o mezcla alcohol-ter, im pregnando
levem ente el pauelo o papel lim pia-gafas.
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4- Cubrir bien el m icroscopio con su funda y, si no se va a usar en un cierto


tiem po, guardarlo en su estuche o arm ario.

INSTRUMENTOS MS USUALES EN MICROSCOPA


1- PORTAOBJETOS.- Vidrio rectangular de 75m m .x 25m m .(aprox.) sobre el que
se deposita la m uestra que pretendem os observar. Se expenden en el com ercio
en cajas de 50 unidades, generalm ente. Existen m odelos excavados para el
exam en "en gota pendiente" de infusorios, por ejem plo
2- CUBREOBJETOS.- Vidrio cuadrado extrem adam ente delgado, de
dim ensiones variables (20x20m m , 22x22m m , 22x50m m .,etc.) con el que se cubre
la muestra. El tam ao 20x20 m m . es el m s usual. Se suelen vender en cajas
de100 unidades.
3- AGUJA ENM ANGADA DE DISECCIN.- Aguja, m s o m enos larga, con
m ango, de usos m ltiples. No suele ser cara, pero se puede hacer de fabricacin
casera.

12- VIDRIOS DE RELOJ.- Vidrios cncavos de distintos dim etros y usos


m ltiples: para calentar suavem ente, para teir cortes etc.
13-CAPSULA DE PORCELANA.- Recipiente cncavo de porcelana, utilizado
para calentar.
14- CPSULA DE PETRI.- Tam bin llam ada placa de Petri o caja de Petri. Es
un recipiente cilndrico, de fondo plano cuya altura es notablem ente m enor que
su dim etro. Consta de dos partes de igual form a, una m ayor que la otra, que
encajan entre s. Se em plea para cultivos de bacterias y otros usos.

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4- LANCETA.- Sim ilar a la anterior pero con la punta aplanada en form a de lanza
y bordes cortantes. Presenta usos m ltiples: diseccin, m ontar preparaciones...
5- ESCALPELO.- Instrum ento cortante de uso en ciruga. Se aconseja utilizar
m odelos de un solo uso, su precio es m s asequible y su afilado, excelente . En
determ inados casos, se podr sustituir por una hoja de afeitar o un cter.

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6- ASA DE PLATINO.- Consta de un m ango provisto en su extrem o de un fino


alam bre, de aleacin nquel-crom o generalm ente, con un anillo term inal. Se
utiliza norm alm ente para m anipular los cultivos de bacterias.

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7- PINZAS.- Se aconsejan de presin suave. La hay puntiagudas, de puntas


redondeadas, curvas, etc.
8- TIJERAS DE DISECCIN.- Deben ser de acero inoxidable. Existen en el
com ercio m odelos desm ontables que perm iten una fcil lim pieza y secado. Las
hay de punta rom a, fina, curva, etc.

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9- CUENTAGOTAS.- Para dosificar colorantes y otros reactivos.


10- PINCEL DE PELO FINO.- Para m anipular cortes histolgicos. Tam bin es
conveniente disponer de otro destinado exclusivam ente a la lim pieza de lentes.
Los hay m uy decentes en los "Todo a 100".

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11- CUCHARILLA ESPTULA: Muy til para m anipular sustancias slidas, sobre
todo al pesar en la balanza.

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15- M ECHERO DE ALCOHOL.- Es conveniente que las fibras de la m echa no


estn m uy apretadas y que sta no sobresalga dem asiado de la boca del
m echero, para tener una llam a estable. Es imprescindible.
16- CUBETA DE TINCIONES.- Recipiente de form a rectangular o cuadrada,
generalm ente de plstico, de dim ensiones opcionales (por ejem plo 25x25 cm .),
sobre el que se deposita una varilla de vidrio o m etlica, doblada en "U" que
sujetar el porta durante la tincin. Se puede hacer con una cubeta de un "Todo
a 100" y un par de varillas de los zapatos o dos agujas de hacer punto, de
alum inio. Es imprescindible.

26- PERA DE GOM A.- Se adquiere en el com ercio para lavados nasales. En
nuestro caso, ser de gran utilidad para elim inar polvo o pelusas de los oculares,
a los cuales no debem os soplar nunca, pues una dim inuta gota de saliva puede
form ar una m ancha de tam ao considerable, a la hora de m irar a travs del
ocular.

17- VASO DE PRECIPITADOS.- Vaso de vidrio con pico en el borde para verter
su contenido. Tiene usos diversos com o calentar, por ejem plo.
18- PIPETA.- Tubo graduado para m edir volm enes de lquidos, con precisin.
Com o solucin casera, se puede sustituir por una jeringuilla de plstico.

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19- M ICRTOM O.- Instrum ento para hacer cortes suficientem ente delgados,
com o para ser observados por transparencia. El m s asequible es el m icrtom o
de m ano, pero, incluso ste m odelo, es un instrum ento caro.

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20- NAVAJA HISTOLGICA.- Es la clsica navaja barbera. Se usa para cortes


con m icrotom o y su perfecto afilado es esencial. (Es peligrosa de manejo se puede
sustituir por una hoja de afeitar y slo se necesita si se piensan hacer cortes histolgicos).
21- FRASCOS CUENTAGOTAS.- Muy tiles para dosificar los diversos
colorantes que se utilizan. Dependiendo de su contenido, se usarn de vidrio o
plstico. Se recom iendan los de vidrio color topacio. Para lquidos m uy voltiles,
se aconsejan de tapn esm erilado, algo m s caros.
22- FRASCO LAVADOR.- Frasco de plstico con un tubo curvo de salida, m uy
til para lavar las preparaciones. Los de 0,5 l. tienen un tam ao m anejable.
23- TU BO S DE ENSAYO.- De usos m ltiples, por ejem plo, para cultivos de
bacterias.

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24- ESTUCHE PARA PREPARACIONES.- Todas las preparaciones definitivas


deben ser alm acenadas en estuches adecuados, disponibles en el com ercio a
precio asequible.
25- ETIQUETAS.- Antes de alm acenar las preparaciones debem os etiquetarlas
en los extrem os del porta. La etiqueta debe indicar cuantos datos sean de inters
(m uestra, tincin, quin realiz la preparacin, fecha, lugar, etc.). Pueden ser
apropiadas las adhesivas de 16x22 m m . (aprox.).

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OBSERVACIONES GENERALES SOBRE EL MONTAJE DE PREPARACIONES

OBSERVACIN DE PREPARACIONES M ONTADAS

1) Para la observacin la luz debe atravesar la preparacin, luego sta debe ser
fina, bien extendida y capaz de ser traspasada por la luz.
2) La LIMPIEZA del m aterial es IMPRESCINDIBLE y debe evitarse siem pre la
grasa, huellas, pelusas, rayados, polvo, etc., tanto en las lentes del m icroscopio
com o en el porta y el cubreobjetos.
3) Los portaobjetos deben sujetarse con los dedos por los bordes, Los
cubreobjetos se m anipulan de igual m anera y/o con ayuda de un instrum ento fino
(aguja enm angada) para evitar huellas y
suciedad.
4) Las gotas de agua, colorantes u otros
productos, deben colocarse con cuidado,
utilizando el cuentagotas o una pipeta fina.
Si es preciso se extendern sobre el porta de
form a hom ognea con ayuda de una aguja
enm angada o lanceta, con cuidado de no rayar.

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5) Cuando se coloca el cubreobjetos sobre una gota previam ente situada en el


porta, se debe proceder com o indica la figura. Rozando el lquido en la unin
porta-cubre hasta que se situ a lo largo de toda la linea de contacto. Despus se
deja caer "de golpe", com o al cerrar un libro, para evitar que queden burbujas de
aire entre cubre y porta..

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