GENUL PSEUDOMONAS

Cuvinte cheie: bacili Gram negativi, oxidaz pozitivi, aerobi, nefermentativi; enzime proteolitice,
pigmeni (piocianina, pioverdina, piorubina etc.); miros aromat; condiionat patogen, infecii
nosocomiale; hidrofil, psichrotrop; fibroz chistic, bacteriemii, infecii urinare, infecii la ari;
rezisten la antibiotice prin mecanisme multiple: enzime, scderea permeabilitii, pompe de
eflux, modificarea intei etc.
I. Minidefiniie
Microorganismele din Genul Pseudomonas sunt bacili Gram negativi, non-fermentativi (spre
deosebire de enterobacterii, care fermenteaz glucoza), aerobi, nesporulai, care pot fi implicai n
infecii cu diverse localizri, la organisme cu imunitate deficitar.
Este unul dintre patogenii cel mai frecvent implicai n infeciile nosocomiale.
II.

ncadrare taxonomic

Domeniu: Bacteria
Phylum: Proteobacteria
Clasa: Gammaproteobacteria
Ordin: Pseudomonadales
Familie: Pseudomonadaceae
Genus: Pseudomonas
Genul Pseudomonas cuprinde un numr mare de specii, dintre care numai unele au fost izolate
de la om. Din acest gen s-au desprins de-a lungul timpului specii nrudite, dar distincte prin caracterele
genetice, cum sunt Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia etc.
Pseudomonas aeruginosa este specia cel mai frecvent implicat n infecii la om.
III.

Habitat

Bacteriile din Genul Pseudomonas sunt ubiquitare, putnd fi prezente n sol, ape naturale sau
bazine de not, organisme vegetale i animale. Majoritatea fac parte din flora normal, dar pot deveni
patogeni condiionai sau oportuniti pentru om, animale sau plante.
Se remarc afinitatea microorganismului pentru lichide i medii umede i gradul mare de
adaptabilitate, datorit necesitilor reduse de cretere prin dotarea cu o serie larg de enzime active pe
substraturi nutritive variate.
Colonizeaz mediul de spital, fiind prezent n aerosoli, ap ditilat contaminat, soluii
terapeutice - heparina, antiseptice i/sau soluii antimicrobiene de clorhexidin, eozin, polimixina B,
spun lichid etc., pe suprafee, echipamente - de aspiraie, de dializ, de susinere respiratorie,
termometre, endoscoape -, pe obiecte, inclusiv flori i frunze etc. De semenea, se poate ntlni n
bazine de not, instalaii sanitare etc.

IV.

Implicare in patologia uman

Infeciile cu Pseudomonas aeruginosa mbrac forme clinice diferite, n funcie de virulena

microorganismului i de raspunsul gazdei:
Infecii ale pielii (plgi chirurgicale, arsuri)
Infecii de tract urinar, n special nosocomiale, dup utilizarea cateterelor urinare
Infecii ale tractului respirator inferior: pneumonie de ventilaie, dup asistare respiratorie n timpul
interveniei chirurgicale i/sau resuscitare n secii de terapie intensiv, cu diseminare la nivel
circulator
Infecii respiratorii cronice, n special n maladia congenital numit fibroz chistic, n care sunt
prezente deficite ale sistemului de aprare local la nivelul cilor respiratorii
Endocardite, meningite, otite, infecii oculare
Septicemie - hemoculturile sunt rar pozitive, calea principal de transmitere este cea limfatic
V.
Microbiologie principalele caractere, implicaii n patogenez i diagnosticul
microbiologic
Prima descriere a bacteriei dateaz din 1872, cnd Schroeter i d denumirea de aeruginosum,
provenind de la aspectul asemntor oxidului de fier.
Datorit elaborrii de piocianin, un pigment de culoare albastru-verzui, a fost denumit bacil
piocianic (gr. pios = puroi, cianum = albastru). Puroiul n infecii cu Pseudomonas este albastru-verzui.
Bacteriile din Genul Pseudomonas sunt bacili Gram negativi, subiri, drepi sau uor curbai (Fig.
1), cu dimensiuni de 0,5-0,8 m / 1,5-3 m, care apar izolai, n
perechi sau lanuri
scurte. n culturi tinere, putem observa i forme filamentoase, iar n culturi mbtrnite sau pe medii
selective, forme de involuie, ondulate, bacili n form de virgul, coci n lanuri scurte etc. Sunt
nesporulai, de obicei necapsulai, dar din infecii severe s-au izolat i variante capsulate.
Pseudomonas aeruginosa prezint un singur flagel situat polar, adic la unul din capete (Fig. 2).
Fig. 1. Frotiu din prelevat cu Pseudomonas aeruginosa

Fig. 2. Pseudomonas aeruginosa flagel polar

Pseudomonadele cresc foarte uor, cu foarte puine surse nutritive, deoarece pot folosi foarte
multe substane ca substrat, inclusiv soluii alcoolice. Cresc pe medii diferite, chiar nefavorabile, cu
substane inhibitorii (selective).
Caracterele de cultur pe medii uzuale sunt: dezvoltarea sub form de colonii plate, frecvent
pigmentate n albastru-verzui, uneori galben (Fig. 3), cu miros aromat (descris ca miros de tei sau
2

salcm), datorat producerii de pigmeni cu structur fenazinic. Frecvent prezint un luciu metalic,
datorat eliberrii de acizi grai prin liza substratului nutritiv. Pigmenii sunt difuzibili n mediu i sunt
de mai multe tipuri:
piocianina, pigment albastru-verzui, specific pentru Pseudomonas aeruginosa, care nu apare la nici o
alt specie, solubil n cloroform, ap cald etc.
pioverdina, fluoresceina, pigment galben-verzui, produs de P. aeruginosa i alte specii, insolubil n
cloroform, solubil n ap
eritrina (piorubina), pigment rou, solubil n ap, insolubil n cloroform, uneori vizibil doar dup
extracia cu cloroform a piocianinei
piomelanina, pigment negru, apare mai rar
Pigmenii sunt sintetizati mai bine n anaerobioz. Exist i tulpini acromogene.
Aspectul coloniile difer n funcie de mediul pe care sunt cultivate tulpinile de Pseudomonas
aeruginosa:
- pe agar simplu, colonii cu pigment caracteristic, albastru-verzui, care difuzeaz n mediu (Fig. 3)
- pe agar snge : colonii gri, lucioase, cu luciu metalic i hemoliza de tip , mai puternic la
temperatura camerei
- pe agar Mac Conkey: colonii mici, lactoz negative, incolore
- pe bulion nutritiv sau ap peptonata 1% tulbur uniform mediul i formeaz vl la suprafaa
mediului; elaboreaz un pigment gri
- pe mediu semisolid, n tub crete la suprafaa, deoarece prefer aerobioza (fig. 4)
n anaerobioz, P. aeruginosa crete folosind ca acceptor final de electroni nitraii, pe care i
reduce la nitrii (Fig. 5).
Pseudomonadele sunt catalaz i oxidaz pozitivi (Fig. 5).
VI. Factori de patogenitate
Factorii de patogenitate ai P. aeruginosa sunt structuri somatice sau produse extracelulare.
Dintre structurile somatice cu rol n patogenitate fac parte capsula polizaharidic, pilii, flagelul,
lipopolizaharidul, acesta din urm cu activitate endotoxinic.
P. aeruginosa elibereaz enzime, cum sunt: neuraminidaza, care favorizeaz aderena la celulele
gazdei, proteaze alcaline, elastaze, hemolizine cu activitatea de lecitinaea, fosfolipaze etc. i toxine, ca:
exotoxina A, exotoxina E, piocianina, care mediaz leziunile tisulare. Exotoxina A, specifica pentru P.
aeruginosa, actioneaz asemntor cu toxina difteric.
Rezistena la un numr mare de clase de antibiotice constituie adesea un factor suplimentar de
patogenitate la P. aeruginosa, mai ales n infeciile nosocomiale.
VII.

Patogenie

Etapele instalrii infeciei cu P. aeruginosa sunt:

- aderena la celulele endoteliale, cu ajutorul pililor i proteinelor implicate n aderen

- persistena la nivel local prin intermediul materialului exopolizaharidic, cu structur de alginat, care
face posibil formarea unui biofilm cu protejarea bacteriei fa de factorii de aprare locali, antibiotice
etc.
- efecte locale prin exotoxina A, care inhib sinteza proteic, prin mecanism asemntor toxinei
difterice, fosfolipaze cu efect hemolitic i de degradare a surfactantului pulmonar, elastaze care
degradeaz proteinele matricei extracelulare i Ig G etc. Aceste enzime joac un rol important n
invazie i distrucia celular, la nivel pulmonar i/sau n alte zone anatomice (cornee, alte esuturi
invadate etc.). Pigmenii i ali compui cu fier cauzeaz leziuni entoteliale caracteristice infeciei cu P.
aeruginosa
- efecte generalizate, n infecii sistemice, prin endotoxina capabil de a declana ocul septic
VIII. Rspunsul imun
Imunitatea n infeciile cu P. aeruginosa este natural i/sau ctigat.
Imunitatea natural este reprezentat de integritatea pielii/mucoaselor, intervenia celulelor
fagocitare, a sistemului complement etc.
Imunitatea ctigat este humorala (Ac antitoxici, Ac antibacterieni - Ig G anti O, antiendotoxinice, tip specifice) i celular (limfocite T).
IX. Noiuni de epidemiologie i profilaxie a infeciilor nosocomiale
Infecie nosocomial sau infecie spitaliceasc este considerat orice infecie ctigat de un
pacient internat sau care primete ngrijiri n ambulator, care devine manifest n timpul internrii
(dup cel puin 48 h de la internare) sau dup externare (ex. la cteva luni dup inseria unei proteze).
Infeciile nosocomiale au multiple consecine medicale, etice, economice, legale etc.
Principalele categorii de microorganisme implicate n etiologia infeciilor nosocomiale sunt:
- bacilii Gram negativi: Pseudomonas, Klebsiella, Acinetobacter etc. pana la 60% din infeciile
nosocomiale
- cocii Gram pozitivi: Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus etc.
- fungii: Candida albicans etc.
Pseudomonas aeruginosa este bacilul Gram negativ cel mai frecvent implicat n etiologia
infeiilor nosocomiale, provenind din surse exterioare spitalului (aer, suprafee, surse de ap) sau surse
din spital (pacieni cu infecii, purttori - aproximativ 10% din oameni poart P. aeruginosa n colon),
diferite echipamente contaminate.
Cei mai expui sunt indivizii care prezint factori de risc, cum sunt:
Investigaii exploratorii moderne si/sau tratamente care afecteaz integritatea pielii i mucoaselor:
abord arterial, uretral, cateterisme, intubaii, bronhoscopii etc.; n aceste situaii, foarte important este
respectarea procedurilor investigaionale, respectiv splarea corect a mnilor, schimbarea
echipamentului de protecie ntre proceduri, existena unor echipe distincte de personal afectate
ngrijirii pacienilor septici i aseptici etc.
Imaturitatea sau deprimarea sistemului imunitar: nou nscui distrofici, pacieni cu afeciuni
coexistente internai n servicii de hematologie, oncologie, urologie, reanimare i terapie intensiv etc.,
cu neoplasme, tuberculoz, SIDA, arsuri, politraumatisme etc., pacieni imunosupresai prin
tratamente cu citostatice, radioterapie etc.

 Utilizarea neadecvat a antibioticelor, care contribuie la selecia de tulpini rezistente i favorizeaz

autoinfecia prin suprimarea florei normale. Greelile pot consta n: nerespectarea ordinii de
administrare a antibioticelor, nerespectarea duratei de administrare (scurtare sau prelungire),
nerespectarea dozelor, nerespectarea politicii de administrare a antibioticelor, rezultate din datele
cumulative ale rezistenei la antibiotice prezentate de laboratorul de microbiologie etc.
Sursele patogenilor nosocomiali sunt elucidate doar n doua treimi dintre cazuri:
Translocare (schimbarea situsului unor bacterii care colonizeaz normal organismul, cu invadarea
unor situsuri anatomice normal sterile), de exemplu la pacientii aplastici (8%),
Surse de infecie digestive (10%)
Surse cutanate, n cazul dispozitivelor intravasculare (33,6%) Fig. 6
Surse urinare (16%) infecii urinare, mai ales dup cateterizare urinar
Surse respiratorii (Fig. 7)
Cei mai expui sunt pacienii cu fibroz chistic, arii i pacienii cu neoplasme, care rmn
internai pentru perioade lungi de timp n uniti de ngrijire medical.
n cazul infeciilor cu Pseudomonas aeruginosa au fost utilizate vaccinuri piocianice polivalente,
n scop profilactic i/sau terapeutic sau vaccinuri monovalente, n scop terapeutic.
Profilaxia nespecific const n curirea i dezinfecia mediului spitalicesc, educarea periodic a
personalului, controlul i monitorizarea purttorilor, evitarea contaminrii, utilizarea antisepticelor i
dezinfectantelor, n funcie de rezultatele testrii sensibilitii etc.
X. Diagnosticul de laborator
Diagnosticul infeciilor cu Pseudomonas aeruginosa este exclusiv bacteriologic.
Etapele diagnosticului sunt urmtoarele:etape:
1.
Prelevarea, transportul i pregtirea probelor
2.
Examenul microscopic direct pentru: sput, LCR, lichide de puncie, aspirate
traheale
3.
Izolarea se face prin inoculare direct pe agar-snge, mediu Mc Conkey sau alte
medii difereniale i prin mbogire n ap peptonat 1%, cnd se anticipeaz prelevate cu un numr
mic de bacterii sau bulion cu TTC (tripheniltetrazolium chloride 1%), care inhib microorganismele
asociate n prelevate presupus pluricontaminate
4.
Identificarea se face prin:
- microscopie: bacili Gram negativi
- aspectul pe agar snge: - hemolitic, colonii S, mai rar R, luciu metalic, miros aromatic
- aspectul pe medii care susin producerea de pigment King A (sau King P) pentru piocianin, King B
(sau King F) pentru fluorescein
- aspectul pe ap peptonat 1% - vl la suprafa, uneori pigment
- aspectul pe medii cu TTC 1% - colonii rou nchis
5.
Detectarea unor markeri microbiologici de interes epidemiologic: serogrup,
lizotip, pattern molecular etc.

6.
Testarea sensibilitii la antibiotice permite detectarea unor fenotipuri de
rezisten complexe, deseori cu rezisten multipl la beta-lactamine, aminoglicozide, quinolone etc.

GENUL ACINETOBACTER
Cuvinte cheie: cocobacili gram negativi, nefermentativi, oxidaz negativi, catalaz pozitivi; infecii
asociate ngrijirilor medicale, infecii n mediul extraspitalicesc
I. Minidefiniie
Cocobacili Gram negativi, nefermentativi, nesporulai, imobili, strict aerobi, catalaz pozitivi,
oxidaz negativi, pot fi implicai n patologia uman ca microorganisme oportuniste. Frecvent
implicai n infecii nosocomiale.
II.

Incadrare taxonomic

Domeniu: Bacteria;
Phylum: Proteobacteria;
Clasa: Gammaproteobacteria;
Ordin: Pseudomonadales;
Familie: Moraxellaceae
Gen: Acinetobacter
Cuprinde peste 30 specii difereniate prin metode genetice. Specii mai frecvent implicate
sunt: Acinetobacter baumannii, Acinetobacter calcoaceticus, facnd parte din complexul Acb
(Acinetobacter calcoaceticus - A. baumanii)
III.

Habitat

Ubiquitar, se gsete n sol, surse de ap, pe suprafee uscate, pe suprafaa alimentelor, iar n
mediul de spital, pe suprafee, instrumentar medical etc.
Poate coloniza organisme vii, cu sau fr manifestri de natur infecioas, Portajul cutanat sau
gastrointestinal este de pn la 25% la indivizi sntoi.
La pacieni spitalizai pentru perioade mai lungi de timp pot coloniza tractul respirator.
IV. Implicare n patologia uman
Cauzeaz infecii la pacieni care prezint factori de risc, n special internai n spital, n secii ca
reanimarea i terapia intensiv, oncologie, ari etc.
Principalele afeciuni cauzate de Acinetobacter sunt: pneumonie, meningit, septicemie, infecii
gastrointestinale, infecii de tract urinar, infecii de plag.
n ambulator poate s cauzeze pneumonii i infecii de plag.

V.
Microbiologie principalele caractere, implicaii n patogenez i diagnosticul
microbiologic
Bacteriile din Genul Acinetobacter, familia Moraxellaceae sunt cocobacili Gram negativi, cu
dimensiuni de 1.0-1.5/1.5-2.5 , imobili, nesporulai, catalaz pozitivi, oxidaz negativi, strict aerobi.
Aspectul pe frotiu este de cocobacili rezisteni la decolorare, n perechi sau grupai n grmezi,
cu variaii de dimensiune i colorabilitate, iar n culturi vechi iau forme cocoide.
Pe mediile de cultur se dezvolt sub forma coloniilor incolore, galben pal sau gri, uneori
mucoide. Unele tulpini pot fi hemolitice pe agar snge.
Folosesc diferite substane organice ca surs de carbon.
VI.

Factori de patogenitate

Dei nu este considerat un microorganism cu grad nalt de patogenitate, Acinetobacter posed

factori de patogenitate cum sunt: capsula, fimbriile implicate n aderen, enzime cu activitate
lipolitic, lipopolizaharidul, sideroforii, proteine ale membranei externe cu rol n aderen etc.
VII.

Patogenie

La pacienii cu factori de risc (dup chirurgie major, cu neoplazii, arsuri, vrste extreme,
tratamente ndelungate cu antibiotice, boli pulmonare cronice, tratament cu imunosupresoare,
dispozitive protetice endotraheale, gastrice etc.), bacteria provenit din flora endogen sau din mediul
exterior poate determina manifestri patologice de natur infecioas, cu exacerbarea virulenei,
creterea hidrofobicitii tulpinilor la nivelul suprafeelor dispozitivelor etc.
VIII. Rspunsul imun
Imunitatea este de tip umoral i celular. Mai multe antigene, ntre care proteinele membranei
externe sunt implicate n stimularea rspunsului imun, astfel c au fost ncercate vaccinuri preparate
din acestea, cu bune rezultate la pacienii cu risc nalt.
IX. Noiuni de epidemiologie i profilaxie a infeciilor nosocomiale
Infeciile apar mai frecvent n sezonul cald, dar pot surveni n oricare perioad a anului.
Situsurile anatomice de colonizare la indivizi sntoi sunt cele cu umiditate crescut, aa cum
ntlnim la nivelul axilelor, zonei inghinale, spaiilor interdigitale etc.; cel puin 25% din populaia
normal este purttoare, iar n spital procentul purttorilor este mai mare, n special la pacieni care
sunt asistai ventilator.
X. Diagnosticul de laborator
Prelevatele pot fi nsmnate pe medii simple, ca agarul nutritiv simplu sau agar tripticase soya
sau pe medii cu compoziie controlat n nutrieni i sruri minerale.
Pentru izolare din prelevate
pluricontaminate se utilizeaz medii cu adaos selectiv de antibiotice i/ sau bil.
8

Exist specii care cresc la temperaturi mai joase dect 37 0 C.

Identificarea se face pe baza caracterelor microscopice, de cultur i metabolice.
Identificarea de certitudine se face prin metode moleculare bazate pe hibridizarea ADN.
Pentru tipizarea n scopuri epidemiologice se poate utilize ribotipia, analiza cu enzime de
restricie etc.
Este necesar testarea sensibilitii la antibiotice, avnd n vedere existena fenotipurilor cu
rezisten multipl, mai ale n mediul de spital.
Tratamentul empiric se face cu monoterapie n infecii urinare, cu asocieri -lactamineaminoglicozide n pneumone i septicemia i cu tigeciclin n cazul tulpinilor cu rezisten multipl.