Prinsip Dasar dan Prinsip Kerja HPLC

Prinsip dasar dari HPLC adalahpemisahan analitanalit berdasarkan kepolarannya.

AdapunprinsipkerjadarialatHPLCadalahketikasuatusampelyangakandiujidiinjeksikanke
dalam kolom maka sampel tersebut kemudian akan terurai dan terpisah menjadi senyawa
senyawa kimia ( analit ) sesuai dengan perbedaan afinitasnya. Hasil pemisahan tersebut
kemudianakandideteksiolehdetector(spektrofotometerUV,fluorometeratauindeksbias)pada
panjanggelombangtertentu,hasilyangmunculdaridetektortersebutselanjutnyadicatatoleh
recorderyangbiasanyadapatditampilkanmenggunakanintegratorataumenggunakanpersonal
computer(PC)yangterhubungonlinedenganalatHPLCtersebut.
Pada prinsipnya kerjaHPLCadalah sama yaitu pemisahan analitanalit berdasarkan
kepolarannya,alatnyaterdiridarikolom(sebagaifasadiam)danlarutantertentusebagaifasa
geraknya.YangpalingmembedakanHPLCdengankromatografilainnyaadalahpadaHPLC
digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak. Campuran analit akan terpisah
berdasarkankepolarannyadankecepatannyauntuksampaikedektetor(wakturetensinya)akan
berbeda,haliniakanteramatipadaspectrumyangpuncakpuncaknyaterpisah.Ukuranskala
polaritas:golonganfluorocarbon<golonganhidrokarbon<senyawaterhalogenasi<golongan
eter<golonganester<golonganketon<golonganalcohol<golonganasam