Tutor Imunologi

PEMERIKSAAN hCG
DENGAN METODE ELFA

Pande Putu Ayu Patria Dewi/

Endang Retnowati K
1

PENDAHULUAN
Human chorionic gonadotropin ( hCG)
chordata

Setelah lahir
gonadotropin
Berasal dari gonad

STRUKTUR hCG
Berat

Rantai

Hormon
Gliko
protein

36.000 dalton

dan , non kovalen

Mirip FSH, LH,TSH

Sumber: Cole,1997
3

BENTUK hCG
hCG
hyperglycosylated

hCG
hCG free subunit
hyperglycosylated hCG
free subunit
sulfated hCG
Sumber: clinica
chimica acta 2011
4

FUNGSI hCG
merangsang korpus luteal

progesteron

angiogenesis vaskuler uterus

differensiasi cytotrophoblast,
pertumbuhan uterus
merangsang pertumbuhan organ fetus dan
tali pusat
5

Diagram Konsentrasi hCG pada masa kehamilan

(Sumber: Taylor and Martin,1997)
6

ARTI KLINIS hCG

Kanker
Eklampsia

Kehamilan Ektopik
Mola Hidatidosa

Abortus
Tidak Terjadi
Fertilisasi
Kehamilan
dengan
Ruptur

Gynecomastia
Kehamilan
7

METODE ELFA

Alat VIDAS dengan metode Enzyme Linked

Fluorescent Assays (ELFA)

PRINSIP PEMERIKSAAN
Sampel yang mengandung hCG dimasukkan ke dalam
sumuran yang dilapisi antibodi anti-hCG berlabel alkaline
phospatase.
Pencucian
Dicampur dengan substrat 4-Methyl-umbelliferyl phosphate
Produk fluoresens : 4-Methyl-umbelliferone
Deteksi dengan 450 nm

ELFA
(Enzyme-Linked Fluorescent Assay)

(Sumber: Anonim,2009)

SPESIMEN

Serum
Plasma (EDTA atau Lithium Heparin)
Suhu 2-80C selama 7 hari
Dibekukan pada suhu -2560C

11

PROSEDUR KERJA
Reagen dikeluarkan dari refrigerator

Diamkan pada suhu kamar min 30 menit

Kode dimasukkan dan dipilih HCG

Kalibrator, Kontrol ,dan Sampel dipipet masingmasing sebanyak 100 L
12

lanjutan
SPRs dan strip dimasukkan ke alat

Dilakukan pemeriksaan secara otomatis

SPRs dan strip yang telah digunakan diambil

dari alat.
13

REAGEN
Strip
Reagen

SPR

14

Strip Reagen
Sumuran

Reagen
1

Sumuran sampel

2-3-4

Sumuran kosong

Konjugat: alkaline phosphatase-labeled

mouse monoclonal
anti-hCG immunoglobins +1 g/l sodium azide (600L )

6-7

Buffer Pencuci: Sodium fosfat (0,01 mol/l,pH 7,4) + 1 g/l sodium

azide (600L )

Buffer Pencuci: diethanolamine DEA (1,1 mol/l atau 11,5 %) pH

9,8 +1 g/l sodium azide (600L )

Sumuran Kosong

10

Kuvet dengan substrat : 4-Methyl-umbelliferyl phosphate (0.6

mmol/l) + DEA (0,62 mol/l, atau 6.6%, pH 9.2) + 1g/l sodium
azide (300 L).
15

HASIL
Background

Setelah
Inkubasi

RFV
( Relative
Fluorescence
Value)

16

Rentang Nilai
Laki-laki: < 3 mIU/ml
Wanita : < 4 mIU/ml
Wanita Menoupase: < 13 mIU/ml

17

Lanjutan.
Wanita Hamil
Week
4-5
5-6
6-7
7-8
8-9
9-10
10-11
11-12
12-13
13-14
Second trimester (14-26)
Third trimester (26-39)

Mean (mIU/ml)
7.400
32.800
52.000
74.000
100.000
105.000
96.000
75.300
66.700
65.900
26.150
27.200

Limit values
(mIU/ml)
1.500-23.000
3.400-135.300
10.500-161.000
18.000-209.000
37.500-219.000
42.800-218.000
33.700-218.700
21.800-193.200
20.300-166.100
15.400-190.000
2.800-176.100
2.800-144.400

18

INTERFERENS
Hemolisis (hingga kadar 300 mol/ L),
Lipemia (hingga kadar 2 g/L)
Bilirubinemia(hingga kadar 513
mol/L).

19

Keterbatasan Metode
Kehamilan

Patologis

Kadar Rendah
Gejala dan
Pemeriksaan Fisik

Penyakit Tropoblastik dan Tumor

Germinal
Pemeriksaan > Spesifiik

20

Pemantapan Kualitas
Pada kit baru dilakukan kontrol
Kalibrasi
Setiap 14 Hari

21

22