Anda di halaman 1dari 5

Malaria merupakan salah satu yang paling penting dari penyakit menular di

tropis dan sub-tropis. Pencarian senyawa antimalaria memiliki telah diharuskan


oleh P. falciparum resistensi untuk hampir semua obat antimalaria. Dalam
penelitian ini, in vitro aktivitas antimalaria dari ekstrak minyak mentah
berair dan etanol Vernonia amygdalina, sebuah tanaman yang digunakan oleh
dukun untuk mengobati malaria dan penyakit lainnya,dievaluasi terhadap 14
isolat segar P. falciparum dari Damboa, Borno, Nigeria. Uji toksisitas akut
dan aktivitas antiinflamasi ekstrak juga ditentukan. Adapenghambatan yang
signifikan dalam pematangan skizon relatif untuk mengontrol (P =0,05). Ekstrak
etanol menunjukkan aktivitas antimalaria yang lebih tinggi dari 78,10%, IC50
11,2 ekstrak ug / ml dan berair memiliki aktivitas 74,02%,
IC50 13,6 mg / ml. Kedua ekstrak menunjukkan antimalaria moderat aktivitas.
Ekstrak dipamerkan toksisitas diabaikan pada tikus dan menunjukkan
ukuran baik aktivitas anti-inflamasi. Hasil ini membenarkan
penggunaan tradisional tanaman dalam pengobatan malaria. Pekerjaan selanjutnya
adalah disarankan untuk mengisolasi, mengidentifikasi dan mengkarakterisasi
prinsip aktif dari tanaman.
PENDAHULUAN.
Malaria merupakan salah satu penyakit tropis yang paling penting dan
penyebab terbesar rawat inap dan kematian di antara anak-anak usia 6
bulan sampai 5 tahun (. Molta et al, 2006; Quattara et al, 2006.). Itu
Organisasi Kesehatan Dunia melaporkan bahwa ada diperkirakan
246 juta kasus malaria didistribusikan di antara 3,3 miliar orang di
risiko pada tahun 2006, yang menyebabkan setidaknya satu juta kematian. Ini
adalah sebagian besar
anak di bawah lima tahun. Seratus sembilan negara yang
endemik pada tahun 2008 dan 45 di wilayah WHO Afrika (WHO,
2008). Sekitar 80% kasus malaria di dunia adalah
diperkirakan berada di Afrika di mana penyakit ini endemik (WHO,
2008). Penyakit ini merupakan penyebab utama dari benua bayi tinggi
kematian, menewaskan 1 dari setiap 20 anak di bawah usia 5 tahun
(Goose, 1993). Di Nigeria, penularan malaria terjadi tahun semuabulat di Selatan, dan lebih musiman di Utara. Negara
menyumbang seperempat dari semua kasus malaria di Afrika WHO
daerah (WHO, 2008).
Tingkat mengkhawatirkan di mana Plasmodium falciparum telah dikembangkan
resistensi terhadap klorokuin dan obat antimalaria sintetik lainnya
membuat perlu untuk mencari antimalaria yang lebih efektif
Senyawa ( Bhat & Surolia , 2001) . Di Afrika dan negara-negara lain
endemis malaria , tanaman obat tradisional sering digunakan untuk mengobati
atau menyembuhkan malaria ( Gessler et al ., 1994; Jenett - Siems et al . ,
1999) . Ini adalah fakta bahwa konvensional antimalaria seperti klorokuin ,
kina dan artemisinin derivatif berasal dari tanaman ( Taylor et al . , 1993) .
ini Oleh karena itu penting untuk mengetahui aktivitas antimalaria dari
tanaman obat untuk menentukan potensi mereka sebagai sumber agen antimalaria
baru ( Mustofa et al . , 2007) .
Vernonia amygdalina , dikenal sebagai daun sambiloto , adalah di bawah
semak tinggi variabel dengan daun hijau petiolate sekitar 6mm
garis tengah. Daun biasanya pahit dan sup yang sangat populer
sayuran di Nigeria ( Ojiako & Nwanjo , 2006) . Tanaman ini ditemukan di

daerah sabana dan melalui Afrika tengah dan selatan tropis . semua bagian
tanaman ( daun , batang dan akar ) dikatakan memiliki menggunakan obat . Ini
termasuk promosi diuresis , penyembuhan tonsilitis , demam , malaria ,
diabetis , pneumonia , penyakit kuning , anemia ,Masalah perut dan Ascaris
( NNMDA , 2006; Odugbemi et al , .2007) .
Kedua ekstrak air dan etanol kulit batang dan daun dilaporkan telah digunakan
sebagai pencahar , antimalaria dan pengobatan eksim ( Ojiako & Nwanjo ,
2006) . Dalam penelitian ini , aktivitas antimalaria dari Vernonia amygdalina
dievaluasi in vitro . Toksisitas akut dan aktivitas anti - inflamasi tanaman
yang juga ditentukan .
BAHAN DAN METODE.
Pengumpulan dan Ekstraksi bahan tanaman: daun segar dari V.amygdalina
dikumpulkan pada bulan Oktober 2008 di Jos, Nigeria. Itu tanaman telah
dikonfirmasi oleh ahli taksonomi di Federal College of Kehutanan, Jos dan
Herbarium sampel spesimen dengan voucher Nomor FCFBM 008 diendapkan di
Botanical Museum College.
Daun segar V. amygdalina dipotong-potong dan dikeringkan di laboratorium.
Potongan yang dikeringkan kemudian dikurangi menjadi bubuk menggunakan
penggiling laboratorium. Delapan puluh gram bubuk kering bentuk bahan tanaman
diekstraksi dengan air dalam sebuah soxlet aparatus untuk 72 jam. Lain 80 g
bubuk tanaman adalah diekstraksi dengan etanol dalam ekstraktor soxlet selama
72 jam. Semua ekstrak yang terkonsentrasi untuk kekeringan pada air mandi dan
ditimbang. Ekstrak kemudian disimpan dalam wadah yang tertutup dan disimpan
dalam lemari es pada 4 C untuk melindungi dari cahaya dan kelembaban sampai
digunakan (Sutharson et al., 2007).
Skrining fitokimia ekstrak : The pendahuluan Analisis fitokimia dari ekstrak
tanaman dilakukan dengan menggunakan tipis - kromatografi lapis ( TLC ) .
Pemutaran standar pengujian dengan menggunakan prosedur standar yang digunakan
untuk mendeteksi aktif
konstituen ( Harborne , 1984) . Hal ini dilakukan pada
Pharmacognosy , Fakultas Farmasi , Universitas
Jos , Nigeria .
Pengumpulan sampel darah dalam tabung percobaan Tes sensitivitas: The
Penelitian dilakukan di Rumah Sakit Umum Damboa, Borno,
Nigeria. Damboa adalah Utara-timur zona National Malaria
Situs Surveillance Sentinel. Penelitian ini dilakukan antara
Oktober-Desember 2009, di antara pasien yang menghadiri departemen rawat jalan
rumah sakit. Kriteria inklusi berikut
ditetapkan untuk pekerjaan ini: anak-anak dan orang dewasa usia 6 bulan ke
atas,yang memiliki demam dalam 24 jam terakhir, suhu tambahan 37,5o C, tidak
mengambil antimalaria apapun dalam 2 minggu terakhir, yang memberi
informed consent lisan atau tertulis setelah tujuan dari penelitian ini adalah
menjelaskan kepada mereka (pasien / orang tua / wali atau dalam kasus
anak di bawah umur). Pasien yang memenuhi kriteria inklusi disaring
untuk infeksi P. falciparum. Beberapa tetes sampel darah yang diperoleh
dari jari tusukan, menggunakan jarum sekali pakai steril digunakan untuk
mempersiapkan smear tebal dan tipis pada slide yang bersih untuk setiap
pasien. Slide disiapkan diwarnai selama 10 menit dengan 10% Giemsa
Solusi disiapkan dapar fosfat pH 7,3 dan diperiksa
mikroskopis untuk parasit (Molta et al., 1992). Pasien yang memiliki

Infeksi mono P. falciparum dengan parasitemia 2000 / ml dan


tidak lebih dari 80.000 / ml darah termasuk dalam obat in vitro
uji kepekaan (WHO, 2001).
Empat belas isolat segar P. falciparum yang diperoleh dari
pasien bergejala , usia 5 sampai 25 tahun dengan mengumpulkan 2,5 sampai 3
ml darah ke dalam botol EDTA dari pasien dengan dikonfirmasi P.
infeksi mono falciparum . Sampel darah segar yang
disentrifugasi pada 2000 rpm selama 10 menit , plasma darah adalah
dihapus dan pelet darah ditangguhkan dan dicuci tiga kali dalam
Medium RPMI 1640 ( Gibco USA ) sebelum digunakan untuk parasit
budidaya ( Flyg et al . , 1997) . Pasien kemudian diobati dengan
Artemeter - lumefantrine ( Coartem ) atau amodiakuin obat kombinasi
-Artesunate .
Persiapan larutan ekstrak Budaya menengah dan : Budaya
media dibuat dengan melarutkan 10,43 g RPMI 1640 bubuk
( Gibco ) , 6 g HEPES , 2 g NaHCO3 ( Sigma Aldrich ) dalam 1 liter
air suling - deionisasi . Media disaring menggunakan 0,22 m
membran filter dan 0,5 ml gentamacin (dari 50 mg / ml saham ) adalah
ditambahkan dan disimpan pada 4 C di aliquot 45ml . Sebelum budidaya ,
setiap aliquot dilengkapi dengan 5 ml 5 % Albumax II
( Cranmer et al . , 1997) .
Ekstrak air pertama kali dilarutkan dalam air suling dan etanol
ekstrak dilarutkan dalam metanol dan diencerkan dalam air distilleddeionised ,
dan solusi 2 mg / ml masing-masing disiapkan . itu
2 mg solusi / ml telah terdilusi dalam media kultur malaria
untuk memberikan 200 mg / ml larutan stok ( Clarkson et al . , 2004) . ekstrak
kemudian diuji di 6 seri dua kali lipat pengenceran dengan akhir
Kisaran konsentrasi 1,56-100 mg / ml dalam 96 sumur microtitre
piring ( Becton Dickinson Lab barang , USA ) .
Dalam budidaya in vitro P. falciparum isolat dan sensitivitas
Tes : Pengujian dilakukan dalam rangkap dua . Seratus ml
air suling pertama kali didistribusikan ke piring dengan baik setelah 100
ml medium kultur yang mengandung ekstrak pada berbagai konsentrasi
ditambahkan ke dalam piring dengan baik. Seratus liter mikro parasit
Budaya akhirnya ditambahkan . Piring titer diinkubasi CO2
Kondisi pada 37 C dalam stoples lilin untuk 24-30 jam ( Trager & Jensen ,
1976) . Setelah inkubasi , isi sumur dipanen dan
sel darah merah ditransfer ke slide mikroskopis bersih untuk membentuk
seri film tebal . Film-film yang bernoda selama 10 menit di 10 %
Solusi Giemsa pH 7,3 .
Hambatan pertumbuhan skizon per 200 parasit aseksual dihitung
dalam 10 bidang mikroskopis . Budaya pengendalian parasit dibebaskan dari
ekstrak dianggap sebagai pertumbuhan 100 % . persentase
penghambatan per konsentrasi dihitung dengan rumus:
[ ( % Parasitemia dalam sumur kontrol - % parasitemia sumur uji ) /

( % Parasitemia kontrol ) ] x 100 ( WHO , 2001; Ngemenya et


al . , 2006) .
Nilai-nilai IC50 , konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghambat skizon
Pertumbuhan sebesar 50 % ditentukan dengan interpolasi linier dari
kurva hambatan pertumbuhan skizon ( Log konsentrasi terhadap
persen penghambatan ) yang dihasilkan dari setiap interaksi parasit - ekstrak
( Mustofa et al . , 2007) .
Hewan percobaan : Hewan-hewan yang digunakan untuk uji toksisitas akut
dan aktivitas anti - inflamasi adalah laki-laki dewasa dan tikus betina ( 20
- 25 g ) dan tikus ( 150-200 g ) diperoleh dari rumah hewan
Universitas Jos , Nigeria . Hewan-hewan diaklimatisasi untuk
periode 7 hari pada suhu kamar dan kelembaban sebelum mereka
digunakan . Mereka tinggal di kandang standar dan dipelihara di
pelet hewan standar dan ad libitum air . semua eksperimen
melibatkan hewan dilakukan di rumah hewan dari
Universitas Jos . Hewan ditangani sesuai dengan peraturan lokal
dan regulasi Experimental Animals , Universitas Jos , Nigeria .
Uji toksisitas akut : Toksisitas akut ekstrak tumbuhan yang
diuji pada tikus dengan menggunakan 3 dosis ( 500 , 1000 dan 3000 mg / kg
berat badan ) diberikan secara oral . Tikus kontrol disimpan di bawah sama
kondisi tanpa perawatan apapun . Hewan-hewan yang secara rutin
diperiksa untuk penampilan atau tanda-tanda keracunan seperti tremor ,
kelemahan dan penolakan feed , jatuh dari rambut , koma atau bahkan
kematian selama 48 jam . The Lethal Dose LD50 diperkirakan dari
Grafik kematian persentase dikonversi ke probit terhadap log -dose
ekstrak , probit 5 menjadi 50 % .
Anti - inflamasi Test: topikal Edema dari Telinga Mouse:
Pengaruh air dan alkohol ekstrak Vernonia amygdalina pada
edema akut topikal dinilai menggunakan xylene - diinduksi telinga
edema pada tikus ( Okoli et al . , 2005) . Mencit albino Swiss ( 20 - 25 g )
menerima aplikasi topikal ( 5 g / telinga ) ekstrak air V.
amygdalina atau etanol ekstrak V. amygdalina , di anterior
permukaan telinga kanan sementara xylene ( 0,08 ml) langsung diterapkan
pada permukaan posterior dari telinga yang sama . Kontrol hewan yang diterima
0,2 ml air suling pada anterior permukaan dan 0.08ml xylene
pada permukaan posterior . Telinga kiri yang tidak diobati .
Setelah 3 jam aplikasi xilena , telinga edema diukur
dengan sekrup mikrometer gauge ( Moore dan Wright , Inggris ) ( Inoue
et al . , 1989) . Perbedaan ketebalan telinga dari diperlakukan tepat
dan telinga kiri diobati dihitung dan digunakan sebagai ukuran
edema ( Okoli et al . , 2005) . Tingkat inhibisi ( % ) dari edema
dihitung dengan menggunakan hubungan :
Penghambatan ( % ) = 100 [ 1 - ( Et / Ec ) ] ,
Dimana Et = edema rata-rata telinga dirawat ,
Ec = rata edema kontrol diobati .
Analisis statistik : Microsoft Excel 2007 digunakan untuk
menghitung pertumbuhan parasit mean dan penghambatan persentase parasit .
T - tes siswa digunakan untuk menganalisis data dan nilai-nilai P
0,05 dianggap signifikan .

HASIL .
Hasil penapisan fitokimia bahan tanaman menunjukkan
kehadiran saponin , tanin , flavonoid , karbohidrat , jantung
glikosida , alkaloid , steroid dan anthaquinones .
Ekstrak kasar diuji pada trofozoit, terutama bentuk cincin.
Pada masing-masing tujuh konsentrasi semua ekstrak (Tabel 1),
ada penurunan yang signifikan dalam jumlah sel diparasiti
relatif untuk mengontrol (P 0,05). Pengukuran dasar
aktivitas antimalaria yang digunakan dalam penelitian ini adalah pengurangan
jumlah sel terparasit dalam budaya uji dibandingkan dengan kontrol pada 24 -30
jam inkubasi. Dari dua ekstrak yang diuji, etanol
ekstrak V. amygdalina menunjukkan aktivitas antimalaria tertinggi
78,1%, dengan IC50 11,2 mg / ml. Ekstrak air memiliki parasit
penghambatan pertumbuhan 74,0% dan IC50 13,6 mg / ml (Tabel 2). Gambar. 1
menunjukkan kurva hambatan pertumbuhan skizon yang dihasilkan dari masingmasing
parasit-ekstrak kombinasi / interaksi. Penghambatan Konsentrasi
(IC50) nilai yang ditentukan dengan interpolasi linear dari masing-masing
kurva penghambatan. Berkenaan dengan konsentrasi diberikan,
tergantung dosis aktivitas antimalaria jelas ditunjukkan untuk dua
ekstrak mentah. Persentase hambatan yang lebih tinggi dengan
peningkatan konsentrasi.