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Cromatografa de gases

Fundamentos
Instrumentacin
Sistemas de inyeccin
Fases estacionarias
Detectores
Preparacin de muestra
Derivatizacin
Aplicaciones

22/11/2005

Qumica Analtica Avanzada

Introduccin

Cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la


fase mvil es un gas.
fase mvil = gas portador = carrier
El analito en forma gaseosa pasa a travs de la columna arrastrado
por el gas portador.
Cromatografa gas-lquido de reparto: fase estacionaria es un
lquido que recubre la pared interior de una columna o un soporte
slido.
Cromatografa gas-slido de adsorcin: fase estacionaria es un
slido sobre el que se adsorbe el analito.
Determinacin de analitos gaseosos o voltiles

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Instrumentacin

Cromatgrafo de gases
-Suministro de gases
-Inyector
-Horno
-Columna
-Detector
-Integrador

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muestra

Instrumentacin
detector
Integrador
ordenador
inyector
gas
columna

gas portador

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horno

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cromatograma

Instrumentacin (gases)
Gas portador: inerte, alta pureza, exento de humedad, exento de
oxgeno, exento de hidrocarburos
He, H2, N2
Gases detector: H2, aire,

manoreductor
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Medidor de burbuja
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Instrumentacin (gases)

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Sistema de inyeccin
-Introduccin de un volumen adecuado de muestra
Volmenes pequeos para evitar la sobresaturacin

1 ml muestra gaseosa
(0,1 10 l) muestra lquida

-Evaporar la muestra

Calentar Tinyector > Pebdel componente menos voltil de la muestra

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Sistema de inyeccin
Inyector para columnas capilares

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Sistema de inyeccin
Glass-liner: tubo de cuarzo silanizado que evita el contacto de la
muestra con las paredes calientes del inyector
Lana de vidrio silanizada para evitar que componentes no voltiles
de la muestra lleguen a la columna.

Tcnicas de inyeccin
-Con divisin
-Sin divisin
-En columna
-Espacio de cabeza
-Purga y trampa

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Sistema de inyeccin
Inyeccin con divisin (split)

septum

Entrada gas
portador

Purga septum

Salida divisin
columna

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Sistema de inyeccin
Inyeccin sin divisin (splitless)

septum

Entrada gas
portador

Purga septum

Vlvula cerrada
Salida divisin
columna

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Sistema de inyeccin
Inyeccin en columna (on column)

septum

Entrada gas
portador

Purga septum

Temperatura inyector baja

Aplicacin:
Analitos termolbiles

Salida divisin
columna

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Sistema de inyeccin
Espacio de cabeza (HS, Head Space)

espacio
libre

Vapor muestra
calor

Vial con
muestra

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Sistema de inyeccin
Espacio de cabeza

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Sistema de inyeccin
Espacio de cabeza
Aplicacin:
Analitos voltiles en muestras poco voltiles
Ejemplos:
Etanol en sangre; voltiles en cerveza
Ventajas:
-Elimina interferencias matriz
-Reduce pico disolvente
-Mejora sensibilidad
-Simplifica la preparacin de
muestra

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Inconvenientes:
-Slo para analitos voltiles

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Sistema de inyeccin
Purga y trampa (P&T, Purge and Trap)

Gas de purga

Trampa con
adsorbente
-tenax
-fenilmetilpolisiloxano

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Sistema de inyeccin
Purga y trampa (P&T, Purge and Trap)

Gas de purga

N2 lquido
Trampa fra

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Sistema de inyeccin
Purga y Trampa
Aplicacin:
Anlisis de trazas de analitos voltiles en muestras
poco voltiles
Ventajas:
-Purga todo el analito
-Elimina interferencias matriz
-Reduce pico disolvente
-pre-concentracin

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Inconvenientes:
-Slo para analitos voltiles
-Coste elevado

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Instrumentacin
(Horno)

Resistencia elctrica, ventilador, sensor de temperatura

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Instrumentacin
(Horno)
-Isotermo
-Temperatura programada
-Isotermo: Temperatura constante durante la separacin

THorno Peb
-Temperatura programada: Aumentar la temperatura de la
columna durante la separacin
Aumentar la presin de vapor de los solutos, disminuyendo
los tiempos de retencin

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Mezcla alcanos lineales. Columna 6 m x 1,6 mm. Apiezon L

Isotermo 150 oC

Temperatura
programada
50 o-250 oC a 8 o/min

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Programa de temperatura
50 oC (10 min) 200 0C a 7,5 oC/min (7 min)

250
Iso 2
200
Temp, oC
150
rampa
100
Iso 1
50

10

20

30

40
Tiempo, min

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Instrumentacin
(Columna)
Empaquetada (de relleno)
Fase estacionaria lquida, que forma una pelcula delgada
sobre la superficie de un soporte slido inerte y finamente
dividido (por ej. Chromosorb).
Fase estacionaria slida, finamente particulada.
Tubo: vidrio, metal (acero inoxidable). 2-4 m (L) x 24 mm ()
Capilar (de tubo abierto, Golay)
Fase estacionaria es una pelcula de lquido que recubre el
interior de un tubo capilar.
Tubo: slice fundida cubierto de poliimida.
15-100 m (L) x 0,1-0,53 mm ()

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Instrumentacin
(Columna)

Empaquetada

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Capilar

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Instrumentacin
(Columna)

Columna empaquetada

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Instrumentacin
(Columna)

Columna capilar

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Instrumentacin
(Columna)
Comparacin columnas capilares - empaquetadas

Las columnas capilares tienen:


- Mayor resolucin
- Menor capacidad de muestra

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Fases estacionarias
-Slidas (adsorcin)
-Slidas (tamiz molecular)
-Lquidas (reparto)
-Quirales

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Fases estacionarias
Slidas (adsorcin)
-Almina (hidrocarburos ligeros, freones)
-Carbn activo (hidrocarburos, fenoles)
-Gel de slice (anhdrido carbnico)
-Poliestireno (agua, amonaco, alcoholes)

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Fases estacionarias
Slidas (tamiz molecular)

Zeolita

Gases permanentes: He, Ne, Ar, O2, N2, CO


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Fases estacionarias
Lquidas (Reparto)
Polmeros lquidos de volatilidad baja, estabilidad trmica, inertes.
-Siliconas (polisiloxanos)

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Carbowax (polietilenglicol)

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Fases estacionarias
Lquidas (Reparto)
Regla para elegir fase estacionaria lquida:
Semejante disuelve a semejante
Polaridad

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Soluto no polar

Fase no polar

Soluto polar

Fase polar

Soluto muy polar

Fase muy polar

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Fases estacionarias
Lquidas (Reparto)
Polaridad de solutos
No polar

Polaridad intermedia dbil

Hidrocarburos saturados
Hidrocarburos olefnicos
Hidrocarburos aromticos
Halocarburos
Mercaptanos

teres
Cetonas
Aldehdos
steres
Aminas terciarias
Nitroderivados (sin H )

Polaridad intermedia fuerte

Muy polar

Alcoholes
cidos carboxlicos
Fenoles
Aminas primarias y secundarias
Oximas
Nitroderivados (con H )

Polihidroxialcoholes
Aminoalcoholes
Hidroxicidos
cidos poliprticos
Polifenoles

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Fases estacionarias
Lquidas (Reparto)
Polaridad de fases estacionarias
Constantes de McReynolds: suma ndices de Kovats (I) de:
Benceno
n-Butanol
2-pentanona
1-nitropropano
Piridina

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Fases estacionarias
Lquidas (Reparto)
Indices de kovats (I)
Benceno
P.e. 80 oC

1-butanol
P.e. 117 oC

2-pentanona
P.e. 102 oC

1-nitropropano
P.e. 132 oC

Piridina
P.e. 116 oC

dimetilpolisiloxano

657

648

670

708

737

3420

(Difenil)0,05
(dimetil)0,95
polisiloxano

672

664

691

745

761

3533

(Difenil)0,35
(dimetil)0,65
polisiloxano

754

717

777

871

879

3998

Polietilenglicol

956

1142

987

1217

1185

5487

(Biscianopropil)0,9
(cianopropilfenil)0,1
polisiloxano

1061

1232

1174

1409

1331

6207

Fase
Estacionaria

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Fases estacionarias
Lquidas (Reparto)
Las constantes de McReynolds se definen en una escala relativa, en la
que el escualeno (C30H50) tiene un valor cero.

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Fases estacionarias
Quirales
Separacin de ismeros pticos.
-ciclodextrina

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Detectores

-Conductividad trmica
-Ionizacin de llama
-Captura electrnica
-Ionizacin de llama alcalina
-Fotomtrico de llama
-Emisin atmica
-Espectrmetro de masas

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Detectores
Conductividad trmica
Catarmetro, TCD (Thermal Conductivity Detector)

Salida gas al exterior

Entrada gas desde la columna


filamento caliente

Cambios en la composicin del gas modifican la temperatura del filamento


Al cambiar la temperatura del filamento cambia su resistencia elctrica

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gas

Conductividad trmica* (JK-1m-1s-1)

H2

0,170

He

0,141

NH3

0,0215

N2

0,0243

C2H4

0,0170

O2

0,0246

Ar

0,0162

C3H8

0,0151

CO2

0,0144

Cl2

0,0076

* a 273 K, 1 atm
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Detectores
Conductividad trmica (TCD)
Caractersticas
-Universal

-Poco sensible (400 pg/ml)

-Rango lineal amplio (105)

-Sensibilidad depende de: tipo de gas


portador, flujo gas portador

-No destructivo

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Detectores
Ionizacin de llama
FID (Flame Ionization Detector)

Salida gas al exterior

Sistema
electromtrico

V = 170 v

Entrada gas desde la columna

Entrada de aire

Entrada de hidrgeno

La formacin de iones en la llama induce una intensidad de corriente elctrica


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Detectores
Ionizacin de llama (FID)
Los tomos de carbono (excepto carbonilos y carboxilos) producen
radicales CH, que forman iones CHO+

CH + O CHO + + e
CHO+

CHO+
CHO+
CHO+

CHO+
CHO+

CHO+

CHO+

CHO+

Eluato con compuestos orgnicos carbonados

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Detectores
Ionizacin de llama (FID)
Caractersticas
-Muchas aplicaciones
(hidrocarburos)

-Destructivo

-Rango lineal amplio (107)


-Sensible (2 pg/s)

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Detectores
Captura electrnica
ECD (Electron Capture Detector)

Ar+
Ar+

Ar+

Ar+

Fuente radiactiva

(63Ni)

e-

Sistema
electromtrico

V = 200 v

Ar+

Entrada gas portador (N2, Ar con CH4) desde la columna

El gas portador se ioniza por el impacto de las partculas


Molculas con tomos electronegativos
(halgenos) captan electrones
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Disminuye ionizacin
gas portador
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Detectores
Captura electrnica (ECD)
Caractersticas
-Compuestos halogenados
-Rango (104)
-Sensible (5 fg/s)

Aplicaciones:
-plaguicidas organoclorados
-hidrocarburos halogenados
(halometanos, freones, clorofenoles)

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Detectores
Ionizacin de llama alcalina
NP-FID (Nitrogen Phosphorous - Ionization Detector)
Aplicaciones:
-plaguicidas (organofosforados,
triazinas)
-drogas de abuso (coana, herona)
Sistema
electromtrico
Gas make up
Entrada gas desde la columna

Entrada de aire

Entrada de hidrgeno

La presencia de la perla alcalina (vidrio con Rb2SO4) sensibiliza el detector a


los compuestos con N y/o P en la molcula

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Detectores
Fotomtrico de llama
FPD (Flame Photometric Detector)
Aplicaciones:
-plaguicidas organofosforados
Filtro interferencia

-compuestos azufrados
-organoestnnicos
h

Tubo fotomultiplicacor

Entrada gas desde la columna

Entrada de aire

Entrada de hidrgeno

Los compuestos con S, P, Sn en la molcula emiten radiacin en la llama

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Detectores
Emisin atmica
AED (Atomic Emission Detector)

Fila de diodos

Cavidad resonante
Plasma

generador
de
microondas
Red de difraccin

Aplicaciones:
-organometlicos
-organoclorados

Eluato de la columna

Los elementos se excitan en el plasma y emiten radiacin

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Detectores
Espectrmetro de masas (MS)

Fuente de ionizacin

Analizador de masas

Detector

Vaco (10-7 torr)

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Detectores
Espectrmetro de masas (MS)
Vaco mnimo (torr)

Recorrido libre medio (mm)

0,0002

10-1

0,002

10-3 (bomba rotativa)

0,2

10-4

10-5 (bomba turbomolecular)

20

10-6

200

10-7

2000

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Detectores
Espectrmetro de masas (MS)

Fuente de ionizacin

Analizador de masas

Detector

Vaco (10-7 torr)


Bomba de vaco

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Detectores
Espectrmetro de masas (MS)
Fuente de ionizacin: La molcula se fragmenta en iones que son
acelerados hacia el analizador de masas
Fuente de impacto electrnico

filamento
columna CG

Placas
aceleradoras

e- e

M+

rechazador

Placas
focalizadoras

Analizador de masas

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Fuente de impacto electrnico


-Fuente ionizacin dura

Espectro complejo
No aparece in molecular

Pico base
100

% abundancia
M+

Identificacin de sustancias
Libreras espectros EI+ 70 eV

0
m/z

Iones positivos, Z = 1

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Ionizacin qumica
Ionizacin en presencia de un gas reactivo (CH4)
El gas se ioniza y los iones formados ionizan la molcula

CH 4 + e - CH 4+ + 2e CH +4 + CH 4 CH 5+ + CH 3

CH 5+ + M CH 4 + MH +
Fuente de ionizacin blanda

Espectro sencillo

Siempre aparece el in molecular

Obtencin de la masa molecular

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Detectores
Espectrmetro de masas (MS)
Analizador de masas
Discrimina los fragmentos en funcin de su valor m/z
-Sector magntico
-Doble enfoque
-Cuadrupolo
-Tiempo de vuelo
-Trampa de iones

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Analizador de sector magntico

Fuente de iones

M+

m eB 2 r 2
=
z
2V
-Barrido variando B
Detector

-V constante

imn

-Sensibilidad alta
-Resolucin baja

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Analizador de doble enfoque


Sector magntico + analizador electrosttico
Fuente de iones

M+

Alta resolucin

Analizador
electrosttico

Detector

imn

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Analizador de cuadrupolo
Sobre el cuadrupolo se aplica
un potencial elctrico variable
de corriente continua y otro de
corriente alterna

M
M++

nes
Fuente de io

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cto
e
t
De

-Barrido rpido

Acoplamientos

-Baja resolucin

CG-MS

-Rango de masas
limitado

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Analizador de tiempo de vuelo


No acta ningn campo magntico ni electrosttico
Los iones de menor masa llegan antes al detector
Detector

Fuente
iones
M+

M+

-Rango de masas ilimitado

Biomolculas

-Alta sensibilidad
-Baja resolucin

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Analizador de trampa de iones


Electrodo anular sobre el que se aplica un campo de radiofrecuencia
que estabiliza la rbita de los iones

colu
mna
CG
M

e-

M+

Detector

-Diseo sencillo

CG-MS

-Baja resolucin
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Detector de masas
Channeltron
Multiplicador de iones
Superficie material que libera
e- cuando impactan los iones
M+

ee- -

e- ee- -

ee- ee-- e

ee- -

Carga negativa, que disminuye hacia el


electrodo colector

Electrodo colector

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Detectores
Espectrmetro de masas

Espectros de masas

TIC

Cromatograma

Total Ion
Current

-modo SCAN (Barrido)


-modo SIR (Single Ion Recording)
(Registro nico de in)

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Preparacin de la muestra
-Extraccin
-Limpieza (Clean-up)
-Concentracin
-Derivatizacion

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Preparacin de la muestra
Extraccin
- Lquido-Lquido
- Extraccin en fase slida (SPE)
- Supercrtica (FSC)

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Preparacin de la muestra
Extraccin lquido-liquido

Extraccin simple

Extraccin continua

Muestras lquidas (aguas, bebidas)


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Soxhlet
Muestras slidas
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Preparacin de la muestra
Extraccin en fase slida (SPE)

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67

Preparacin de la muestra
Extraccin con fluido supercrtico (FSC)

Bomba alta presin

Cmara extraccin

Bala con FSC


bomba auxiliar

Sistema colector

restrictor

Muestras slidas

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Preparacin de la muestra
Limpieza (clean-up)

El extracto se pasa por una columna rellena de:


- florisil
- gel de slice
- almina
Se separan componentes de la muestra que dan interferencias.

Picos en el cromatograma que solapan con los de los analitos

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69

Preparacin de la muestra
Concentracin
Despus de la extraccin y limpieza la muestra suele quedar diluida
El disolvente se elimina por evaporacin en vaco o mediante el paso
de una corriente de nitrgeno

Rotavapor

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Preparacin de la muestra
Concentracin

Kuderna-danish

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Derivatizacin
Modificar la molcula de los analitos mediante una reaccin
qumica para facilitar el anlisis por cromatografa
En cromatografa de gases se forman derivados para aumentar la volatilidad

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Compuesto

Derivado

cido carboxlico

ster

Alcohol

Metilsilil

Amina

metilsilil

Carbonilo

oxima

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Aplicaciones analticas Cromatografa de gases

Alimentos
Toxicolgico y forense
Medioambiente
Petroqumica
Esencias y perfumes

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Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Alimentos
Componentes voltiles de bebidas alcohlicas:
cerveza, vinos, destilados
Compuesto

Comentario___________

metanol, 1-butanol, 2-metilpropanol, 2-metil-butanol,


3-metil-butanol,
acetaldehdo, acetato de
etilo, acetato de isoamilo

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Inyeccin por espacio de cabeza


FID

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Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Alimentos
Anlisis de aceites vegetales (oliva, girasol, soja, almendra)
Compuesto

Comentario___________

cidos grasos (mirstico,


olico, linolico, palmtico,
linolnico)

Saponificacin
Derivatizacin (ster metlico, FAME)
FID

Esteroles (estigmasterol,
campestanol, -sitosterol,
-5-avenasterol)

Saponificacin, CCF
Derivatizacin (silil derivado)
FID

Disolventes (diclorometano,
tricloroeteno)

Inyeccin espacio de cabeza


ECD

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Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Alimentos
Anlisis de aguas potables
Compuesto

Comentario___________

Halometanos (cloroformo,
bromoformo,
dibroclorometano,
diclorobromometano)

Inyeccin espacio de cabeza


ECD

Plaguicidas
(organoclorados,
organofosforados, triazinas)

Extraccin, clean-up, concentracin


ECD, FPD, NP-FID

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Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Toxicolgico y forense

Compuesto

Comentario___________

Drogas de abuso (cocana,


herona, metadona,
morfina, cafena)

Extraccin, clean-up, concentracin


NP-FID, MS

Dopantes (efedrina,
nandrolona)

Extraccin, clean-up, concentracin


MS

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77

Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Medioambiente
Anlisis de aguas, suelo, atmsfera
Compuesto

Comentario___________

Plaguicidas

Extraccin, clean-up, concentracin


ECD, FPD, NP-FID,

Disolventes industriales

Extraccin, clean-up, concentracin


FID

Freones

ECD

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78

Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Petroqumica
Anlisis de gasolinas, gasleos, gases de bombona
Compuesto

Comentario___________

hidrocarburos

FID

Metano, propano, butano

Tamiz molecular
FID

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79

Aplicaciones analticas cromatografa de gases


Esencias y perfumes
Anlisis de colonias, perfumes, cosmticos
Compuesto
Geraniol, limoneno,
mirceno, sabineno

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Comentario___________
Inyeccin espacio de cabeza
FID

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Bibliografa:
- Anlisis Qumico Cuantitativo, D.C. Harris, 2 ed.(correspondiente a la 5 ed
norteamericana), Revert, Barcelona, 2001.
- Principios de Analisis Instrumental, D. Skoog, F.J. Holler, T.A. Nieman,
McGraw-Hill/Interamericana de Espaa, Madrid, 2000.
- Modern Practice of Gas Chromatography, R.L. Grob, John Wiley & Sons,
New York, 1985.
Direcciones web:
-http://www.uga.edu/srel/AACES/GCtutorial/page1.html
-http://www.shsu.edu/~chm_tgc/sounds/sound.html
-http://en.wikipedia.org/wiki/Chromatography

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