Anda di halaman 1dari 5

BAB III

METODOLOGI
A. Waktu dan Tempat
Waktu

: Pukul 07.00 10.00 WIB.

Tanggal

: 25 28 Maret 2015

Tempat

: Laboratorium Media dan Laboratorium Bakteriologi

B. Alat dan Bahan


1. Alat
- Ose Bulat
- Ose Jarum
- Rak Tabung
- Korek Api
- Lampu Spirtus
- Inkas
- Inkubator
- Tabung Khan
- Tabung Durham
- Tabung Reaksi
- Pipet Ukur 10 ml
- Pipet Ukur 1 ml
- Plate 12 cm
2. Bahan
- Sampel Air Kran di Bandar Kidul yang sudah dimasak 200ml
- Media Pelarut PDF (Pepton Dilution Fluid)
- Media MCB (Mac Conkey Broth)
- Media BGLB (Brilliant Green Bile Lactosa Broth)
- Media EMB (Eosin Methylen Blue)
- Media IMVIC (Indol, MR-VP, Citrat)
C. Prosedur dan Skema

Prosedur :
1. Hari Pertama
-

Pembuatan media (PDF, MCB, BGLB, EMB dan IMVIC)

Pensterilan botol (wadah) sampel air kran dan pipet ukur

2. Hari Kedua (Presumtive Test)


-

Sampel dipipet 10ml, dimasukkan dalam 90ml pelarut PDF (P = 10 -1),


dari PDF 90ml dipipet masing masing 1ml untuk 3 tabung media
MCB

Dipipet 1ml dari PDF 90ml (P = 10 -1), dimasukkan dalam 9ml PDF (P
= 10-2), dari PDF 9ml (P = 10-2) dipipet masing masing 1ml untuk 3
tabung media MCB

Dipipet 1ml dari PDF 90ml (P = 10 -2), dimasukkan dalam 9ml PDF (P
= 10-3), dari PDF 9ml (P = 10-3) dipipet masing masing 1ml untuk 3
tabung media MCB

Semua pencampuran dikocok sampai homogen

Media MCB diinkubasi pada suhu 37o C selama 24 jam

3. Hari Ketiga (Confirmed Test and Completed Test)


-

Dilihat hasil dari media presumtive test (MCB) dan dipilih yang
menghasilkan gas (+) dan paling keruh untuk diteruskan pada media
confirmed test and completed test (BGLB, EMB, dan IMVIC)

Dimasukkan semua alat dan bahan yang diperlukan kedalam inkase

Dipanaskan ose bulat sampai merah membara, dinginkan sebentar

Diambil satu masa ose dari hasil gas (+) media MCB pada media
BGLB (sesuai nomor urut)

Dambil satu mata ose dari MCByang memiliki gas terbanyak dan
paling keruh distreak pada media plate EMB sesuai zona yang sudah
dibagi dan diinokulasi pada media IMVIC (Indol, MR-VP, dan Citrat)

Dipanaskan kembali ose bulat

Diinkubasi 37 C selama 24 jam.

4. Hari Keempat

Penambahan reagen pada media Indol, MR dan VP.


o Media Indol ditambahkan reagen Kovac sebanyak 1 3 tetes.
o Media MR ditambahkan indikator MR 1 tetes.
o Media VP ditambahkan reagen KOH 40% dan Naftol dengan
perbandingan 1 : 2.
Pembacaan hasil dari media BGLB, EMB, dan IMVIC .

Skema :

1ml

10ml

Sampel

PDF 90ml (P10-1)

1ml

PDF 9ml (P10-2)

@1ml

@1ml

PDF 9ml(P10-3)
1. Presumtive Test (Tes Pendahuluan)
@1ml

MCB 9ml
Inkubasi 37o C 24 Jam
Media yang memiliki gas terbanyak ditanam pada media BGLB
(sesuai nomor urut). Media yang paling keruh ditanam pada
media EMB dan IMVIC
2. Confirmed Test (Tes Penegasan)

BGLB 4 ml
3. Completed Test (Tes Pelengkap)

Indol, MR VP, Citrat

EMB

Inkubasi 37o C 24 Jam


Identifikasi dan Pembacaan Hasil
Escherechia coli : Metallic sheen. IMVIC : ++-Coliform : Berlendir, Banyak. IMVIC : --++

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Media MCB

Media BGLB

Media EMB

Media IMVIC

Indol, MR VP,
-

Bentuk : Bulat

Ukuran : Kecil

Warna : Keruh, Berlendir

Tepi

: Rata

Permukaan

: Cembung

Sifat

: Mucoid

Fermentasi

: Laktosa -

Citrat
+