Tujuan Untuk memberikan informasi mengenai banyaknya komponen dalam analisa kualitatif.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
Dasar Teori Kromatografi lapis tipis adalah suatu metode pemisahan yang menggunakan plat atau lempeng kaca yang sudah dilapiskan adsorben yang bertindak sebagaifasa diam. Fase bergerak ke atas sepanjang fase diam danterbentuklah kromatogram. Metode ini sederhana, cepat dalam pemisahandan sensitif (Khopkar, 1990). Kromatografi lapis tipis adalah metode pemisahan fitokimia. Lapisan yang memisahkan terdiri atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah, berupa larutan, ditotolkan berupa bercak atau pita (awal), kemudian pelat dimasukkan pengembang
di
dalam
yang
bejana
cocok
(fase
tertutup gerak).
rapat
yang
Pemisahan
berisi
larutan
terjadi
selama
perambatan kapiler (pengembangan) dan selanjutnya senyawa yang tidak
berwarna harus ditampakkan (Stahl, 1985). Pada prinsipnya KLT dilakukan berdasarkan pada penggunaan fasa diam untuk menghasilkan pemisahan yang lebih baik. Fasa diam yang biasadigunakan dalam KLT adalah serbuk silika gel, alumina, tanah diatomedan selulosa (Harborne, 1987). Adapun carakerja dari KLT yakni
larutan cuplikan sekitar 1% diteteskan denganpipet mikro pada jarak 1-2
cm dari batas plat. Setelah eluen ataupelarut dari noda cuplikan menguap, plat siap untuk dikembangkandengan fasa gerak (eluen) yang sesuai
hingga
jarak
eluen
dari
batasplat
mencapai
10-15
cm.
Mengeringkan sisa eluen dalam plat dengandidiamkan pada suhu kamar.
Noda pada plat dapat diamati langsung dengan menggunakan lampu UV atau dengan menggunakan pereaksi semprot penampak warna. Setelah noda
dikembangkan
dan
divisualisasikan,identitas
noda
dinyatakan
dengan harga Rf (retardation factor)(Anwar, 1994).
Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang keras. Gel silika (atau alumina) merupakan fase diam.
Fase
diam
untuk
kromatografi
lapis
tipis
seringkali
juga
mengandung substansi yang mana dapat berpendarflour dalam sinar ultra
violet. Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai (Harborne, 1987). Fase
diam
yang
digunakan
dalam
KLT
merupakan
penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 m.
Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya.Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika dan serbuk selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada KLT adalah adsorpsi dan partisi(Gandjar & Rohman, 2007). Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak : -
Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena
KLT merupakan teknik yang sensitif.
Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.
Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika
gel, polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti juga menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzene akan meningkatkan harga Rf secara signifikan (Gandjar & Rohman, 2007).
BAB III METODE PERCOBAAN
3.1. Alat dan Bahan 3.1.1. Alat - Plat KLT - UV source - Pipa Kapiler - Chamber 3.1.2. Bahan - Simplisia hasil kromatografi kolom - Eluen : 3.2. Cara Kerja - Cuplikan Ditotolkan menggunakan pipet kapiler dengan jarak -
15mm dari tepi bawah plat KLT.
Spot dikeringkan dengan pengering udara Dikembangkan secara tegak lurus pada garis cuplikan dalam
bejana pemisah yang telah dijenuhkan dengan fase gerak.
Tentukan harga Rf. Untuk menampakkan noda menggunakan lampu UV dengan panjang gelombang 254nm.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Gambar Hasil KLT Eluen : Fase Diam : Silika Gel Rf : 0
4.2. Pembahasan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya yang menggunakan. Kromatografi juga merupakan analisis
cepat
yang
memerlukan
bahan
sangat
sedikit,
baik
penyerap maupun cuplikannya.
KLT dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama, dipakai selayaknya
sebagai
metode
untuk
mencapai
hasil
kualitatif,
kuantitatif atau preparatif. Kedua, dipakai untuk menjajaki sistem
pelarut
dan
sistem
penyangga
yang
akan
dipakai
dalam
kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi.
KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawa senyawa yang sifatnya hidrofobik seperti lipida lipida dan hidrokarbon yang
sukar dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat
berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara kromatografi dan isolasi senyawa murni skala kecil. Pelarut yang dipilih untuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. Bahan lapisan tipis seperti silika gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan pereaksi pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat. Data yang diperoleh dari KLT adalah nilai Rf yang berguna untuk identifikasi senyawa. Nilai Rf untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai Rf dari senyawa standar. Nilai Rf dapat didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh oleh senyawa dari titik asal dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut dari titik asal. Oleh karena itu bilangan Rf selalu lebih kecil dari 1,0. Terdapat dua fase pada KLT, yakni fase diam dan fase gerak. Pada praktikum kali ini digunakan silica untuk fase diam, dan fase gerak
atau
eluennya
yang
digunakan
adalah
dengan
perbandingan . dan digunakan simplisia daun sembung.
Dalam literatur disebutkan bahwa Blumea balsamifera [L.] DC. Atau sembung telah digunakan oleh masyarakat Indonesia untuk mengatasi influenza, rematik, nyeri haid, haid tidak teratur, demam, asma,
batuk,
bronkitis,
perut
kembung,
diare,
perut
mulas,
sariawan, dan diabetes. Sembung berasa pedas, sedikit pahit,
hangat dan baunya seperti rempah. Metabolit yang terkandung di dalam daun sembung secara umum berupa minyak atsiri dengan komponen
golongan fenolik turunan asam sinamat . Peneliti lain menemukan seskuiterpen dalam bentuk ester, flavonoid, icthyo-thereolacetate, cryptomerediol, lutein dan betakaroten. Dalam praktikum langkah pertama adalah cuplikan yang sebelumnya melalui proses maserasi,destilasi, kromatografi kolom, dan hasil dari kromatografi kolom inilah ditotolkan dengan
pipet
kapiler dengan jarak 15 mm dari tepi bawah plat KLT, kemudian spot dikeringkan dengan pengering udara, lalu dikembangkan secara tegak lurus pada garis cuplikan dalam bejana pemisah yang telah dijenuhkan dengan fase gerak, kemudian ditentukan harga Rf, dan untuk menampakkan noda menggunakan lampu UV dengan panjang gelombang 254nm. Dari hasil praktikum, pada plat KLT tidak terdapat bercak/noda yang terdeteksi, hal ini mungkin dikarenakan karena kesalahan awal pengerjaan maserasi terjadi kejenuhan sehingga zat aktif yang ditarik hanya sedikit, atau kesalahan pada pengerjaan pada kromatografi kolom. Konsentrasi larutan simplisia sangat berpengaruh pada hasil kromatografi kolom, sehingga dalam pengerjaannya
konsentasi
atau
perbandingan
eluen
harus
berurutan dari konsentrasi besar ke konsentrasi kecil atau dari
konsentrasi kecil ke konsentrasi besar, tetapi dalam perlakukan kelompok kami terjadi kesalahan, dimana konsentrasi eluen yang diberi tidak berurutan dari konsentrasi besar ke kecil atau dari konsentrasi kecil ke besar, sehingga menghasilkan kromatigrafi kolom yang tidak optimal dan terlihat pada hasil kromatografi kolom pun tidak optimal atau gagal, atau kesalahan lain yang dilakukan adalah saat pengerjaan kromatografi kolom, wadah tidak di tutup dengan alumunium foil atau dibiarkan lama kontak dengan udara padahal dalam literature disebutkan bahwa simplisia daun kecubung mengandung banyak minyak atrsiri seperti borneol, sineol, limonen, dan dimetil eter floroasetofenon, sehingga zat aktifnya menguap, dan ketika diuji dengan KLT, tidak terdaat bercak/noda satu pun, selain itu dalam pengujian KLT spesifikasi unuk mendeteksi apakah daun
sembung
mengandung
flavonoid
atau
tidak,
senyawa
flavonoid adalah jenis senyawa yang tidak menghasilkan berkas
noda
dalam
plat
KLT,
sehingga
dalam
engujiannya
harus
menggunakan pendarflour sinar UV, hasilnya pada lempengan tidak
ditemukan bercak kecil yang gelap.
BAB V PENUTUP
Simpulan Daun sembung merupakan minyak atsiri yang mengandung borneol, kamfora, floroasetofenon dimetil eter, seskuiterpenlakton, diterpen, triterpen, sterol, paraffin, saponin, golongan fenolik turunan asam sinamat, sehingga mudah menguap jika terlalu lama kontak dengan udara luar,
untuk
pengujian
KLT
tidak
diperolah
bercak
sama
sekali,
dimungkinkan karena proses pengerjaan ekstraksi (isolasi senyawa kimia)
dari daun sembung kurang benar/tidak sesaui prosedur seharusnya.
DAFTAR PUSTAKA
Denikrisna. 2010. Kromatografi. denikrisna.
wordpress.com/category/bakul/ kromatografi/. Diakses pada 25 April
2012. Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Bandung: ITB Bandung . Ismiarni. 2010. Kromatografi (Dasar). alamlearning.blogspot.com/search/label/ chromatography.
Diakses pada 25 April 2012.
Khopkar, S.M. 2010. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: Penerbit
Universitas Indonesia. Soebagio, dkk. 2000. Kimia Analitik II. Malang: Universitas Negeri
Malang. Stahl, E., "Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopik", terjemahan K. Radmawinata dan I. Soediso, penerbit ITB, Bandung, 1985, 3-18. 15.
