Anda di halaman 1dari 32

Imaging of the brain serotonin

transporters (SERT)
with 18F-labelled fluoromethylMcN5652 and PET in humans
KELOMPOK 4

ABSTRAK
Tujuan [11C] DASB saat ini yang paling sering digunakan radiotracer
selektif untuk visualisasi dan kuantifikasi SERT pusat. Namun
penggunaannya terhambat oleh waktu paruh 11C yang pendek, moderat
kortikal reliabilitas test-retest, dan kurangnya kuantifikasi serotonin
endogen. Pelabelan dengan 18F mengikuti pada prinsip waktu akuisisi
yang lebih lama untuk analisis kinetik dalam jaringan otak dan dapat
memberikan sensitivitas yang lebih tinggi.

PENDAHULUAN

Transport
er
Serotoni
n (SERT)

protein transmembran yang terletak di


terminal presinaptik dalam sistem saraf
pusat
mengatur jumlah serotonin di celah
sinaps dengan reuptake-nya, sehingga
mengakhiri aksinya
Densitas tinggi di daerah subkortikal
(kaudatus, putamen, thalamus, dan
hipotalamus)
Disfungsi gangguan kejiwaan

SERT
merupakan struktur target
pengobatan antidepresan saat ini
SERT imaging (single-photon
emission tomography atau PET)
metode penting untuk penyelidikan
mekanisme patofisiologi & terapi
pada gangguan kejiwaan

RADIOTRACER
[ C] McN5652
11

Radiotracer pertama yang berhasil digunakan


Terakumulasi ke tingkat tinggi pada daerah kaya
SERT di otak kinetika agak lambat
pengikatan tidak spesifik terlalu tinggi untuk
reliabel kuantifikasi

CDASB9

11

Radiotracer yang paling sering digunakan


untuk PET
Untuk visualisasi & kuantifikasi SERT pusat
yang sangat affine & sangat selektif
Penggunaannya terbatas oleh waktu paruh 11C
(20 menit) tes-retest reliabilitas kortikal
moderat & kurang mengukur endogen
serotonin.

data manusia
tidak tersedia dan
evaluasi dari sifat
in vivo dari
radiotracers
tersebut masih
berkelanjutan

beberapa tracer
akan
memungkinkan
waktu akuisisi
data kemudian

Membantu mengatasi
kelemahan

Pelabelan 18F
menyediakan
kesempatan bagi
aplikasi luas dalam
satelit konsep

untuk
penyelidikan
kinetika tracer
dalam jaringan
otak (modeling)

PENGEMBANGAN [18F]
FLUOROMETIL ANALOG (+)MCN5652
Menunjukkan sifat praklinis menguntungkan untuk SERT imaging

Studi in vitro dan ex vivo autoradiografik pada hewan distribusi radiotracer sangat cocok
dengan distribusi SERT alamiah di otak
Pengikatan ini dapat diganti dengan derajat yang sangat tinggi oleh antagonis selektif SERT
seperti citalopram
Studi in vivo pada babi pola akumulasi spesifik SERT dalam otak dan perpindahan 90%
baik oleh citalopram atau fluoxetine, tapi tidak ada perpindahan dengan NET inhibitor
maprotiline
Afinitas in vitro dari analog fluoromethyl telah dideterminasi untuk menjadi sedikit lebih
rendah dibandingkan dengan (+)-McN5652 (2,3 nM vs 0.72 nM), tetapi pengikatan spesifik
dari turunan yang berlabel 18F diukur diukur secara in vivo adalah 40% lebih tinggi
dibandingkan dengan senyawa yang diberi label 11C

(+)-[18F]HPH-McN5652

kinetika yang lebih cepat dari (+)-[11C]McN5652


mencapai binding equilibrium selama panjang studi
120 menit yang tidak terjadi pada turunan yang
berlabel 11C

TUJUAN PENELITIAN
menerapkan SERT selektifitas tinggi terbaru yang berlabel 18F
analog fluorometil dari (+)-McN5652 pada manusia untuk
mengevaluasi kesesuaian untuk menunjukkan tempat ikatan
SERT dalam otak manusia yang hidup

untuk mengukur yang avaibilitas SERT melalui penelitian


baru ini dibandingkan dengan "standar emas" [11C] DASB
saat ini

MATERIAL DAN
METODE

Sukarelawan
Studi ini disetujui oleh komite etika Fakultas Kedokteran Universitas Leipzig
dan oleh pihak berwenang di Jerman.
Lima relawan sehat (tiga laki-laki, dua perempuan, usia 39 10 tahun)
dimasukkan dalam studi. Mereka menjalani Scan PET dinamik dan
pengambilan sampel darah arteri.
Sebagai perbandingan, data dari 21 sukarelawan sehat (10 pria, 11 wanita,
usia 38 8 tahun) yang dinilai oleh [11C] DASB PET disajikan sebagai
referensi.
Semua anggota dari kedua kelompok bebas dari gangguan mental,
gangguan neurologis atau tidak sedang menjalani pengobatan apa pun.
Tidak dalam penggunaan obat-obatan terlarang dan penyalahgunaan
alkohol

RADIOKIMIA
(+) - [18F] HPH-McN5652 disintesis sesuai dengan metode Zessin et al
dengan modifikasi.
demethylated (+)-McN5652 (diproduksi oleh hidrolisis dasar dari
thiobutyrate prekursor MCN5652; Senyawa Biokimia ABX Lanjutan,
Radeberg, Jerman) direaksikan dalam kondisi GMP dalam sintesis
dimodifikasi Modul (TRACERlab FxF-N) dengan bromo- [18F]
fluoromethane untuk menghasilkan (+) - [18F] HPH-McN5652 dalam dua
langkah / reaksi dua pot. Karena (+) - [18F] FME-McN5652 tidak stabil
dalam larutan, prosedur pemurnian HPLC dikembangkan berdasarkan
pada eluen etanol 62%. Produk yang dimurnikan dilewatkan melalui filter
Sartorius dan mengalami kualitas kontrol. Larutan diencerkan dengan
garam fisiologis untuk menurunkan kadar etanol sampai 15% sebelum
diinjeksikan. Kemurnian radiokimia adalah 97,6 0,7%. Aktivitas spesifik
radiotracer pada waktu injeksi adalah 3,7 1,8 105 GBq / mmol.

PENCITRAAN PET
Proses PET (Positron Emission Tomography)
Partisipan diinjeksi radiotracer
PET dilakukan dengan ECAT HR EXACT + scanner (Siemens / CTI,
Knoxville, TN / Erlangen, Jerman;
Proyeksi gambar

Resolusi intrinsik di pusat 4.3 mm, resolusi aksial 5-6 mm, bidang pandang
15,5 cm, 3-4 mm-lebar penuh
Peserta menjalani scan dinamis PET lebih dari 120 menit
Massa yang disuntikkan adalah 0,25 mg (0.8 nmol) (+) - [18F] HPHMcN5652 per kilogram tubuh berat badan rata-rata.
26 frame (4 15 s, 4 1 menit, 5 2 menit, 5 5 menit, 8 10 menit)
dalam mode 3-D dengan resolusi transaxial 4,4 mm (tengah) dan resolusi
aksial dari 4,5 mm (pusat).

PENGUKURAN FUNGSI
INPUT ARTERI
Seluruh darah dan plasma
Plasma dipisahkan dari sel-sel darah dengan sentrifugasi
(3.000 g, 5 menit, 4C). Radioaktivitas dalam aliquot dari
seluruh darah dan plasma diukur dalam counter lintaskalibrasi gamma (Cobra 5003; Packard Company Instrumen,
Meriden, CT). Kurva waktu-aktivitas (TAC) yang dihasilkan
dari waktu ke-0 sampai menit ke-210 setelah injeksi.

Cont
Protein plasma mengikat (+) - [18F] HPH-McN5652
sampel plasma ditambahkan dengan 10 kBq radioligand per
mililiter, diinkubasi selama 30 menit pada 37C dan
kemudian pasangkan
perangkat penyaring sentrifugal
(Centrifree, Millipore, Bedford, MA). Perangkat Filter
disentrifugasi selama 6 menit pada 2.000 g dan pada suhu
37 C. Kemudian radioaktivitas dalam volume yang sama
dari filtrat (yaitu fraksi bebas radiotracer) dan plasma yang
mengandung Jumlah total radiotracer diukur dalam counter
gamma. Protein plasma yang mengikat p dihitung sebagai
rasio radioaktivitas menurut p01-

Cont
Penentuan fraksi nonmetabolized dari (+) - [18F]UM-McN5652
sebagai fungsi waktu setelah injeksi, Plasma sampel dari darah
yang diambil pada ke-3, 10, 30, 50, 70, 90, 120, 150, 180 dan
210 setelah injeksi ditambahkan tiga kali volume etanol, dan
dicampur dengan penuh semangat selama 2 menit untuk
denaturasi protein. Campuran kemudian disentrifugasi pada
10.000 g untuk mendapatkan supernatan protein bebas yang
diterapkan ke RP-18 kolom Supelcosil (250 10, 5 m).
HPLC dari supernatan dilakukan dengan menggunakan gradien
asetonitril antara 50% dan 90% dalam 0,1 M amonium format
mengandung 0,02% trietilamina.

Analisis Data PET, Perhitungan TAC


dan Pengukuran Hasil
Pengolahan gambar PET, penyesuaian dan perhitungan TAC
regional dengan analisis volume of interest (VOI) dan
perhitungan rasio nilai serapan standar (SUVR) dari TAC
Frame 1-29 yang disesuaikan diubah menjadi file analisis
multivolume untuk diproses lebih lanjut dengan alat VOI
(software PMOD).
Untuk analisis VOI dan perhitungan SUVR untuk
perbandingan antarkelompok, digunakan gambar 90-120
menit untuk (+) - [ 18F] HPH-McN5652 dan gambar 60-90
menit untuk [11C] DASB.

Model kinetik dari TAC jaringan otak dilakukan menggunakan


model kompartemen dua jaringan dengan empat konstanta laju
dan ditambah volume darah fraksional Vb (ml / cm3);
kompartemen satu jaringan mengandung konsentrasi tracer
nondisplaceable (tracer bebas dalam jaringan dan terikat secara
nonspesifik).
Parameter kinetik adalah clearance K1 (ml / (min cm)), konstanta
laju k2 (l / min), k3 (l / min) dan k4 (l / min). Clearance K1
menggambarkan transport perunut dari arteri plasma ke dalam
kompartemen pertama jaringan (pengiriman tracer) dan
konstanta laju k,2 transportasi dari kompartemen jaringan ini
kembali ke dalam darah. Konstanta laju k3 mengekspresikan
pengikatan (+) - [18F] FME-McN5652 ke SERT dan k4, disosiasi
kompleks SERT-perunut.

Analisis Statistik
Untuk membandingkan metode dengan tes masingmasing, kami menggunakan SPSS18 (IBM, Somer, NY).
Sebelum perbandingan, data diuji normalitas distribusi
dan variasi homogenitasnya. Nilai p <0,05 dianggap
signifikan.

HASIL DAN DISKUSI

Analisa visualGambar 1 menunjukan distribusi ikatan


radiotracer pada daerah otak yang kaya
akan SERT dan rancangan anatomi. Konten
plasma, ikatan protein plasma, dan
metabolit (+)-[18F]FMe-McN5652
Gambar 1. Penjumlahan PET image
(semua gambar dari studi dinamik)
setelah injeksi (+)-[18F]FMe-McN5652
(top row) atau [11C]DASB (bottom row)
pada level striatum atau thalamus, dan
otak tengah secara berturut-turut dan
koregister MR image (middle row).
Pengambilan tinggi pada area SERT yaitu
pada periaqueductal (arrow), seluruh
striatum dan talamus, secara signifikan
melampaui pengambilan pada daerah
kortikal.
rancangan anatomi pada (+)-[18F]FMeMcN5652 lebih baik dari [11C]DASB, juga
akrena enery kinetik positron 18F
yang digunakan lebih kecil

gambar 2 menjelaskan fraksi yang tidak termetabolisme dari


(+)-[18F]FMe-McN5652 pada plasma dari 5 subjek sehat sebagai
fungsi waktu setelah injeksi tracer yang dibandingkan dengan
kurva voluntir DASB dimana metabolit nya diukur, dicocokan
untuk usia dan jenis kelamin. Nilai rata-rata (n05) dari fraksi non
metabolit dari masing masing titik poin yang dipilih telah cocok
dengan regresi non linear berdasarkan fungsi bieksponensial.
Nilai nya diukur dengan HPLC dengan sampel plasma bebas
protein yang diperoleh dari masing-masing ke lima subjek.

Gambar
3
menunjukan
representatif kromatogram HPLC
yang diperoleh 10 menit setelah
injeksi. Ada metabolisasi yang
cepat
dari
(+)-[18F]FMeMcN5652
in
vivo
dengan
meningkatkan jumlah metabolit
polar (hidrofilik) hingga 3,5 jam
setelah
injeksi.
Tidak
ada
metabolit lipofil yang dideteksi
secara invivo.

Secara berhubungan, gambar 4


mengindikasikan
pengukuran
konsentrasi plasma total dan
konsentrasi yang diperhitungkan
dari senyawa induk. Penentuan
pengikatan protein plasma dari
(+)-[18F]FMe-McN5652
menghasilkan ikatan radiotracer
sebesar 844%.

Brain reuptake dan


model kompartemen
Pengambilan High SERT-specific
terlihat pada daerah raphe dan
thalamus yang dibandingkan
pada serebellum (gambar 5).
Pertumbuhan
yang
cepat
mengindikasikan bahwa
(+)[18F]FMe-McN5652 secara cepat
melalui sawar darah otak. Peak
TAC adalah 30 menit untuk
thalamus dan 50 menit untuk
raphe.
Hal
tersebut
diikuti
dengan klirens radiotracer cepat.
Kurva
mengindikasikan
kecocokan yang baik dari model
kompartemen
dua
jaringan
tehadap nilai yang diukur. Tabel
1 meringkaskan daerah K1 dan
nilai VT pada ke lima subjek
yang diinvestigasi pada semua
daerah.

Gambar 6, menunjukan data PET hingga menit 210


untuk model kompartemen dua jaringan. Jumlah
residual dari kuadrat dibagi oleh angga poin data pada
korteks sereberal di gambar 5 adalah 0.020 (120 min,
n026) dibandingkan terhadap 0.073 (210 min, n029)
pada gambar 6. Mengindikasikan kualitas fit lebih
rendah untuk durasi PET 210 menit.

Specific regional accumulation (SUVR) of (+)-[18F]FMeMcN5652


TAC dari model kompartemen dua jaringan (gambar 6, 210 menit)
digunakan untuk memperhitungkan SURV bergantung waktu
seperti pada darah raphe, talamus dan korteks sereberal (gambar
7). Untuk daerah dengan densitas SERT yang tinggi, SURV
mencapai maksimum sekitar 120 menit. Seperti yang diharapkan,
spesifik SUVRs of (+)-[18F]FMe-McN5652 pada beberapa daerah
menunjukan tidak ada perbedaan hemisperik. Daerah tertinggi
SURV ditemukan pada daerah otak yang diketahui mengandung
densitas SERT yang tinggi seperti nucleus accumbens, kaudat,
putamen, thalamus dan daerah raphe (tabel 2, gambar 8).
Dibandingkan dengan SURV yang diperoleh dari [11C]DASB PET,
nilainya bagaimanapun lebih kecil dengan standar deviasi yang
lebih kecil tapi SUVR sangat kuat terinterkorelasi.

keamanan
tidak ada efek samping yang serius yang muncul pada partisipan
selama penelitian ini.

DISKUSI
Tujuan utama dari penelitian ini adalah
untuk mengelola analog baru dari [18F]
fluoromethyl dari (+) - McN5652 pada
manusia dan untuk mengevaluasi
kesesuaiannya pada in vivo yang
digunakan untuk penggambaran dan
untuk mengukur pengikatan SERT.
delineasi dari SERT khas yang
terkandung pada daerahnya. Penyerapan
cerebral (+) - [18F] HPH-McN5652 dan
distribusinya merupakan korelasi yang
bagus dengan diketahuinya distribusi
kerapatan SERT dalam otak manusia dan
seperti yang diperkirakan dari gambar
PET dengan baik (+) [11C] -McN5652
atau [11C ] DASB.

DISKUSI
Penurunan yang cepat (+) - [18F]
HPH-McN5652 di dalam darah
menunjukkan ketidakstabilan
metabolisme daripada senyawa
yang mudah, karena diamati tidak
adanya dekomposisi radiotracer
pada inkubasi dalam plasma
manusia in vitro (data tidak
ditampilkan).
Pada data hewan pada penelitian
ini yang menunjukkan adanya
peningkatan radioaktivitas dalam
tengkorak, yang menunjukkan
beberapa defluorinasi, dan tidak
ditemukannya serapan tengkorak
yang signifikan selama waktu
pemindaian
Protein plasma yang terikat
adalah 84% dan sebanding
dengan (+) - [11C] McN5652.

Ketidakmampuan
menempatkan VT di otak
(diukur dalam korteks
serebelar) adalah antara 6,5
dan 10 ml / cm3, yang hampir
tiga kali lebih rendah dari yang
dihitung untuk [11C] (+) - MCN
5652.
Untuk daerah dengan
kepadatan tinggi SERT yang
spesifik dan tidak spesifik
mengikat (ke SERT) mencapai
maksimum sekitar 120 menit,
seperti yang diperkirakan dari
data hewan, yang lagi tidak
terjadi untuk [11C] (+) MCN
5652
Berdasarkan SUVR sebagai
ukuran sederhana ketersediaan
SERT, Standar deviasi dari nilai
SUVR berasal dari (+) - [18F]
FMe- McN5652, adalah lebih

DISKUSI
Ini mungkin menguntungkan
berkaitan dengan perkiraan tes tes
yang berulang dan analisis
kuantitatif dalam penelitian yang
lebih besar; Namun, penyelidikan
klinis selanjutnya diperlukan untuk
menarik kesimpulan yang pasti.
Perbedaan dalam kualitas gambar
scan (+) [18F] HPH-MCN 5652 dan
scan [11C] DASB PET mungkin
setidaknya sebagian telah
disebabkan oleh energi foton yang
lebih rendah dari 18F dibandingkan
dengan 11 C

Eksperimen selanjutnya diminta


untuk menyelidiki lebih lanjut
kekhususan SERT dari (+) [18F] HPHMcN5652 dan untuk memvalidasi
materi abu-abu serebelum yang
digunakan sebagai daerah acuan
dalam studi PET manusia seperti
yang telah sebelumnya terbukti
cocok pada uji tikus dan babi.
Hal ini juga akan menarik untuk
menentukan apakah pengikatan (+)
- [18F] FMe- McN5652 reversibel

Kesimpulan
Hasil penelitian menunjukkan bahwa (+)-[18F]FMeMcN5652 ini juga cocok untuk kuantifikasi in vivo dari
SERT dengan PET. Karena waktu paruh 18F panjang, yang
digunakan secara luas dalam konsep satelit terlihat
layak.