IDENTIFICACION DE GLUCIDOS

Estudiantes
LILIAN SILVA PEREZ
JOSE ROMERO ROMERO
DANIEL OTERO MEZA

Docente:
RUBEN D. JARAMILLO., Ph D. IBB-UNAM

UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE INGENIERIA
PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
BIOQUIMICA I LABORATORIO
III SEMESTRE
2012-01
17 DE ABRIL
SINCELEJO, SUCRE

INTRODUCCION
Los glcidos, carbohidratos o sacridos (del griego azcar)
son molculas orgnicas compuestas por carbono, hidrgeno y oxgeno. Son
solubles en agua y se clasifican de acuerdo a la cantidad de carbonos o por el
grupo funcional aldehdo. Son la forma biolgica primaria de almacenamiento y
consumo de energa.
Los glcidos mas simples, los monosacridos, son aldehdos o cetonas, con uno
a mas grupos hidroxilo, los monosacridos de seis carbonos glucosa y fructosa
tienen cinco grupos hidroxilo. Los tomos de carbono a los que se unen los
grupos hidroxilo son a menudo centros quirales que dan lugar a muchos
estereosomeros de los azucares que se encuentran en la naturaleza.
Los disacridos (tales como la maltosa, la lactosa y la sacarosa) estn formados
por dos monosacridos unidos covalentemente mediante un enlace Oglucosdico, que se forma cuando un grupo hidroxilo de un azcar reacciona
con el carbono anomrico del otro. Esta reaccin da lugar a la formacin de un
acetal a partir de un hemiacetal (tal como la glucopiranosa) y un alcohol (un
grupo hidroxilo de una segunda molcula de azcar). Los enlaces glucosdicos
se hidrolizan con facilidad por accin de cidos pero son resistentes a la
hidrolisis bsica. Por lo tanto, los disacridos pueden hidrolizarse para dar lugar
a sus componentes monosacridos libres por ebullicin en un medio que
contenga acido diluido. Enlaces N-glucosdicos unen el carbono anomrico de un
azcar y un tomo de nitrgeno

OBJETIVOS
Objetivo general:
-

Describir el comportamiento de los carbohidratos al someterlos a los

mtodos cualitativos

Objetivos especficos:
-

Diferenciar los tipos de carbohidratos estructural y funcionalmente

Diferenciar los mtodos cualitativos utilizados en la practica
Establecer diferencias entre los carbohidratos a partir de los mtodos
cualitativos

MATERIALES Y REACTIVOS
8 Tubos de ensayo
1 Beaker de 500 ml
1 Placa de calentamiento
1 Gradilla para tubos de ensayo
Soluciones al 2% de Glucosa, Fructosa, Lactosa, Ribosa y Sacarosa
Reactivo de Molisch
Reactivo de Benedict
Reactivo de Fehling
Reactivo de Tollens
Reactivo de Seliwanof
Reactivo de Bail
Acido Sulfrico concentrado [ H 2 SO 4 ]

MARCO TEORICO
Los glcidos son las biomolculas ms abundantes de la Tierra. Cada ao, la
fotosntesis convierte ms de 100.000 millones de toneladas mtricas de
y

H2O

CO2

en celulosa y otros productos vegetales. Ciertos glcidos (como el

azcar y el almidn) son fundamentales en la dieta humana en la mayor parte

del mundo y la oxidacin de glcidos es la principal ruta de obtencin de
energa en la mayora de las clulas no fotosintticas. Los polmeros glcidos
insolubles actan como elementos estructurales y de proteccin en las paredes
celulares de las bacterias y las plantas y en los tejidos conjuntivos de los
animales. Otros polmeros glcidos lubrican las articulaciones seas y participan
en el reconocimiento y la adhesin intercelulares. Polmeros glcidos mas
complejos, unidos covalentemente a protenas o lpidos, actan como seal de
localizacin intracelular o de destino metablico de estas molculas hibridas
denominadas glucoconjugados. Los glcidos son polihidroxialdehdos o
cetonas, o bien sustancias cuya hidrolisis da lugar a estos compuestos. Muchos
glcidos comunes, aunque no todos, poseen la formula emprica

(CH 2 O)n ;

algunos glcidos tambin contienen nitrgeno, fosforo o azufre.

Existen tres clases principales de glcidos: monosacridos, oligosacridos y
polisacridos (la palabra sacrido proviene del griego sakcharon, que significa
azcar). Los monosacridos, o azucares simples, consisten en una sola
unidad de polihidroxialdehdo o cetona. El monosacrido ms abundante en la
naturaleza es la D-glucosa de siesa tomos de carbono, a veces llamada
dextrosa. Los monosacridos de ms de cuatro tomos de carbn suelen poseer
estructuras cclicas.
Los oligosacridos consisten en cadenas cortas de unidades de
monosacridos, o residuos, unidas por los caractersticos enlaces glucosdicos.
Los ms abundantes son los disacridos, formados por dos unidades de

monosacridos. El mas conocido es la sacarosa, o azcar de caa, formado por

los azucares de seis carbonos D-glucosa y D-fructosa. Todos los monosacridos
y disacridos comunes tienen nombres que terminan en el sufijo -osa. La
mayor parte de oligosacridos con tres o mas unidades de monosacrido no se
encuentras libres en la clula sino unidos a otro tipo de molculas (Lpidos o
protenas) formando glucoconjugados.
Los polisacridos son polmeros que contienen ms de 20 unidades de
monosacrido. Algunos polisacridos constan de centenares o millares de
monosacrido. Algunos polisacridos, como la celulosa, son cadenas lineales;
otros, como el glucgeno, estn ramificados. El almidn y la celulosa consisten
en unidades repetitivas de D-glucosa, pero difieren en el tipo de enlace
glucosdico y tiene propiedades y funciones biolgicas notablemente diferente 1

PROCEDIMIENTO
1. PRUEBA DE MOLISCH
En 5 tubos de ensayo se mezclaron 1 ml de cada solucin (Glucosa,
Fructosa, Sacarosa, Extracto de jugo de mora y agua destilada
respectivamente) y 0.2ml de reactivo de Molisch en cada tubo. Despus
se le adiciono, cuidadosamente por la paredes del tubo sin agitar, 1ml de
H 2 SO 4
acido sulfrico [
]. Los resultados se tabularon en la tabla R-1.
2. PRUEBA DE BENEDICT
En 5 tubos de ensayo de mezclaron 1 ml de cada solucin (Glucosa,
Fructosa, Lactosa, Sacarosa y Extracto de jugo de mora respectivamente)
y 0.2 ml de reactivo de Benedict, luego, los tubos se sometieron a
calentamiento en un Beaker con 250 ml de agua hirviendo durante 3
minutos. Los resultados se tabularon en la tabla R-1.
3. PRUEBA DE FEHLING
En 5 tubos de ensayo de mezclaron 1 ml de cada solucin (Glucosa,
Fructosa, Lactosa, Sacarosa y Extracto de jugo de mora respectivamente)
y 0.5 ml de cada solucin de Fehling (Reactivo de Fehling A y B), luego, los
tubos se sometieron a calentamiento en un Beaker con 250 ml de agua

1 Vea: Nelson DL, Cox MM. Lehninger - Principios de Bioqumica, p. 238.

hirviendo durante 3 minutos. Los resultados se tabularon en la tabla R-1.

4. PRUEBA DE SELIWANOFF
En 4 tubos de ensayo de mezclaron 0.5 ml de cada solucin (Glucosa,
Fructosa, Sacarosa y Extracto de jugo de mora respectivamente) y 0.5 ml
de reactivo de Seliwanof, luego, los tubos se sometieron a calentamiento
en un Beaker con 250 ml de agua hirviendo durante 2 minutos. Los
resultados se tabularon en la tabla R-1.
5. PRUEBA DE TOLLENS
En 5 tubos de ensayo se colocaron 2 ml de reactivo de Tollens en cada
tubo, luego, se agregaron 0.5 ml de cada solucin (Glucosa, Fructosa,
Lactosa, Sacarosa y Extracto de jugo de mora respectivamente), los tubos
se sometieron a calentamiento en un Beaker con 250 ml de agua
hirviendo durante 4 minutos agitndose los tubos, suavemente, durante el
calentamiento. Los resultados se tabularon en la tabla R-1.
6. PRUEBA DE BIAL
En 3 tubos de ensayo se colocaron 2 ml de reactivo de Bial, luego, se
agreg 1 ml de cada solucin (Glucosa, Fructosa y pentosa
respectivamente) en los tubos, despus, los tubos se sometieron a
calentamiento en un Beaker con 250 ml de agua hirviendo durante 12
minutos. Los resultados se tabularon en la tabla R-1

RESULTADOS Y ANLISIS
RESULTADOS POR PRUEBAS
MUESTRA

BENEDIC
T
+

FEHLING

Glucosa

MOLISC
H
+

TOLLE
NS
+

BIAL

SELIWANO
FF
-

Fructosa

Sacarosa

NA

Lactosa

NA

NA

NA

Ribosa

NA

NA

NA

NA

NA

Agua
destilada
Extracto de
jugo

NA

NA

NA

NA

Tabla R-1

1. PRUEBA DE MOLISCH
Luego de realizar, cuidadosamente, el procedimiento de la gua
observamos que en algunos tubos de ensayo se formo un anillo en la
interface de los dos lquidos indicando que la prueba fue positiva. Cabe
notar que algunas muestras se tornaron de color violeta en el fondo.
2. PRUEBA DE BENEDICT
Al finalizar el tiempo de calentamiento de los tubos pudimos notar que
casi todas las mezclas cambiaron notoriamente su color a ladrillo
indicando que la prueba fue positiva. Resultado que esperbamos puesto
que este prueba, al igual que la prueba de Fehling, solo da positivo en los
azucares reductores.
3. PRUEBA DE FEHLING
Pasados 3 minutos de haber sometido las muestras al Bao de Mara
notamos que las muestras de Glucosa, Fructosa y lactosa tomaron un
color anaranjado indicando que la prueba fue positiva. Cabe notar que al
principio del calentamiento las muestras eran de color azul (color del
reactivo de Fehling). La sacarosa es un disacrido que no posee carbonos
anomrico libres por lo que carece de poder reductor y la reaccin con el
reactivo de Fehling es negativa.
4. PRUEBA DE SELIWANOFF
Observamos, al cabo del tiempo de calentamiento, que solo las muestras
de Sacarosa y fructosa cambiaron su color y que las dems se
mantuvieron tal cual se inicio el calentamiento. Como se esperaba, esta
prueba solo resulta positiva en las cetohexosa y da positivo en la sacarosa
porque esta es un disacrido de glucosa y fructosa.
5. PRUEBA DE TOLLENS
Al concluir el tiempo de calentamiento pudimos notar que solo la muestra
de glucosa presento formacin concreta de un espejo de plata dando
como resultado positivo al test de tollens. Esta conclusin era de
esperarse ya que como sabemos, la glucosa es una aldohexosa y la
prueba de tollens solo da positivo en los aldehdos.
6. PRUEBA DE BIAL
En este ensayo pudimos darnos cuenta de que solo la ribosa presento un

cambio de tonalidad hacia azul verdoso como se esperaba ya que esta

prueba solo da positivo en las pentosas.

PREGUNTAS
1.Cul es el fundamento de cada uno de los ensayos utilizados para la
identificacin
de
carbohidratos?
En la prueba de Molisch, se utiliza el cido sulfrico en la reaccin de
deshidratacin (del monosacrido) y el alfa-naftol en la reaccin de
condensacin del furfural. Al aplicar esta prueba cualitativa, todos los
carbohidratos o glcidos producen un complejo color morado; por eso de dice
que es una prueba general: por medio de ella, puede determinarse si una

sustancia es un carbohidrato de cinco o ms carbonos. 2Las reacciones

involucradas
en
la
prueba
de
Molisch
son
las
siguientes:

-Grafica -1-.3

2 Vea: Silvia Quesada Mora. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica,

p. 90.
3 Vea: http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch

La prueba de Benedict se fundamenta en la reduccin del

2+
Cu

1+
Cu , que

ocurre al oxidarse el azcar. El reactivo de Benedict es una solucin estable que

CuSO 4
Na2 CO 3
contiene sulfato de cobre,
; carbonato de sodio
; y citrato de
sodio

C5 H 5 Na2 O7

. El carbonato de sodio mantiene el pH del medio alcalino

(alrededor de 10). El citrato de sodio acta como secuestrante del

2+

Cu

presente en el reactivo, para prevenir la remocin de este ion por precipitacin

(si no se agrega el citrato de sodio, el

2+
Cu precipita como

Cu(OH )2 o CuO ). El

citrato forma con el cobre un complejo color azul.

En la preparacin del reactivo de Benedict, primero se observa una precipitacin
verde, que es hidrxido de cobre (II): Cu(OH )2 . El hidrxido de cobre se
encuentra en equilibrio con los iones cobre (II) e hidroxilo:
2+ +2OH

Cu(OH )2 Cu
Disociacin del hidrxido de cobre
Pero, por la presencia del citrato, el precipitado se disuelve despus de agitar y
la solucin de toma de color azul. La reaccin que ocurre es la siguiente:

-Grafica-2-.

Como las reacciones se encuentran en equilibrio, en solucin siempre hay

2+

Cu

(en baja concentracin) que, en presencia del azcar reductor, de convierte en

1+
Cu . Conforme se consume el

2+
Cu , la reaccin se desplaza hacia su

produccin (el citrato lo libera) y, as, el reactivo de Benedict provee

constantemente el

2+
Cu

oxidante necesario para la reaccin. El calor y el

medio alcalino facilitan la oxidacin de los azucares que se convierten, primero

en su n-diol (su grupo aldehdo o cetona se oxida a alcohol), y luego, en dos
fragmentos altamente reductores.4

En la prueba de Seliwanof, se utiliza el acido clorhdrico en la reaccin de

deshidratacin (del monosacrido) y el resorcinol (1,3-dihidroxibenceno) en la
reaccin de condensacin del derivado del furfural (el hidroximetilfurfural). Esta
es una prueba cualitativa (el medio pasa de incoloro a rojo) para las
cetohexosas y aldohexosas. El hidroximetilfurfural (producto de la
deshidratacin) se forma rpidamente a partir de cetohexosas, y ms
lentamente a partir de aldohexosas. El tratamiento prolongado de ms de
quince minutos de duracin- provoca la isomerizacin de la glucosa
(aldohexosa) en fructosa (cetohexosa), por lo que tambin la glucosa puede dar
la prueba positiva. La sacarosa da una reaccin positiva debido a la hidrolisis
acida de un enlace glucosdico, cuyos productos son la D-glucosa y la Dfructosa. Las reacciones involucradas en la reaccin de Seliwanof son: 5

4 Vea: Silvia Quesada Mora. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica,

p. 94.
5 Vea: Silvia Quesada Mora. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica,
p. 92.

-Grafica-3-.

La prueba de Fehling de basa en la propiedad de reduccin de los

monosacridos y disacridos, que a su vez depende de un grupo cetona o
aldehdo libres. Esta prueba se realiza mediante la adicin de unas cuantas
gotas de solucin de azcar a una mezcla de reactivo de Fehling A (
es decir CuSO 4
) y reactivo de Fehling B (es decir, KOH y Na-K-tartrado). Cuando
la solucin alcalina de hidrxido cprico se calienta en la presencia de un azcar
reductor, que se reduce a oxido cprico de color amarillo o rojo. La prueba de
Fehling es respondida de manera positiva por monosacridos (glucosa,
galactosa, fructosa) y por disacridos (lactosa, maltosa) que tienen un grupo
cetona o aldehdo libres. Pero la sacarosa que no posee un grupo cetona o
aldehdo libres no responde a esta prueba. Por lo tanto, la prueba de Fehling
puede ser usada para distinguir disacridos reductores, tales como la maltosa y

la lactosa, de disacridos no reductores, como la sacarosa. La qumica

involucrada in la prueba de Fehling es como sigue: 6

-Grafica 4-.7

Las pruebas denominadas prueba de Tollens y prueba de Benedict

consisten en agregar, a una muestra, unos compuestos que son oxidantes
dbiles y solo reaccionan con los aldehdos (no cetonas). Los reactivos
empleados como oxidantes en estas pruebas de denominan reactivo de Tollens
y reactivo de Benedict.
6 Vea: Arti Nigam. Archana Ayyagari. Lab Manual in Biochemistry, Immunology and
Biotechnology, p. 23.
7 Vea: Rajan Katock. Analytical Techniques in Biochemistry and Molecular Biology,
p.72.

El reactivo de Tollens consiste en un ion complejo que se forma entre el

nitrato de plata y el amoniaco mediante la siguiente reaccin (sin equilibrar):

-Grafica-5-.
Los aldehdos reaccionan con este reactivo y se observa la formacin de un
espejo de plata; como esta reaccin se realiza en medio alcalino (NaOH),
tambin se forma la sal del acido correspondiente. La reaccin general (sin
equilibrar) es:

-Grafica-6-.
Cuando este ensayo se realiza en un tubo de vidrio bien limpio, la plata
finalmente dividida se deposita como un espejo sobre la superficie del vidrio;
por esta razn, a este ensayo de le denomina la prueba del espejo de plata.
Ciertos tipos de espejo se fabrican a partir de esta reaccin, empleando
formaldehdo o metanal.
Las siguientes reacciones ilustran la prueba de Tollens, para distinguir entre el
propanal y la acetona. En estas reacciones de oxidacin, se acostumbra solo
especificar el nombre de Tollens y la plata metlica. 8

8 Vea: Flora Acua Arias. Qumica Orgnica, p. 187- 188.

-Grafica 7-.
La prueba de Bial (orcinol, HCL concentrado y

FeCl3

), se usa para

diferenciar pentosas de hexosas. Tanto pentosas como hexosas se deshidratan

en el medio acido concentrado dando furfural (a partir de pentosas) o 5hidroximetilfurfural (a partil de hexosas); ambas sustancias reaccionan con
FeCl3
orcinol y
dando productos de condensacin, que se diferencian por la
coloracin. A partir de pentosas se obtienen colores de tonalidad azul-verde,
mientras que las hexosas originan una coloracin verde, caf o caf-rojiza.9 Las
reacciones involucradas en esta prueba son:

Grafica 8-.10

2. Por qu se considera reductor un azcar?

Azcar reductor Monosacrido o disacrido que puede ceder electrones a
otras molculas y puede, por tanto, actuar como agente reductor. La presencia
9 Vea: Anderson G. Franco, Pedro N. Martnez Y. Experimentos de Qumica Orgnica,
p. 138.
10 Vea: Arti Nigam. Archana Ayyagari. Lab Manual in Biochemistry, Immunology and
Biotechnology, p. 31.

de un grupo cetona (-CO-) o aldehdo (-CHO) libre permite a la mayora de los

monosacridos y polisacridos actuar como azucares reductores. 11
3. Escriba la reaccin de cada una de las pruebas efectuadas en la
prctica.
Las graficas del inciso 1 son la solucin del presente inciso.
4. Por qu no se deben tirar las sales de plata al drenaje?
El reactivo debe ser preparado en el momento y nunca almacenado por ms
de un par de horas. Despus de realizar el test, la mezcla resultante debe ser
acidificada con cido diluido antes de ser desechada. Estas precauciones
previenen la formacin del altamente explosivo fulminante de plata, que es
fundamentalmente nitruro de plata, Ag3N.12

CONCLUSIONES

los glcidos tienen una estructura definida, puedes ser

monosacridos o disacridos y se los puede identificar con las
pruebas realizadas ateriormente en donde dependiendo de su
estructura indican una coloracin
los monosacridos reaccionan de acuerdo a los grupos hidroxilo y
carbonilo que poseen.
los azucares que dan resultados positivos con las pruebas de
Benedict o Fehling se conocen como azucares reductoras

11 Vea: Inmaculada Julin. Diccionario de Qumica, p. 66.

12 Vea: http://es.wikipedia.org/wiki/Reactivo_de_Tollens. Consultado 19 de abril de 2012

BIBLIOGRAFIA
1. NELSON DL, COX MM. PRINCIPIOS DE BIOQUIMICA Lehninger. Cuarta
edicin. Barcelona: Omega, 2005
2. ACUA AGUAS, FLORA. QUIMICA ORGANICA. Primera edicin. San Jos,
C.R: EUNED, 2006
3. Rajan Katock. Analytical Techniques in Biochemistry and Molecular
Biology. New York: Springer
4. QUESADA MORA, SILVIA. Manual de experimentos de laboratorio para
bioqumica. San Jos C.R: EUNED, 2007
5. Arti Nigam. Archana Ayyagari. Lab Manual in Biochemistry, Immunology
and Biotechnology. McGraw-Hill: New Delhi, 2008.
6. es.wikipedia.org/wiki/glcido