biuret Uji

Tes biuret adalah tes kimia yang digunakan untuk mendeteksi adanya ikatan
peptida. Dengan adanya peptida, tembaga (II) ion membentuk kompleks koordinasi
berwarna ungu dalam larutan alkali. [1] Beberapa varian pada tes telah
dikembangkan, seperti tes BCA dan uji Lowry yang dimodifikasi. [2]
Reaksi biuret dapat digunakan untuk menilai konsentrasi protein karena ikatan
peptida terjadi dengan frekuensi yang sama per asam amino dalam peptida.
Intensitas warna, dan karenanya penyerapan pada 540 nm, berbanding lurus
dengan konsentrasi protein, menurut hukum Beer-Lambert.
Meskipun namanya, reagen tidak sebenarnya berisi Biuret ((H2N-CO-) 2NH). Tes ini
dinamakan demikian karena juga memberikan reaksi positif terhadap ikatan
peptida-seperti dalam molekul biuret.
prosedur
Sampel air diperlakukan dengan volume yang sama dari 1% dasar yang kuat
(natrium atau kalium hidroksida paling sering) diikuti oleh beberapa tetes air
tembaga (II) sulfat. Jika larutan berubah ungu, protein terdapat. 5-160 mg / mL
dapat ditentukan. Sebuah peptida dari panjang rantai minimal 3 asam amino yang
diperlukan untuk, pergeseran warna terukur signifikan dengan reagen ini. [3]
biuret reagen
The Biuret reagen terbuat dari natrium hidroksida (NaOH) dan tembaga terhidrasi
(II) sulfat, bersama dengan kalium natrium tartrat. [4] Kalium natrium tartrat [5]
ditambahkan ke kompleks untuk menstabilkan ion tembaga. Reaksi ion tembaga
dengan atom nitrogen yang terlibat dalam ikatan peptida menyebabkan
perpindahan atom hidrogen peptida dalam kondisi basa. Sebuah tri atau tetra
dentate khelat dari dengan peptida nitrogen menghasilkan "buret" warna. Ini
ditemukan dengan dipeptides (Datta, SP, Leberman, R., Dan Rabin, BR,
Trans.Farad.Soc. (1959), 55, 2141.)
Reagen umumnya digunakan dalam uji protein biuret, tes kolorimetri digunakan
untuk menentukan konsentrasi protein oleh UV / VIS pada panjang gelombang 565
nm.
Sensitivitas tinggi varian dari tes biuret
Dua modifikasi utama dari uji biuret umumnya diterapkan dalam analisis modern
yang kolorimetri peptida: asam bicinchoninic (BCA) assay dan uji Lowry. Dalam tes
ini, Cu + yang terbentuk selama reaksi biuret bereaksi lebih lanjut dengan reagen
lainnya, yang mengarah ke warna yang lebih dalam.

Pada uji BCA, Cu + membentuk kompleks ungu dengan bicinchoninic asam (BCA),
[6] yang menyerap sekitar 562 nm, menghasilkan warna khusus violet. The larut
dalam air BCA / kompleks tembaga menyerap jauh lebih kuat daripada kompleks
peptida / tembaga, meningkatkan sensitivitas uji biuret dengan faktor sekitar 100:
uji BCA memungkinkan untuk mendeteksi protein dalam kisaran ,0005-2 mg / mL) .
Additionnally, uji protein BCA memberikan manfaat penting dari kompatibilitas
dengan zat seperti sampai 5% surfaktan dalam sampel protein.
Dalam uji protein Lowry Cu + teroksidasi kembali ke Cu2 + oleh Movi di reagen
Folin-Ciocalteu, yang membentuk molibdenum biru (MoIV). Residu tirosin protein
juga membentuk molibdenum biru dalam kondisi ini. Dengan cara ini, protein dapat
dideteksi dalam konsentrasi antara 0,005 dan 2 mg / mL [7] Molibdenum biru [8]
pada gilirannya dapat mengikat pewarna organik tertentu seperti perunggu hijau
dan Auramin O, sehingga amplifikasi lebih lanjut dari sinyal..