Diskusi

Helicobacter pylori

Helicobacter pylori
Ditemukan tahun 1982 oleh
ilmuwan Australia Barry
Marshall dan Robin Warren
Diteliti lebih lanjut oleh
ilmuwan Inggris Stewart
Goodwin
Bakteri ditemukan pada
pasien dengan gastritis
kronik dan ulkus gaster.

Santacroce L, Bhutani MS. Helicobacter pylori infection. 2014 Sep 11. Diunduh dari
http://emedicine.medscape.com/article/176938-overview#aw2aab6b2b2 pada tanggal 5 Februari 2015

Helicobacter pylori

Bakteri Gram negatif

Bentuk S
1 - 3 lekukan
Panjang 0.55 m
Memiliki 5 - 7 flagel
berselubung

(a) S-shaped H. pylori

with five to seven
sheathed polar flagella.
Field emission SEM, bar
= 0.5 m.

(b) Detail of the flagella

hook. Negative stain,
bar = 0.05 m

O'Rourke J, Bode G. Morphology and ultrastructure. In: Mobley HLT, Mendz GL, Hazell SL, editors. Helicobacter pylori:
Physiology and Genetics. Washington: ASM Press; 2001.
Kusters JG, Vliet AHM, Kuipers EJ. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection.Clin Microbiol Rev July 2006:449-90.

Patofisiologi
Infeksi H. pylori

pH gaster: < 2
pH optimal untuk H. pylori: 4-8
Sehingga, H. pylori mencari tempat dengan pH yang lebih netral dan
mengeluarkan urease untuk menetralkan pH di sekitarnya

Toksik bagi sel epitel gaster

URE
A

NH3

NH3 + H2O NH4+ + OH-

CO2

CO2 + OH- HCO3-

urease

Menetralkan pH

Penularan

Faktor Risiko
Akses air bersih kurang
Tinggal 1 rumah dengan orang yang
terinfeksi H. pylori
Lingkungan padat penduduk

Gejala Klinis
80% tidak menimbulkan gejala klinis
Gejala klinis yang dapat muncul:
Nyeri atau rasa panas di perut
Mual
Muntah
Nafsu makan kurang
Berat badan turun

Diagnosis

Tatalaksana

Mekanisme PPI terhadap H.

pylori
Menghambat produksi urease oleh H. pylori
PPI meningkatkan pH gaster, sehingga:
Jika PPI dikombinasi dengan antibiotik, dapat
meningkatkan efektivitas antibiotik karena
PPI meningkatkan pH gaster, sehingga
antibiotik tidak mudah terdegradasi oleh asam
(antibiotik bertahan pada pH di atas 4 MIC
rendah)
H. pylori mengeluarkan urease kondisi
sekitar bakteri semakin basa suicide

Horn JR. How do PPIs work? Implications for therapy. Diunduh dari http://www.medscape.org/viewarticle/457393_4

Lain-Lain

Gastrin: Hormon yang menginduksi sekresi asam lambung oleh sel parietal

Kontraindikasi

Gastric bypass surgery

Pada pasien
dengan morbid
obesity
(IMT di atas 40)

 Penggunaan jangka panjang

kortikosteroid dan imunosupresan
koloni H. pylori meningkat

Bleeding disorder
Bleeding disorders are a group of conditions that result when the
blood cannot clot properly.
In normal clotting, platelets, a type of blood cell, stick together
and form a plug at the site of an injured blood vessel.
Proteins in the blood called clotting factors then interact to form a
fibrin clot, essentially a gel plug, which holds the platelets in
place and allows healing to occur at the site of the injury while
preventing blood from escaping the blood vessel.
While too much clotting can lead to conditions such as heart
attacks and strokes, the inability to form clots can be very
dangerous as well, as it can result in excessive bleeding. Bleeding
can result from either too few or abnormal platelets, abnormal or
low amounts of clotting proteins, or abnormal blood vessels.

Endoskopi dan
Biopsi

Endoskopi
Kontraindikasi
Absolut
Pasien dengan kelainan koagulasi (contoh: hemofilia,
disfungsi platelet)
Riwayat perdarahan masif akibat varises esofagus
Ketidakstabilan sistem kardiopulmonar oleh berbagai
sebab
Pasien dengan infark miokard
Pasien dengan suspek perforasi abdomen
Pasien tidak kooperatif
Tidak ada informed consent

Relatif
Penggunaan obat antikoagulan
Zurad EG. Esophagogastroduodenoscopy. In: Gastrointestinal system procedures. p. 700

Zurad EG. Esophagogastroduodenoscopy. In: Gastrointestinal system procedures. p. 700

Endoskopi
Komplikasi
Perforasi
Perdarahan akibat trauma atau biopsi
Infeksi
Efek sedasi berupa komplikasi
kardiopulmonar, seperti sesak napas,
keringat berlebih, tekanan darah
menurun, frekuensi nadi menurun, atau
spasme larynx
Zurad EG. Esophagogastroduodenoscopy. In: Gastrointestinal system procedures.p.700
Pietrangelo A, Krucik G. Gastric tissue biopsy and culture. 20 Agustus 2012. Diunduh dari
http://www.healthline.com/health/gastric-tissue-biopsy-and-culture#Overview1 pada tanggal 12 Juni 2015

Zurad EG. Esophagogastroduodenoscopy. In: Gastrointestinal system procedures. p. 700

Biopsi
Kontraindikasi
Pasien dengan kelainan koagulasi
Pada daerah yang direncanakan
enukleasi tumor submukosa
Pada area diverticula
Pada area varices
Pada area esofagitis yang terkena
radiasi

Block B, Schachschal G, Schmidt H. Specimen Collection. In: Endoscopy of the upper GI tract: A training manual.
Stuttgart: Georg Thieme Verlag; 2004.p.156.

Block B, Schachschal G, Schmidt H. Specimen Collection.

In: Endoscopy of the upper GI tract: A training manual.
Stuttgart: Georg Thieme Verlag; 2004.p.156.

Biopsi
Komplikasi
Perdarahan
Infeksi

Enzyme Immunoassay (EIA)

Enzyme Immunoassay (EIA)

Menggunakan enzim sebagai label untuk
immunoassay
Pemilihan enzim yang digunakan didasari
oleh:
Jumlah molekul substrat yang dikonversi per
molekul enzim
Kemudahan dan kecepatan dalam mendeteksi
Stabilitas enzim
Ketersediaan enzim
Biaya

Enzyme Immunoassay (EIA)

Enzim yang sering digunakan
sebagai label:
horseradish peroxidase
glucose-6-phosphate dehydrogenase
alkaline phosphatase
-D-galactosidase

Klasifikasi EIA
EIA Heterogen
EIA Homogen

EIA Heterogen
EIA kompetitif
Antigen berlabel enzim dan antigen
pasien berkompetisi untuk berikatan
dengan antibodi pada solid phase
Dicuci dan aktivitas enzim diukur
Aktivitas enzim >> Ikatan antigen
pasien dengan antibodi << Aktivitas
enzim berbanding terbalik dengan
konsentrasi substansi yang diperiksa

EIA Heterogen
EIA nonkompetitif
Biasa disebut ELISA

EIA Heterogen
EIA nonkompetitif

Antibodi pada solid phase antigen memiliki beberapa epitope sandwich

EIA Homogen
Tidak butuh tahap pemisahan
Prinsip: Perubahan aktivitas enzim ketika
terjadi kombinasi antibodi-antigen spesifik
Saat antigen reagen berikatan dengan antibodi,
enzim diblok aktivitasnya Aktivitas enzim
sebanding dengan konsentrasi antigen pasien
Digunakan untuk memeriksa analit dengan
berat molekul rendah:
Hormon
Obat-obatan

Immunochromatographi
c Assay (ICA)

 Gold conjugates (as main component) : Mouse

monoclonal antiHelicobacter pylori -gold conjugate
(0.120.024 )
Test Line (as main component) : Mouse monoclonal
anti-Helicobacter pylori (0.640.128 )
Control Line (as main component) : Goat anti-mouse
IgG (0.640.128 )
Assay buffer included:

Phosphate buffer (20mM)

Bovine serum albumin (1%)
Sodium azide (0.01%)
Sodium chloride (0.1M)
Tween 20 (0.1%)

Premier Platinum
HpSA Plus

 Tetramethylbenzidine (TMB)
substrates react with peroxidase,
yielding a soluble blue reaction
product
When the TMB-peroxidase reaction is
stopped using Stop Solution for TMB
Substrates, the chromogen changes
from blue to yellow, and hence the
absorbance from 620 nm to 450 nm.

ImmunoCard STAT!
HpSA

Reagen

antigen test
(Vegal
Farmaceutica)

Rapid Urease Test

(RUT)

Rapid Urease Test (RUT)

Pemeriksaan untuk
mendeteksi
Helicobacter pylori
dengan cara melihat
keberadaan urease
(enzim yang diproduksi
oleh H. pylori)
Melalui prosedur
gastroskopi dan biopsi
mukosa lambung

Rapid Urease Test (RUT)

Persiapan Pasien
Pasien harus menghentikan penggunaan antibiotik,
minimal 3 minggu sebelum biopsi karena antibiotik
dapat mensupresi keberadaan H. pylori
menyebabkan H. pylori sulit untuk terdeteksi
Pasien harus menghentikan penggunaan Bismuth
atau Proton Pump Inhibitor (PPI), minimal 2 minggu
sebelum biopsi beberapa studi menunjukkan
bahwa obat ini dapat menghambat pertumbuhan H.
pylori

Rapid Urease Test (RUT)

Biopsi
Area lambung yang
direkomendasikan untuk biopsi
setidaknya berjarak 2 cm dari
pylorus, di sepanjang antrum.
Jaringan yang dibiopsi adalah
jaringan yang terlihat normal.
Hindari jaringan yang
mengalami erosi atau ulserasi
karena H. pylori ditemukan
sedikit pada area tersebut
Jika pengambilan sampel biopsi
dilakukan lebih dari 1x, hindari
kontaminasi sampel kedua
dengan darah dari tempat biopsi
pertama

Rapid Urease Test (RUT)

Penanganan Spesimen
Gel dikeluarkan dari kulkas. Untuk mendapatkan hasil tes
yang lebih cepat, gel dibiarkan pada suhu ruangan sebelum
digunakan (sekitar 7-10 menit).
Plastik penutup dibuka sampai gel terlihat.
Seluruh sampel biopsi dimasukkan ke dalam gel dengan
menggunakan stik steril.
Plastik penutup ditutup kembali.
Catat nama, tanggal, dan waktu pengambilan biopsi.
Saat terjadi perubahan warna yang menunjukkan reaksi
positif, maka hasil dapat ditetapkan sebagai positif tanpa
perlu menunggu lebih lanjut.
Dapat ditunggu maksimal 24 jam, jika kadar infeksinya
rendah. Setelah 24 jam tidak akan terjadi perubahan
warna.

 Gel mengandung:
Urea
Phenol red
Buffers
Bacteria static agent

Pada kondisi basa berubah

menjadi biru

Toksik bagi sel epitel gaster

URE
A

NH3

NH3 + H2O NH4+ + OH-

CO2

CO2 + OH- HCO3-

urease

Menetralkan pH

Monoklonal vs
Poliklonal

 Monoklonal
Spesifik terhadap 1 epitope

Poliklonal
Dapat mengenali beberapa epitope

Antibodi Monoklonal
Monoclonal antibodies represent a single B lymphocyte
generating antibodies to one specific epitope. B-cells can
be isolated easily from the spleen and lymph nodes of
immunised animals; however, these cells have a limited
life span, and can only divide a limited number of times,
coined the 'Hayflick limit'. This prohibits the culture of Bcells directly. For an antibody to be useful in research or
industry, it must be readily available in large quantities.
Due to the Hayflick limit, this would not be possible using
B-cells cultured in vitro as they would eventually stop
dividing and the population would die out.

 The immune response to an antigen

generally involves the activation of
multiple B-cells all of which target a
specific epitope on that antigen. As a
result a large number of antibodies
are produced with different
specificities and epitope affinities
these are known as
polyclonal antibodies.

Pemeriksaan H. Pylori
di RSCM

Gambaran PA
H.pylori
Penilaian semikuantitatif

Penilaian Semikuantitatif H. pylori

berdasarkan PA
Skor semikuantitatif pada
pemeriksaan PA, didasarkan
pada densitas bakteri yang
terlihat pada mikroskop
dengan pembesaran 400x.
Skor:

0=0
1+ = <10
2+ = 10-29
3+ = 30-99
4+ = >100

Tokunaga Y, Shirahase H, Yamamoto E, Gouda Y, Kanaji K, Ohsumi K. Semiquantitative evaluation for diagnosis of
Helicobacter pylori infection in relation to histological changes. Am J Gastroenterol 1998;93(1):26-9.
Twisk M, Kusters JG, Balk AG, Kuipers EJ, Loffeld RJLF. Colonisation density and topographic localisation of
Helicobacter pylori do not depend on the cagA status. J Clin Pathol 2001;54:771-3.

Pewarnaan H.pylori pada

sediaan PA

Pewarnaan H. pylori
Ada beberapa metode pewarnaan
yang dapat digunakan untuk melihat
H. pylori dalam sediaan PA, di
antaranya:
Hematoxyllin-Eosin (H&E)
Giemsa
Warthin-Starry
Immunostaining
Hartman DJ, Owens SR. Are routine ancillary stains required to diagnose Helicobacter infection in gastric biopsy
specimens?. Am J Clin Pathol 2012;137(2):255-60.

Hartman DJ, Owens SR. Are routine ancillary stains required to diagnose Helicobacter infection in gastric biopsy
specimens?. Am J Clin Pathol 2012;137(2):255-60.

For H&E stains, with standard staining procedures, staining times

3:30 minutes for hematoxylin and 1:00 minute for eosin.
Briefly, for the Warthin-Starry stain, a microwave method was
used. Slides were placed in silver nitrate 1% solution and
microwaved for 20 seconds at 80% power for 3 rounds with 30
seconds for the final round. After cooling for 5 minutes, slides
were placed in gelatin, 5% solution, and microwaved for 10
seconds at 80% power; then developer solution was added
according to instructions. Slides were then rinsed and
coverslipped.
For Giemsa staining, deparaffinized slides were placed into
methanol for 2 changes (3 minutes each), stained in Jenner
solution for 7 minutes, stained in working Giemsa solution for 45
minutes, rapidly dipped in 1% glacial acetic acid, and
coverslipped.
For immunostaining, 4-m slides from paraffin-embedded,
formalin-fixed gastric biopsy specimens were dried and loaded
onto the Ventana BenchMark system (Ventana Medical Systems,
Tucson, AZ) using the Iview procedure. Examples of the H&E,
Giemsa, and Warthin-Starry stains and Helicobacter immunostain

Faeces Specimen
Collection

Jumlah spesimen feses yang

dibutuhkan
Untuk 1 pemeriksaan:
0.1 mL atau 0.1 gram atau 5-6 mm
diameter feses padat atau semipadat
yang ditampung dalam wadah plastik
antibocor

Untuk 5 pemeriksaan:
0.5 mL atau 0.5 gram atau 2530 mm diameter feses

Stabilitas spesimen
Suhu ruangan: Perlu ditranspor
segera
Suhu 2-8oC: 72 jam
Suhu -20oC: 30 hari

Statistik

 Sensitivitas:
Probabilitas suatu tes mendeteksi positif sebagai
benar-benar positif

 Spesifisitas:
Probabilitas suatu tes mendeteksi negatif
sebagai benar-benar negatif

Korespondensi