Medio VRBA (VIOLETA ROJO Y BILIS AGAR)

El agar biliado-rojo neutro-cristal violeta o medio VRBA es un medio de

cultivo de microorganismos,tanto selectivo ,como diferencial ,que se usa para la identificacin
y enumeracin de coliformes.

Esquema de crecimiento de microorganismos coliformes (Lac+) y no coliformes (Lac-) en VRBA

Est formado por cierto nmero de componentes que favorecen el crecimiento bacteriano, y
por otros componentes que dotan a este medio de sus caractersticas diferenciales y
selectivas
Componentes que favorecen el crecimiento bacteriano:
-Lactosa (fuente de carbono)
-Extracto de levadura(fuente de vitamina B)
-Peptona (fuente de nitrgeno y en menor medida de carbohidrato y vitamina.)

Componentes de medio VRBA

Elementos selectivos del medio VRBA:

Sales biliares y cristal violeta (ambos compuestos inhiben en buena medida el crecimiento de
bacterias Gram + ,de modo que solo se selecciona el crecimiento de Gram -, grupo bacteriano
en el cual se encuentran las bacterias coliformes, que son las que se quieren seleccionar en
este medio para su identificacin, observacin, aislamiento o recuento.)
Elementos diferenciales del medio VRBA:
Indicador de pH rojo neutro, cuyo modo de funcionamiento es el siguiente:
Las bacterias coliformes son fermentadoras de lactosa, al crecen en VRBA y fermentar lactosa
reducen el PH del medio de modo que el indicador rojo neutro vira a rojo/rosado intenso. As,
de las colonias Gram - que han crecido en la placa, las coliformes, pueden ser diferenciadas
de otras colonias Gram -.

Lauril Sulfato Caldo.

Medio recomendado por A.P.H.A. para deteccin y recuento de coliformes en aguas, aguas residuales y alimentos.

Fundamento

Medio rico en nutrientes, que permite un rpido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa, an de los
fermentadores
lentos.
La triptosa es la fuente de nitrgeno, vitaminas, minerales y aminocidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable,
las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico
Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompaante.
Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y gas, ste ltimo se evidencia al utilizar las campanas Durham.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Triptosa

20.0

Lactosa

5.0

Cloruro de sodio

5.0

Lauril sulfato de sodio

0.1

Fosfato dipotsico

2.75

Fosfato monopotsico

2.75

Suspender 35,6 g del polvo en 1 litro de agua

destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a
ebullicin hasta la disolucin total. Distribuir en
tubos conteniendo tubos de fermentacin. Esterilizar
en autoclave durante 15 minutos a 121C.

pH final: 6.8 0.2

Siembra

Para
recuento
de
coliformes
totales,
tcnica
del
Nmero
Mas
Probable:
a.- Para el anlisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentracin y 1ml y 0,1
ml en caldo simple concentracin.
Nmero
de tubos

Volumen de la Volumen
muestra
medio

de Concentracin
del medio

10 ml

10 ml

Doble

1 ml

10 ml

Simple

0.1 ml

10 ml

Simple

b.- Para muestras slidas (alimentos, cosmticos, frmacos), efectuar diluciones seriadas 10 -1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada
dilucin por triplicado en medio de cultivo simple concentracin.
Nmero
de tubos

Dilucin
muestra

dela Volumen de la Volumen

muestra
medio

de Concentracin
del medio

10-1

1 ml

10 ml

Simple

10-2

1 ml

10 ml

Simple

10-3

1 ml

10 ml

Simple

Incubacin

Incubar los tubos 24-48 horas a 35-37 C.

Resultados
Considerar como positivos aquellos tubos que presentan gas.
Microorganismos

Crecimiento

Produccin
de gas

Enterobacter aerogenes

Bueno a excelente

Escherichia coli ATCC 25922

Bueno a excelente

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Bueno a excelente

Staphylococcus aureus ATCC 25923

Inhibido

Inhibido

El resultado del nmero mas probable se expresa por 100 ml para muestras fluidas y por gramo para muestras slidas.

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro a ligeramente opalescente. Si se conserva en fro, generalmente flocula o forma precipitado.

Almacenamiento:
Si

se

conserva

entre

25-30

estufa

de

incubacin

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-174-05

x 500g :Cdigo: B02-174-06

35-37

permanece

claro.