Dasar Teori HPLC

Definisi
Teknik pemisahan fisika dan kimia (kepolaran, ukuran
partikel, titik didih) berdasarkan interaksi antara fasa
diam (padat), fasa gerak (cair), dan sampel.
Perbedaan distribusi komponen antara fase diam dan
fase gerak semakin lama terdistribusi dalam fase diam
semakin lama waktu retensinya.
Untuk penetapan kadar senyawa non volatile dan
senyawa yang mempunyai berat molekul tinggi dari
campuran dengan senyawa-senyawa lain tanpa
dilakukan pemisahan terlebih dulu.

instrumentasi
detektor

pompa
Wadah
solven

injektor

kolom
oven

Fase Gerak
Berupa cairan yaitu campuran 2 atau lebih
pelarut sehingga dapat terjadi pemisahan zatzat dalam campuran senyawa berdasarkan
koefisien partisi dari zat-zat dalam campuran
senyawa tersebut dalam pelarut.
Berdasarkan komposisi fasa geraknya:
- isokratik komposisi fasa gerak selama
analisa tidak berubah
- gradient komposisi fasa gerak selama
berubah-ubah selama analisa

Fase gerak
Water/buffer
- buffer phosphate
- buffer acetat
Pelarut organik
- methanol
- Acetonitrile
- dll

Mode pemisahan
Berdasarkan kekuatan/kepolaran fase
geraknya:
Normal phase
fase gerak nonpolar sedangkan fase diam
polar
Reverse phase
fase gerak lebih polar daripada fase
diamnya