Bahan Kroma
Bahan Kroma
Genus Vitex terdiri dari sekitar 250 spesies termasuk pohon dan semak-semak, yang terutama
ditemukan di daerah tropis dan subtropis. Sekitar 14 spesies yang ditemukan di India yang telah
dilaporkan untuk memiliki obat tertentu dan properti komersial [1,2]. Tanaman Legundi L. (V.
negundo) yang dikenal sebagai nirgundi dan milik family Verbenaceae. Dalam bahasa
Sansekerta, kata "nirgundi" kata digunakan untuk pabrik atau zat-zat yang dapat melindungi
tubuh dari penyakit (s). Kegunaan dari
tanaman tersebut telah disebutkan di De Materia Medica serta dalam teks dasar Ayurveda
(pengobatan tradisional India), Charaka Samhita. Tanaman ini terutama dikenal untuk utilitas
dalam gangguan reproduksi wanita seperti sindrom pramenstruasi [3], menopause [4],
hiperprolaktinemia [3,5], dll. Menurut Dancel, Legundi Linn adalah semak yang berasal
Afghanistan, Bangladesh, Bhutan, Kamboja, China, India, Indonesia, Jepang, Kenya,
Madagaskar, Malaysia, Mozambik, Myanmar, Nepal, Pakistan, Filipina, Sri Lanka, Taiwan,
Tanzania, Thailand, dan Vietnam. Di Filipina, daun secara tradisional direbus dalam air dan
kaldu yang dihasilkan digunakan eksternal untuk membersihkan bisul dan dikonsumsi secara
internal untuk mengobati perut kembung, untuk meningkatkan produksi susu dalam keperawatan
perempuan. [4]
Legundi adalah semak tegak atau pohon kecil yang tumbuh 2-8 meter tingginya. Kulit biasanya
berwarna coklat kemerahan. Daunnya bercabang menjadi 3-5 jari seperti selebaran lanset. Setiap
daun mudanya sekitar 4 sampai 10 cm, dengan selebaran pusat yang terpanjang dan memiliki
tangkai. Daun-ujungnya bergigi atau berlekuk seperti gergaji dan permukaan bawah ditutupi
dengan rambut. Bunga-bunga ungu-putih berlebihan ditanggung dalam malai sekitar 10 sampai
20 cm (Gambar 1). Kelopak yang panjang yang berbeda, dengan lobus bawah tengah menjadi
yang terpanjang. Baik corolla dan kelopak yang ditutupi rambut lebat [6]. Bunga-bunga yang
harum hermafrodit. Berikut ialah gambarnya. [5]
[5] (memiliki baik laki-laki dan organ kewanitaan) di alam dan diserbuki oleh serangga.
Kebanyakan kegiatan terapi yang dimiliki oleh V. negundo karena phytoconstituents ada di
dalamnya, yaitu friedelin, karoten, casticin, artemisin, luteolin, vitexin, nigunduside,
vitexicarpin, linalool, asam strearic, asam, negundin, agnuside, asam vanilat behenic, asam,
vitexoside, stigmasterol, sabinene, GardenDi, asam ursolat, asam p-betunilic hydrobenzoic ,
spathulenol, p-cymene, globulol, virdifloral, hentriacontane, lagundinin, vitedoamine,
nishandaside dan sebagainya [6]. V. negundo merupakan tanaman obat secara ekstensif dipelajari
dan diketahui memiliki berbagai pilihan aktivitas farmakologi seperti analgesik dan antiinflamasi [7-9], hepatoprotektif [10], antidiabetes [11], antikonvulsan [7,12], antioksidan [13,14],
dll Dalam sistem tradisional India obat (Ayurveda), V. negundo digunakan sebagai antihelmintik
dan untuk mengobati gangguan kulit. The Pharmacopoeia Cina mengatur buah V. negundo
dalam pengobatan memerah, menyakitkan, dan bengkak mata; sakit kepala dan rematik sendi
[15]. Ada daftar besar penyakit yang V. negundo digunakan sebagai obat di Ayurvedic, Unani,
Sidhha dan sistem Cina obat [16,17]. Luteolin merupakan konstituen penting dari V. negundo L.
Kimia itu adalah 3 ', 4', 5,7-tetrahydroxyflavone (Gambar 1) dan memiliki berbagai kegiatan
terapi. Meskipun banyak flavonoid yang hadir dalam tanaman obat ini tapi karena kandungan
kecil luteolin dalam obat dan kemanjuran terapi tinggi, analisis kuantitatif menjadi sangat
diperlukan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan pelarut yang paling sesuai untuk
mengoptimalkan metode ekstraksi untuk isolasi luteolin dari daun V. negundo L. dengan
penentuan kuantitatif luteolin dalam ekstrak pelarut yang berbeda melalui kromatografi cair
kinerja tinggi (HPLC).
ekstraksi pelarut panas soxhlet dilakukan dengan menggunakan alat soxhlet selama 2 jam pada
suhu 50 C dengan menggunakan pelarut: rasio obat 10: 1 (mL / g). Pengolahan lebih lanjut dari
ekstrak dilakukan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan sebelumnya.
2.3.4. Ekstraksi melalui (UEA) USG dibantu ekstraksi dilakukan selama 20 menit dengan
pelarut: rasio obat 10: 1 (mL / g) pada 50 C dalam sonikator (TOSCHON, SW7). Pengolahan
lebih lanjut dari ekstrak dilakukan dengan cara yang sama dibahas di atas.
2.4.1. Persiapan larutan standar
Larutan stok standar luteolin disiapkan di HPLC kelas metanol pada konsentrasi 1 mg / mL.
Deret standar dibuat pada konsentrasi 100, 125, 175, 200 dan 500 mg / mL dengan metanol dan
disimpan pada suhu -20 C. Sebelum digunakan lebih lanjut, larutan dibawa ke suhu kamar.
Setiap larutan standar disaring melalui 0,2 m filter membran (Axiva) dan kemudian diukur pada
analisis HPLC untuk mendapatkan ketinggian puncak pada waktu retensi statis untuk setiap I
larutan standar. Kurva kalibaras kemudian dibuat hubungan konsentrasi (mg / mL) dengan
daerah puncak. Persamaan linear dari kurva standar digunakan untuk menentukan konsentrasi
luteolin pada sampel uji.
2.4.2. Larutan sampel persiapan
Sepuluh miligram berbagai ekstrak pelarut dari daun V. negundo L. dibuat dengan metode
ekstraksi yang berbeda, ditimbang dan dilarutkan dalam HPLC kelas metanol untuk
mendapatkan konsentrasi akhir 1 mg / mL. Solusi kemudian disaring melalui 0,2 um membran
filter dan 20 uL larutan yang dan diukur analisis HPLC. Konsentrasi akhir luteolin dalam ekstrak
dihitung dengan menggunakan persamaan linear pada kurva kalibrasi.
2.4.3. Kromatografi analisis kondisi
Analisis HPLC dari ekstrak daun v dilakukan dengan HPLC Kuarter System (Shimadzu,
Jepang) yang terdiri dari LC- 10AT VP pompa (Shimadzu, Jepang), panjang gelombang tunggal
yang diprogram secara UV-detektor, dan sistem pengendali. Sampel disuntikkan dengan
menggunakan injektor Rheodyne dilengkapi dengan 20 uL lingkaran tetap. Standar dan solusi
sampel disaring melalui 0,2 m jarum suntik penyaring (Axixa) sebelum injeksi. Pemisahan
dicapai dengan menggunakan kolom dengan 25 mm x 4,6 mm, ukuran partikel 5 m, LiChrospher
C18 kolom fase terbalik (Merck, Jerman). Penentuan luteolin dilakukan dengan fase gerak yang
terdiri dari metanol dan 1% larutan asam asetat (99: 1 v / v) dengan laju alir 1,0 mL / menit.
Pemisahan optimal di HPLC dicapai pada 30 C dan absorbansi diukur pada 289 nm.
3. Hasil
3.1. Pengujian fitokimia
Beberapa survei fitokimia telah dilakukan, termasuk pendekatan sampling secara acak
yang melibatkan beberapa macam tanaman yang dikumpulkan dari seluruh penjuru dunia. Zat
kimia utama yang menarik dalam survei fitokimia ini ialah alkaloid dan steroid sapogenins
(saponin). Selain itu, terdapat juga senyawa fitokimia alami lain yang beragam seperti flavonoid,
tanin, sterol tak jenuh, triterpenoid, minyak esensial, dll juga telah dilaporkan.
(http://ijpr.sbmu.ac.ir/index.php/daru/article/view/article_16_0.html). Analisis fitokimia yang
dilakukan pada ekstrak tumbuhan digunakan untuk mengungkapkan adanya konstituen sebagai
aktifitas fisiologis obat (RNS Yadav dan Munin Agarwala 2011). [1]
Selama percobaan, waktu ekstraksi, suhu ekstraksi dan obat: rasio pelarut dijaga konstan untuk
semua pelarut. Hasil persen hasil dalam pelarut yang berbeda dengan berbagai teknik ekstraksi
telah disajikan pada Tabel 1. Seperti yang diharapkan, berbagai jumlah hasil ekstrak diperoleh
dengan pelarut yang berbeda dan teknik ekstraksi. Hasil maksimum dan minimum untuk ekstrak
etanol (14,5% dan 5,2%) diperoleh dengan soxhlet dan teknik UEA masing-masing. Namun hasil
ekstrak metanol ditemukan menjadi yang tertinggi dengan teknik UEA. Jumlah yang cukup
kloroform dan diklorometana ekstrak diperoleh dengan refluks dan teknik soxhlet masingmasing. Secara umum, hasil dari ekstrak dengan refluks dan metode ekstraksi soxhlet (sistem
pelarut panas) ditemukan lebih besar dari maserasi dan teknik UEA. Tabel 1
Gambar 4. HPLC kromatogram ekstrak daun V. negundo metanol dengan teknik refluks.
Kuantifikasi ekstrak dengan metode yang berbeda dari V. negundo L. melalui HPLC
mengungkapkan bahwa metanol adalah pelarut terbaik untuk ekstraksi luteolin. Kandungan
luteolin dalam ekstrak metanol diperoleh melalui maserasi, soxhelation, refluks dan teknik UEA
ditemukan 1.020%, 1.075%, 6,340% dan 0,640% masing-masing (Tabel 1). Dalam etanol,
kandungan luteolin diekstraksi dengan berbagai teknik tidak setinggi dalam kasus metanol.
Seperti terlihat, dalam pelarut lain seperti, kloroform dan diklorometana mengandung kisaran yg
sgt sedikit yaitu di kisaran 0,5% -0.6%. Selain itu, ia juga mengamati bahwa di antara berbagai
teknik yang digunakan untuk ekstraksi dan isolasi luteolin, teknik refluks ditemukan untuk
menjadi yang paling efisien. Jelas, hasil penelitian kami menunjukkan bahwa metanol adalah
pelarut yang paling sesuai untuk ekstraksi luteolin.
4. Diskusi
Luteolin (3 ', 4', 5,7-tetrahidroksi-flavon) adalah salah satu flavonoid yang paling bioaktif yang
ada di banyak jenis tanaman seperti peterseli, thyme, peppermint artichoke, daun perilla dan teh
chamomile. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa luteolin memiliki berbagai sifat
biokimia dan farmakologi, termasuk anti-platelet, anti-ulkus, anti-inflamasi, perlindungan
kardiovaskular, anti-bakteri dan sifat antivirus [3-7]. Studi terbaru telah lebih lanjut
menunjukkan bahwa hal itu bisa masuk ke inti sel dan menekan kerusakan oksidatif DNA, lipid,
protein, dan karbohidrat [8, 9]. Oleh karena itu, control dan memantau dosis luteolin sangat
penting dalam bidang klinis. Sampai saat ini, banyak metode telah dilaporkan untuk penentuan
luteolin flavonoid, termasuk highperformance kromatografi cair (HPLC) [10-12], elektroforesis
kapiler [13, 14], spektrofotometri [15], kromatografi gas (GC) [16] dll. [8]. Selama beberapa
dekade banyak teknik ekstraksi baru terakhir telah dikembangkan untuk isolasi komponen
bioaktif dari tanaman obat. Namun beberapa penelitian telah melaporkan bahwa aktivitas
biologis ekstrak dipengaruhi oleh teknik ekstraksi yang digunakan. Oleh karena itu, penting
untuk memilih pelarut yang cocok serta metode ekstraksi, yang paling dipengaruhi oleh adanya
zat campur, berdasarkan sifat kimia dan fisika contoh matriks [19].
Luteolin merupakan konstituen penting dari V. negundo dan diketahui memiliki banyak manfaat
terapeutik. Oleh karena itu, kandungan dari tanaman ini perlu diketahui. Luteolin hadir dalam
jumlah yang sangat kecil sekali dalam daun tanaman ini. Oleh karena itu teknik HPLC
digunakan untuk kuantifikasi nya. HPLC adalah teknik kromatografi yang umum digunakan
untuk analisis kualitatif dan kuantitatif flavonoid dalam bahan tanaman karena dianggap metode
yang paling mudah [20]. Juga pemisahan jauh lebih cepat daripada metode klasik dan
memberikan resolusi tinggi dan sensitivitas. Hasil panen ekstrak bervariasi dengan pelarut dan /
atau teknik ekstraksi tetapi maksimum% yield diperoleh dengan teknik refluks. Perbedaan hasil
% daun ekstrak bisa disebabkan perbedaan dalam ketersediaan komponen diekstrak dengan
teknik pelarut / ekstraksi yang berbeda [21]. Hal ini dapat disimpulkan bahwa metode ekstraksi
pelarut panas adalah pilihan yang lebih baik untuk persiapan ekstrak dari leveas V. negundo
dibandingkan dengan metode non thermal seperti maserasi atau UEA. Juga, hasil analisis HPLC
menunjukkan bahwa kandungan luteolin merupakan yang tertinggi dalam ekstrak metanol
terlepas dari teknik ekstraksi yang digunakan, yang berarti bahwa metanol adalah pilihan yang
menguntungkan pelarut untuk ekstraksi luteolin. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa
prosedur ekstraksi dan pelarut tidak mempengaruhi isolasi dan hasil luteolin dari V. negundo
ekstrak daun. Hasil penelitian ini juga akan membantu para peneliti dalam memilih pelarut yang
sesuai dan teknik ekstraksi yang tepat untuk isolasi luteolin dari daun ekstrak V. negundo, yaitu
metanol dan refluks metode. Juga luteolin dapat digunakan sebagai biomarker dalam
standardisasi dan pengawasan mutu daun ekstrak obat ini dalam industri herbal sebagai metode
HPLC ini sederhana, selektif, sensitif dan cepat. Konflik pernyataan bunga Kami menyatakan
bahwa kita tidak memiliki konflik kepentingan.
Ucapan Terima Kasih Penulis berterima kasih kepada Kepala, Departemen
Farmakognosi dan Fitokimia, Jamia Hamdard, New Delhi, India untuk menyediakan
fasilitas penelitian yang diperlukan untuk melaksanakan proyek ini. Para penulis
juga ingin mengucapkan terima kasih AICTE, Pemerintah. India untuk mendukung
proyek penelitian hibah lebar No. AICTE / M.PHARM / SS / 2011-2013).